韩国检测霉菌的方法是Howard霉菌计数法
GB 4789.15霉菌和酵母计数
6.3 取1 mL1:10稀释 液注入含有9 mL灭
菌水的试管中，另 换一支1 mL灭菌吸 管吹吸5次，此液为 1:100稀释液。
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5 操作步骤
5.1 样品的稀释
5.1.4 按5.1.3操作程 序，制备10倍系列稀 释样品匀液。每递增 稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管。
后开始观察，共培 养观察5 d。
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5 操作步骤
5.3 菌落计数
肉眼观察，必 要时可用放大镜， 记录各稀释倍数和 相应的霉菌和酵母 数。以菌落形成单 位（colony forming units，CFU）表示。
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1 范围（主题内容与适用范围）
本标准规定了食品中霉菌和酵母 菌（moulds and yeasts）的计数方法。
本标准适用于各类食品中霉菌和 酵母菌的计数。
本标准规定了各类粮食、食品和饮料 霉菌和酵母菌计数的检验方法。
本标准适用于各类粮食、食品和饮料 中霉菌和酵母菌的计数。
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2 引用Байду номын сангаас准
GB/T 4789.28 食品卫生微生物学 检验 染色法、培养基和试剂
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6.3 ……然后将晾至 45℃左右的培养基注
入平皿中，转动平皿 混匀，……
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微生物鉴定 细菌 霉菌计数
微生物鉴定细菌霉菌计数
微生物鉴定中细菌、霉菌的计数一般采用平皿法。
这是一种常用的计数方法，包括常规法和培养基稀释法。
在采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2~3个稀释级的供试液。
取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中（如果是培养基稀释法，则将1ml供试液均匀分注入2个或以上的平皿中）。
然后，注入15~20ml 温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，待其凝固。
通过这种方法，可以测定出供试品中的细菌、霉菌及酵母菌的菌数。
如需更多信息，建议咨询相关领域的专家或查阅相关文献。
食品微生物学检验 霉菌和酵母计数
食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数1 范围本标准规定了食品中霉菌和酵母（moulds and yeasts）的计数方法。
本标准适用于各类食品中霉菌和酵母的计数。
2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1 培养箱：28 ℃±1 ℃。
2.2拍击式均质器及均质袋。
2.3 电子天平：感量0.1 g。
2.4 无菌锥形瓶：容量500 mL。
2.5 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0.1 mL刻度)。
2.6 无菌试管: 18 mm×180 mm。
2.7 旋涡混合仪。
2.8 无菌平皿：直径90 mm。
2.9 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
2.10显微镜：10×。
3 培养基和试剂3.1 生理盐水：见附录A中A.1。
3.2 马铃薯葡萄糖琼脂：见附录A中A.2。
3.3孟加拉红琼脂：见附录A中A.3。
4 检验程序霉菌和酵母计数的检验程序见图1。
图1 霉菌和酵母计数的检验程序5 操作步骤5.1 样品的稀释5.1.1 固体和半固体样品：称取25 g样品，加入225 mL无菌稀释液（水或生理盐水），充分振摇，或用拍击式均质器拍打2 min，制成1:10的样品匀液。
5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无菌稀释液（水或生理盐水）的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打2 min，制成1:10的样品匀液。
5.1.3 取1 mL 1:10样品匀液注入含有9 mL无菌稀释液的试管中，另换一支1 mL无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合仪上混匀，此液为1:100的样品匀液。
5.1.4 按5.1.3操作程序，制备10倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1支1 mL无菌吸管。
5.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内。
霉菌检测的原理
霉菌检测的原理霉菌检测是指通过特定的方法和技术来鉴定和测量环境中是否存在霉菌，并评估霉菌的种类和数量。
霉菌是一类广泛存在于自然环境中的微生物，可以生长在各种有机物质上，包括食物、土壤、空气和建筑材料等。
生活中的霉菌虽然看起来微小无害，但实际上其孢子和代谢产物可能对人类健康造成负面影响，如过敏反应、呼吸道感染和毒性效应。
因此，及早进行霉菌检测和控制对于保护人类健康和环境卫生至关重要。
霉菌检测的原理主要包括采集样品、孵育培养、观察鉴定和计数测量等步骤。
首先，需要选择适当的采样点和方法来收集环境样品，如表面拭子、空气采样器、液体培养基和分生技术等。
然后，将采集的样品放置在适宜的培养基上，提供适当的温度、湿度和营养条件来促进霉菌孢子的萌发和生长。
培养一段时间后，利用显微镜观察和鉴定不同形态的霉菌菌落，如颜色、形状和纹理等特征。
同时，也可以利用分子生物学技术，如PCR扩增和DNA测序等方法，对霉菌进行基因分析和鉴定。
最后，可以使用计数板、显微镜、光学密度法或培养液细胞数等方法来测量霉菌的数量和浓度，从而评估霉菌的污染程度和危害程度。
在霉菌检测中，有一些常用的培养基被广泛应用于分离和鉴定霉菌，如马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）、玉米麦芽琼脂（CMA）、培养基盒（MEA）和马尔霉菌球蛋白琼脂（DG18）等。
这些培养基富含丰富的营养物质和适宜的pH值，能够满足霉菌的生长需求，并便于观察和鉴定。
除了传统的培养和观察方法外，现代技术也被广泛应用于霉菌检测中，如荧光显微镜、流式细胞术、DNA探针和高通量测序等。
荧光显微镜可以利用特殊的染色剂和荧光探针来标记霉菌细胞或代谢产物，从而在显微镜下进行可视化观察和鉴定。
流式细胞术是一种基于细胞的悬浮液通过激光束逐个通过细胞计数器进行检测和测量细胞数量、大小和形态等特征的技术。
DNA探针可以通过与霉菌DNA序列的互补配对来标记和检测霉菌的存在和数量。
高通量测序技术可以通过对环境样品中霉菌DNA进行大规模测序分析来鉴定和定量霉菌的组成和种类。
实验八食品中霉菌计数法
实验八食品中霉菌计数法食品中的霉菌计数法及其实验方法引言：食品中的霉菌，是食品卫生与安全的一个重要指标。
霉菌孳生繁殖，会产生许多毒素，对人体健康造成危害。
因此，了解和掌握食品中霉菌的计数方法，对于保障食品安全具有重要意义。
本文将介绍食品中霉菌计数法以及相关的实验方法。
一、霉菌的定义和分类霉菌是一类简单的真菌，主要以孢子繁殖。
霉菌分为好霉菌和致病霉菌两大类。
好霉菌可用于发酵食品的制作，如酱油、豆豉等，具有食用价值；致病霉菌则会产生毒素，严重时可导致食物中毒。
二、食品中霉菌计数法食品中霉菌计数的主要方法有直接计数法和表面均匀涂布法。
1. 直接计数法直接计数法是将食品样品进行适当的稀释后，通过显微镜下观察计数霉菌孢子的数量。
具体步骤如下：（1）准备所需实验材料和设备，包括显微镜、玻璃片、移液管、无菌培养基等。
（2）取少量食品样品加入适量的无菌水中，制成一系列的稀释液。
（3）将稀释液取适量滴于玻璃片上，覆盖另一块玻璃片，用显微镜观察计数霉菌孢子的数量。
（4）根据观察结果计算出食品样品中霉菌数量。
2. 表面均匀涂布法表面均匀涂布法主要是将食品样品均匀地涂布在培养基表面，使霉菌孢子落在培养基上形成菌落。
具体步骤如下：（1）准备所需实验材料和设备，包括培养基、无菌针筒、平板培养皿等。
（2）将食品样品取适量，利用无菌针筒将样品均匀涂布在培养基的表面上。
（3）将培养基培养皿倒置，放置在适当的温度下，培养一定的时间，使霉菌孢子发芽和生长。
（4）观察培养皿上的霉菌菌落数量和形态。
三、实验注意事项在进行食品中霉菌计数实验时，需要注意以下事项：1. 实验过程要保持无菌环境，以避免外界的干扰和污染。
2. 要选择适当的培养基和培养条件，以促进霉菌的生长，保证实验结果的准确性。
3. 实验结束后，要对实验器材进行彻底的清洗和消毒，避免交叉污染。
4. 实验过程中，要注意个人的安全防护，避免吸入或接触有害物质。
5. 实验结果应根据食品卫生标准进行评价，以判断食品是否符合卫生要求。
培训讲义-细菌.霉菌及酵母计数
16400 37750 27100
16000或 1.6×104
38000或 3.8×104
27000或 2.7×104
表3-1 稀释度选择及菌落数报告方式
例 稀释液及菌落数 两稀 菌落总数个 报告方式个/g
次
释液 /g 或mL
或mL
10-1 10-2 10-3 之比
4 多不可 多不 313 —— 计 可计
关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落 总数的测定。
3.2.1 霉菌菌丝的特征
（1）平行壁：霉菌菌丝呈管状，多数情况 下，整个菌丝体的直径是一致的。因此在 显微镜下菌丝壁看起来象两条平行的线。 这是区别霉菌菌和其他纤维时最有用的特 征之一。
（2）横隔：许多霉菌菌丝具有横隔，毛霉、 根霉等少数霉素菌的菌丝没有横隔。
液体或半固体样品可用迅速颠倒容器 25次来混匀。有的规定在实际操作时， 振摇时振幅要30cm，7s振摇25次。
为了减少样品稀释倍数的误差，在连 续递增稀释时，每一稀释度应更换一 根吸管。
3.1.2 培养基的选择
（1） 马铃薯-葡萄糖琼脂培养基 （PDA）：
马铃薯含有氮源、丰富的维生素， 霉菌和酵母生长良好。抗菌素可以 抑制细菌。
（5）培养温度37℃，水产品30℃。 （6）检样从开始稀到最后一个平皿所用
时间不宜超过20min。 （7）培养基温度、用量：46℃，15mL。
霉菌和酵母计数
Enumeration of molds and yeasts
1. 概述
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为 食品中正常菌相的一部分。
25~28℃ 5d 菌落计数
报告
2.2 霉菌直接镜检计数法
常用的方法为郝氏霉菌计数法，或称 霍华德（Howard）霉菌计数法。
GB4789.15-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》标准解读
品稀 释 液 的混 匀 ，否 则 在小 试 管里 面 很难 充 分混 匀 。增 加 了 微量 移 液 器及 吸头 １．０ ｍＬ（２．１１），这是 为 了兼 容 检验机 构实 际工 作 中
ａｎａｌｙｚｅｄ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｅｄ．Ｂｙ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｔｈｅ ｓｃｏｐｅ，ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ａｎ ｄ ｍａｔｅｒｉａｌ， ｍ ｅｄｉｕｍ ａｎ ｄ ｒｅａｇｅｎｔ，ｔｅｓｔ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ｒｅｓｕｌｔ ａｎｄ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｍ ｅｔｈｏｄ，ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｒｅａｇｅｎｔ ｏｆ
版 标 准 ）实 施 日期 为 ２０１７年 ４月 １９日 。这 个 标 准 方 法 在 目前
３ 培 养基 和试 剂
各个 食 品 检验 机 构 和企业 微 生 物实 验 室使 用 频率 比较高 。在 ２０１６
２０１６版 标准 中增 加 了生 理 盐水 和 磷 酸盐 缓 冲液 ，保 留无 菌蒸
ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４－９３１６ ２０１８．０５．００１
冲洗 ，均 质程 度不 足 。另外 有些 检验 机构 ，使 用旋 转刀 片均质 器 ，
ＩｎｔｅｒＤｒｅｔａｔｉＯｎ ｆ０ｒ Ｇ Ｂ ４７８９．１５—２０ｌ６ Ⅳ ａｔｉｏｎａｌ Ｆｏ０ｄ Ｓａｆｅｔｙ 可能 会 把霉 菌 的菌 丝 切 断 ，导致 检验 结 果偏 高 。所 以，２０１６版标
撼准研兜芍麓墉
国 生耘 准 ￣ ＣＨＳＭ ０５ １
ＧＢ ４７８９．１ ５—２０１ ６《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 标准解读
马群飞
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液的制备和使用（以白色念珠菌为示例）白色念珠菌（0）代↓传代培养↓实验菌液的制备：沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20～25℃，培养时间2～3天↓计数培养基适用性检查：胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu↓计数方法适用性试验：胰酪大豆胨琼脂培养基（MPN法不适用），培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu 注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基适用性检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.1菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
1.2菌液制备（按表1规定程序培养各试验菌株）取白色念珠菌的新鲜培养物↓用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液取黑曲霉的新鲜培养物↓加入3～5ml含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱↓采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
1.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
2.培养基适用性检查按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表1规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好3计数方法适用性试验供试液制备：水不溶性非油脂类供试品↓取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基↓制备成1:10供试液。
《霉菌和酵母计数》课件
在生物领域中，霉菌和酵母起着重要作用。本课件将介绍计数方法的基本原 理和实验步骤，以及在工程和医学中的应用。
计数方法
平板计数法
通过将微生物样品均匀涂布 在琼脂平板上，结合菌落计 数原理，用于测定微生物的 数量。
筛选计数法
通过过滤和筛选微生物样品， 用显微镜观察计数，可用于 测定微生物的浓度。
2
对参与学习者的要求
说明参与学习此课程的学习者应具备的知识和技能，以及学习的态度和动力。
3
后续学习建议及扩展阅读资料
提供参与学习者继续学习的建议和推荐扩展阅读资料，以进一步拓展知识。
浓度计算公式
根据样品中微生物的计数结 果，进行浓度计算，以了解 微生物的分布情况。
现场实验
实验设备及 时所需要使用的实验设备和试剂。
详细阐述进行霉菌和酵母计数实 验的步骤及操作指南。
数据处理及分析
介绍如何处理实验数据并进行统 计和分析，以得出可信的结果。
结论及应用
1 结论简述
总结霉菌和酵母计数实验 的结果，并提出对微生物 数量的评估和判断。
2 工程及医学中的应用 3 发现与尚未解决的问
题
探讨霉菌和酵母计数在工
程和医学领域中的应用，
讨论与霉菌和酵母计数相
如食品工业和制药工业等。
关的挑战和待解决的问题，
为未来的研究提供方向。
总结
1
概括本课程的重点
对本课程的核心内容进行概括，强调学习目标和要点。
霉菌数的测定
霉菌数的测定
一、供试液的制备
用开空面积为20cm 2的消毒过得采样板压在试样的内层面上，将无菌棉签在无菌生理盐水中稍沾湿，在板孔范围内擦抹5次，换一支再擦5次，共擦抹5个位置100cm 2
,10支棉签，每个棉签擦抹完后将头折断投入盛有30ml 无菌生理盐水的三角烧瓶中。
全部投入后，将烧瓶迅速摇晃1分钟，静置10分钟，即得1:1供试液（原液）。
二、培养基、试剂制备
1、 虎红琼脂培养基
按所需称虎红琼脂干粉，加蒸馏水充分溶解。
经121℃15—20分钟高温灭菌，冷至45℃倾注平皿。
2、 生理盐水
称取0.9g 氯化钠加100ml 蒸馏水，摇匀即可。
溶解分装后于121℃20分钟高温灭菌。
三、检验程序
四、菌落数报告 制备
1:10供试液 1:1000供试液 供试品
1:100供试液
稀释 稀释
2—3个 2—3个
2—3个
注 皿
养
菌落计数 报 告 23—28℃ 72h
1、一般宜选择菌落数在30—100间的稀释级，作为菌落计算的依据。
2、若相邻的2个稀释级的平均平板菌落数处在30—100时，计算级间比值。
当比值≦2时，
以两级菌落数的均值为报告菌数；当比值>2时，按低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数为报告菌数。
3、各稀释级的平均菌落数均不足30，以最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌
数。
注：报告数值取2位有效数字。
霉菌平板的计数范围 -回复
霉菌平板的计数范围-回复霉菌平板的计数范围是指在霉菌平板计数方法中，可以有效测定的霉菌菌落数的范围。
霉菌平板计数是一种常用的实验方法，用于测定空气、食品、医药、环境等样品中的霉菌含量。
在实际应用中，为了准确测定并满足质量控制标准，霉菌平板计数范围非常重要。
下面将逐步回答你关于霉菌平板计数范围的问题。
第一步：什么是霉菌平板计数？霉菌平板计数是一种用于测定样品中霉菌含量的方法。
它是通过将待测样品均匀地涂布在含有适宜培养基的平板上，然后在适宜温度和湿度条件下培养一段时间，利用霉菌在培养基上形成的菌落来反映原样品中的霉菌数量。
通过计数菌落的数量，可以得出对应霉菌的菌落形成单位（CFU）。
第二步：霉菌平板计数范围的意义霉菌平板计数范围的确定对于各行各业的质量控制非常重要。
在某些特定领域，如制药业、食品行业和医疗卫生行业等，霉菌的污染可能对产品质量和人体健康造成严重威胁。
因此，制定了相关的质量控制标准，规定了允许的最大霉菌菌落形成单位数目。
霉菌平板计数范围的确定可以帮助监测样品中的霉菌含量是否达到标准并采取相应的措施。
第三步：影响霉菌平板计数范围的因素在确定霉菌平板计数范围时，有几个关键因素需要考虑：1. 平板培养基的选择：不同的平板培养基适用于不同种类的霉菌生长。
通过根据样品类型和需求选择合适的平板培养基，可以最大限度地提高计数的准确性和可靠性。
2. 培养条件：适宜的温度和湿度对于霉菌生长和繁殖至关重要。
不同种类的霉菌对培养条件有不同的要求，为了获得准确的计数结果，应根据被测样品的特点选择适宜的培养条件。
3. 培养时间：霉菌的生长速度是不同的，所需的培养时间也会有所差异。
根据不同的霉菌种类和培养条件的选择，合理设定培养时间以保证菌落的充分形成。
第四步：霉菌平板计数范围的确定方法为了确定适当的霉菌平板计数范围，可遵循以下步骤：1. 选取一系列霉菌菌落形成单位数目已知的标准菌株，涂布到平板上，分别进行培养。
2. 在培养完全后，根据各菌株的菌落形状、大小、颜色等特征进行初步鉴定。
食品中霉菌的检测技术
食品中霉菌的检测技术
（3）操作步骤
① 采样 取样时需特别注意样品的代表性和避免采 样时的污染。样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在 低温干燥处。 ② 以无菌操作称取检样25g（mL），放入含有225mL 灭菌水的具玻塞锥形瓶中，振摇30min，即为 1:10稀释液。 ③ 用灭菌吸管吸取 1:10 稀释液 10mL，注人灭菌试管中， 另用带橡皮乳头的 1mL灭菌吸管反复吹吸 50次，使霉菌孢 子充分散开。 ④ 取 lmLl:l0 稀释液注人含有 9mL 灭菌水的试管中 （注意吸管尖端不要触及试管内稀释液），另换一支lmL 灭菌吸管吹吸五次，此液为1:100稀释液。
食品中霉菌的检测技术
（3）培养温度 大多数霉菌和酵母在25～30℃的情况下生长良好。有人 用附加抗生素的培养基和酸性培养基，在温度12℃、17℃、 22℃、27℃和32℃的培养条件下，测定蔬菜、乳制品、海产 品和肉类的霉菌和酵母数。结果表明，培养温度在17～27℃ 之间，用两种培养基测定的霉菌和酵母数没有明显差异。 （4）菌落计数 应选取菌落数在30～100之间的平板作为霉菌和酵母数测 定标准。一个稀释度使用两个平板，采用两个平板的平均数。 选择稀释度也选择平均菌落数在30～100之间的稀释度，乘以 稀释倍数报告之。关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落总数 测定。
食品中霉菌的检测技术
第九章
食品中霉菌的检测技术
第一节
食品中霉菌和酵母菌的计数
第二节
常见产毒霉菌的鉴定
食品中霉菌的检测技术
第一节 食品中霉菌和酵母菌的计数
一、概述 二、检验方法
1．霉菌和酵母平板计数法 （1）设备和材料 温箱（25～28℃）；振荡器；天平； 显微镜；具玻塞三角瓶（300mL）；试管（15mm×150mm）； 平皿（直径9cm）；吸管（1mL及10mL）；酒精灯；载物玻片； 盖玻片；广口瓶（121℃灭菌20min）；牛皮纸袋；金属勺、 刀等；试管架；接种针；橡皮乳头。 （2）培养基和试剂 察氏培养基；高盐察氏培养基；马 铃薯葡萄糖琼脂；马铃薯琼脂；孟加拉红培养基；玉米粉琼 脂；灭菌蒸馏水、乙醇；乳酸-苯酚液。 如标准要求只做霉菌菌数，则可用高盐察氏培养基，其 他同本方法。
霍华德霉菌直接镜检计数法
霍华德霉菌直接镜检计数法The document was prepared on January 2, 2021霍华德霉菌直接镜检计数法1适用范围本方法适用于清汁、浊汁、水、浓缩果汁中霍华德霉菌直接镜检计数。
2设备和材料烧杯玻璃棒折光仪显微镜郝氏计测玻片3流程取样→称样→稀释→调节视野→涂片→观察→记录→计算4步骤检样制备取定量检样，加蒸馏水稀释至折光指数为～（即浓度为～％）。
用糖度计或折光仪测定折光指数或浓度，如果折光指数过大或过小，须加水或样品，直至配成标准样液，才能进行检验。
标准视野的调节霍德华霉菌计测用的显微镜，要求物镜放大倍数为90～125倍，其视野直径的实际长度为，则该视野为标准视野。
检查标准视野：将载玻片放在载物台上，配片置于目镜的光栏孔上，然后观察。
标准视野要具备两个条件：载玻片上相距的两条平行线与视野相切；配片（测微器）的大方格四边也与视野相切。
如果发现上述两个条件，其中有一条不符合，须经校正后再使用。
涂片检查玻片首先用擦镜纸或绸布沾酒精将载玻片和盖玻片擦净。
检查是否擦干净，可将盖盖玻片置于载玻片的两条突肩上观察盖玻片与载玻片突肩的接触处是否产生牛顿环，如果没有产生牛顿环，表明没有擦净，必须重新擦，直至产生牛顿环，方可使用。
加样用滴管或玻棒取一大滴混合均匀的样液，均匀地摊布于载玻片中央的平坦面上，盖上盖玻片（盖玻片可直接盖上去，也可以从突肩边沿处吻合切入）。
如果发现样液涂布不均匀、有气泡、或样液流入沟内、从盖玻片与突肩处流出、盖玻片与载玻片的突肩处不产生牛顿环等，应弃去不用，重新制作。
涂好的制片，在计测室内，每个标准视野的样液体积为：πr2×＝×（2）2×＝观察视野数及分布对一般样品，每个涂片均检查50个视野（每一个样品至少应测25个视野，才能代表样品的各个部分。
如果检查结果阳性视野低于30％，则检查25个视野即可；如果在30～40％之间，须检查50个视野；如果在40～50％之间，须检查100个视野；如果在50％以上或超过更多，则要继续检查，直至检查25个视野的结果与一系列计算结果无差异为止）。
酵母菌,霉菌检测
酵母菌、霉菌一、原理二、范围三、安全保护措施四、制样1、在无菌条件下，称适量的实验样品，并以1:10的比例加入无菌Butterfields磷酸盐缓冲剂进行稀释（例如：90ml 10克，225ml 25克）。
干物使用无菌压舌板或者样品勺，而液体则使用无菌注射器或者吸管。
2、用力摇晃使之充分混合或均匀悬浮，对于一些材料（如药片、胶囊）可能需要在45℃的水浴中进行30分钟的溶解。
3、要求混合的样品（例如：食物棒），按需持续1-2分钟或者更多，直到样品悬浮液均匀为止。
4、随后，酌情用90或者99ml的Butterfields磷酸盐缓冲剂进行1：10的稀释。
然后，在7分钟内以1英尺（30cm）的弧度摇晃稀释液25次。
五、二氯喃玫瑰红氯黴素培养基（DRBC）1、材料及仪器：2、培养基及试剂①任何知名品牌的脱水培养基都可使用。
用适宜的微生物测试每种培养剂的抑制生长和促进生长能力。
②Butterfields磷酸盐缓冲剂。
90ml，99ml或者225ml储存溶液：将34.0g的KH2PO4溶解在500ml去离子水中，用1N NaOH(ca.175ml)将PH值调到7.2，再用去离子水稀释到1L。
放入冰箱保存。
工作溶液：将1.25ml储存溶液用去离子水稀释至1L，分出想要的容量放入合适的容器中，用高压灭菌法灭菌。
③DRBC培养基。
加热脱水培养基至沸腾到完全溶解。
然后在121℃的温度下，高压灭菌15分钟或一个适宜的规定时间。
最后的PH值应为5.6+/-0.2.在水浴中调节温度至45-50℃，倒入平板。
培养基需避光储存在2-8℃的黑暗环境下。
在通风橱中称量脱水培养基;避免吸入粉尘，避免接触眼睛，皮肤。
参照安全手册。
④异丙醇（IPA）70%，或者同等的消毒剂。
参照安全手册。
3、步骤①用灭菌吸管吸取1ml或者0.1ml适量的样品稀释液，一式两份，置于干DRBC琼脂平板表面。
为了避免散开和彻底干燥，将稀释液移到5个培养皿中，每个0.2ml，共1ml。
番茄酱中霉菌的霍华德计数方法分析
番茄酱中霉菌的霍华德计数方法分析甄珍【摘要】目的:拟对番茄酱中霉菌的霍华德计数方法进行详细分析.方法:依据标准要求,番茄酱中霉菌检验需使用霍华德计数方法,而GB 4789.15-2016 标准中只是简单地规定检验步骤,并未对检验过程中的难点即镜检时如何分辨霉菌菌丝进行详细描述.实验通过GB 4789.15-2016、SN/T 3934-2014、AOAC 984.29 这3种检验方法的比较分析,以及实验过程中的镜检照片,对番茄酱中霉菌的霍华德计数法的镜检方法进行详细分析.结果:AOAC 984.29 方法中对霉菌特征进行了详细描述,可作为参考,依据实验具体的镜检照片便可解决用霍华德计数法对番茄酱中霉菌检验时的难题.结论:用霍华德计数法对番茄酱中霉菌检验时需严格区分霉菌菌丝与番茄组织细胞,用实验介绍的方法可帮助区分霉菌菌丝与番茄组织细胞,避免出现假阳性结果.%Objective: To make a detailed analysis of Howard counting method for mould in ketchup.Method: According to the standard requirements, the detection of mould in ketchup should use Howard counting method, and GB 4789.15-2016 standard just specifies the inspection steps simply,not describes the difficulties in the inspection process in detail, that is how to distinguish fungal hyphae.Through the comparative analysis of these three kinds of inspection methods such as GB 4789.15-2016, SN/T 3934-2014, AOAC 984.29,and the microscopic photos in experimental process, the inspection procedures of Howard counting method for mould in ketchup are analyzed in detail.Results:In AOAC 984.29 method, the characteristics of mould are described in detail, it can be used as a reference, and based on these experimentalmicroscopic photos, the problems of Howard counting method for detecting mould in ketchup can be solved.Conclusion: The detection of mould in ketchup with Howard counting method should strictly distinguish the fungal hyphae and tomato tissue cells, the methods used in this experiment can help distinguish the fungal hyphae and tomato tissue cells, to avoid the false positive results.【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2017(042)009【总页数】4页(P134-137)【关键词】番茄酱;霉菌;霍华德计数;镜检;番茄组织细胞【作者】甄珍【作者单位】齐齐哈尔出入境检验检疫局,黑龙江齐齐哈尔 161005【正文语种】中文【中图分类】TS201.3霉菌作为评价食品卫生质量的指标菌之一，能够反映食品有无受到霉菌的污染，加工制品的原料有无霉菌所致的腐烂存在[1-3]。
3霉菌计数课件
将上述物品于121度灭菌20分钟 值日生看灭菌罐,灭菌好后将物品(除培养 基外)放在篮内; 下次课上课前当日值日生将培养基融化待 接种.
进一步熟练操作: ——包裹 1.用牛皮纸\双层报纸\灭菌筒灭菌 2.用牛皮纸\双层报纸包裹要求: 保证容器的内壁与外界隔开,不暴露于空 气,不接触外界 双层;纸大小要合适;口要抓紧
（Hale Waihona Puke ）(2)、供试液稀释（10倍递增稀释法） 2-3个梯度，1∶100、1∶1000，稀释剂同上 ∶ 、 ∶ ， (3)、吸样 每级稀释液吸取1ml，注入90mm平皿，重复21ml 90mm 23次，同时做阴性对照 3 阴性对照试验 取试验用的稀释剂1ml，置无菌 平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种 计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生 长。
b\检查流程（平皿菌落计数法）
示意图表示
c\霉菌总数准备（平皿菌落计数法）
设备、仪器、器皿、试剂及用具 培养皿：8 试管：2 吸管：10ml(2);1ml(5) 三角瓶或烧杯：1 PH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液：150ml 磷酸二氢钾3.56 磷酸氢二钠7.23 氯化钠4.30 蛋白胨1.0 加水1000ml，微温溶解、滤清、分装、灭菌 研钵、玻璃棒 培养基：玫瑰红钠琼脂 150ml
酵母菌含量超标，一方面意味着该食品的 生产环节卫生质量较差，另一方面意味着 这种食品已过分发酵，很容易变质。抵抗 力特别差的人如果食用酵母菌含量超标的 食品，可能出现急性腹泻等问题。
二、霉菌及酵母菌总数检查
1.概念 2.方法 3.平皿菌落计数法（过程、流程、准备） 4.报告规则 5.结果报告 6.培养基稀释法；
操作练习: ——包扎 棉线长度：避免浪费； 拇指留一圈线头——3圈左右——另一线头穿圈 打结 要求：紧、活结、无大线头、包扎位置恰当 研钵：干燥、内壁完整包裹不外露、便于抓拿
霉菌试验标准和条件
霉菌试验♦一、概述♦二、霉菌的试验方法♦三、防霉措施♦四、有关标准概述♦霉菌的危害♦霉菌试验的定义♦霉菌试验的目的霉菌对材料和产品的影响♦直接危害是霉菌生长食取材料中的有机成分，直接导致结构破坏、强度降低、物理性质变化等。
间接危害是霉菌分泌的新陈代谢排泄物有机酸和其他离子化合物，造成电解或老化效应，某些触媒剂，还促成氧化或分解作用的发生，间接导致材料及部件的损坏。
长霉造成的故障模式：---引起电子或电气设备失灵---减低绝缘材料的电性能---造成燃油系统的腐蚀和堵塞---破坏密封---使金属件腐蚀---使玻璃产生蚀刻低压与霉菌这两个因素的组合不会增大二者本身的影响太阳辐射与霉菌因为太阳辐射产生热，所以这个组合不可能产生影响，和高温与霉菌的组合相同。
此外未经过滤的太阳辐射中的紫外线具有显著的杀菌作用盐雾与霉菌这是一个相容的组合湿度与霉菌湿度有助于霉菌和微生物的生长，但不会增大它们的影响高温与霉菌霉菌和微生物的生长，需要比较高的温度，但是，在71℃（160 ℉）以上，霉菌和微生物就不能生长了低温与霉菌低温影响霉菌的生长。
在零度以下，霉菌保持在假死状态霉菌试验的定义♦霉菌试验是气候环境试验的一个项目。
用于考核产品或材料抵抗霉菌侵袭的能力。
它于一般环境试验一样，考虑产品在实际运输、储存或使用中，最易遭受霉菌危害的环境条件，在试验室中用人工模拟创造霉菌生长最适宜环境进行试验。
霉菌试验的目的♦为确定产品抗霉菌侵蚀能力，必须制定一个与实际工作条件相似，能判断霉菌的侵蚀作用和给出正确评价的试验方法。
它将为产品的选材、结构和设计提供依据以保证产品能在有大量霉菌存在的气候环境中安全可靠地运行二、霉菌试验方法：1、霉菌试验的分类：♦天然暴露试验：直接暴露在选定的湿热环境中。
有室内、室外的暴露试验和埋土试验的方法。
♦试验室人工加速试验：常用有湿室悬挂法和无机盐琼脂平皿法。
2、菌种的选择♦黑曲霉♦黄曲霉♦杂色曲霉♦绳状青霉♦球毛壳霉3、试验样品的准备♦霉菌试验不得采用经过盐雾、沙尘等试验的试品。
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韩国检测霉菌的方法是Howard霉菌计数法（Howard Mold Counting Assay）。
其方法如下：
1.所需设备
1)高速混合器
可调速的高速混合器，4-8个尖锐的不锈钢刃在200ml容量的不锈钢杯容器的底部附近旋转，使用旋转速度最少0~10，000rpm之间，并用带有旋转速度仪的高速混合器。
2)Howard霉菌计数玻片（Howard Mold Counting Slide）
依外壕被围绕的20×15mm大小的四角的玻璃片。
试料点滴平面的两个侧面盖玻片支架比试料点滴平面高出0.1mm的整齐突起。
盖玻片放在支架上面时，使用试料点滴平面与盖玻片之间的深度达到0.1mm的玻片。
3)显微镜
使用配有4个黑白接物镜并以10-400倍的倍率可以观察的显微镜。
2.试剂
1）1%氢氧化钠溶液（NaOH）
2）氧化硅胶液小包制或者2-辛醇（2-octanol）
3）稳定液（5%果胶溶液）：高速搅拌器里注入475ml、85℃水搅拌的同时将25g的果胶（pectin）少量的添加并溶解。
3．试验操作
1）试验溶液的调配
称5g检样放入高速混合器。
100ml的1%氢氧化钠溶液分2
次添加，第一次添加约30ml在10，000rpm的速度下搅拌5秒，然后用余下的70ml清洗混合器内壁上的附着物。
把混合器内的混合物以10，000rpm的速度搅拌3分钟后，滴入氧化硅胶液3~4滴除去泡沫，以上的混合物100g与25g的稳定液混合作为显微镜镜检试料。
2）试验操作
（1）显微镜镜检试料的操作
Howard霉菌计数玻片的试料平面上利用滴管点滴试料。
在点滴的试料上，大的检样片或籽等用微型镊子取出后，尽量不产生斑点或线条的小心放上盖玻片，然后在显微镜载物台上插入霉菌计数玻片。
（2）霉菌菌丝的诊断
在显微镜的100~450倍观察时，霉菌菌丝有下列外观特性。
★细胞壁的平行
★分节
★形成粒子
★分枝
★菌丝的末梢
★非折射性的外观
（3）阳性划区判定
对一个可视划区判定阳性或者阴性。
哪一个划区也不能一次以上的判定阳性。
为判定一个划区为阳性，三根以下的霉菌菌丝的总长度（合计长度）需要超过可视划区直径的1/6.大部分的阳性划区判
定是包括分枝长度的一个菌丝的长度为依据，并且要超过可视划区直径的1/6。
下列长度中只要有一个超过可视划区直径的1/6，该可视划区判定为阳性。
●没有分枝的一个菌丝的长度
●分枝的长度合计的一个菌丝的长度
●2个菌丝的长度合计的长度
●3个菌丝的长度合计的长度
●由霉菌块形成的所有菌丝的总长度(霉菌块是作为1个碎片来
看待并且所有菌丝的总长度)
（4）显微镜镜检
适当的调整粗调螺丝和微调螺丝，在90~125倍的倍率范围里，调准焦距到可视划区内的物体能够清晰可见。
在试料平面上设定25个圆型的可视划区，按号码顺序判定霉菌菌丝体的各可视划区的霉菌菌丝体是阳性或者阴性。
从1号可视划区到25号可视划区逐一镜检，按各可视划区分别判定霉菌菌丝体的阳性或者阴性。
从1号到25号划区的镜检结束后，从显微镜拿出Howard霉菌计数玻片清洗干燥。
使用同一试验溶液反复（1）的试验操作，从25号划区起至1号划区逐一实施镜检，对总共50个可视划区判定阳性或者阴性。
（5）计算
观察的所有划区镜检的结果被判定为阳性的划区的比率%
（阳性的可视划区/镜检的总可视划区数）×100=阳性比率%。