附：免疫学及血清学反应
免疫学检测原理及临床应用
免疫学检测原理及临床应用免疫学检测是一种通过检测体内免疫系统的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断技术。
其基本原理是利用体内自身的免疫系统对外来物质（如细菌、病毒或人工合成物质）做出特异性反应，产生特异性抗体或细胞免疫反应，并将其检测出来。
免疫学检测可分为血清学检测和细胞免疫学检测两种。
血清学检测是指通过检测血清中特异性抗体的存在来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有ELISA、免疫荧光、免疫印迹等方法。
其基本原理是将目标抗原或建立细胞突变株制备成特异性抗原，与患者血清中的特异性抗体结合，用酶、荧光或其他标记物检测出来。
例如，ELISA是一种广泛应用的免疫学检测技术，用于检测抗体和抗原的相互作用。
它的原理是将抗原吸附到多孔板上，在体外将待测样本加入其中，样品中如有特异性抗体，则与抗原结合，未结合的抗体被洗掉，再加入标记抗体，标记物与抗原相互结合形成复合物，可以根据标记物的性质来检测复合物的形成。
细胞免疫学检测是指通过检测免疫细胞的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有淋巴细胞转化试验（LTT）、流式细胞术等方法。
其基本原理是将血液或其他体液样本中的免疫细胞与特异性抗原共同孵育，在体外激活免疫细胞产生抗体或细胞反应，使用流式细胞术分离、检测不同类型的免疫细胞。
例如，LTT可用于检测细菌或病毒等病原体感染及免疫功能异常等疾病。
其原理是将血液或其他体液样本加入培养基中，与特定抗原刺激后，在体外培养一段时间，测定培养物中的淋巴细胞增殖情况，反映细胞免疫应答功能的多样性和复杂性。
免疫学检测在临床实践中的应用非常广泛。
它被用来诊断多种感染性疾病，例如乙型肝炎、艾滋病、结核病等。
通过检测患者体内是否存在相应的抗体或细胞反应，可以确定疾病病原体是否存在以及疾病的严重程度。
此外，免疫学检测还被用于诊断自身免疫性疾病，例如狼疮、风湿性关节炎等。
通过检测患者体内是否存在特定的自身抗体，可以确定患者的疾病类型和严重程度。
免疫学课件——第七章 血清学反应
免疫学原理与技术
5.血清学反应的影响因素 电解质:抗原与抗体的反应需要在适当浓 度的电解质参与下,才出现可见反应.血清学反 应一般用生理盐水作稀释液,但禽类血清需用 8-10%的高渗氯化钠溶液. 温度:通常用370C水浴中,有的补体结合反 应在冰箱低温结合效果更好. pH:血清学反应常用的pH为6-8,过高或过 低的pH可使抗原抗体复合物重新解离.如pH 降至抗原或抗体的等电点时,可引起非特异性 的酸凝集,造成假象.
免疫学原理与技术
2.结合力和离解力 抗原和抗体的结合为弱能量的非共价键结 合,是分子表面的结合,这一过程受物理化学,热 力学的法则所制约,结合的温度应在0-400C范 围内,pH在4-9范围内,如温度超过600C或pH降 到3以下时,则抗原抗体复合物又可重新解离. 3.抗原抗体的结合比例 抗原与抗体的结合常需要适当的比例才出 现可见的反应,在最适比例时,反应最明显. 带现象:如抗原过多或抗体过多,则抗原抗 体的结合不能形成大的复合物,抑制可见反应 的出现. “格子学说”
免疫学原理与技术
三.血清学反应的应用 1.抗原或抗体的快速检测 2.生物活性物质的超微量测定 3.抗原或抗体在细胞和亚细胞水平的定位 4.抗原组成的分析 5.微生物鉴定和抗原分型 6.血型鉴定
免疫学原理与技术
四.血清学试验的发展趋向 技术上要求高特异性,高敏感性,高分辨率, 精密定位,简易快速;在方法上要求微量化,自动 化,标准化;试剂上要求商品化.
免疫学原理与技术
二.血清学反应的一般特点 1.特异性和交叉性 如肠炎沙门氏菌与鼠伤寒沙门氏菌 Ab1 Ag1
Ab2 Ag2 交叉反应是区分血清型和亚型的重要依据 关系数R R=√r1 *r2 x 100%
免疫学原理与技术
血清学反应应用的基本原理
血清学反应应用的基本原理什么是血清学反应血清学反应是指使用血清来检测某种特定物质的反应。
血清是指去除了血液中的细胞和凝血因子后的液体部分，主要由血浆和其中的溶解物组成。
血清中含有丰富的抗体和抗原，通过血清学反应可以对某些疾病的诊断和治疗提供重要的参考。
血清学反应的基本原理血清学反应的基本原理是基于抗原-抗体相互作用的原理。
1.抗原：抗原是一种可以引起免疫反应的物质，通常是一种蛋白质或糖蛋白。
在血清学反应中，抗原可以是病原体、疫苗、细胞器官等多种物质。
2.抗体：抗体是免疫系统产生的特异性蛋白质，可以识别并结合特定的抗原。
抗体可以通过抗原-抗体相互作用来调节免疫反应，并参与病原体的清除。
血清学反应根据抗原和抗体的特异性，可以分为以下几种类型：•补体结合试验：补体结合试验可以检测抗原-抗体的结合情况，通过观察抗原-抗体结合后是否激活了补体系统来判断。
•中和试验：中和试验可以检测抗体是否能够与病原体或毒素结合，并阻止其对宿主产生伤害。
•沉淀试验：沉淀试验可以检测抗原和抗体在溶液中的反应，通过观察反应后是否形成沉淀来判断。
•凝集试验：凝集试验可以检测抗原和抗体的凝集反应，通过观察反应后是否形成可见的凝结物来判断。
•免疫荧光试验：免疫荧光试验利用荧光染料标记的抗体来检测抗原-抗体结合的情况，通过观察是否在样品中出现荧光信号来判断。
•酶联免疫吸附试验：酶联免疫吸附试验利用酶标记的抗体来检测抗原-抗体结合的情况，通过观察酶反应产生的色素变化来判断。
血清学反应的应用血清学反应在医学和生物科学研究中有广泛的应用。
1.疾病诊断：血清学反应可以用于诊断多种疾病，如传染病、免疫系统疾病、肿瘤等。
例如，中和试验可以用于检测病毒感染，酶联免疫吸附试验可以用于检测某些肿瘤标志物。
2.疫苗研发：血清学反应可以评估疫苗的免疫效果。
通过检测接种疫苗后产生的抗体水平，可以判断疫苗是否能够有效地诱导免疫反应。
3.抗体治疗：血清学反应可以检测抗体的效力和浓度，用于指导抗体治疗的剂量和频率。
医学免疫学实验课件-实验七_生化反应与血清学鉴定(黄小凤)
实验材料
1. 菌种 沙门菌 2. 试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3. 其他 无菌载玻片
沙门菌的主要抗原组成
• 主要有O、H、Vi Ag • O Ag：至少58种,以1、2、3等阿拉伯数字顺序排
列。凡含相同抗原组分归为一个组，引起人类疾 病的沙门菌大多数在A~F组 • H Ag：分为第Ⅰ和第Ⅱ相两种，第Ⅰ相以a、b、 c等小写字母表示，第Ⅱ相以1、2、3等阿拉伯数 字表示
细菌产生的酶
含硫的 氨基酸
硫化氢
硫化铁
或硫化铅
黑褐色
（2）方法：利用接种针将大肠埃希菌或沙门 氏菌穿刺接种于硫生化反应管内，37℃孵育 18～24h后观察结果。
3.硫化氢试验
• （3）结果判断：变黑色为阳性反应，不变 色为阴性。
+
二、血清学鉴定
实验目的
掌握细菌血清学鉴定法
实验原理
根据抗原抗体反应高度特异性的特点， 在疾病诊断中可用抗原、抗体任何一方作为 已知条件来检测另一未知方。
＋－ ＋
2.靛基质试验
（1）原理：
色氨酸
细菌产生的 色氨酸酶
靛基质试剂
吲哚
玫瑰吲哚
（无色）
（红色）
（2）方法：利用接种针将菌种接种于靛生化 反应管内，37℃孵育18～24h后加入靛基质 试剂，最后观察结果。
2.靛基质试验
（3）结果判断：上层呈红色为阳性，不变色为 阴性
阳性
3.硫化氢试验
（1）原理：
初步判断为沙门氏菌属，但需去 除菌体Vi荚膜后再继续鉴定其他 抗原成分。
每组1人专门接种大肠杆菌，另1人专门接种 沙门氏菌
37℃培养18～24h后观察并比较其结果。
血清学实验进程
免疫学原理及检测
志。HCV RNA亦可定量，定量测定有助于了解
病毒复制程度、抗病毒治疗的选择及疗效评估等。
为什么要同时检测 抗HCV 及 HCV RNA？
★ 抗病毒治疗的要求。 ★ 防止漏诊。
有 报 道 223 例 丙 型 肝 炎 病 例 中 ， 抗 HCV 和 HCV RNA 同时阳性 86 例，单纯抗 HCV 阳性 118例，单纯HCV RNA 阳性19例。 表明单做其中一项可能导致漏诊。
ELISA 方法的种类
双抗体夹心法 间接法 双抗原夹心法 HBsAg、HBeAg HCV、Dengue-IgG HBsAb、HIV、TP
竞争性抑制法
中和抑制法 捕获法
抗－HBc
HBeAb HBc-IgM、HA-IgM
双抗体夹心 ELISA 法示意图
影响因素
试剂因素 标本因素（内源性、外源性） 操作因素
洗涤应彻底。
中山生物产品
乙肝两对半（缺少e抗原） 丙肝
梅毒
EB病毒
登革热
G6PD
乙型肝炎病毒血清标志物检测
HBsAg
★ 常用ELISA法检测。
★ 目前HBsAg诊断试剂质量较高，灵敏度可达
0.2ng/L。从全国室间质控评价结果显示，阳 性标本率达到或超过98％。
★ HBsAg滴度越高，HBeAg、HBV DNA阳性的
免疫学反应
是抗原与抗体的反应，仅在高等脊椎 动物中存在。 这是已知的最精妙复杂的 身体抵御外部物质的系统。
抗原(Antigen)
抗原是指能刺激机体免疫系统产生 免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等 免反应原性。一般抗 原都是外来物，如细菌、病毒、寄生虫、 大分子蛋白等 。
血清免疫学
血清免疫学
血清免疫学是研究免疫学中的一种生理功能的检测，主要是借助免疫学、细胞生物学、分子生物学等理论或方法，对免疫分子（抗原、抗体、补体、细胞因子等）和免疫细胞进行定性、定量检测。
它包括检测血清中免疫球蛋白、心肌肌钙蛋白、肌红蛋白等指标，用于疾病的诊断、病情检测和疗效评价等。
血清免疫学检查是一种重要的临床检查项目，可以帮助医生了解患者的免疫状态和诊断疾病。
例如，检测免疫球蛋白可以帮助医生判断是否存在免疫缺陷或自身免疫性疾病；检测心肌肌钙蛋白和肌红蛋白可以帮助诊断心肌梗死等疾病。
在血清免疫学检查中，需要注意保持血清的新鲜和避免受污染，以保证检查结果的准确性。
同时，根据不同的情况，医生可能会要求进行特定的血清免疫学检查项目，以便更好地了解患者的病情和制定治疗方案。
以上信息仅供参考，如有需要，建议查阅相关文献或咨询专业医生。
血清学原理
血清学原理
血清学原理是一种用于检测人体血清中特定抗体和抗原的方法。
它基于免疫学原理，即人体对入侵病原体产生特异性的免疫应答。
当病原体侵入人体后，免疫系统会产生相应的抗体来抵御病原体的进一步感染。
血清学原理中常用的方法是血清中特定抗体与抗原结合的反应。
抗体是免疫系统产生的一种蛋白质，具有特异性，可以识别并结合特定的抗原。
当特定抗原存在于血清中时，与之相应的抗体会结合在一起形成抗原-抗体复合物。
这种结合反应可以通
过使用不同的实验技术来进行检测。
常见的血清学实验技术包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、间
接免疫荧光试验（IFA）和凝集反应。
这些方法可以用于检测
多种病原体，如细菌、病毒和寄生虫等。
通过测量抗原-抗体
复合物的形成或凝集反应的程度，可以确定血清中是否存在特定的抗体和抗原。
这可以用于诊断疾病、监测免疫应答、评估免疫状态以及筛查疫苗的有效性。
血清学原理在医学和流行病学研究中具有重要的应用价值。
它不仅能够帮助医生确定疾病的类型和严重程度，还可以追踪病原体的传播途径和感染人群的免疫状况。
此外，血清学原理还可以用于血型鉴定、移植匹配和妊娠筛查等领域。
总之，血清学原理是一种重要的免疫学方法，通过检测血清中的特定抗体和抗原，可以为疾病诊断、流行病学研究和其他医学应用提供有价值的信息。
微生物的免疫技术—微生物的血清学技术
沉淀反应——可溶性抗原与相应 抗体结合所发生的沉淀反应 沉淀反应是指可溶性抗原（细菌 培养滤液、细胞或组织的浸出液、 血清蛋白等）与相应抗体在液相 中特异结合后，形成的免疫复合 物受电解质影响出现的沉淀现象。
反应中的抗原称为沉淀原 （precipitinogen），可以是类 脂、多糖或蛋白质等；抗体称为 沉淀素（precipitin）。
不被结合而游离存在。 此时如在上述反应系统中加入绵羊红细胞(Ag)和溶血素(Ab)系统，即可与游离的补体结合而出现溶
血现象。因此，根据溶血现象是否产生，即可得知检测系统中有无相应的抗原或抗体存在。
3、补体结合反应(complement fixation reaction)
补体结合试验：（CFT） 抗原、抗体、 补体、红血球悬液、溶血素
凝集试验 ： 直接凝集试验、间接凝集试验、 乳胶凝集试验
补体参与的试验： 补体结合试验
沉淀试验： 环状沉淀试验、絮状沉淀试验、 琼脂扩散试验、免疫电泳
中和试验： 病毒中和试验
1、凝集反应 (agglutination)
凝集反应——颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应 细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体特异结合后，在适量 电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象称 为凝集反应。 反应中的抗原称为凝集原（agglutinogen） 抗体称为凝集素（agglutinin）。 根据凝集反应的原理，以后又发展建立了各种直接凝集试验、间 接凝集抑制试验以及固相免疫吸附血凝试验等新方法。
2、电解质： 生理盐水做稀释液
3、温度：
37-45摄氏度
4、酸碱度 ： pH6-8
思考与讨论、任务
思考与讨论：我学到什么？
1、血清学反应的类型 2、血清学反应的特点 3、血清学反应的主要影响因素
免疫学课件：免疫血清学技术
抗体的生物学功能
抗体具有中和毒素、调理吞噬、介导炎症反应等 多种生物学功能。
抗原抗体结合机制
锁钥学说
ห้องสมุดไป่ตู้01
抗原与抗体结合就像锁和钥匙一样，具有高度的特异性和互补
性。
诱导契合学说
02
抗原与抗体在结合过程中，会发生构象变化，使得两者更加紧
力。
抗原的特异性
抗原与相应抗体或致敏淋巴细胞发 生特异性结合的物质基础。
抗原的分类
根据抗原性质不同，可分为完全抗 原和不完全抗原。完全抗原具有免 疫原性和特异性，而不完全抗原仅 具有特异性。
抗体结构与功能
1 2 3
抗体的基本结构
由四条多肽链组成，包括两条重链和两条轻链， 通过二硫键连接。
抗体的功能区域
密地结合在一起。
多重识别机制
03
抗原抗体结合不仅依赖于锁钥关系或诱导契合，还涉及到电荷、
疏水作用等多重因素。
03 免疫血清制备技术
动物选择与免疫方案
动物选择
选用健康、适龄、免疫原性强的实验动物，如兔、马、羊等 。
免疫方案
根据实验需求和免疫原性质，制定合适的免疫程序，包括免 疫剂量、免疫途径、免疫次数和间隔时间等。
补体结合实验方法
补体结合试验（CFT）
在补体参与下，用已知抗原或抗体检测未知抗体或抗原的方法。该方法具有较高的敏感性和特异性。
间接补体结合试验
先用已知抗原致敏红细胞，再加入待检血清中的相应抗体，最后加入补体，观察红细胞是否溶解来判 断结果。该方法常用于检测某些病毒、立克次体等微生物的抗体。
血清学-血清学反应的一般特点
血清学- 血清学反应的一般特点1)抗原体的结合具有特异性，当有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。
2)抗原体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的。
3)抗原体的结合是按一定比例进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应。
4)血清学反应大体分为两个阶段进行，但其间无严格界限。
第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。
第二阶段为抗原体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。
反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。
而且，在第二阶段反应中，电解质、PH、温度等环境因素的变化，都直接影响血清学反应的结果。
习惯上将经典的血清学反应分三种类别：凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。
１、凝集反应颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutinationreaction）。
其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。
在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应稀释抗体。
１）直接凝集反应颗粒性抗原与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应(Directagglutionreactio n)。
a.玻片凝集法。
是一种常规的定性试验方法。
原理是用已知抗体来检测未知抗原。
常用于鉴定菌种、血型。
如将含有痢疾杆菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。
此法快速、简便，但不能进行定量测定。
b.试管凝集法。
是一种定量试验方法。
多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其含量。
常用于协助诊断某些传染病及进行流行病学调查。
如肥达氏反应就是诊断伤寒、付伤寒的试管凝集试验。
因为要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小时观察，血清最高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价。
11.免疫学技术概论
第十一章免疫学技术概论免疫学技术是指利用免疫反应的特异性原理，建立各种检测与分析技术，以及建立这些技术的各种制备主意。
免疫学技术包括：①免疫血清学技术：用于检测抗原或抗体的体外免疫反应技术，或称免疫检测技术②细胞免疫技术：用于分析研究机体细胞免疫功能与状态的免疫学技术③免疫制备技术：用于建立免疫检测主意的技术第 1 节免疫血清学技术抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性结合反应，因抗体主要来自血清，因此在体外举行的抗原抗体反应称为血清学反应或免疫血清学技术。
一、免疫血清学反应的基本原理抗原与抗体的特异性结合，主要是基于抗原与抗体分子结构及立体构型的互补，以及由多种因素造成的两者在分子间引力参加下发生的可逆性免疫化学反应。
1.抗原抗体的结合力①库仑引力/静电引力：是抗原与抗体带有相反电荷的氨基与羧基之间互相吸引的力。
其大小与两个电荷间距离的平方呈反比。
②范德华引力：是原子与原子、分子与分子互相临近时分子极化作用产生的一种吸引力，引力大小与分子空间构象的互补性有关。
③氢键作用：是供氢体上的氢原子和受氢体原子间的引力。
④疏水作用：在水溶液中两个疏水基团互相接触，因为对水分子的排斥而趋向聚拢的力。
疏水作使劲在抗原抗体结合力中作用最强。
2.抗原抗体的亲和力与亲合力①亲和力(affinity)：指抗体的抗原结合位点与相应的抗原决定簇之间的结合强度，它是抗原抗体间固有的结合力。
亲和力可用平衡常数K表示：K＝K1/K2 （K1为结合常数，K2为解离常数）②亲合力(avidity)：指一个抗体分子与囫囵抗原表位之间结合的强度，与抗体结第 1 页/共7 页合价直接相关。
亲合力表现为多价优势。
3.抗原抗体的胶体特性及亲水性转化为疏水性①胶体特性：抗体和大多数抗原同属蛋白质，在通常的反应条件下均带有负电荷，使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体。
②亲水性改变：抗原抗体结合使表面电荷减少，水化层变薄，失去亲水性能，抗原抗体复合物由亲水胶体转化为疏水胶体。
12 经典血清学试验
十二章经典血清学实验一、名词解释凝结性实验：按照是否产生凝结现象，用已知抗体或抗本来判定相应（未知）抗原或抗体的免疫反应。
凝集反应：细菌，红细胞等颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体发生特异性反应，在适当电解质存在下，经过一段时光形成肉眼可见的凝集现象。
反应中的抗原称为凝集原，反应中的抗体称为凝集素。
直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接发生特异性结合并浮上肉眼可见的凝集现象称为直接凝集反应。
间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）吸附在一种与免疫无关的惰性载体颗粒表面，使其成为致敏载体，然后与相应抗体（或抗原）结合，在电解质存在的条件下发生凝集的现象。
葡萄球菌A蛋白（SPA）：是金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与IgG分子的Fc片段结合，当SPA-Ab与相应抗原结合时，就可产生协同凝集反应。
HA：有些病毒具有能凝集某种哺乳动物和禽类红细胞的特性，依此特性建立的检测主意称为病毒血凝实验。
HI：按照病毒的特异性抗体可以抑制血凝现象建立的检测主意称为血凝抑制实验。
沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的白色沉淀。
参加沉淀反应的可溶性抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。
琼脂免疫蔓延：抗原，抗体在琼脂凝胶中蔓延，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。
反应的沉淀物因颗粒较大，故在凝胶中不再蔓延，而形成沉淀带。
电泳：带电质点在电场中向着带异向电荷的电场移动。
免疫电泳：由琼脂双蔓延与琼脂电泳技术结合的实验。
凝集价/滴度/抗体效价：浮上50%以上凝集的血清最大稀释度为该血清的凝集价。
沉淀价：环状沉淀实验时，以浮上白色沉淀环的最高抗原稀释倍数作为沉淀素的效价，即沉淀价。
中和指数：在尽头法中和实验中，使病毒感染力减少至50%的血清中和效价称为中和指数。
中和效价：中和实验中，被检血清中抗体中和病毒的能力。
病毒的毒价：引起半数感染动物死亡的病毒最小量。
第1页/共5页二、简答题1.凝集反应和沉淀反应的基本类型有哪些？有何用途？2.凝集反应和沉淀反应的区别？（凝集反应和沉淀反应各有什么特点？）3.琼脂凝胶免疫蔓延实验有哪些不同的主意？举例说明它们的用途？抗原，抗体在琼脂凝胶中蔓延，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。
第六章免疫学技术基础
(2)间接法:
抗原+特异性抗体+抗抗体----只要是抗该动物的Ig, 则抗体可与之结合反应。 优点:减少标记次数,具普遍适用性. 间接法缺点:有非特异性。 5.免疫酶技术〔Immunoenzyme Tchniques〕： 酶联免疫吸附试验 - ELISA 〔enzyme－linked immunosorbent assay 〕 利用酶的显色底物的灵敏反应,指示抗原抗体 的特异性反应。在抗体上标记酶,该酶可催化颜色 反应,通过酶标仪检测。 常用固相载体:聚乙烯;聚苯乙烯96孔板。
ELISA:
特异性: 检测过程的精确性-------直接法特异性好 影响特异性的因素: (1)抗原类似物的干扰; (2)洗脱过程的彻底性 灵敏度: 可检测量----间接法灵敏度高 重复性: 二次结果的一致性, CV(变异系数)。
6.蛋白免疫印迹技术（Western Blot)
Southern Blot-分析DNA Northern Blot-分析Radish Peroxidase） 供氢体: 3,3’-二氨基联苯胺(DAB);邻甲苯胺(OT) HP DH2 + H2O2 D + H2O
492nm
HP的RZ值－－－－铁 A403/275nm糖蛋白＝3.0 比活250/mg
b)碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase AKP） 底物：对硝基酚磷酸盐〔P-nitrophenyl phosphate;P-NPP〕
(1)直接凝集反应 抗原+抗体直接混合,在栽玻片上也可观 察。 如: 肥达试验(widal test),用于伤寒诊断。
(2)间接凝集反应
将可溶性抗原吸附在某球形颗粒状物质表面,与 抗体发生凝集反应。 也有将抗体吸附于颗粒上反应,称为反向凝集反应。
血清学的原理及应用原则
血清学的原理及应用原则1. 血清学的基本原理血清学是研究血清和免疫反应的学科。
它利用抗体和抗原之间特异性相互作用的原理，通过检测血清中的抗体或抗原来诊断疾病，评估免疫应答，以及研究免疫机制。
血清学主要涉及 ELISA、免疫印迹、免疫沉淀等实验技术。
2. 血清学的应用原则2.1 血清学在临床诊断中的应用•疾病诊断：血清学技术可用于检测抗体或抗原以确认某些疾病的诊断，例如乙肝病毒感染可通过血清中检测乙肝病毒抗体来确诊。
•免疫应答评估：通过血清中的特定抗体或抗原来评估机体对感染或疫苗接种的免疫应答。
例如，检测流感病毒抗体可以评估病人是否对流感病毒有免疫力。
•血型鉴定：血清学技术可用于确定血型，以确保输血安全。
通过检测特定的血型抗体和抗原，可以确定血型，例如ABO血型系统和Rh血型系统。
2.2 血清学在疫苗开发中的应用•抗原筛选：血清学技术可以用于筛选潜在的疫苗候选者。
通过检测病原体的抗原与抗体的特异性相互作用，可以选择最有效的抗原作为病毒或细菌疫苗候选者。
•免疫保护评估：通过血清学技术，可以评估疫苗的免疫保护效果。
通过检测疫苗引起的抗体水平的变化，可以判断疫苗是否能够引起有效的免疫应答。
2.3 血清学在免疫学研究中的应用•抗体检测：通过血清学技术可以检测特定抗体的存在以研究免疫反应。
例如，ELISA技术可以用于检测抗体水平的变化，从而研究免疫应答的动态变化。
•蛋白质相互作用研究：血清学技术可以用于研究蛋白质的相互作用。
通过血清学技术如免疫沉淀，可以检测抗体与特定蛋白质的结合，以深入了解蛋白质的功能和相互作用。
•免疫组化：血清学技术可以用于免疫组化实验，即检测免疫反应在组织和细胞水平上的表达。
通过检测抗体与目标抗原的结合，可以确定特定蛋白质在不同组织和细胞中的表达情况。
3. 总结血清学作为研究血清和免疫反应的学科，在临床诊断、疫苗开发和免疫学研究中发挥着重要的作用。
通过特异性相互作用原理，血清学技术可以用于检测抗体或抗原，评估免疫应答，筛选疫苗候选者，研究蛋白质相互作用等。
肺炎支原体感染的病毒血清学与免疫学检测
肺炎支原体感染的病毒血清学与免疫学检测肺炎支原体是一种常见的细菌性感染病原体，可引起呼吸道疾病，包括肺炎、支气管炎和喉炎等疾病。
针对肺炎支原体感染的确诊与治疗，病毒血清学与免疫学检测成为了非常重要的手段。
本文将介绍肺炎支原体感染的病毒血清学与免疫学检测的原理和方法，并探讨其在临床应用中的价值。
一、病毒血清学检测方法病毒血清学检测主要通过检测人体血液中的抗体来判断肺炎支原体的感染情况。
常用的病毒血清学检测方法包括：1. 血清中特异性抗体的检测：通过检测患者血液中肺炎支原体特异性IgM和IgG抗体的水平变化来确定感染的阶段和病情。
IgM抗体是早期感染的标志，而IgG抗体则是感染后体内产生的免疫应答。
针对这些抗体的检测可采用酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法。
2. 补体结合试验：通过检测患者血清中的补体结合反应来判断是否感染了肺炎支原体。
该方法较为传统，操作相对繁琐，但作为一种辅助诊断手段仍然具有一定的参考价值。
二、免疫学检测方法免疫学检测方法是指以人体免疫系统的反应来检测肺炎支原体的感染情况，常用的免疫学检测方法包括：1. 免疫荧光检测法：该方法通过标记抗肺炎支原体抗体的荧光物质，并与患者标本中的肺炎支原体结合，最后观察荧光情况来判断是否感染。
该方法具有灵敏度高、特异性好的特点，且操作简便，常用于快速检测和筛查。
2. 免疫层析检测法：该方法通过将肺炎支原体特异蛋白质与检测纸条上的抗体相结合，形成蛋白质-抗体复合物，从而显示出特异反应的颜色带。
该方法具有快速、便携、易于操作的特点，常用于临床现场的快速诊断。
三、病毒血清学与免疫学检测在临床应用中的意义病毒血清学与免疫学检测方法在肺炎支原体感染的临床应用中发挥着重要作用。
其意义主要包括：1. 确定感染与排除感染：通过病毒血清学与免疫学检测，可以明确患者是否感染了肺炎支原体，排除其他病原体引起的类似症状，有助于判断病情和制定治疗方案。
2. 指导治疗：不同阶段的肺炎支原体感染需要采取不同的治疗策略，如抗生素和抗病毒药物的选择等。
经典的免疫学反应
免疫电泳技术
免疫电泳技术是将琼脂电泳与免疫扩散相结合 的一种常用的免疫学实验方法，此项技术由于 具有抗原抗体反应的高度特异性，电泳分离技 术的快速，灵敏和高分辨力，以及实验设备和 操作简便等优点，至今仍作为免疫学的一种基 本技术，广泛用于科学研究和临床实验诊断。
数十年来，根据不同的实验目的和要求，在经 典的免疫电泳技术基础上，又衍生出对流免疫 电泳、火箭电泳、交叉免疫电泳及免疫固定电 极等许多新技术和新方法出现。
此时如在上述反应系统中．加入绵羊红细胞(抗 原)和溶血素(抗体)系统，即可与游离的补体结 合而出现溶血现象。
因此，绵羊红细胞和溶血素是CFT的指示系统 (亦称溶血系统)。试验结果根据溶血现象是否 产生，即可得知检测系统中有无相应的抗原或 抗体存在。
中和反应
中和试验是免疫学和病毒学中常用的一种抗原抗 体反应试验方法，用以测定抗体中和病毒感染性 或细菌毒素的生物学效应。
凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体又称中 和抗体。能与细菌外毒素结合，中和其毒性作用 的抗体称为抗毒素。
中和试验可以在敏感动物体内(包括鸡胚)，体 外组织(细胞)培养或试管内进行。观察特异性 抗体能否保护易感的试验动物死亡；能否抑制 病毒的细胞病变效应或中和毒素对细胞的毒作 用；以及测定抗体的其他生物学效应。
凝集反应
细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体特异 结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚 集，出现肉眼可见的凝集现象．称为凝集反应。
早在1896年，Widal就利用伤寒病人血清与伤寒杆 菌发生特异性凝集的现象成功地诊断伤寒病。
1900年Landsteiner在特异血凝现象的基础上发现 了人类ABO血型，于1930年获得诺贝尔生理学和 医学奖。
免疫电泳
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②同种异体抗原(allogenic antigen) 同种异体抗原
同种属不同个体之间，由于遗传基因 不同，其相同组织或细胞表面的化学结 构也有差异的抗原
输血反应？
移植排斥？不排斥？
③改变和隐蔽的自身抗原
血清学反应
第一节 抗 原
一、抗原的 概念
抗原（antigen，Ag） 抗原 是一类能刺激机体免疫系统产生 特异性免疫应答，并能与相应免疫应 答产物即抗体和致敏淋巴细胞在体内 或体外发生特异性结合的物质
免疫原性（immunogenicity） 免疫原性
抗原能诱导机体产生抗体 或致敏淋巴细胞的能力
2、重要的抗原 、
（1）微生物及其代谢物 （2）动物免疫血清 （3）同种异体抗原 （4）异嗜性抗原 （5）肿瘤抗原 （6）自身抗原 （7）其他：如食物/花粉/激素/药物
3、细菌的抗原
细菌成分复杂，包含多种抗原成分，如： 表面抗原：荚膜抗原 菌体抗原：细胞壁、细胞膜、细胞质抗原 鞭毛抗原 菌毛抗原 外毒素和类毒素（甲醛脱毒后的外毒素仍 有免疫原性的蛋白质）
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反应原性（reactogenicity） 反应原性
抗原能特异性与相应的抗体 或致敏淋巴细胞反应的能力
二、抗原的基本特性
1、异物性 2、具一定的理化性质
1、异物性（foreignness） 、异物性（ ）
①异种物质 ②同种异体物质 ③改变和隐藏的自身抗原
①异种抗原（xenogenic antigen）
• 改变自身抗原（altered self antigen） 外伤、感染、药物或电离辐射等都可使 自身组织结构发生改变，形成自身抗原 • 隐蔽自身抗原（sequestered self antigen） 与免疫系统隔绝的自身组织发生释放， 刺激机体产生免疫应答。 （眼球晶状体、脑、二、影响抗原抗体反应的因素
1、电解质 2、温度 3、酸碱度 4、机械振荡
三、抗原抗体反应种类
1、凝集反应 • 颗粒性抗原+抗体----凝集团 • 一般稀释抗体
凝集反应中的抗体称为凝集素 而抗原为凝集原
红 细 胞 凝 集 反 应
2、沉淀反应 、
• •
可溶性抗原+抗体------沉淀反应 环状沉淀反应、絮状沉淀反应、琼 脂扩散法、免疫电泳法
第二节 抗体
一、概念： 概念： 是高等动物在抗原物质的刺激下， 是高等动物在抗原物质的刺激下，由浆 细胞产生的一类能与相应抗原在体内外发生 特异性结合的免疫球蛋白（ ） 特异性结合的免疫球蛋白（Ig） 抗体属于糖蛋白， 抗体属于糖蛋白， 本身也是抗原 抗体存在于血清中， 抗体存在于血清中，抗体参与的反应称为 血清学反应
二、Ig的化学结构
Y形分子 分为重链（H链）、轻链（L链） 可变区（V区）:重链1/4、轻链1/2 恒定区（C区）：重链3/4、轻链1/2 C 3/4 1/2 铰链区
第三节 体外抗原抗体（血清学） 体外抗原抗体（血清学） 反应
一、抗原抗体反应的一般特点
特异性： 特异性：抗体只能与刺激它的相应抗原反应 可逆性：物理结合， 可逆性：物理结合，有可逆性 定比性： 定比性：比例合适 阶段性：不可见----可见反应 阶段性：不可见----可见反应 ---条件依赖性：pH6条件依赖性：pH6-8，37-45度，电解质 37-45度
（1）免疫荧光技术 （2）免疫酶技术 （3）放射免疫测定法 （4）免疫电镜技术 （5）发光免疫测定法
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双重染色标本的单色和双色观 察
WU WIB DUAL BAND
DAPI+FITC
WIBA
WIG
WIB
FITC+PI
多重染色标本的多色观察
FITC+Texas Red+DAPI
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①分子量大 ②一定的化学组成和结构
抗原须为大分子的物质： 抗原须为大分子的物质：
抗原分子量越大，表位就越多，越能有效 刺激免疫系统产生免疫应答；
明胶 分子量≧100kD 无免疫原性
化学组成：
• 单一氨基酸组成的聚合物，免疫原性弱； • 不同氨基酸构成的共聚物，免疫原性良好； • 有芳香簇氨基酸，可大大提高免疫原性； • 多糖的免疫原性取决于单糖的数目和类别； • 核酸的免疫原性很低，但与蛋白质结核则具有强 的免疫原性（核酸抗体）
双 相 免 疫 扩 散 试 验
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3、补体结合试验 、
指示系统： 指示系统：绵羊红细胞和溶血素 待测系统： 待测系统：已知抗体或抗原 待测抗原或抗体 补体系统： 补体系统：豚鼠的新鲜血清 补体可以与任何抗原抗体复合物结合
补 体 结 合 试 验 原 理
4、免疫标记技术 、
三 、 抗 原 的种类
1、按抗原性能分类 、
（1）完全抗原 （2）半抗原
完全抗原 （complete antigen） 凡同时具有免疫原性 和反应原性的物质
半抗原 (incomplete antigen or hapten) 只有反应原性而无免疫原性的物 质。 半抗原多为简单的小分子物质， 单独作用时无免疫原性，当半抗原与 蛋白质载体结合后可具有免疫原性。