20041211_细菌鉴定中常用的生理生化反应
细菌鉴定中常用的九个生化反应
１、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力、培养物可呈弥散生长。
２、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20°培养5天。
然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。
立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。
阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。
培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。
淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。
3 、明胶液化试验有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基。
于20~22℃培养7~14天。
明胶高层亦可培养于36±1℃。
每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细菌液化，如确被液化，即为试验阳性。
试验七
有的细菌只产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来指示。在配制培养基时可预先加入溴甲酚紫［pH5(黄)～pH7(紫)］。当细菌发酵糖产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体的产生可由糖发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
试剂：甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂，KOH溶液；
实验用具：
试管：每个试验3根试验管，1根对照管，8个试验，共32管；
杜氏小管、接种环、接种针、酒精灯、火柴、试管架、记号笔。
四、实验步骤。
1. 配制培养基（老师准备）
2. 鉴别实验
1）．糖(醇)类发酵试验
编号：在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。
接种：取葡萄糖发酵培养基3支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。同样取3支乳糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。
将已接种好的培养基置32℃温箱中培养24h。
2）. 甲基红试验(M.R.试验)
将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，32℃培养 24h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。
实验五 细菌鉴定中常见Biblioteka 生理生化反应 一、实验目的。
1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
糖或醇发酵试验：细菌在分解糖或醇(如葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇)的能力有很大的差异。
细菌鉴定中常见的生理生化反应
实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应16111202班史政伟1120122681一、实验目的1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1.糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
2.甲基红试验（M.R试验）甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。
3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。
4.靛基质试验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。
5.硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。
细菌常用生理生化鉴定
细菌鉴定中常用的生理生化反应录入时间:2009-8-13 15:12:12 来源：中国生命科技论坛1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应
实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应微生物实验一、实验目的。
1) 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2) 了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3) 了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1. 糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色―pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
2. 甲基红试验（M.R试验）甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。
3. Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。
4. 靛基质试验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。
5. 硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。
在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。
本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。
1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。
如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。
2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。
如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。
3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。
如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。
通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。
4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。
如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。
通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读知识专栏：细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告再解读封面图片：一位实验室技术人员在显微镜下观察细菌培养物导语：在细菌学研究领域，生理生化反应实验是常用的方法之一，它可以帮助我们了解细菌的特性、代谢途径以及与环境的相互作用。
本文将对细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告进行具体解读，帮助读者更深入地了解细菌的鉴定过程及意义。
一、实验背景和目的在细菌鉴定中，我们经常需要对待测的细菌进行分类和鉴定。
而生理生化反应实验是一种非常重要的手段，能够通过观察细菌对不同化学试剂的反应，以及产物的生成情况等特征，来判断细菌的性质。
本实验的目的即是通过几项常用的生理生化反应实验，进一步探究待测细菌的特性和代谢途径。
二、实验方法1. 大肠杆菌的蛋白酶试验（编号：1）在本实验中，我们采用的是凝固酶试纸。
观察到试剂的颜色发生变化，即从黄色转变为品红色，说明大肠杆菌在此试验中结果为阳性。
进一步解读：凝固酶是一种能够水解胶原蛋白的酶，大肠杆菌能够产生这种酶，因此在这一试验中呈阳性反应。
这可以帮助我们进一步确认待测菌株是大肠杆菌，从而对其进行鉴定分类工作。
2. 肺炎克雷伯氏菌的氧化/发酵试验（编号：2）我们使用菲斯氏培养基进行此实验，观察培养基颜色变化。
如果培养基由绿色变为黄色，表示菌株对葡萄糖的进行氧化反应，即为氧化阳性；如果培养基继续保持绿色，表示菌株对葡萄糖进行发酵，即为发酵阳性。
进一步解读：肺炎克雷伯氏菌对葡萄糖的氧化/发酵反应具有很重要的意义。
通过此实验，我们可以判断菌株的能量代谢途径是氧化还是发酵，并且可以辅助鉴定菌株的种类。
3. 金黄色葡萄球菌的氧化/发酵试验（编号：3）氧化/发酵试验在金黄色葡萄球菌的鉴定中也扮演着重要的角色。
在此实验中，当培养基由紫色变为黄色时，表示菌株对葡萄糖的进行氧化反应，即为氧化阳性；若培养基继续保持紫色，表示菌株对葡萄糖进行发酵，即为发酵阳性。
进一步解读：金黄色葡萄球菌的氧化/发酵反应结果也能帮助我们确定菌株的代谢途径，并对其分类鉴定提供重要依据。
细菌鉴定中的生理生化反应
细菌鉴定中的生理生化反应实验六细菌鉴定中常用的生理生化反应一、实验目的1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法。
2、通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性。
3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
4、学习各种接种技术。
二、实验原理各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1、糖（醇）类发酵实验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫【pH 5.2（黄色）~ pH 6.8（紫色）】，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
2、甲基红实验（M.R.实验）甲基红【pH 4.4（红色）～pH 6.2（黄色）】实验，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4.2 以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH 升至大约6。
3、Voges-Proskauer 实验（伏-普实验，V.P. 实验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为 V.P.反应阳性。
4、靛基质（吲哚）实验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
实验五 细菌鉴定中常见的生理生化反应
实验仪器：32度恒温培养箱、4度冰箱；
微生物材料：大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌、待鉴定的未知菌的平板单菌落；
试剂：甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂，KOH溶液；
实验用具：
试管：每个试验3根试验管，1根对照管，8个试验，共32管；
杜氏小管、接种环、接种针、酒精灯、火柴、试管架、记号笔。
红色
/
黄色
/
桔红色
淡黄色
伏-普试验
黄色
红色
红色
淡黄色
吲哚试验
玫瑰红色
/
玫瑰红色
/
无色
淡黄色
硫化氢试验
黄色
/
/
黑色从中间向外蔓延
黄色
ห้องสมุดไป่ตู้黄色
明胶液化试验
无液体
/
无液体
/
液体
无液体
柠檬酸盐利用试验
下蓝上黄
/
下黄上蓝
/
下蓝上黄
绿色
淀粉试验
紫色
紫色
紫色
黄色
紫色
紫色
表2. 各项生理生化实验现象及意义
阳性
阴性（对照）
硫化氢试验：变形杆菌、乙型副伤寒杆菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。
3. 假设某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现怎样的结果？
不产酸，产气。有机酸将被转化为非酸性末端产物，培养基呈黄色。葡萄糖发酵实验中，培养基颜色由紫变黄，杜氏小管中气体超过10%。
4. 通过哪些生理生化反应可以区分大肠杆菌和变形杆菌？
图1 葡萄糖发酵（从左到右依次为对照、大肠杆菌、未知菌、变形杆菌）
图2 乳糖发酵（从左到右依次为对照、未知菌、变形杆菌、大肠杆菌）
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告背景细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务，通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析，可以确定细菌的种属和特性。
生理生化反应实验是其中的关键步骤，通过观察细菌对不同物质的代谢情况，可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。
本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法，并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。
分析1. 嗜热/嗜冷性嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。
常用实验方法包括在不同温度条件下进行培养观察，并记录生长情况。
根据结果可将细菌分为嗜热菌（适宜高温）、嗜冷菌（适宜低温）或中温菌（适宜中等温度）。
2. 好氧/厌氧性好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。
常用实验方法包括在含氧和不含氧的培养条件下观察细菌生长情况。
根据结果可将细菌分为好氧菌（需氧）、厌氧菌（不需氧）或兼性厌氧菌（能在有或无氧的条件下生长）。
3. 革兰氏染色革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。
该实验通过处理细菌样品，并使用革兰染色剂将其染色，然后观察其颜色变化。
根据结果可将细菌分为革兰阳性（蓝紫色）或革兰阴性（红粉色）。
4. 淀粉酶活性淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上，经过一段时间后，用碘液滴定并观察是否出现透明圈。
透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。
5. 水解酪蛋白活性水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。
该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上，经过一段时间后，用盖有硫酸铜的试管放置在平板上，观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。
颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。
6. 氧化/发酵代谢氧化/发酵代谢实验用于检测细菌在代谢过程中产生的产物。
该实验将待测细菌接种于含有碳源的培养基中，并根据pH指示剂颜色变化观察细菌是通过氧化代谢还是发酵代谢产生能量。
氧化代谢通常伴随着pH值升高，培养基呈碱性；而发酵代谢则通常伴随着pH值降低，培养基呈酸性。
实验五--细菌鉴定中常见的生理生化反应
实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。
1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1.糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
2.甲基红试验（M.R试验）甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。
3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。
4.靛基质试验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。
5.硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。
6.明胶液化实验明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。
实验6细菌鉴定中常用的理化
色 。
产气杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸,培养基的pH在
6.2以上, 故此时加入甲基红指示剂,呈现黄色.
注：甲基红指示剂变色范围 pH4.4(红色)-pH6.2(黄色).
伏-普(Voges-Proskauer)氏实验(V.P.实验)
产气气杆菌： V.P.试验阳性 甲基红试验阴性 大肠杆菌： V.P.试验阴性 甲基红试验阳性
（pH5.2黄色—6.8紫色），即当发酵产酸时，可使培 养基由紫色变为黄色。 气体产生可由发酵管内倒置的杜氏小管中有无气泡 来判断。
甲基红（Methyl red）实验（MR实验） 大肠杆菌等许多细菌分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸 可进一步分解成甲酸（或乙酸\乳酸）,使培养基的 pH降低到4.2以下,此时加入甲基红指示剂，呈现红
注意:
1.实验时,同时以未接种细菌的培养基作对照.因为亚硝酸 盐在自然界分布很广,容易污染试剂.另外,硝酸盐不纯或 保管不妥,也可能含有亚硝酸盐. 2.繁殖迅速而还原硝酸盐能力强的细菌,如果培养时间过 久,可能将亚硝酸盐全部分解成为氨气和氮气,这样可出现 假阳性反应,故须每天进行实验.
结果与讨论
五、实验步骤
（一）糖(醇)类发酵实验
1.编号： 在试管上标明培养基名称,所接种的菌名和组号. 2.接种： 取3支葡萄糖发酵培养基, 1支接种大肠杆菌，1支 接种变形杆菌,留1支不接种，作为对照. 3.乳糖发酵试验接种方法同葡萄糖发酵试验。将已接种 好的培养基置37℃培养箱中培养24h. 4.结果观察:若细菌能发酵培养基中的糖，可使培养基的pH降 低, 培养基中的指示剂呈酸性反应(为黄色),若发酵糖产酸产 气,不仅培养基呈黄色,且在倒置的小玻璃管(杜氏小管)中有 气体（气体占杜氏小管的10%以上）；若被测细菌不分解培养 基中的糖,则培养基不发生变化。
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实验原理－－大分子物质代谢实验
明胶液化实验
某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝 固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不 做）
细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生 的胞外酶(淀粉酶)将淀粉水解为小分子糊精或 进一步水解为葡萄糖(或麦芽糖)，再被细菌吸 收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变 化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
实验原理－－大分子物质代谢实验
靛基质(吲哚)试验
某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色 氨酸，产生靛基质(吲哚)，靛基质与对二甲基 氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质(红色化合 物)。
硫化氢试验
某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨 酸等)，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐 或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫 化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
实验仪器,材料和用具
实验仪器
37℃恒温培养箱、20℃恒温培养箱（室温代替）。
微生物材料
大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌这四 种菌种的斜面各1支。
试剂
甲基红试剂、V．P试剂、吲哚试剂、格里斯试剂 (硝酸盐利用试验)、卢戈氏碘液(淀粉水解试验)
实验仪器,材料和用具
实验用具
试管：每份每个试验2根试验，1根对照， 8个试验共27根。 无菌乎皿：每份2个 杜氏小管：每份6个。 接种环、酒精灯、试管架、记号笔。
实验步骤
明胶液化试验
取大肠杆菌和枯草杆菌的纯培养物少许，以接 种针分别穿刺接种到营养明胶培养基中，置20℃ 培养5～7天。观察明胶培养基液化情况。若被检 细菌20℃不易生长，可放37℃培养，但在此温度 下明胶培养基呈液状，故观察结果时，应将明胶 培养基轻轻放入4℃冰箱30min，此时明胶又凝固。 若放置于冰箱30min仍不凝固者，说明明胶被试 验细菌液化，是为阳性。
实验步骤
葡萄糖蛋白 胨水培养基中，37℃培养 48h，加甲基红指示剂 数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色 者为阴性。
伏一普二氏试验(V．P．试验)
将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中， 37℃培养48h，取出，加入40％KOH 5～10滴， 然后再加入等量的5％α一萘酚溶液，用力振荡， 再放入37℃温箱中保温15～30min，以加快反应 速度。若培养物呈现红色，为伏—普反应阳性。
实验原理－－细菌生化试验
甲基红(Methylred)试验(该试验简称MR试验)
很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮 酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸 等，使培养基的pH降低到4．2以下，这时若加 甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色 范围是pH4．4(红色)～pH6．2(黄色)。若某些 细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但 很快将丙酮酸脱羧，转化成醇等物，则培养基 的pH仍在6．2以上，故此时加入甲基红指示剂， 呈现黄色。
实验步骤
靛基质(吲哚)试验
将被检菌接种到 胰蛋白胨水培养基 中，37℃培养24h～ 48h后，沿试管壁滴 加数滴吲哚试剂于 培养物液面，观察 结果。 出现红色者为阳 性，出现黄色者为 阴性。
实验步骤
硫化氢试验：
将大肠杆菌和变 形杆菌以接种针 穿刺接种到醋酸 铅或柠檬酸铁氨 培养基中，37℃ 培养24h，观察 结果，若有黑色 出现者为阳性。
实验原理－－有机酸盐及氨盐利用试验
柠檬酸盐利用试验
柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠檬酸 钠为碳的唯一来源。而磷酸二氢铵是氮的唯一来 源。有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳 源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠 檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时 培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝 色。不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌，在该培养 基上不生长，培养基不变色。
实验仪器,材料和用具
培养基
葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基：每份各6支试管，每 支5～10mi培养基，灭菌。用于糖类发酵试验。 葡萄糖蛋白胨水培养基：每份3支试管，每支5～10mi培养 基，灭菌。用于甲基红和V．P试验。 胰蛋白水培养基：每份3支每支5～10mi培养基，灭菌。用 于吲哚试验。 柠檬酸铁铵或醋酸铅的半固体培养基；每份3支，每支5～ 10ml培养基，灭菌。用于硫化氢试验。 营养明胶培养基：每份3支，每支．5～10ml培养基、灭菌。 用于明胶液化试验。 淀粉培养基：每份2个平皿，每平皿约20ml培养基，灭菌后 倒入平皿。用于淀粉水解试验。 柠檬酸钠培养基：每份3支，每支5一lOml培养基，灭菌， 做斜面。用于柠檬酸盐利用试验。
实验步骤
柠檬酸盐利用试验
取少量被检菌接种 到柠檬酸盐培养基 上，37℃培养24h后， 观察结果。培养基 变深蓝色者为阳性。 培养基不变色，则 继续培养7天，培养 基仍不变色者为阴 性。
实验结果
糖发酵实验
结果与讨论
记录上述各试验结果； 在吲哚试验和硫化氢试验中细菌各分解 何种氨基酸?
谢谢大家！
细菌鉴定中常用的生理生化反应
陈金春,林琳， 郑重，陈晶瑜，王亚武 清华大学微生物实验室,100084
实验目的和内容
a. 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定 中常用的生理生化反应的测定方法； b. 通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分 解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样 性； c. 了解细菌在不同培养基中的不同生长现象及 其代谢产物在鉴别细菌中的意义；
实验原理
细菌生化试验
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基 质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或 少地各有区别，可供鉴别细菌之用。用生化试 验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其 代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌 的生化反应。
实验原理－－细菌生化试验
糖(醇)类发酵试验
不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵 糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不 ( ) 相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的 产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先 加入溴甲酚紫[pH5．2(黄色)一6．8(紫色)]，当发 酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产 生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证 明。
实验步骤
糖(醇)类发酵试验
编号 在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌 名和组号，下同。 接种 取葡萄糖发酵培养基3支，按编号1支接种大肠杆菌， 另1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。同 样取3支乳糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种普 通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。 将已接种好的培养基置37℃温箱中培养24h。 观察结果：被检细菌若能发酵培养基中的糖时，则使培 养基的pH降低，这时培养基中的指示剂呈酸性反应(为黄 色)，若发酵培养基中的糖产酸产气，则培养基不仅显酸 色反应，并且在培养基中倒置的小玻璃管(杜氏小管)中 有气体。气体占整个倒置小玻管的10％以上。若被检细 菌不分解培养基中的糖，则培养基不发生变化。
实验步骤
淀粉水解试验
将配制好的淀粉培养基冷却到50℃左右，以无菌 操作制成平板。 用接种环取少许枯草杆菌划线接种在平板的一边， 再取少许大肠杆菌划线接种在平板的另一边。置 37℃温箱培养24h。 将平皿取出，打开皿盖，滴加少量卢戈氏碘液于 平板上，轻轻摇动平皿，使碘液均匀铺满整个平 板。如菌苔周围有无色透明圈出现，说明淀粉已 被水解。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力 的大小。