小鼠骨髓细胞染色体制备与观察PPT课件
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小鼠骨髓染色体标本的制备(共5张PPT)
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦去附 着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注射器吸取 KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗，用离心管接收 冲洗液。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液中，放入
4．离3心：72℃000恒转/分温，离水心5浴min锅，弃中上清，液，静留下置沉淀2物5。min。（吹打不宜过猛） 345678．．、、、、预离固再再制固 心 定 固离片定：：定心：：沿：2：用0加离再02滴00入心加转0管固管入0/吸转分定壁固细/，液加定分胞离入 液5，滴心悬固2离－吹5定液心m3打液，滴i5混n5m，从，m匀打i2弃nl。打0匀，上－匀。弃清3，上0液室c清，m温液留高下，下度固沉留定滴淀下1在物0沉冰m。淀i水n物。预。浸泡的 548394043335130230581168331093091477777、 ． 、 ． 、 ． ． ． ． ． 、 、 ． 、 、 、 、 、 、 ． ． 、 、 ． 、 、 ．55555固离制预染离离预预预固取预低预固制取取再制预预取染预染取离mmmmmooooo定心片固色心心固固固定材固渗固定片材材离片固固材色固色材心lllll/////：：：定：：：定定定：定处定：：：：心：定定：：定：：：LLLLL)))))溶溶溶溶溶沿2用：G22：：：沿以：理：沿用以以：用：：以G：G以20000iii液 液液液液离滴加加加加离颈加：加离滴颈颈滴加加颈加颈2eee0000mmm00000， ，，，，心管入入入入心椎入加入心管椎椎管入入椎入椎0转转转转sss0将 将将将将aaa管吸固固固固管脱固固管吸脱脱吸固固脱固脱K///转/染染染分分分分C针 针针针针壁细定定定定壁臼定定壁细臼臼细定定臼定臼/L液液液，，，分，头 头头头头至加 胞 液 液 液 液 加 法 液 液 加 胞 法 法 胞 液 液 法 液 法染染染离离离，离插 插插插插2入悬入处入悬处处悬处处555555555色色色/心心心离心滴滴滴滴滴滴滴滴滴3入 入入入入固液固死固液死死液死死管777555心5吹吹吹吹吹吹吹吹吹骨 骨骨骨骨定，定小定，小小，小小mmmmmmm，5打打打打打打打打打iiii髓 髓髓髓髓液从液鼠液从鼠鼠从鼠鼠miiinnnnnnn用混混混混混混混混混，，，，、、、i腔 腔腔腔腔，，，，，525522n吸mmm0匀匀匀匀匀匀00匀匀匀弃弃弃，弃细细细上 上上上上取取取取取－－－管lll。。。。。。。。。打打打上上上弃上水水水段 段段段段两两两两两333打匀匀匀清清清上清000冲冲冲冲 冲冲冲冲腿腿腿腿腿ccc匀，，，液液液清液mmm洗洗洗洗 洗洗洗洗股股股股股使高高高室室室，，，液，、、、， ，，，，骨骨骨骨骨细度度度温温温留留留，留晾晾晾用用 用 用 用，，，，，胞滴滴滴下下下下下下留下干干干离 离离离离剔剔剔剔剔悬在在在固固固沉沉沉下沉。。。心 心心心心净净净净净浮冰冰冰定定定淀淀淀沉淀管 管管管管肌肌肌肌肌于水水水111物物物淀物接 接接接接肉肉肉肉肉000低预预预。。。物。mmm收 收收收收，，，，，渗iii浸浸浸。nnn冲 冲冲冲冲擦擦擦擦擦。。。液泡泡泡洗 洗洗洗洗去去去去去中的的的液 液液液液附附附附附，洁洁洁。 。。。。着着着着着放净净净在在在在在入载载载上上上上上3玻玻玻7面面面面面℃片片片的的的的的恒上上上血血血血血温，，，污污污污污水立立立，，，，，浴即即即剪剪剪剪剪锅用用用取取取取取中口口口两两两两两，吹吹吹端端端端端静散 散 散股 股 股 股 股置，，，骨骨骨骨骨2在在在头头头头头5m酒酒酒，，，，，i精精精n暴暴暴暴暴。灯灯灯露露露露露上上上骨骨骨骨骨过过过髓髓髓髓髓几几几腔腔腔腔腔次次次，，，，，或或或用用用用用吹吹吹注注注注注风风风射射射射射机机机器器器器器吹吹吹吸吸吸吸吸干干干取取取取取。。。KKKKKCCCCCLLLLL(((((00000..... 洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风机吹干。 5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦去附 着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注射器吸取 KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗，用离心管接收 冲洗液。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液中，放入
4．离3心：72℃000恒转/分温，离水心5浴min锅，弃中上清，液，静留下置沉淀2物5。min。（吹打不宜过猛） 345678．．、、、、预离固再再制固 心 定 固离片定：：定心：：沿：2：用0加离再02滴00入心加转0管固管入0/吸转分定壁固细/，液加定分胞离入 液5，滴心悬固2离－吹5定液心m3打液，滴i5混n5m，从，m匀打i2弃nl。打0匀，上－匀。弃清3，上0液室c清，m温液留高下，下度固沉留定滴淀下1在物0沉冰m。淀i水n物。预。浸泡的 548394043335130230581168331093091477777、 ． 、 ． 、 ． ． ． ． ． 、 、 ． 、 、 、 、 、 、 ． ． 、 、 ． 、 、 ．55555固离制预染离离预预预固取预低预固制取取再制预预取染预染取离mmmmmooooo定心片固色心心固固固定材固渗固定片材材离片固固材色固色材心lllll/////：：：定：：：定定定：定处定：：：：心：定定：：定：：：LLLLL)))))溶溶溶溶溶沿2用：G22：：：沿以：理：沿用以以：用：：以G：G以20000iii液 液液液液离滴加加加加离颈加：加离滴颈颈滴加加颈加颈2eee0000mmm00000， ，，，，心管入入入入心椎入加入心管椎椎管入入椎入椎0转转转转sss0将 将将将将aaa管吸固固固固管脱固固管吸脱脱吸固固脱固脱K///转/染染染分分分分C针 针针针针壁细定定定定壁臼定定壁细臼臼细定定臼定臼/L液液液，，，分，头 头头头头至加 胞 液 液 液 液 加 法 液 液 加 胞 法 法 胞 液 液 法 液 法染染染离离离，离插 插插插插2入悬入处入悬处处悬处处555555555色色色/心心心离心滴滴滴滴滴滴滴滴滴3入 入入入入固液固死固液死死液死死管777555心5吹吹吹吹吹吹吹吹吹骨 骨骨骨骨定，定小定，小小，小小mmmmmmm，5打打打打打打打打打iiii髓 髓髓髓髓液从液鼠液从鼠鼠从鼠鼠miiinnnnnnn用混混混混混混混混混，，，，、、、i腔 腔腔腔腔，，，，，525522n吸mmm0匀匀匀匀匀匀00匀匀匀弃弃弃，弃细细细上 上上上上取取取取取－－－管lll。。。。。。。。。打打打上上上弃上水水水段 段段段段两两两两两333打匀匀匀清清清上清000冲冲冲冲 冲冲冲冲腿腿腿腿腿ccc匀，，，液液液清液mmm洗洗洗洗 洗洗洗洗股股股股股使高高高室室室，，，液，、、、， ，，，，骨骨骨骨骨细度度度温温温留留留，留晾晾晾用用 用 用 用，，，，，胞滴滴滴下下下下下下留下干干干离 离离离离剔剔剔剔剔悬在在在固固固沉沉沉下沉。。。心 心心心心净净净净净浮冰冰冰定定定淀淀淀沉淀管 管管管管肌肌肌肌肌于水水水111物物物淀物接 接接接接肉肉肉肉肉000低预预预。。。物。mmm收 收收收收，，，，，渗iii浸浸浸。nnn冲 冲冲冲冲擦擦擦擦擦。。。液泡泡泡洗 洗洗洗洗去去去去去中的的的液 液液液液附附附附附，洁洁洁。 。。。。着着着着着放净净净在在在在在入载载载上上上上上3玻玻玻7面面面面面℃片片片的的的的的恒上上上血血血血血温，，，污污污污污水立立立，，，，，浴即即即剪剪剪剪剪锅用用用取取取取取中口口口两两两两两，吹吹吹端端端端端静散 散 散股 股 股 股 股置，，，骨骨骨骨骨2在在在头头头头头5m酒酒酒，，，，，i精精精n暴暴暴暴暴。灯灯灯露露露露露上上上骨骨骨骨骨过过过髓髓髓髓髓几几几腔腔腔腔腔次次次，，，，，或或或用用用用用吹吹吹注注注注注风风风射射射射射机机机器器器器器吹吹吹吸吸吸吸吸干干干取取取取取。。。KKKKKCCCCCLLLLL(((((00000..... 洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风机吹干。 5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
小鼠骨髓染色体制片技术21页PPT
金时代是在我们的前面，而不在 我们的 后面。
•
7、心急吃不了热汤圆。
•
8、你可以很有个性，但某些时候请收 敛。
•
9、只为成功找方法，不为失败找借口 (蹩脚 的工人 总是说 工具不 好)。
•
10、只要下定决心克服恐惧，便几乎 能克服 任何恐 惧。因 为，请 记住， 除了在 脑海中 ，恐惧 无处藏 身。-- 戴尔． 卡耐基 。
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
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7、心急吃不了热汤圆。
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8、你可以很有个性，但某些时候请收 敛。
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9、只为成功找方法，不为失败找借口 (蹩脚 的工人 总是说 工具不 好)。
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10、只要下定决心克服恐惧，便几乎 能克服 任何恐 惧。因 为，请 记住， 除了在 脑海中 ，恐惧 无处藏 身。-- 戴尔． 卡耐基 。
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察PPT
。
结果分析
实验过程中，细胞培养和染色环节是关键，需要 严格控制实验条件，以保证染色体制备的质量。
染色体观察需要经验丰富的实验员，以确保准确 识别染色体的数目和结构。
实验结果与预期相符，证明了实验方法的可靠性 和准确性。
结果讨论与展望
本实验为小鼠骨髓细胞染色体制备与观察提供了有益 的参考，但仍需进一步优化实验条件和操作步骤，以
04
其他必要的缓冲液和盐溶液
实验仪器
显微镜
01
02
细胞培养箱
离心机
03
04
染色设备（染色缸、染色架等）
恒温水浴锅
05
06
吸管和移液器等定量工具
02
CATALOGUE
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
01
02
03
麻醉小鼠
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个采集过程中 保持安静。
采集骨髓
使用注射器抽取小鼠的骨 髓，注意抽取时要避免混 入其他组织或血液。
染色体组型分析
将染色体制成中期片，进行染色体组型分析，可以观察到染色体的配对情况、 排列顺序等特征，有助于判断染色体的结构异常。
染色体畸变分析
染色体结构畸变
观察染色体的结构畸变，如染色体断裂、倒位、缺失等， 可以分析出细胞在分裂过程中可能遇到的异常情况。
染色体数目畸变
分析染色体数目畸变，如非整倍体、多倍体等现象，有助 于了解细胞分裂过程中的异常变化。
小鼠骨髓细胞染色 体制备与观察
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 实验结果 • 结论与讨论
01
CATALOGUE
实验准备
实验材料
小鼠骨髓细பைடு நூலகம்胞样本
结果分析
实验过程中，细胞培养和染色环节是关键，需要 严格控制实验条件，以保证染色体制备的质量。
染色体观察需要经验丰富的实验员，以确保准确 识别染色体的数目和结构。
实验结果与预期相符，证明了实验方法的可靠性 和准确性。
结果讨论与展望
本实验为小鼠骨髓细胞染色体制备与观察提供了有益 的参考，但仍需进一步优化实验条件和操作步骤，以
04
其他必要的缓冲液和盐溶液
实验仪器
显微镜
01
02
细胞培养箱
离心机
03
04
染色设备（染色缸、染色架等）
恒温水浴锅
05
06
吸管和移液器等定量工具
02
CATALOGUE
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
01
02
03
麻醉小鼠
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个采集过程中 保持安静。
采集骨髓
使用注射器抽取小鼠的骨 髓，注意抽取时要避免混 入其他组织或血液。
染色体组型分析
将染色体制成中期片，进行染色体组型分析，可以观察到染色体的配对情况、 排列顺序等特征，有助于判断染色体的结构异常。
染色体畸变分析
染色体结构畸变
观察染色体的结构畸变，如染色体断裂、倒位、缺失等， 可以分析出细胞在分裂过程中可能遇到的异常情况。
染色体数目畸变
分析染色体数目畸变，如非整倍体、多倍体等现象，有助 于了解细胞分裂过程中的异常变化。
小鼠骨髓细胞染色 体制备与观察
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 实验结果 • 结论与讨论
01
CATALOGUE
实验准备
实验材料
小鼠骨髓细பைடு நூலகம்胞样本
骨髓细胞染色体制备与观察课件
•
• •
8、弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分 上清液，吹均匀制成细胞悬浮液涂片观察。
注意：如果细胞分散的不好，可再按上述方法 再固定1-2次，使染色体进一步分散。 9、取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞悬浮液于 其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥。
骨髓细•
•
实验目的：掌握制备方法，计算分裂中期
染色体数目，观察端着丝点的形态特点．
实验原理：小鼠骨髓细胞中的造血干细胞
，具有高度的分裂能力，可得到较多的细胞中 期的分裂相．
骨髓细胞染色体制备与观察
•
– – –
实验用品：
材料：小白鼠（2n=42）． 用品：显微镜、冰箱、恒温箱、恒温水浴锅 、离心机、注射器、解剖剪、 镊子、移液器、载玻片、烧杯等。 药品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)柠檬酸 钠溶液、0.07M氯化钾溶液、 （或0.35%氯 化钾溶液）、蒸馏水、Giemsa原液，甲醇、 乙酸等。
骨髓细胞染色体制备与观察
实验步骤：
预处理 低渗 取股骨 固定 冲洗骨髓 离心 离心 滴片
染色
观察
骨髓细胞染色体制备与观察
1、取健康小白鼠（约65-90天龄），腹腔注射
0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为4ml/Kg动物体 重。 2、2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，取出 股骨，把肌肉刮净，剪下，用2%柠蒙酸钠溶液 洗净血污及残渣。 3、剪去关节头，用3-5ml2%柠檬酸钠溶液冲洗股 骨断面至粉白色，制备了骨髓细胞悬浮液。
•
•
10、用Giemsa染液,染色15-20分钟，自来水冲
洗，空气干燥。
11、在低倍镜下观察中期分裂相细胞，计算染
色体的数目，以确定其细胞2n的染色体数目。
• •
8、弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分 上清液，吹均匀制成细胞悬浮液涂片观察。
注意：如果细胞分散的不好，可再按上述方法 再固定1-2次，使染色体进一步分散。 9、取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞悬浮液于 其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥。
骨髓细•
•
实验目的：掌握制备方法，计算分裂中期
染色体数目，观察端着丝点的形态特点．
实验原理：小鼠骨髓细胞中的造血干细胞
，具有高度的分裂能力，可得到较多的细胞中 期的分裂相．
骨髓细胞染色体制备与观察
•
– – –
实验用品：
材料：小白鼠（2n=42）． 用品：显微镜、冰箱、恒温箱、恒温水浴锅 、离心机、注射器、解剖剪、 镊子、移液器、载玻片、烧杯等。 药品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)柠檬酸 钠溶液、0.07M氯化钾溶液、 （或0.35%氯 化钾溶液）、蒸馏水、Giemsa原液，甲醇、 乙酸等。
骨髓细胞染色体制备与观察
实验步骤：
预处理 低渗 取股骨 固定 冲洗骨髓 离心 离心 滴片
染色
观察
骨髓细胞染色体制备与观察
1、取健康小白鼠（约65-90天龄），腹腔注射
0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为4ml/Kg动物体 重。 2、2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，取出 股骨，把肌肉刮净，剪下，用2%柠蒙酸钠溶液 洗净血污及残渣。 3、剪去关节头，用3-5ml2%柠檬酸钠溶液冲洗股 骨断面至粉白色，制备了骨髓细胞悬浮液。
•
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10、用Giemsa染液,染色15-20分钟，自来水冲
洗，空气干燥。
11、在低倍镜下观察中期分裂相细胞，计算染
色体的数目，以确定其细胞2n的染色体数目。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察ppt课件
可编辑课件
染色体 分散度
18
2.染色体形态特征观察
可编辑课件
19
3.染色体计数
16
8
9
22
22+8+10=40
10
（100×10）
可编辑课件
15
9+16+15=40
20
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
可编辑课件
21
实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
可编辑课件
29
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
30
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可编辑课件
22
一、中心体（4×10）
马蛔虫子宫横切片全貌 可编辑课件
23
中心体（10×10）
可编辑课件
24
中心体（40×10）
可编辑课件
25
二、高尔基体（4×10）
脊神经可编节辑课切件 片
26
高尔基体（10×10）
可编辑课件
27
高尔基体（40×10）
可编辑课件
28
高尔基体（40×10）
实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
可编辑课件
1
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
可编辑课件
2
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
课件：实验二、骨髓细胞染色体制片与观察
骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效 果差，因此要进行必要的处理：
酵母液诱导增加分裂期的细胞数量； 秋水仙素使细胞处于有丝分裂中期； KCl溶液低渗使细胞膨胀； 甲醇和冰醋酸固定使染色体保持完好的形态。
三、实验用品
• 材料：小鼠 • 器材：
解剖盘、解剖剪、镊子、白纱布、10ml离心管、滴管、 5ml注射器、烧杯、载玻片、盖玻片、酒精灯、显微镜、 离心机和恒温培养箱等。
实验二、
骨髓细胞染色体 制片与观察
一、实验目的
• 学习活体小鼠骨髓细胞染色体标本的制 片技术；
• 观察小鼠有丝分裂中期的染色体数目、 结构及其特征。
二、实验原理
• 骨髓存在于长骨（肱骨、股ห้องสมุดไป่ตู้）的骨髓腔和扁 平骨（如骼骨）的稀松骨质间的网眼中，是一 种海绵状的组织。
• 骨髓中存在造血多能干细胞，具有高度自我更 新的能力（即有丝分裂），并能分化为各血细 胞系统的祖细胞（如淋巴系干细胞）。
低渗：1000 r／min离心7 min后弃掉上清液， 留下的细胞加人0.075 mol／L KCl低渗液6 ml， 用吸管将骨髓细胞吹打成细胞悬液，37℃恒 温水浴锅中低渗30 min。
预固定：加入新配制固定液(甲醇:冰醋酸 3:1) 5-6滴， 轻轻打匀，室温下预固定5 min。
固定：1000 r／min离心7 min，弃上清液，留细胞；加 入4 ml新鲜固定液，轻轻打匀，室温下固定25 min；离 心(条件同上)后弃上清留细胞。此步骤反复2次（时间 紧张可只做一次）。
预冷的玻片
染色：将玻片平放于桌上，用吉姆萨使用液染色 15-20 分钟后，用蒸馏水或自来水小心冲去染液， 吸干后镜检。
结果显示
05级生物技术，40倍物镜
实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察PPT课件
染色体观察的原理
染色体观察
通过显微镜观察染色体制片，可以观察到染色体的形态、 数目和结构等信息。观察时需要选择适当的显微镜倍数和 焦距，以便清晰地看到染色体。
显微镜倍数选择
根据实验需求选择适当的显微镜倍数。高倍镜下可以观察 到更加细致的染色体结构，但视野较小；低倍镜下可以观 察到更多的染色体，但分辨率较低。
选择合适的区域，使用高倍镜观察染 色体的形态和数目。
低倍镜观察
使用低倍镜观察载玻片上的细胞分布 情况。
数据分析与处理
数据记录
详细记录每个细胞的染色体数目 和形态。
数据整理
将记录的数据进行整理，统计染色 体异常的比例。
结果分析
根据数据结果分析染色体异常与疾 病之间的关系。
04
结果分析
正常染色体特征分析
THANKS
感谢观看
染色体结构异常特征
染色体结构异常是指染色体内部结构的改变，包括易位、倒位、缺失和重复等。这类异常 可能导致遗传性疾病如唐氏综合征、威廉姆斯综合征等，以及生长发育异常、智力障碍和 生育障碍等症状。
03
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
麻醉小鼠
脱臼处死
切开皮肤和骨骼
抽取骨髓
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个实验过程
疾病易感性增加
某些染色体异常可能导致小鼠对某些疾病或药物的易感性增加，如 肿瘤、感染等。
05
结论与讨论
实验结论总结
实验成功制备了小鼠 骨髓染色体，观察到 了清晰的染色体形态 和结构。
实验结果支持了前期 理论分析，验证了实 验方法的可行性和准 确性。
实验结果表明，小鼠 骨髓染色体数目正常， 未发现染色体异常现 象。
中保持安静。
遗传实验：小鼠骨髓染色体的制片与观察
❖ 动物骨髓中的造血干细胞是各种血细胞的来源， 具有很强的分裂能力。且便于获取，是动物染色 体核型分析的理想材料。
❖ 与血淋巴细胞相比，造血干细胞具有分裂旺盛的 优势，无需PHA处理即可用于核型分析。
实验目的
❖ 掌握动物骨髓细胞染色体制片技术 ❖ 观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数
实验材料及流程 *
❖小鼠 2n=40
❖ 秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片 -染色-水洗-镜检
1 秋水仙素处理 *
❖ 原理：秋水仙素能够抑制纺锤丝形成，使中期 姐妹染色单体无法分离，大量的有丝分裂细胞 被阻断在中期。增加了中期分裂相细胞的比例。
❖方法：腹腔注射0.01%秋水仙素溶液 0.5ml 等 待2-4h，秋水仙素通过肠系膜吸收进入血液循 环。
盐浓度与渗透压 *
4 固定
❖ 目的：终止细胞生长过程及一切生理生化反应， 维持细胞结构不变。
❖固定液配方： 甲醇：乙酸=3:1
5 滴片 *
❖ 目的：使细胞膜破裂，细 胞核或核内染色体分散在 载玻片上。
❖ 原理：滴片时产生的剪切 力破坏细胞膜。预冷的玻 片使得液体的表面张力增 加，液层更薄，有利于细 胞的破裂和染色体的分散。
6 染色
❖ 染色液：石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异 染料
❖ 步骤： 1 滴加染色液覆盖全部细胞 2 染色5min
中期分裂相特点 *
❖ 染色体浓缩成棒状，着丝点在染色体末端 ❖ 可见三种形状的中期染色体
镜检结果
பைடு நூலகம்
2 收集骨髓细胞 *
❖ 收集股骨和胫骨内 的骨髓细胞
2 收集骨髓细胞 *
❖用生理盐水（0.85% NaCl溶液）收集骨髓细胞 ❖ 目的：维持等渗环境，保持细胞自然形态。
❖ 与血淋巴细胞相比，造血干细胞具有分裂旺盛的 优势，无需PHA处理即可用于核型分析。
实验目的
❖ 掌握动物骨髓细胞染色体制片技术 ❖ 观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数
实验材料及流程 *
❖小鼠 2n=40
❖ 秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片 -染色-水洗-镜检
1 秋水仙素处理 *
❖ 原理：秋水仙素能够抑制纺锤丝形成，使中期 姐妹染色单体无法分离，大量的有丝分裂细胞 被阻断在中期。增加了中期分裂相细胞的比例。
❖方法：腹腔注射0.01%秋水仙素溶液 0.5ml 等 待2-4h，秋水仙素通过肠系膜吸收进入血液循 环。
盐浓度与渗透压 *
4 固定
❖ 目的：终止细胞生长过程及一切生理生化反应， 维持细胞结构不变。
❖固定液配方： 甲醇：乙酸=3:1
5 滴片 *
❖ 目的：使细胞膜破裂，细 胞核或核内染色体分散在 载玻片上。
❖ 原理：滴片时产生的剪切 力破坏细胞膜。预冷的玻 片使得液体的表面张力增 加，液层更薄，有利于细 胞的破裂和染色体的分散。
6 染色
❖ 染色液：石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异 染料
❖ 步骤： 1 滴加染色液覆盖全部细胞 2 染色5min
中期分裂相特点 *
❖ 染色体浓缩成棒状，着丝点在染色体末端 ❖ 可见三种形状的中期染色体
镜检结果
பைடு நூலகம்
2 收集骨髓细胞 *
❖ 收集股骨和胫骨内 的骨髓细胞
2 收集骨髓细胞 *
❖用生理盐水（0.85% NaCl溶液）收集骨髓细胞 ❖ 目的：维持等渗环境，保持细胞自然形态。
小鼠骨髓染色体制备与观察 ppt课件
怎样才能制备一个好的染色体标本？
获得大量处于有丝分裂中期的细胞。 使细胞膜破裂，且染色体能够完整并较分散的释
放出来。
ppt课件
12
秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期 ，积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
速细胞破裂，使染色体更好地粘连在载玻片上；不可使载玻片烫手。
7.染色：在玻片上滴几滴Giemsa染液并铺匀，染色8～10min，倒去
染液，用自来水缓缓冲洗干净、晾干。（染色盘中进行） 注意：采用平铺的方法
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中期分裂
相，移至视野中央进行观察。
ppt课件
精品资料
你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
二、实验原理
染色体是组成细胞核的基本物质，是基因的载体。染色
染色体是染色质在细胞分裂期的存在形式。 细胞分裂的中期，染色体在赤道板上排列清晰，
是染色体观察的最佳时期。
ppt课件
10
骨髓细胞 数量多且分裂旺盛，可直接进行染色体
标本的制备。取材方便，操作简单和无需体外培 养和无菌操作，是研究小型哺乳动物等染色体的 常用方法。
人骨髓染色体抽取
ppt课件
11
16
空气吹打法：用吸管橡胶头内的空气混匀液体。
3. 低渗：用吸管吹打骨髓细胞使其分散 ，加入预温 37℃的低渗液至8ml,将离心管至37℃水浴锅中， 保温至少30 min后取出，使细胞充分吸水膨胀。
大学课程遗传学实验小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察 JC课件
9.染色
10.镜检
【内容与方法】
1.动物预处理
• 4.预固定：现配固定液甲醇、冰
2.取材及收集细胞 醋酸（3：1）1ml，打匀，离心8分
3.低渗
钟（1000r/min），弃上清。
4.预固定
5.固定
6.再固定
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色 10.镜检
使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期，便于 观察
• 2.取材及收集细胞：颈椎脱臼法处
死小鼠，剪开后肢皮肤和肌肉，取出完整股骨，剔 除肌肉、肌腱，生理盐水洗净；剪去少许股骨头， 吸取4ml37℃预温0.075mol/L KCl低渗液冲洗两个
股骨的骨髓细胞至同一试管。
5.固定
6.再固定
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色
10.镜检
1.动物预处理 2.取材及收集细胞 3.低渗 4.预固定 5.固定 6.再固定 7.制备细胞悬液 8.滴片 9.染色 10.镜检
【内容与方法】
• 6.再固定：重复步骤5，本
次实验省略不做。
1.动物预处理
【内容与方法】
2.取材及收集细胞
3.低渗 4.预固定 5.固定 6.再固定
• 7.制备细胞悬液：倒净后重
新加适量固定液至半透明（或留 4~5滴 ） ，吸管缓慢打匀。
7.制备细胞悬液
8.滴片
9.染色
10.镜检
【内容与方法】
1.动物预处理 2.取材及收集细胞 3.低渗 4.预固定 5.固定
3.低渗 4.预固定
，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察 到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色 体组型分析。
5.固定
如何做人的染色体制备？
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
3、简述实验中应注意那些关键问题？
〔二〕染色体标本片观察 1.标本片质量评价 〔1〕细胞密度适宜、均匀； 〔2〕背景干净，细胞核和染色体清晰； 〔3〕有较多的分裂相； 〔4〕染色体分散较好。
细胞密度
染色体 分散度
2.染色体形态特征观察
3.染色体计数
16
8
9
22
22+8+10=40
10
〔100×10〕
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
实验目的与要求：
1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2.了解小鼠染色体核型。
处死小鼠。
小白鼠骨骼标本
取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断， 否那么容易造成骨髓细胞的流失。
用纱布擦股骨上的肌肉组织，去除干净
注射器抽取生理盐水冲洗骨髓
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 熟悉小鼠骨髓细胞么作用？
15
9+16+15=40
4.细胞增殖指数统计
腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼处死小鼠。
分裂细胞数 〔4〕染色体分散较好。
小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。
细胞增殖指数= 一、中心体〔4×10〕
分裂细胞数+间期细胞数 在酒精灯火焰过火8次，
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。 注射器抽取生理盐水冲洗骨髓 在酒精灯火焰过火8次， 认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。 滴2~3滴于玻片上，吹气， 认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 高尔基体〔10×10〕 取材前2～3h，向腹腔内注射秋水仙素。 秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 分裂细胞数+间期细胞数 熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞， 注射浓度随动物种类不同而异。 在酒精灯火焰过火8次， 一、中心体〔4×10〕 熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
〔二〕染色体标本片观察 1.标本片质量评价 〔1〕细胞密度适宜、均匀； 〔2〕背景干净，细胞核和染色体清晰； 〔3〕有较多的分裂相； 〔4〕染色体分散较好。
细胞密度
染色体 分散度
2.染色体形态特征观察
3.染色体计数
16
8
9
22
22+8+10=40
10
〔100×10〕
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
实验目的与要求：
1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2.了解小鼠染色体核型。
处死小鼠。
小白鼠骨骼标本
取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断， 否那么容易造成骨髓细胞的流失。
用纱布擦股骨上的肌肉组织，去除干净
注射器抽取生理盐水冲洗骨髓
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 熟悉小鼠骨髓细胞么作用？
15
9+16+15=40
4.细胞增殖指数统计
腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼处死小鼠。
分裂细胞数 〔4〕染色体分散较好。
小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。
细胞增殖指数= 一、中心体〔4×10〕
分裂细胞数+间期细胞数 在酒精灯火焰过火8次，
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。 注射器抽取生理盐水冲洗骨髓 在酒精灯火焰过火8次， 认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。 滴2~3滴于玻片上，吹气， 认识秋水仙素对细胞增殖的作用。 高尔基体〔10×10〕 取材前2～3h，向腹腔内注射秋水仙素。 秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 分裂细胞数+间期细胞数 熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞， 注射浓度随动物种类不同而异。 在酒精灯火焰过火8次， 一、中心体〔4×10〕 熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备和核型分析27页PPT
小鼠骨髓细胞染色体标本制备和核型分 析
56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
60、人民的幸福是至高无个的法。— —西塞 罗
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔
56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
60、人民的幸福是至高无个的法。— —西塞 罗
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔
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5
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼
处死小鼠。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
6
小白鼠骨骼标本
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
7
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
16
细胞密度
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
17
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
Байду номын сангаас染色体 分散度
18
2.染色体形态特征观察
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
19
3.染色体计数
16
8
9
22
22+8+10=40
10
（100×10）
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
15
9+16+15=40
20
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？
3、简述实验中应注意那些关键问题？
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
15
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
8
取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断， 否则容易造成骨髓细胞的流失。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
9
用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净
注射器抽取生理盐水冲洗骨髓
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
10
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
➢ 定容至6ml.
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
25
二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
26
高尔基体（10×10）
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
27
高尔基体（40×10）
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
28
高尔基体（40×10）
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
29
实验二 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
1
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
2
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
21
实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
22
一、中心体（4×10）
马蛔虫子宫横切片全貌 小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
23
中心体（10×10）
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
24
中心体（40×10）
11
滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
12
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
13
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
14
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
3
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
4
实验目的与要求：
1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
器材与试剂
内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
固定、再固定
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察