实验四 高效液相色谱法测定水体中的苯酚及α-萘酚
水样中苯酚测定
反相色谱法测定环境水样中苯酚的含量
一．实验目的
1. 熟悉液相色谱仪的基本构造和操作方法
2. 学会利用内标法对物质进行色谱定量分析
二．仪器与试药
仪器：
高效液相色谱仪（日本岛津10AVP型）、溶剂过滤器、样品溶液过滤器、微量进样器
试药：甲苯（分析纯）、苯酚（分析纯）、甲醇
三、色谱条件
色谱柱：C18（250×4.6，5um）
流动相：甲醇-水=70：30 （v/v）
检测器及检测波长：紫外检测器254nm
流速：1.0ml/min
四、实验操作
1. 内标物溶液的配制：准确称取一定量的甲苯，加甲醇溶解后制成0.5 mg/mL的内标溶液。
2．对照品溶液的配制：准确称取苯酚对照品适量，加甲醇溶解后制成0.4 mg/mL的对照品溶液。
3. 调用或创建咖啡因测定方法并运行方法
4. 测定
⑴校正因子的测定：取400uL内标溶液和200uL对照品溶液混合。
待基线平稳后，吸取5μL 进样。
⑵样品测定：取400uL内标溶液和200uL样品溶液混合。
待基线平稳后，吸取5μL进样。
五、数据处理及计算
六、思考题
1.如何判断第一个色谱峰就是苯酚的峰？
2.简述三种定量方法的优缺点。
高效液相色谱法测定水中α-萘酚和β-萘酚
高效液相色谱法测定水中α-萘酚和β-萘酚张国祯;李丹丹;马可婧【摘要】建立了液液萃取—高效液相色谱法测定水样中α-萘酚和β-萘酚的分析方法.对流动相组成及流速、柱温、萃取剂种类、色谱柱类型等条件进行了优化.选用三氯甲烷为萃取剂,乙腈:水(0.1%乙酸)=50:50为流动相,流速1mL/min,柱温40℃,作为色谱条件.在1L空白水样中添加低浓度水平的萘酚标准溶液(加标量为0.2μg),测定平行样品7份,α-萘酚加标回收率为92%~117%,标准偏差为5.5%;β-萘酚加标回收率为96%~121%,标准偏差为5.1%.当萃取体积为1L,浓缩至1mL,进样量为10μL时,α-萘酚和β-萘酚的方法检出限分别为0.15μg/L和0.17μg/L.【期刊名称】《甘肃科技》【年(卷),期】2016(032)018【总页数】3页(P47-49)【关键词】液液萃取;高效液相色谱;α-萘酚;β-萘酚【作者】张国祯;李丹丹;马可婧【作者单位】甘肃省环境监测中心站,甘肃兰州730020;甘肃省环境监测中心站,甘肃兰州730020;甘肃省环境监测中心站,甘肃兰州730020【正文语种】中文【中图分类】X832萘酚属于多环芳烃类物质的一种，由于羟基位置的不同有两种同分异构体，分别为α-萘酚和β-萘酚，是医药、农药、染料、化妆品生产合成等行业的重要中间体，有毒，对皮肤、黏膜有强烈的刺激作用，易于经皮肤吸收。
在我国环境行业，《地表水环境质量标准》（GB3838-2002）、《污水综合排放标准中》（GB8978-1996）以及医药等行业排放标准中，水环境萘酚的各类水质限量标准和标准检验方法尚未建立，目前仍将其归类于挥发酚中。
2015年环保部组织征集水体中萘酚类化合物的测定方法。
因此，研究水中萘酚类化合物的的测定方法具有重要的意义。
目前，α-萘酚和β-萘酚的测定方法主要有紫外光谱法[1]、荧光光谱法[2-5]、高效液相色谱法[6-8]、电化学分析法和联用技术[9]。
苯酚含量的测定方法
苯酚含量的测定方法主要有以下两种：一、高效液相色谱法：1.样品制备：量取适量待测溶液，使用孔径为0.45μm的滤膜过滤，得到待测样品。
2.仪器检查：按洗脱的初始体积比将流动相A（如1.0‰TFA-乙腈溶液）和流动相B（如1.0‰TFA-水溶液）接入高效液相色谱仪的C色谱柱中平衡，检查仪器各系统，确保仪器正常。
3.检测前准备：设置高效液相色谱仪的色谱条件，包括压力警戒、检测波长、流速、进样量、柱温等参数。
随后继续按初始体积比将流动相A和流动相B 接入C色谱柱中，直至C色谱柱内的各物质含量达到动态平衡。
4.苯酚洗脱：将步骤1中得到的样品加入至已平衡的C色谱柱中，按流动相A和流动相B之间的体积比的不同分成多个洗脱阶段，依次对样品中的苯酚进行梯度洗脱，记录色谱图。
5.绘制线性回归方程：精密量取不同浓度的苯酚标准溶液作为标准对照液，按照上述洗脱阶段进行梯度洗脱，记录色谱图，测得标准对照液的吸收峰面积。
以标准对照液浓度为横坐标、以吸收峰面积为纵坐标制作的线性回归方程。
6.苯酚含量测定：将待测样品的苯酚的吸收峰面积代入线性回归方程中，计算得到样品中苯酚的含量。
二、氧化还原滴定法：1.原理：供试品加水溶解后，取适量置碘瓶中，加入溴滴定液和盐酸，摇匀后静置，再加入碘化钾试液和硫代硫酸钠滴定液进行滴定，根据滴定液的使用量计算苯酚的含量。
2.试样制备：制备溴滴定液、碘化钾试液、淀粉指示液和硫代硫酸钠滴定液等所需试剂。
3.操作步骤：按照上述原理中的步骤进行操作，记录滴定结果，并用空白试验校正。
根据滴定液的使用量计算苯酚的含量。
以上两种方法各有特点，可以根据实际需求和实验条件选择适合的方法进行苯酚含量的测定。
高效液相色谱法测定水样中的苯酚
实验三高效液相色谱法测定水样中的苯酚一、实验目的1.1熟悉HPLC仪器的各个部件及熟悉操作方法；1.2掌握应用高效液相色谱法对苯酚的定性、定量分析；1.3掌握水样中苯酚的测定。
二、实验原理HPLC原理高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9´107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
特点1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。
一般可达150～350×105Pa。
2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。
高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。
3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。
4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。
另外，用样量小，一般几个微升。
5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。
而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75% ～80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。
高效液相色谱仪一般分为四个部分：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。
高效液相色谱法测定酚类化合物
同淋 洗梯 度 对 出峰 时 间的影响 作 了探 讨 。
关键 词 ：高效 液相 色谱 法 ；酚类化 合物 ；梯 度 ；出峰 时 间
中图分 类号 ：Ｘ ３ ８
ｌ 引言
文献 标识 码 ： Ａ
文 章编 号 ： ６ ３—９ ５ （ ０ ２ ４— １３— ２ １７ ６ ５ ２ １ ）０ ０ ０ ０
酚 类 化 合 物是 造 成 环 境 污 染 的重 要 工业 化 学 品 ，不但 有 毒 ，而 且 它 可 使 水 带 有 讨 厌 的气 味 和
颜色 ，因 而 水 中 酚 类 物 质 测 定 具 有 重 要 意 义 … 。
目前水质分析 中常用 ４一 氨基安替 比林萃取光度法 测定 挥 发酚 ］ ，而 用 高 效液 相 色 谱 测 对 苯 酚 、 间
进 样 量 ：１ 。检 测 器 ：Ｕ ２ ０ ｍ 。 ０ Ｖ一 ８ ｎ ２ ３ 标 准 溶液 配制 ．
泵 、进样器 、色谱柱 、检测器和记录器组成 ，其整 体组成类似于气相色谱 ， 但是针对其流动相为液体 的特点作 出很多调整。Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ的输液泵要求输液量 恒定 平稳 ；进 样 系统 要求进 样 便利 切换 严 密 ；由于 液体 流 动相 粘度远 远 高 于气体 ，为了减 低柱 压 ，高
（０ ８ ％Ａ＋２ ％ Ｂ） １ ｉ （ ０ ０ ，２ ｍ ｎ ３ ％Ａ＋ ０ Ｂ） ５ ｎ ７％ ，２ ｍｉ
（０ ３ ％Ａ＋ ０ ） ７ ％Ｂ ，流速 ：１０ ｍ／ ｉ。 ．０ ｌｍ ｎ
２ １ 主要 仪器 和试 剂 ．
梯度 淋 洗 ４：开 始 （ ０ Ａ ＋７ ％ Ｂ） ５ ｉ ３％ ０ ，２ ｍ ｎ （０ ８ ％Ａ＋２ ％ Ｂ） ６ ｉ （０ Ｏ ，２ ｍ ｎ ３ ％Ａ＋７ ％ Ｂ） ０ ｉ ０ ，３ ｍ ｎ
高效液相色谱法测定酚类物质的探讨
[1] 周 晓 珍,肖 熳.高 效 液 相 色 谱 法 测 定 水 中 六 种酚 类 化 合 物 [J].南 昌 高 专 学 报,2005,1 (56):103-105.
[2] 刘桂明,邓义敏.水 中 苯 酚、五 氯 酚、2,4,6三氯酚 的 高 效 液 相 色 谱 法 [J].云 南 环 境 科 学 ,2005,4(19):59-61.
方法二:流动相为70% 乙 腈—1% (v/v)乙 酸 水 溶液;流速为1ml/min;柱温 箱 温 度 为 35℃;进 样 量 为 10μL,测 定 波 长 在 254nm。 2.2.2 定性标准溶液的配制
本项目旨 在 确 定 碎 煤 加 压 气 化 酚 氨 回 收 水 中 酚类的检验 方 法,因 此,本 实 验 选 择 了 样 品 中 可 能 存在的 20 中 酚 类 物 质,利 用 标 准 物 质 进 行 定 性 分析。
在反相色谱分 析 体 系 中,待 测 的 酚 类 物 质 在 反 向固定 相 和 流 动 相 之 间 进 行 一 定 比 例 的 分 配,此 时,可以通 过 改 变 流 动 相 的 种 类 以 及 组 成 比 例,或 者是流速,来改变或 者 控 制 待 测 物 质 在 色 谱 柱 上 的 保留时间,以达 到 待 测 物 质 有 效 分 离 的 目 的。 通 过 查询文献 发 [2] 现 多 数 采 用 甲 醇 或 者 乙 腈 作 为 流 动 相,而且在流 动 相 中 加 入 1% 的 冰 乙 酸 能 够 有 效 的 改善目 标 物 峰 形 并 且 降 低 峰 宽,获 得 更 好 的 分 离 度。本文 中 选 用 两 种 流 动 相,一 种 是 70% 甲 醇— 1%(v/v)乙酸水溶液,另 一 种 是 70% 乙 腈—1%(v/ v)乙 酸 水 溶 液 。 2.3.2.3 酚类化合物色谱分析结果
HPLC测定酚类化合物实验报告
实验题目：液相色谱测定酚类化合物实验报告环境工程刘鹏12333511.实验目的（1）了解仪器各部分的构造和功能及分析的原理（2）掌握样品、流动相的处理、仪器的维护等基本知识（3）学会简单样品的分析操作过程（4）掌握HPLC分析的定性、定量方法2.基本原理高效液相色谱仪以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。
与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。
对于酚类化合物的测定，其基本原理是这样的：先用固相小柱吸附水中酚类化合物，然后用溶剂洗脱，经氮吹气浓缩至一定体积后，用反相高压液相色谱法分析。
在反相色谱柱上以甲醇/（水+乙酸）为流动相把经预处理的酚类化合物分离，用二极阵列检测器或紫外检测器，测定各种酚的峰高或峰面积，以外标法定量。
3.仪器与试剂3.1仪器：高效液相色谱仪：可编程紫外检测器微量注射器：50μL、100μL色谱柱：C18或C8柱化学工作站尖底浓缩瓶：10ml 具刻度富集柱3.2试剂：流动相：甲醇/高纯水(需Φ0.22μm滤膜过滤)标准物：六种酚类混合物洗脱液：正己烷、四氢呋喃(需重蒸)硫酸冰醋酸无水亚硫酸钠4.所用仪器的主要组件(1) 高压输液泵♥主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。
♥为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。
♥应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。
(2) 梯度淋洗装置外梯度（高压梯度）：用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。
内梯度（低压梯度）：一台高压泵，通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。
高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质
高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质一、实验目的1.掌握高效液相色谱法分离检测有机化合物的原理及操作步骤；2.熟悉水中分离化合物的分离检测方法。
二、实验原理酚类化合物是指芳香烃中苯环上的氢原子被羟基取代所生成的化合物，根据其分子所含的羟基数目可分为一元酚和多元酚。
酚类化合物具有强烈的杀菌作用。
酚是一种中等强度的化学毒物。
低浓度时使细胞变性，高浓度时使蛋白质凝固。
酚类化合物可经皮肤粘膜、呼吸道及消化道进入体内。
低浓度可引起蓄积性慢性中毒，高浓度可引起急性中毒以致昏迷死亡。
采用高效液相色谱法测定酚类化合物可以保持原化合物的组成不变，直接测定，对各种不同取代基的酚类化合物可以同时进行分离和分析，此法具有重现性好，选择性好，灵敏度高，操作简便的优点。
高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
三、仪器条件1、仪器：高效液相色谱仪、高压泵、紫外光度检测器、六通进样阀、色谱工作站2、试剂：苯酚、甲酚、间苯二酚为分析纯；甲醇为色谱纯；纯水为重蒸水.标准溶液的配制：分别配制苯酚、甲酚、间苯二酚浓度为250 mg/L，甲醇溶液10.0 mg/L。
3、实验条件：色谱柱：C18 柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm) ，柱温：28 ℃流动相：甲醇：水= 45:55，流量：1.0 ml·min-1紫外分光检测器：测定波长233、274 nm进样量：20μl四、实验步骤1. 将配制好的流动相于超声波清洗器上脱气15 min 。
2. 根据实验条件，将仪器按照仪器的操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡，基线平直时，即可进样。
3. 吸取20μl 标准溶液进样，记录色谱图，重复进样。
4. 检测废水的酚类物质的含量。
高效液相色谱法测定水中酚类物质
2017年04月高效液相色谱法测定水中酚类物质景阳贺调（陕西煤业化工集团神木天元化工有限公司，陕西榆林719319）摘要：在淡水资源日益短缺的背景中，水资源污染形势仍然十分严峻。
酚类物质作为一种较为常见且难以处理的污染物，其在淡水资源中的存在极易危害人们的身体健康。
为了改善这种现象，相关环保部门应该加强对河流、湖泊等淡水资源酚类物质含量、种类的测定，以便更加精确地开展水污染治理工作。
本文以某地区河水样本作为研究对象，利用高效液相色谱法对该河水样本中含有的酚类物质进行精确测定和分析。
关键词：高效液相色谱法；测定；酚类物质随着工业的不断发展，水资源污染问题变得越来越明显。
工业生产活动中产生了大量的酚类物质，这些物质通过工业污水、地下水等途径汇入河流、湖泊，对水资源产生污染。
对于作为一种工业化学污染物，酚类物质的存在会对水资源的质量、安全性产生极大影响。
相关环保部门需要通过测定水中酚类物质含量的方式，提出有针对性的处理措施，改善水资源的质量，更好地保障人们的用水安全。
与其他酚类物质测定方法相比，高效液相色谱法在测定水中酚类物质种类、含量方面的应用优势较为明显。
1实验仪器与试剂这里选用Mill 色谱管理软件、2690型分离系统、996型紫外线检测器、Inte 质谱检测器作为测定水中酚类物质的实验仪器。
在实验试剂方面，基于高效液相色谱法的水中酚类物质检测所需的试剂主要包含以下几种：磷酸二氢钾、二甲基苯酚、乙腈、蒸馏水、三氯苯酚、二氯苯酚、四硝基苯酚等。
为了保证酚类物质的检测质量，本研究选用的酚类物质含量全部高于95%[1]。
2样品选择这里以某地区的河水作为样品来源，利用孔径参数为0.45μm 的滤膜对样品进行初步过滤。
将过滤后的河水体积控制在250mL[2]。
当初步处理完成后，利用氢氧化钠溶液提高河水样品的pH 值。
经测定，原河水样品的pH 值为10.45，采用碱溶液将其pH 参数提高为13左右时，停止上述处理；利用流速参数为每分钟10毫升的速度，将pH 值为13的河水样品通过活化好的小柱[3]。
高效液相色谱法测定水样中的苯酚
实验三高效液相色谱法测定水样中的苯酚一、实验目的1.1 熟悉HPLC仪器的各个部件及熟悉操作方法；1.2 掌握应用高效液相色谱法对苯酚的定性、定量分析；1.3 掌握水样中苯酚的测定。
二、实验原理HPLC原理高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
特点1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。
一般可达150～350×105Pa。
2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。
高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。
3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。
4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。
另外，用样量小，一般几个微升。
5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。
而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。
高效液相色谱仪一般分为四个部分：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。
高效液相色谱荧光检测法测定环境水体中的苯酚的实验研究
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｌ ｗｉ ｌ ｌ ｃ ａ ｕ ｓ ｅ ｓ ｅ ｉｏ ｒ ｕ ｓ ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ｐ ｏ ｌ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｄ ｕ ｅ ｔ ｏ ｉ ｔ ｓ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｇ ｒ ａ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ，ｂ ｕ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓ ａ ｌ ｓ ｏ ａ ｎ
高 效 液 相 色 谱 荧 光 检 测 法 测 定
环 境 水 体 中 的 苯 酚 的 实 验 研 究
黄尧 ， 王 小文 ， 薛科社 ， 范晓娟
（ 西北大学 城市与环境学 院 ， 陕西 西安 ７ １ ０ １ ２ ７ ）
摘
要： 苯酚毒性 大、 难 降解 ， 是 严重的环境 污染物 ， 同时也是环境监 测的重要 指标 。文章介 绍 了用高效液相
Ｈ ｕ ａ ｎ ｇ Ｙ ａ ｏ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｘ ｉ ａ ｏ ｗ ｅ ｎ ，Ｘ ｕ ｅ Ｋ ｅ ｓ ｈ ｅ ，Ｆ ａ ｎ ｇ Ｘ ｉ ａ ｏ ｊ ｕ ａ ｎ
（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｕ ｒ ｂ ａ ｎ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ，Ｎ ｏ ｒ ｔ ｈ ｗ ｅ ｓ ｔ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｘ ｉ ’ ａ ｎ ７ １ ０ １ ２ ７， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
水中酚类化合物(液相色谱法)测定实验报告
水中酚类化合物(液相色谱法)测定实验报告1.进行醇和酚主要化学性质的实验操作。
2.熟练进行水浴加热和点滴板使用的操作。
3.能够较慢地设计出来①伯醇、仲醇与叔醇；②一元醇与多元醇；③醇与酚类物质的辨别方案，并展开实验操作方式。
4.具有严肃和实事求是的科学态度，养成爱护公物，节省试剂的良好品德。
【实验用品】金属钠、无水乙醇、酚酞试剂、仲丁醇、叔丁醇、蒸馏水、卢卡斯试剂、1.5mol/l硫酸、0.17mol/l重铬酸钾溶液、g/l naoh溶液、乙醇、醋酸、48g/l cuso4溶液、甘油、蓝色石蕊试纸、0.1mol/l苯酚溶液、饱和碳酸钠溶液、饱和碳酸氢钠溶液、溴水、0.06mol/l三氯化铁溶液、0.03mol/l高锰酸钾溶液、浓硫酸。
试管、烧杯、酒精灯、玻璃棒、点滴板、广为ph试纸、表面皿。
【实验原理】羟基就是醇的官能团、o－h键和c－o键难脱落出现化学反应；同时，α-h和β-h存有一定的开朗性，使醇能够出现水解反应、消解反应等；而邻多元醇除了具备通常醇的化学性质，由于它们分子中相连羟基的相互影响，具备一些特定的性质，例如甘油能够与cu(oh)2促进作用。
酚类化合物分子中所含羟基，o－h键已出现脱落，在水溶液中能电离出来少量氢离子，并使酚溶液表明弱酸性；－oh受到苯环上大π键的影响，使c－oh键表明一定的活性，极易出现水解反应；而苯环也受到－oh的影响，使苯环上的h的活性进一步增强，极易出现替代反应。
【实验指导】（实验内容、步骤、操作事项）一、醇的化学性质1. 醇钠的生成及水解在潮湿试管中，重新加入无水乙醇1ml，并提一小粒艾盖佩的、用滤纸擦拭的金属钠，观测反应释出的气体和试管与否咳嗽。
随着反应的展开，试管内溶液变小仁和。
当钠全然熔化后，加热，试管内溶液逐渐凝固成液态。
然后几滴搅拌直至液态消失，再提一滴酚酞试液，观测并表述出现的变化。
2. 醇的氧化挑4两支试管，分别重新加入5几滴仲丁醇、叔丁醇和蒸馏水，然后各重新加入10几滴1.5mol/l硫酸和0.17mol/l重铬酸钾溶液，振摇，观测并及时记录发生变化快慢的时间。
超高效液相色谱法快速灵敏检测水中苯酚
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高效液相色谱法测定废水中酚类化合物含量
高效液相色谱法测定废水中酚类化合物含量张德谨;王君荷;谢永;朱军;李沙沙;张萍花【摘要】采用高效液相色谱法同时测定废水中间苯二酚和对苯二酚的含量,以酚类化合物浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,通过精密度试验、稳定性试验以及加标回收率实验对该方法进行评价.结果表明:测定间苯二酚的线性回归方程为Y=0.00009X+0.31783,测定对苯二酚的线性回归方程为Y=0.0002X-1.36472.在设定的色谱条件下,模拟废水中间苯二酚浓度为6.27 mg/L,对苯二酚浓度为2.30 mg/L,加标回收率试验、精密度试验和稳定性试验结果表明,该检测方法准确可靠.【期刊名称】《廊坊师范学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(019)001【总页数】4页(P59-62)【关键词】高效液相色谱法;含量;酚类化合物【作者】张德谨;王君荷;谢永;朱军;李沙沙;张萍花【作者单位】宿州学院,安徽宿州234000;宿州学院精细化工产品开发研究所,安徽宿州234000;宿州学院,安徽宿州234000;宿州学院,安徽宿州234000;宿州学院精细化工产品开发研究所,安徽宿州234000;宿州学院,安徽宿州234000;宿州学院,安徽宿州234000;宿州学院,安徽宿州234000【正文语种】中文【中图分类】O6580 引言随着生活水平的提高，人们对生态环境的关注度越来越高，其中，水体污染已经成为环境污染中最重要的方面［1］。
酚类化合物被广泛应用于染料、医药杀菌剂、防腐剂以及除草剂等各个方面，是我国工业发展不可或缺的一种重要有机化合物［2］。
但是，含酚工业废水对环境危害巨大，具有致癌、致突变以及致畸等严重危害，我国已经把酚类化合物列为5种毒物之一［3，4］。
因此，对酚类化合物的检测十分必要。
目前已有多种检测酚类化合物的方法，例如福林-西莫卡特比色法［5］、分光光度法［6］、气相色谱法［7］以及高效液相色谱法［8］等。
HPLC定量测定水中苯酚类化合物
需要注意的问题
1．操作一定要严格认真 实验原理务必搞清楚。 2.标准曲线一定要画得规范，美观，尽量用满坐标纸。 3.结论的描述要有以下内容： A、用什么方法得到的数据 B、如何做的标准曲线 C、查得未知样品中对苯二酚的含量是多少。
4、分析结束后如果次日或一段时间内不再进行分析，必须用纯 的甲醇将色谱柱封好（一般用甲醇冲洗20分钟）
再 见
四、实验步骤
(一)、实验条件 1、色谱柱：反向 C18---4.6X15cm 2、流动相：甲醇水溶液（甲醇：水=20:80） 流量为1.2ml/min-1 3、紫外检测器：检测波长为270nm 4、进样量：25μl
（二）、具体步骤 1、设定参数表（结束时间10分钟、等浓度洗脱、流速 1.2ml/min、检测波长 270nm） 2、用20%甲醇清洗进样针, 3、进样针吸取不同浓度的对苯二酚标准溶液25ul，进 样后，测得各浓度溶液的峰高和峰面积。 4、 进样针吸取未知样品溶液，以同样的方法测得峰高 和峰面积。 5、以标准物质的峰高或峰面积对浓度作标准曲线 6、以未知样品峰高或峰面积在标准曲线上查出其中对 苯二酚的浓度。
• 我们采用标准曲线法对对苯二酚进行定量 分析。作标准曲线（峰面积为纵 坐标、浓度为横坐标）， • 在标准曲线上查出未知样品中对苯二酚的 浓度。
三、实验仪器与试剂
高效液相色谱仪
（岛津LC-20A ） （岛津LC-20A D） 试 剂： 对苯二酚 20%甲醇 定量标准溶液： 对苯二酚溶液: 含量为40μgml-1、 80μgml-1 120μgml-1 160μgml-1 未知样品液: 对苯二酚（浓度未知）
HPLC定量分析
高效液相色谱法 定量测定水中苯酚类化合物
指导教师：赵建军
一、实验目的
高效液相色谱测定水中酚类化合物
高效液相色谱测定水中酚类化合物褚芸;张吉君【期刊名称】《化工设计通讯》【年(卷),期】2016(042)004【摘要】High performance liquid chromatography detection has advantages of its outstanding performance in many areas, following a brief performance liquid chromatography and high performance liquid chromatography,high performance liquid chromatography and discuss the steps to detect and test compounds in water accuracy of the results.%高效液相色谱法在检测方面具有的优势使其在很多领域表现突出，下面简单介绍高效液相色谱法和高效液相色谱仪，并讨论高效液相色谱法检测水中化合物的步骤及检测结果的准确性。
【总页数】1页(P137-137)【作者】褚芸;张吉君【作者单位】苏州大学卫生与环境技术研究所，江苏苏州 215000;苏州市吴江区公安局交警大队平望中队，江苏苏州 215221【正文语种】中文【中图分类】X832【相关文献】1.固相萃取-高效液相色谱法测定废水中的酚类化合物 [J], 刘彬;李爱民;贺小敏;陈瑞文;张强2.高效液相色谱法测定废水中酚类化合物含量 [J], 张德谨;王君荷;谢永;朱军;李沙沙;张萍花3.固相萃取—高效液相色谱仪测定水中的五种酚类化合物 [J], 黎钰韬4.高效液相色谱法测定废水中酚类化合物含量 [J], 张德谨[1,2];王君荷[1];谢永[1,2];朱军[1];李沙沙[1];张萍花[1]5.枪头式羧基化多壁碳纳米管固相萃取/高效液相色谱测定饮用水中双酚类化合物[J], 朱培杰;涂雪元;周家欢;陈奕全;刘艳清;汪洪武因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定水中苯酚类化合物
3、定量分析：外标法 标准品： A0=KC0V0 得出K值 待测样品： A’=KC’V’ 得出A’ V’值，通过上 式求的K1，算C’
四、实验步骤
1、实验条件 1)色谱柱： 2)流动相：n-1 3)紫外光度检测器：检测波长为270nm 4)进样量：20μg
2、具体步骤 1)用20%甲醇清洗进样针 2)进样针吸取对本二酚标准溶液，测得保留时 间吸光度（t1，A1） 3)进样针吸取邻本二酚标准溶液，测得保留时 间吸光度（t2，A2） 4)进样针吸取样品溶液，测得3个峰值的保留 时间，吸光度（t1’、t2’tx’ A1 ’ Ax’ A2 ’ ） 5)计算邻本二酚、对苯二酚的浓度
附Ⅱ：（预习）实 验 报 告 格 式
1．工作准备 实验室级别：温度： 相对湿度： 高效液相所用液体的确认 样品确认 2．高效液相柱状态确认 柱型： 。高效液相柱连接是否完好 漏液现象。
；有无
4．检测过程
1、 洗柱、平衡柱 流动相： 流速： （ml/min）时间： （min） 2、上样 上样量： μl 流速： (ml/min) 样品采集时间 （min） 检测波长 (nm) 3 、清洗 流动相： 流速： （ml/min）时间： （min） 4、封柱 流动相： 流速： （ml/min）时间： （min）
高效液相色谱法测定水中 苯酚类化合物
指导教师：刘晓宇
一、实验目的
1、初步掌握高压液相色谱仪的基本原理和使 用方法。 2、了解反相液相色谱仪的分离非极性与弱极 性化合物的基本原理。 3、站我反相液相色谱法分离苯酚类化合物试 验条件。 4、对水中苯酚类化合物进行定性和定量分析。
实验四 高效液相色谱法测定水体中的苯酚及α-萘酚
高效液相色谱法测定水体中的苯酚和α-萘酚一、实验目的1、了解色谱法的分离原理，初步学会使用高效液相色谱仪；2、利用高效液相色谱仪分离测定水体中的苯酚及α-萘酚。
二、实验原理1、色谱法的分离原理溶于流动相中的各待测组分经过色谱柱固定相时，由于各组分与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸收、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，达到分离的目的，又称色层法、层析法。
2、高效液相色谱仪使用原理高效液相色谱仪由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成四个系统即高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
正是根据物质的定性与定量关系，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。
3、苯酚及α-萘酚的分离原理及标准溶液准备对于一些组分比较简单的已知范围的混合物，或无已知物的情况下，可以利用保留值定性。
保留值的大小取决于分配系数之比，即与组分的性质、固定液的性质及柱温有关，与固定液的用量、柱长、流速及填充情况无关。
在一定操作条件下，用对照品配成不同浓度的对照液，定量进样，用峰面积或峰高对对照品的量（或浓度）做校正曲线，求回归方程，然后在相同条件下分析试样，计算含量，这种方法称为校正曲线法。
通常截距近似为零，若截距较大，说明存在一定的系统误差。
本实验，苯酚的波长为270nm，α-萘酚的波长为295nm。
使得两种物质的吸收峰达最大值，最终选定在254nm条件下。
分别配置单样和混合液浓度为100mg/L、80mg/L、60mg/L、40 mg/L、20mg/L标准溶液，分别进样，记录保留时间和出峰面积，用于定性分析。
高效液相色谱法-紫外线法测定水中的苯酚含量实验模板
实验题目：高效液相色谱法-紫外法测定水中的苯酚含量一、实验原理苯酚是最简单的酚，为无色固体，有特殊气味，显酸性。
苯酚是有机化工工业基本原料，可通过各种途径对环境水体造成污染，对人类、鱼类以及农作物带来严重危害。
根据国家环保部门有关规定，工作场所苯酚的最高允许质量浓度为5×10-6μg/L，饮用水中为2μg/L，地面水中为0.1mg/L。
苯酚的测量方法有多种，如溴化容量法、比色法、高效液相色谱法等。
但前两种方法分析速度较慢、精度较低，高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新技术，具有分析速度快、检测灵敏度高、操作简便、样品用量少等特点。
二、仪器与试剂1、仪器名称及型号Agilent 12002、试剂规格及用量苯酚（分析纯），甲醇（色谱纯），二次蒸馏水三、实验步骤1、开机操作（1）打开电脑进入window XP 画面（2）打开Agilent 1200 各模块电源（3）待各模块自检完成后，双击“联机”图标“进入化学工作站”（4）把流动相放入溶剂瓶中（5）数据采集及分析方法编辑2、标准曲线的制备称取纯苯酚600mg 于100.0ml 容量瓶中，用适量甲醇溶解，用甲醇稀释至刻度。
分别吸取该溶液（单位：ml）0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0于50ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
得到标准系列溶液。
分别采用高效液相色谱-紫外法测定标准溶液，记录色谱峰面积，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
3、样品分析将水样经过过滤（0.45um滤膜）处理后，测定其峰面积值，根据标准曲线进行定量。
4、关机操作（1）关机前先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统（2）退出化学工作站关闭计算机（3）关闭Agilent 1200各模块电源开关四、实验数据记录及其处理（可另附页）1、标准曲线的绘制及数据处理序号进样量峰面积序号进样量峰面积五、实验结果六、问题与讨论。
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高效液相色谱法测定水体中的苯酚和α-萘酚
一、实验目的
1、了解色谱法的分离原理，初步学会使用高效液相色谱仪；
2、利用高效液相色谱仪分离测定水体中的苯酚及α-萘酚。
二、实验原理
1、色谱法的分离原理
溶于流动相中的各待测组分经过色谱柱固定相时，由于各组分与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸收、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，达到分离的目的，又称色层法、层析法。
2、高效液相色谱仪使用原理
高效液相色谱仪由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成四个系统即高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
正是根据物质的定性与定量关系，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。
3、苯酚及α-萘酚的分离原理及标准溶液准备
对于一些组分比较简单的已知范围的混合物，或无已知物的情况下，可以利用保留值定性。
保留值的大小取决于分配系数之比，即与组分的性质、固定液的性质及柱温有关，与固定液的用量、柱长、流速及填充情况无关。
在一定操作条件下，用对照品配成不同浓度的对照液，定量进样，用峰面积或峰高对对照品的量（或浓度）做校正曲线，求回归方程，然后在相同条件下分析试样，计算含量，这种方法称为校正曲线法。
通常截距近似为零，若截距较大，说明存在一定的系统误差。
本实验，苯酚的波长为270nm，α-萘酚的波长为295nm。
使得两种物质
的吸收峰达最大值，最终选定在254nm条件下。
分别配置单样和混合液浓度为100mg/L、80mg/L、60mg/L、40 mg/L、20mg/L标准溶液，分别进样，记录保留时间和出峰面积，用于定性分析。
绘制标准曲线，用于定量分析，计算出样品浓度。
三、实验仪器和药品
高效液相色谱仪；流动相过滤器；超声波清洗器；分析天平；
100 mL容量瓶3个、250 mL容量瓶、200 mL量筒、滴管、100 μL-1000 μL 移液枪、20 μL-200 μL移液枪；
苯酚、α-萘酚、乙腈、蒸馏水。
四、实验步骤
1、开机前准备工作
查资料，确定流动相的比例，一般选用甲醇、水、乙腈按比例配制之后根据需要选择不同的滤膜，对流动相进行抽滤除杂质；再进行超声脱气泡10~20min；配制样品和标准溶液，必要时也用0.45μm滤膜过滤。
2、开机
（1）开启计算机，运行Bootp Serve程序。
（2）依次开启仪器各模块电源。
（3）待各模块自检完成后，设定参数。
菜单栏单击control→monitor instrument，单击Pump图标，出现参数设定菜单，设定Flow 1.0 mL/min，单击Pump off变为Pump on；单击Light图标后，单击Light off 变为Light on；关闭菜单栏。
3、在线检测
（1）在工作界面，选择通道，填写实验信息，在方法菜单栏上点击采样控制，设置采样时间、文件保存路径、保存方式、文件名。
（2）在方法菜单栏点击积分，选择积分参量、积分方法、样品重量、积分最小面积，时间参数等相关参数后点击“采用”按钮。
（3）在方法菜单栏点击谱图显示，设置时间显示范围、电压表示范围、谱图显示颜色、数据显示内容，点击“采用”按钮。
（4）在方法菜单栏点击仪器信息，输入相关仪器参数。
（5）在通道菜单栏点击数据采集，观察流动相基线是否平稳待，基线平稳，在检测器通过“zero”键调零。
标样谱图：用进样针抽取相应量标品，把手动进样器扳钮按逆时针方向旋至“load”处，将进样针插入进样孔，注入标液，注完将进样器扳钮按顺时针方向旋至“inject”处，同时点击外带按钮或数据采集菜单栏“采集数据”按钮。
数据采集完毕，自动积分，文件存于相应地址。
样品谱图：在方法菜单栏点击组分表，在对话框点击谱图按钮，调入标样谱图，通过鼠标拖动圈住对应峰，设定相关参数，点击采用按钮，用进样针抽取相应量样品，进样方式同标样。
点击采集按钮，采集时间结束，文件存于设定地址。
4、分析色谱图
在住界面点击Reprogress进入界面后双击右侧图标后，打开文件，点击所保存的文件名既看到图谱。
点击▓（analysist）显示保留时间和峰面积，记录数据做标准曲线。
计算标准线性方程；待测样品进样后，记录相同保留时间下的物质峰面积，代入方程计算含量。
5、关机
试验结束后用纯甲醇将色谱柱冲洗干净，一般用纯甲醇冲洗1~3h，待记录仪上无杂质峰后关机，关闭稳压电源。
五、实验结果
浓度（mg/L）苯酚保留时间
（min）
苯酚峰面积
（mv）
α萘酚保留时
间（min）
α萘酚峰面积
（mv）
5 5.870 10885 17.817 11832 10 5.885 20712 17.843 22597 20 5.838 3952
6 17.810 42753 40 6.393 85953 19.472 84744 60 6.395 132342 19.53 111818 80 6.37
7 201670 19.12
8 211266 100 6.263 218933 19.343 249168 样品
绘制苯酚、α萘酚标准曲线。
六、注意事项
1. 流动相的制备要与装置相适应，必须经过过滤、脱气并恢复到室温后使用，以防气泡的产生；
2. 样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损；
3. 转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力，再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏；
4. 为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。
通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗；
5. 输液泵的压力必需稳定，才能取得良好的分析结果。
变动的幅度大致在0.5MPa以内范围为正常；
6. 在一段时间内不进行分析时，建议清洗柱子，并从装置上卸下，种类不同的柱子，清洗的方法也不同，必须按柱的使用说明书确认。
存放时，柱内应充满溶剂（甲醇或乙腈），两端要封死。
柱子要轻拿轻放。
七、附高效液相色谱法分析谱图
思考题
1、采用色谱法原理的分析仪器有哪些？
2、高效液相色谱法还可以对环境中的哪些污染物质进行分析检测？。