蛋白质的等电点测定与沉淀实验
实验二蛋白质的等电点测定和沉淀反应(精)
现象
解释
5．乙醇引起的变性与沉淀
管号 1 2
3
操作 振荡混匀 加数滴盐酸 振荡混匀 醋酸中和 加数滴盐酸 振荡混匀 碳酸钠中和 加数滴盐酸
现象
解释
思考题
1.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？ 2.氯化汞为何能做为杀菌剂？ 3.什么是蛋白质的等电点？ 4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生
沉淀 ？
• 本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测 定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠（醋酸 钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值 的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后， 沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的 等电点。
• 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成 水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体 颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白 质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
此时蛋白质分子内部结构发生重大改变， 蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂 中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白 质与重金属离子或某些有机酸的反应都属 于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液 稳定的条件仍然存在（如电荷），并不 析出。因此变性蛋白质并不一定都表现 为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变 性。
蛋白质的沉淀反应可分为 两类。
可逆的沉淀反应
此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变 化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉 淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天 然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析 作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间 作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此 类反应。
不可逆沉淀反应
实验二、蛋白质 等电点测定及沉淀反应
一、实验目的
1、了解蛋白质的两性解离性质 2、学习测定蛋白质等电点的一种方法 3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。
蛋白质的性质实验二-蛋白质的等电点测定和沉淀反应
蛋白质沉淀反应结果分析
要点一
蛋白质沉淀反应原理
当溶液的pH值低于或高于蛋白质的 等电点时，蛋白质带负电荷或正电荷 ，容易与其他带相反电荷的物质发生 静电吸引而产生沉淀。沉淀反应可用 于分离纯化和测定蛋白质含量。
要点二
实验结果
实验观察到在pH值低于或高于等电 点时，蛋白质出现沉淀现象。通过离 心分离和称重，测定了沉淀物中蛋白 质的质量和含量。实验结果表明，该 蛋白质在不同pH值下的沉淀效果显 著，可用于蛋白质的分离纯化和含量 测定。
实验试剂
盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸盐缓冲液等。
配置不同pH值的缓冲液
选择适当的缓冲液，如醋酸-醋酸钠缓 冲液、磷酸盐缓冲液等。
根据需要配置不同pH值的缓冲液，确 保缓冲液的准确性和稳定性。
蛋白质溶液的等电点测定
将蛋白质溶液与不同pH值的缓冲液混合，观察蛋白质的溶解度变化。
当蛋白质溶解度最低时，记录对应的pH值，即为该蛋白质的等电点。
了解蛋白质的沉淀反应及原理
沉淀反应
蛋白质在某些条件下，失去溶解性从 溶液中析出的现象。
原理
蛋白质的沉淀反应通常与溶液的pH值 、离子强度、温度等因素有关，当这 些因素发生变化时，蛋白质的溶解度 可能会降低，导致沉淀的产生。
02
实验原理
蛋白质等电点的概念及影响因素
蛋白质等电点
蛋白质分子在溶液中处于净电中性状态时的pH值，此时蛋白质的溶解度最低。
通过测定不同pH值下的蛋白质电导率，确定了蛋 白质的等电点。
在实验过程中，观察到了蛋白质的溶解度变化和 电荷性质的变化。
分析实验结果与理论预期的差异
实验结果与理论预期基本一致，没有出现明显的偏差。
实验结果支持了蛋白质等电点沉淀的理论，即当溶液pH值等于蛋白质等电点时，蛋白质溶解度最低， 容易发生沉淀。
实验3蛋白质的等电点测定和沉淀反应
实验3蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验3 蛋白质的等电点测定和沉淀反应华南师范大学杨兴举一、目的1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
1、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
二、原理蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有特异的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋白质沉淀与凝固。
蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜鸡蛋（二）试剂1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 200ml取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40—50?的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。
实验3蛋白质的等电点测定和沉淀反应
实验3蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验3 蛋白质的等电点测定和沉淀反应华南师范大学杨兴举一、目的1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
1、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
二、原理蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有特异的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋白质沉淀与凝固。
蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜鸡蛋（二）试剂1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 200ml取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40—50?的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。
蛋白质的等电点测定与沉淀实验
实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应姓名：指导教师：实验室：组员：成绩：第三部分：实验记录与分析实验现象记录及分析：（一）蛋白质等电点测定（二）蛋白质的盐析1．蛋白质的盐析2．重金属离子沉淀蛋白质3．有机酸沉淀蛋白质4．有机溶剂沉淀蛋白质5．乙醇引起的变性与沉淀第四部分：课后研讨题1.通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。
适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。
2.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？铅、汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
3.氯化汞为何能做为杀菌剂？细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
5.将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以说明。
（1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。
（2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋白质，用于提纯蛋白质。
（3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml的蛋白质溶液，再加入3%硝酸银溶液1-2滴，振荡试管，观察现象。
（4）某些有机酸沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。
（5）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入2ml 95%乙醇，观察现象。
教师评阅：签名。
蛋白质的等电点测定和沉淀反应
实验3蛋白质的等电点测定和沉淀反应、目的1、 了解蛋白质的两性解离性质。
2、 学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
1、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
、原理蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡:COOHJfP NH 2蛋白质分子蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的PH 达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动， 此时溶液的pH 值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有特异的等电点。
在等电点时， 蛋白质的理化性质都有变化， 可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液 pH 值。
本实验通过观察不同 pH 溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠（醋 酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同 pH 值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后， 沉淀出现最多的缓冲液的 pH 值即为酪蛋白的等电点。
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒， 在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中， 并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇 （或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时， 常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀,不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋白质沉淀与凝固。
蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
COO'/PCOQ-NH 2阴离子NH3兼性离子COOH + H* /b ■= p+ 0H -NH ；阳离子P H>pIP H = pIpH<pI蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
实验八 蛋白质的等电点测定和沉淀反应
（二）实 验 原 理
水溶液中的氨基酸为两性离子，因而不能直接
用碱滴定氨基酸的羧基。用甲醛处理氨基酸，甲醛
生 物
与氨基结合，可形成—NH—CH2OH,—N(CH2—OH)2等
化 羟甲基衍生物，使NH3+上的H+游离出来，这样就可
学
实 用碱滴定NH3+放出的H+，测出氨基氮，从而计算氨
在第2、3号管中加一滴甲基红，在分别用
0.1mol/L醋酸溶液和0.2mol/L碳酸钠溶液中和之。
观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管再加
0.1mol/LHCL溶液数滴，观察沉淀的再溶解。溶
生 物
解后各试管调pH至7后加入乙醇1mL。解释各管发
化 生的全部现象。
学
实
验
三思考题
1.名词解释：
水化层；双电层；蛋白质变性；盐溶与盐析；蛋白 质等电点沉淀。
甲醛滴定法常用以测定蛋白质水解程度，随着水解 程度的增加，滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保
实 持恒定。
验
四 甲醛滴定法(补充材料）
(三）操 作 方 法
取一只烧杯，加入甲醛溶液50ml，加0.5% 酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mol/LNaOH溶液， 使溶液成为微粉红色，临用前中和。取3只锥 形瓶，按下表操作。
由于电位离子的静电引 力，在其周围又吸附了 大量的异号离子，形成 了所谓的“双电层”。
二 蛋白质的沉淀及变性
(三）操 作 方 法
1、蛋白质的盐析
加5%卵清蛋白溶液5ml于试管中，再加等量
的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出
球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水
生 物
实验一、蛋白质的等电点测定和沉淀反应报告
测定及沉淀反应
一、实验目的
1、了解蛋白质的两性解离性质 2、学习测定蛋白质等电点的一种方法
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识
4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义
5、了解蛋白质变性与沉淀的关系
二、实验原理
蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下 列平衡：
蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸 碱度影响。
蛋白质溶液：5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液 （新鲜鸡蛋清:水=1:9） 0.2M 醋酸-醋酸钠缓冲液，pH4.7 3%硝酸银溶液
5%三氯乙酸溶液
95%乙醇 饱和硫酸铵溶液：25℃，100mL水＋76.7g硫酸铵
0.1 M盐酸溶液
0.1 M氢氧化钠溶液 0.05 M碳酸钠溶液 0.1 M醋酸溶液 甲基红溶液：pH变色范围为4.4-6.2，由红变黄
蛋白的沉淀。
离心，取沉淀，加少量水，观察是否溶解。
离心后上清液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为
止，此时析出的沉淀为清蛋白。 离心，取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察 沉淀能否重新溶解。
2. 重金属离子沉淀蛋白质
取1支试管，加入蛋白质溶液2 mL，再加3%
硝酸银溶液1~2滴，振荡试管，有沉淀产生。
可逆的沉淀反应
蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引 起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原
来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如：盐析作用、低温下用乙醇（丙酮）短时间
作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
问题：提纯蛋白质时常用的沉淀方法有哪些?
蛋白质的等电点测定和沉淀反应
1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有特异的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋白质沉淀与凝固。
蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
（一）材料新鲜鸡蛋（二）试剂1、0.4酪蛋白醋酸钠溶液200ml 取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40—50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。
加入10mL 1mol/L醋酸钠溶液。
实验二蛋白质的等电点测定和沉淀反应
2
3 4
8.7
8.0 7.4
-
0.3
1.0 -
—
— 1.6
（2）向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，
加一管，摇匀一管。此时1、2、3、4管的pH依次
为5.9、5.5、4.7、3.5。观察其混浊度。静置10分 钟后，再观察其混浊度。最混浊（有颗粒沉淀） 的一管pH即为酪蛋白的等电点。
（二）蛋白质沉淀实验
不可逆沉淀反应
此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，
蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂
中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白 质与重金属离子或某些有机酸的反应都属 于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液 稳定的条件仍然存在（如电荷），并不
析出。因此变性蛋白质并不一定都表现
为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变
饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球
蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水， 观察是否溶解，为什么？将管中内容物过滤， 向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此 时析出的沉淀为清蛋白。
• 取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的
再溶解。
• 2．重金属离子沉淀蛋白质： 重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的 复合物。 • 取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加
性。
三、试剂器材
1、实验材料： 2、仪器设备：
鸡蛋清
牛乳
• 水浴锅
• 温度计 • 锥形瓶 • 100mL容量瓶 • 吸管
• 试管及试管架
3、试剂
• 0.4% 酪蛋白乙酸钠溶液
取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨， 将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用 少量40—50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入 锥形瓶内。加入10mL 1mol/L醋酸钠溶液。把锥形 瓶放到50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到 酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移 到100mL容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。
实验蛋白质的等电点测定和沉淀反应
蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸 碱度影响。
可编辑ppt
3
当溶液的pH为一定值时，蛋白质极性基团解离 的正负离子数相等，净电荷为0，此溶液的pH值 为该蛋白质的等电点。
不同蛋白质具有各自特定的等电点，与该蛋白 质的组成结构有关。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可 利用性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
可编辑ppt
14
（二）蛋白质沉淀实验
可编辑ppt
15
1. 蛋白质的盐析
加5%卵清蛋白溶液5 mL于试管中，再加等量 饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球 蛋白的沉淀。
离心，取沉淀，加少量水，观察是否溶解。 离心后上清液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为
止，此时析出的沉淀为清蛋白。 离心，取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察
实验一、蛋白质等电点 测定及沉淀反应
可编辑ppt
1
一、实验目的
1、了解蛋白质的两性解离性质 2、学习测定蛋白质等电点的一种方法 3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识 4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义 5、了解蛋白质变性与沉淀的关系
可编辑ppt
2
二、实验原理
蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下 列平衡：
可编辑ppt
5
在水溶液中，蛋白质分子由于表面生成水 化层和双电层而成为稳定的亲水胶体。
在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可 因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
可编辑ppt
6
➢ 可逆的沉淀反应
蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引 起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原 来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
可编辑ppt
蛋白质的等电点测定与沉淀实验
实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应姓名：指导教师：实验室：组员：成绩：第三部分：实验记录与分析实验现象记录及分析：（一）蛋白质等电点测定（二）蛋白质的盐析1．蛋白质的盐析2．重金属离子沉淀蛋白质3．有机酸沉淀蛋白质4．有机溶剂沉淀蛋白质5．乙醇引起的变性与沉淀第四部分：课后研讨题1.通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。
适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。
2.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂铅、汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
3.氯化汞为何能做为杀菌剂细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
5.将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以说明。
（1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。
（2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋白质，用于提纯蛋白质。
（3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml的蛋白质溶液，再加入3%硝酸银溶液1-2滴，振荡试管，观察现象。
（4）某些有机酸沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。
（5）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入2ml 95%乙醇，观察现象。
教师评阅：签名。
蛋白质的等电点测定与沉淀实验
实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应姓名：指导教师：实验室：组员：成绩：第三部分：实验记录与分析实验现象记录及分析：（一）蛋白质等电点测定（二）蛋白质的盐析1．蛋白质的盐析2．重金属离子沉淀蛋白质3．有机酸沉淀蛋白质4．有机溶剂沉淀蛋白质5．乙醇引起的变性与沉淀第四部分：课后研讨题1.通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。
适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。
2.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？铅、汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
3.氯化汞为何能做为杀菌剂？细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
5.将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以说明。
（1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。
（2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋白质，用于提纯蛋白质。
（3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml的蛋白质溶液，再加入3%硝酸银溶液1-2滴，振荡试管，观察现象。
（4）某些有机酸沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。
（5）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入2ml 95%乙醇，观察现象。
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高中生物 实验3 蛋白质的等电点测定和沉淀反应
实验3 蛋白质的等电点测定和沉淀反应一、目的1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
1、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
二、原理蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有特异的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋白质沉淀与凝固。
蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜鸡蛋（二）试剂1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200ml取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40—50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。
蛋白质的等电点测定与沉淀实验
蛋白质的等电点测定与沉淀实验蛋白质的等电点测定与沉淀实验是蛋白质分离纯化过程中的重要步骤之一。
等电点测定可以帮助我们了解蛋白质的电荷性质，而沉淀实验则有助于分离纯化蛋白质。
本文将详细介绍这两个实验的原理、方法和意义。
一、蛋白质的等电点测定1.原理蛋白质是两性电解质，其分子中既有酸性基团，又有碱性基团。
在某一pH值下，蛋白质分子将不带电荷，成为兼性离子。
这个pH值就称为该蛋白质的等电点。
等电点可以通过测定不同pH值下的蛋白质溶解度来确定。
2.方法常用的等电点测定方法有圆盘电泳法和毛细管电泳法。
圆盘电泳法是将蛋白质样品放在支持介质（如凝胶、滤纸等）上，在一定pH值下进行电泳分离，然后根据各区带的迁移率和染色结果计算等电点。
毛细管电泳法则将样品装入毛细管中，通过改变缓冲液的pH值来进行电泳分离，然后检测各峰的荷电性质来推算等电点。
3.意义等电点测定对于蛋白质的分离纯化和功能研究具有重要意义。
首先，确定等电点有助于选择合适的缓冲液体系来稳定或沉淀蛋白质。
其次，等电点可用于蛋白质的分离纯化，例如通过调节缓冲液pH值将目标蛋白质沉淀下来，再通过离心、过滤等方法进行分离。
最后，了解蛋白质的等电点有助于研究其在生物体内的生理作用和药理活性。
二、蛋白质的沉淀实验1.方法常用的蛋白质沉淀方法有盐析、有机溶剂沉淀、聚合物沉淀、离子交换等。
盐析法是利用高浓度盐离子破坏蛋白质的水化层，使其析出沉淀。
有机溶剂沉淀则是通过降低水相介电常数使蛋白质析出。
聚合物沉淀是利用聚合物如聚乙二醇等与蛋白质结合形成大分子复合物而沉淀。
离子交换则是利用离子交换剂与溶液中的离子进行交换，使蛋白质结合到离子交换剂上而沉淀。
2.影响因素蛋白质沉淀实验的影响因素包括温度、pH值、离子强度和浓度、沉淀剂浓度等。
这些因素可以影响蛋白质的溶解度、构象和荷电性质，从而影响沉淀效果。
在进行沉淀实验时，需要仔细控制这些因素，以获得最佳的沉淀效果。
3.意义蛋白质沉淀实验在蛋白质分离纯化过程中具有重要意义。
蛋白质的等电点测定与沉淀反应
❖ 加5%卵清蛋白溶液5 ml于试管中，再加等量的饱和硫酸 铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少 量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管中 内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止， 此时析出的沉淀为清蛋白。
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最浑浊的一管的p可H编辑为ppt 酪蛋白的等电点。 7
六.等电点测定实验结果
几号管最混浊,溶液pH为?由于等电点 时蛋白质溶解度最小,所以酪蛋白的等电点 为?
可编辑ppt
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Ⅱ．蛋白质的沉淀反应
一、目的： 1．加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2．了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3．了解蛋白质变性与沉淀的关系。
❖ 3．某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋 白质溶液2 ml，再加1 ml 5%三氯乙酸溶液，振荡
试管，观察沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液， 向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。
❖ 4．有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入2 ml蛋
白质溶液，再加入2 ml 95%乙醇。混匀，观察沉
淀的生成。
❖ 取出部分清蛋白，加少量可蒸编馏辑p水pt ，观察沉淀的再溶解。 12
❖ 2．重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋白质 结合成不溶于水的复合物。
❖ 取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加3%硝酸 银溶液1~2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片
刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀 是否溶解？为什么？
+ OH+ H+
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实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应
姓名：指导教师：实验室：
组员：成绩：
第三部分：实验记录与分析
实验现象记录及分析：
（一）蛋白质等电点测定
（二）蛋白质的盐析
1．蛋白质的盐析
2．重金属离子沉淀蛋白质
3．有机酸沉淀蛋白质
4．有机溶剂沉淀蛋白质
5．乙醇引起的变性与沉淀
第四部分：课后研讨题
1.通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。
适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。
2.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？
铅、汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
3.氯化汞为何能做为杀菌剂？
细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？
蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
5.将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以说明。
（1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。
（2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋白质，用于提纯蛋白质。
（3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml的蛋白质溶液，再加入3%硝酸银溶液1-2滴，振荡试管，观察现象。
（4）某些有机酸沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。
（5）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入2ml 95%乙醇，观察现象。
教师评阅：
签名。