各种转染试剂中文说明
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FuGENE6（Roche）转染步骤:
转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总
体积到100ul。
2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。
4.室温孵育20分钟。
5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液
洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。
6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：
1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释
4.0ugDNA，轻轻混匀。
3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如
OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。室温放
置20分钟。
5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入
2ml无血清配养基。
6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
7.在37℃，5％CO
中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。
2
或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。
8.在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，
检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
贴壁细胞的稳定转染：
转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。
Lipofectamine 2000转染试剂转染步骤（24孔板）：
1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数（0.5-2×105），细胞铺板，使其在转染日
密度为90-95％。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2.对于每孔细胞，使用50ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释
0.8-1.0ugDNA，轻轻混匀。
3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用50ul无血清培养基（如
OPTI-MEM I培养基）稀释1-3ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。室温放
置20分钟。
5.（optional）将24孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入
0.5ml无血清配养基。
6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。
7.在37℃，5％CO
2
或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。
8.在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，
检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
贴壁细胞的稳定转染：
转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。
Effectene Transfection Reagent(Qiagen) 转染步骤：
以下步骤适用于在6孔培养板中转染贴壁细胞。开始时，每6孔培养板使用0.4ug DNA。尽管DNA的量看起来很少，但已足够用于转染。如果想获得最高的转染效率，对每种细胞系的转染条件都要进行优化。
1.转染前一天，用5ml含血清和抗生素的培养基分装使每6孔培养板含2-8×
105的细胞（根据细胞类型而定）。
2.在细胞的正常培养条件下培养（通常37℃和5％CO2）。转染当天细胞应
40-80％融合。
3.转染时，用DNA浓缩缓冲液（EC Buffer）稀释1ug DNA至100ul总体积（DNA
用pH 7-8的TE Buffer溶解，DNA最低浓度：0.1ug/ul）。加入3.2ul Enhancer，涡旋1s以混合溶液。
重要：请保持DNA与Enhancer比例恒定。
注意：质粒DNA的质量会显著影响几个转染参数如转染效率、细胞增殖和细胞毒性、以及对于结果的解释。因此，只应该使用最高纯度的DNA。使用HiSpeed，QIAfilter和QIAGEN Plasmid Kits抽提纯化的质粒适合于大多数细胞系的转染。要获得最好的重复性和最好的结果，我们推荐使用Endofree Plasmid Kit，该试剂盒可以快速有效地在质粒纯化过程中去除细菌内毒素，从而获得最佳的转染结果。
4.室温（15-25℃）孵育2-5分钟，离心（spin down）几秒钟以从管顶去除液5