柔红霉素-盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的HPLC分析

柔红霉素\盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的HPLC分析【摘要】目的：建立柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星的高效液相色谱分析方法。方法：色谱柱为agilent hc-c18(250 mm ×4.6 mm ,5m)；柱温为30 oc；流速为1.0 mlmin-1；流动相为十二烷基硫酸钠溶液-乙腈-甲醇(500∶500∶60，用磷酸调ph 2.2)；检测波长为254 nm。结果：柔红霉素保留时间19.7 min，盐酸多柔比星保留时间10.9 min，盐酸表柔比星保留时间12.4 min；三种化合物进样量在0.1 2g范围内与峰面积积分值呈良好线性关系；平均回收率为98.4 %~99.0 %，rsd为0.45 %(n=5)；结论：本方法灵敏度高、准确，可以对盐酸多柔比星类化合物进行定性定量分析。

【关键词】柔红霉素；盐酸多柔比星；盐酸表柔比星；高效液相色谱法

hplc analysis of daunorubicin, doxorubicin and epirubicin shi taochen sha-sha zhu yu-pengshang guang-dong

【abstract】objective: to establish a hplc method for the analysis of daunorubicin, doxorubicin and epirubicin. methods: the determination was performed by hplc using agilent hc-c18 column (250 mm x4.6 mm ,5m) with the column temperature maintained at 30 oc. the mobile phase consisted of sds-acetonitrile-methanol (500∶500∶60, ajust ph 2.2 with h3po4)at a flow rate of 1.0 mlmin-1 and a uv detection

wavelength of 254 nm. results: the daunorubicin retention time is 19.7 min ,the doxorubicin retention time is 10.9 min ,the epirubicin retention time is 12.4 min; the linear range of the three compounds were 0.1 2g,and the average recoveries of all stood at 98.4 %~99.0 % and rsd at 0.45 %( n = 5 each); conclusion: this method is sensitive, accurate, and it can be used for the qualitative and quantitative analysis of daunorubicin, doxorubicin and epirubicin.

【key words】daunorubicin; doxorubicin; epirubicin; hplc 【中图分类号】r414【文献标识码】a【文章编号】

1005-0515(2011)01-0025-02

柔红霉素和盐酸多柔比星为蒽环类抗生素[1]，盐酸多柔比星是柔红霉素的c-14位的羟化产物[2]，盐酸多柔比星氨基糖部分4’位异构化得到活性相当、但毒性减少的盐酸表柔比星[3]，是联合国世界卫生组织推荐的治疗肿瘤化疗的基本药物，在国际和国内市场同类药物中占有较大的份额。目前盐酸多柔比星类化合物主要是通过化学半合成法[4]，问题是化学合成目标产物时可能含有其他的组份，质量控制需要各组份精确分析，因此定性和定量分析就很重要。2005版药典中有介绍盐酸多柔比星类化合物的分析方法，但没有柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星三种化合物的分析方法，故参照有关文献[5]，以高效液相色谱法建立盐酸多柔比星类

化合物的分析方法。

1 材料

1100型高效液相色谱仪包括包括g2170aa型pc化学工作站、g1311a型四元梯度泵、g1314a型可变紫外检测器（美国agilent 公司）；alc-1100.4精密天平（sarforius公司）；kq250db型数控超声波清洗器（昆山超声仪器厂）。柔红霉素（柔红霉素标准品，中国药品生物制品检定所，批号：130559~200501），盐酸多柔比星（sigma公司，批号：038k1349），注射用盐酸表柔比星（盐酸表柔比星样品，浙江海正药业股份有限公司，批号：090803）；甲醇、乙腈为色谱级，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:色谱柱：agilent hc-c18 (250 mm×4.6 mm ,5μm)；柱温：30 oc；流速：1.0 mlmin-1

烷基硫酸钠溶液（1.44 g+0.68 ml h3po4+h2o+500ml, 用磷酸调ph 2.2）-乙腈-甲醇(500∶500∶60)，检测波长254 nm；进样体积20μl。结果，在此条件下柔红霉素与盐酸多柔比星、盐酸表柔比星色谱峰可基线分离，柔红霉素保留时间19.7 min，盐酸多柔比星保留时间10.9 min，盐酸表柔比星保留时间12.4 min。该条件的建立为盐酸多柔比星类化合物进行定性分析奠定了基础（色谱见图1）。

2.2 样品溶液的制备:称取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔

比星样品各1 mg，用水溶解配置各自储存液1 mgml-11μgμl -1。

2.3 线性关系的考察:精密吸取样品溶液2.5、5、10、25、50、100μl，分别置于1.5 ml eppendorf管中，用流动相稀释至1 ml，摇匀，精密吸取系列溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量（x,μg）为横坐标，峰面积的积分值（y）为纵坐标进行线性回归，得到回归方程及线性范围，回归方程的建立为盐酸多柔比星类化合物的定量分析奠定基础。结果见表1。

图1 高效液相色谱

a.柔红霉素；

b.盐酸多柔比星；

c.盐酸表柔比星；

d.三种标准品的混合物：1，盐酸多柔比星；2，盐酸表柔比星；3，柔红霉素

2.4 最低检测限测定:将样品溶液逐步稀释，直至信噪比(s/ n) ≥3 ,此时的进样浓度即为检测限。以s/ n = 3 :1 确定的柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星的最低检测浓度均为2.5μgml -150 ng。

2.5 稳定性试验:取同一样品溶液,分别在0 、2 、4 、6 、8 、12 、24 h 测定峰面积。结果，柔红霉素、盐酸多柔比星、盐酸表柔比星rsd均<2.0%，表明供试品溶液在24h 内稳定性良好。

2.6 精密度试验:取柔红霉素、盐酸多柔比星和盐酸表柔比星样品各1mg ，按“2.2”项下方法制备样品溶液，吸取20μl 注入液相色谱仪，重复进样6 次，按上述色谱条件测定峰面积。结果，柔