科学研究开题报告ppt模板

实验技术路线
采集土壤 分离培养细菌 细菌 抗性实验
选出优良拮抗细菌
接种根腐病原菌
活化病原菌 病原菌
细菌鉴定 发酵优化 保存目标菌株 构建高效表达工程菌株
实验进度安排
2013.2-2013.4
论文撰写
2012.5-2013.2
实验部分
2012.4-2012.5
预实验
2011.10-2012.4 查阅文献 土壤采集
常规防治技术及存在的问题
1
拮抗细菌及其生防作用
2
3
拮抗细菌在草坪草病害防治中的应用研 究
国内外研究现状
常规防治技术及 其存在的问题
传统防治方法
种子检疫 预测预报 栽培管理 化学防治
存在的问题
预测预报不成熟 综合防治体系不完善
造成环境污染
破坏生态平衡 影响观赏效果
国内外研究现状
土壤放射杆菌
拮抗细菌
芽孢杆菌
假单胞菌
国内外研究现状
竞争作用
生防作用
拮抗作用
诱导系 统抗性
重寄生 作用
国内外研究现状
拮抗细菌在草坪草病害防治中的应用研究
目前为止，拮抗 细菌在防治禾本科 作物小麦、水稻等 病害方面的应用很 多，但在同属的草 坪草病害防治中的 研究则非常少
国外对草坪草病害的生 物防治进行了大量的研 究工作。 我国草坪业起步较晚， 草坪病害生物防治的研 究相对滞后。 关于草坪根腐病拮抗细 菌的报道没有
实验内容与方法
16SrDNA序列测AGAGTTTGATCCTGGCTCA G-3’），1429R（ 5’GGCTACCTTGTTACGACTT -3’）扩增拮抗菌的 总 DNA 的 16SrDNA 片段。
PCR 扩增反应体系
10*扩增缓冲液（不含 MgCl2）：2.0μL MgCl2： 1.0μL，
草坪草根腐病拮抗细菌的筛 选鉴定及发酵条件的研究
姓 名：赵 耀 荣 学 号：201130521101 专 业：林 业 时 间：2012.11.14
Contents
1
2 3
国内外研究现状
研究目的与意义
实验内容及方法
4
5
实验创新点与技术路线
实验进度安排及预期结果
国内外研究现状
草坪草根腐病是一种由多种病原菌单独或复合侵染引起的真 菌性病害，目前已报道的主要致病菌有镰刀菌属(Fusarium spp)、 腐霉属(Pythium spp)、离蠕孢属(Biploaris sp.)及立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani)。
本试验采用生物防治 思路，与传统的草坪 草根腐病害防治方法 相比，减少了人力物 力的资源的大量投入 和潜在的环境污染。
2
拮抗细菌在防治禾本 科作物小麦、水稻等 病害方面的应用很多， 但在同属的草坪草病 害防治中的研究则非 常少，至今没有发现 与草坪草根腐病拮抗 细菌相关的报道。
3
学者衡量细菌抗性要么 通过测量病原菌的对照 生长量(菌落半径)和处 理生长量(接种细菌后的 抑制生长半径)，拮抗作 用用抑菌率表示，要么 通过测量抑菌带来确定 抗性大小。本文创新之 处就是将两者结合，从 而得到较为全面的结果。
(1)取1.5mL的培养物于离心管 中，12000rpm离心1-2min； (2)吸取上清液，沉淀中加入 565ulTE缓冲液，旋涡振荡使之 悬浮，再加入30ul10%SDS， 37℃温育1h； (3)加入100ul5mol⁄L NaCl，充 分混匀，再加入80ulCTAB⁄NaCl 溶液，混匀后 65℃，温育 2030min； (4)加入等体积氯仿⁄异戊醇混匀，离心 4-5min，上清转入新离心管中，当白色 物质较多或者较黏时，可重复一次；加 入0.6-0.8倍体积的异戊醇，放入-20℃ 冰箱中，过夜沉淀； (5)取出后，4℃,12000rpm离心10min； (6)沉淀加入70%乙醇，洗涤两次； (7)将DNA真空干燥，加入15-25ulddH2O ，将DNA溶解; (8)用1%琼脂糖凝胶电泳在紫外灯下进行 检测，观察有无目标条带。
实验内容与方法
16SrDNA序列测定
PCR产物的回收
用1%琼脂糖凝胶电泳， 切胶回收目的条带。
序列的测定
将回收产物，送往指定公司进行测序。 测序完毕后，将序列提交到 NCBI 数据 库中，用Blast程序与数据库中的序列进 行同源性比对。用MEGA4.0 软件进行系 统进化树的建立。
实验创新点
1
PCR 反应扩增条件
95℃ ：5min，
94℃ ：1min，56 ℃ :30s 72℃ ：1.5min，30个循环
d NTP：1.0μL，
p1：1.0μL， p2：1.0μL，
72℃：延伸 10min，反应 结束后 4℃保存。
Taq 酶： 0.2μL，
模板： 1.0μL， 加无菌双蒸水至 20μL。
培养菌落特征观察 菌体形态观察 生理生化特性实验 16SrDNA序列测定 及系统发育分析
土壤稀释法 平板对峙法
以草坪草根腐病病 原菌为靶标菌株， 从培养基、发酵时 间、pH值、接种量 等方面系统的研究 目标菌株的最适培 养条件和最佳培养 基组分组合。
实验内容与方法
16SrDNA序列测定
CTAB⁄NaCl法提取细菌总DNA
研究目的与意义
意 义
•
目 的
筛选并鉴定草坪 草根腐病根际拮 抗细菌，用以防 治草坪根腐病； 优化拮抗细菌的 摇瓶发酵条件， 为构建高效表达 工程菌株及其以 后工业大规模发 酵提供试验依据
•
草坪业持续发展
减少生态环境破 坏
生物防治是草坪 病害防治的一个 新领域
实验内容与方法
发酵条件的优化 鉴定 分离与筛选
实验预期结果
分离出的细菌
分离出的细菌
分离出的细菌
芽孢杆菌
分离出的细菌
实验预期结果
目标菌株最佳发酵条件
优化
培养基
发酵时间
接种量
PH
拮抗细菌在植物病害防治中占据着重要的地位，因其种类和 数量众多，繁殖速度快，代谢速度旺盛，在植株的表面和内部 （内生细菌），土壤的根际和根围等大量存在，且有促进植物生 长和增产作用等显著优势，拮抗细菌无论是在自然的还是人为的 生物防治中，与其他拮抗真菌和放线菌等相比，其生物防治效果 都更加明显。

国内外研究现状