基因工程、蛋白质工程和细胞工程

条件
5.植物体细胞杂交与单克隆抗体制备过程比较 步骤 植物体细胞杂交过程 单克隆抗体制备过程
第一步 第三步
第四步
原生质体的制备(酶解法) 杂种植株的筛选与培养
杂种植株的诱导与鉴定
正常小鼠免疫处理 杂交瘤细胞的筛选与培养
单克隆抗体的提纯
第二步 原生质体融合(物理、化学法) 动物细胞融合(物理、化学、生物方法)
②动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒(诱导动物细
胞融合的特有因素)、电激等。
融合的细胞类型：前者—AA、BB、AB。后者—瘤瘤、B瘤、BB。
(2)各自的原理分别有哪些？
提示
前者有细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，后者有细胞膜的
流动性和细胞增殖。
6.掌握克隆动物培育的流程
7.理清单克隆抗体制备的过程
蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交。
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解析
答案
(5)艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要
贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论 DNA可以从一种生物个体转移到 的建立提供了启示，那么，这一启示是_____________________________ 另一种生物个体 。 _______________ 解析 艾弗里实验表明加热杀死的S型细菌的DNA可转入R型菌中，这充
专题10
现代生物科技专题
考点28 基因工程、蛋白质工程和细胞工程
栏目 索引
静悟与梳理 排查与特训
静悟与梳理
依纲静悟
核心梳理
1.基因工程常考的3种基本工具 (1)限制性核酸内切酶：识别特定核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA 分子。 (2)DNA连接酶：①E· coli DNA连接酶只能连接黏性末端；②T4 DNA连 接酶能连接黏性末端和平末端。 (3)载体：①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；②有一个至多个限制 酶切割位点，便于外源DNA片段(基因)插入其中；③具有特殊的标记基 因——以便对含目的基因的受体细胞进行筛选。
(1)在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常 嫩叶组织细胞易破碎 。 选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是___________________
防止RNA降解 。 提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是_____________
①两种技术手段的培养过程中都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都
相同点 可称为克隆，都不涉及减数分裂；
②均为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件
(1)诱导融合的方法分别有哪些？融合的细胞类型有哪几种(仅考虑两两
融合的细胞)?
提示
①诱导植物体细胞的原生质体融合的方法主要有离心、振动、
电激或用聚乙二醇作为诱导剂。
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解析
答案
(2)若用家蚕作为表达基因 A的载体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中， 噬菌体的宿主是细菌，而不是家蚕 。 噬菌体 作为载体，其原因是 _______________________________ 不选用 _______ 解析 噬菌体是细菌病毒，专门寄生在细菌体内；家蚕是动物。因此用
分显示“DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体，”因此，可 为基因工程理论的建立提供启示。
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5Hale Waihona Puke Baidu
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解析
答案
2.(2017· 全国Ⅱ，38) 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可
催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强
其抗真菌病的能力。回答下列问题：
2.基因工程的4大操作程序
(1)目的基因的获取
①从基因文库中获取。
②PCR技术扩增
a.原理：DNA双链复制。
b.条件：模板DNA、引物、游离的脱氧核苷酸、热稳定的DNA聚合酶。
③用化学方法直接人工合成。
(2)基因表达载体的构建
①基因表达载体模式图
②基因表达载体的构建过程
(3)将目的基因导入受体细胞
排查与特训
题组一 基因工程和蛋白质工程 1.(2017· 全国 Ⅰ ， 38) 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中 没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机 制。已知在人体中基因 A( 有内含子 ) 可以表达出某种特定蛋白 ( 简称蛋白 A)。回答下列问题： (1)某同学从人的基因组文库中获得了基因 A，以大肠杆菌作为受体细胞 基因A有内含子，在大肠杆菌中，其初始转 却未得到蛋白A，其原因是_______________________________________ 录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除，无法表达出蛋白A 。 ___________________________________________________________
①导入植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法。
②导入动物细胞：显微注射法。
③导入微生物细胞：感受态细胞法(用Ca2＋处理)。
(4)目的基因的检测与鉴定
①插入检测：DNA分子杂交。
②转录检测：DNA—RNA分子杂交。
③翻译检测：抗原—抗体杂交。
④个体水平检测：抗性接种实验。
3.图解记忆蛋白质工程
细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌。
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解析
答案
(4) 若 要 检 测 基 因 A 是 否 翻 译 出 蛋 白 A ， 可 用 的 检 测 物 质 是 蛋白A的抗体 填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗体”)。 ____________( 解析 检测目的基因 A是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取
家蚕作为表达基因A的载体，不选用噬菌体作为载体。
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解析
答案
(3)若要高效地获得蛋白 A，可选用大肠杆菌作为受体，因为与家蚕相比， 繁殖快、容易培养 答出两点即可)等优点。 大肠杆菌具有_________________( 解析 原核生物常作为基因工程中的受体细胞的原因是繁殖快、多为单
4.比较记忆植物组织培养与动物细胞培养 项目 植物组织培养 动物细胞培养 取材 植物幼嫩部位 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织
过程
结果
获得植株个体，可以体
现全能性 ①无菌；②营养；③适 宜条件
新的细胞，不形成个体，不体现全能性 ①无菌、无毒；②营养、血清等；③温 度和pH；④气体环境：O2、CO2