血管生成实验步骤及方法

血管生成实验步骤及方法

一、技术简介

血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉新的毛细血管性血管的生长。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1-2 mm，都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。小管形成实验是测量在体外血管生成一种快速的，可量化的方法。

二、实验流程

1. 第一天matrigel（BD，354230）放入4℃冰箱过夜。

2. 第二天待matrigel冻融后，离心数分钟。

3. 冰上操作（matrigel不能凝固）。matrigel用预冷枪头混匀，EP管提前预冷，每500μl分装。

4. 96孔板提前预冷，每孔加入50μl matrigel，避免产生气泡。在37℃孵箱放置45分钟。

5. 当细胞长满70-80%时，消化下来，并用含10%FBS的DMEM重悬，每孔加入50μl重悬液，浓度为10000-60000/孔细胞，重复三孔。

6. 37℃孵育，四小时后可见血管形成。