蛋白质沉淀

三 器材 四 试剂
1. .卵清蛋白 2.（NH4）2SO4晶体 3. 饱和（NH4）2SO4 4. 95%乙醇 5. 1%AgNO3 6. 1% CuSO4 7. 1%HAC 8 5%鞣酸 9 饱和苦味酸 10 NaCl晶体
漏斗，滤纸
五 操作
1. 盐析 无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)浓溶液能析出蛋白质。 盐浓度不同，析出蛋白质也不同。 如球蛋白可在半饱和 硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才 能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度 时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
蛋白质的沉淀反应
一 目的
1 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2 了解沉淀蛋白质的几种方法，以及蛋白质变 性与沉淀的关系。
二 原理
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定 的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颖拉可因 失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类。 1）可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变 化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的 溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析 作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短时间作用于蛋白质。提纯蛋 白质时，常利用此类反应。 2）不可逆沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大改变， 蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白 质沉淀与凝固，蛋白质与重金届离子或某些有机酸的反应都属 于此类。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存 在(如电荷)，并不析出。因此变性蛋白质并不一定部表现为沉 淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
取卵清蛋白溶液1毫升，加入少许NaCl，待后者溶解 后再加入95%乙醇2ml，观察现象。
3. 重金属盐沉淀蛋白质
金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。
操作
取2支试管，各加入蛋白质溶液2ml，再各滴加 1%AgNO3.和1% CuSO4至有沉淀产生。
4. 生物碱试剂
蛋白质与生物碱结构有类似之处，如含有含氮 基团，故能被生物碱试剂沉淀。 取2支试管，各加入蛋白质溶液2ml，再百度文库滴 加5%鞣酸和饱和苦味酸数滴，观察沉淀。
操作
取卵清蛋白溶液5毫升于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶 液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。将管内容 物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此 时析出的沉淀为清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸馏 水，观察沉淀的再溶解。
2. 乙醇沉淀蛋白质
乙醇为脱水剂，破坏蛋白胶体的水化层而使其沉淀。
操作