03微生物控制菌检查方法薄膜过滤法验证方案

微生物限度-薄膜过滤法

微生物限度（薄膜过滤法）
1、用到的设备和仪器：
微生物限度仪，一次性过滤杯，无菌滤膜（0.45um，Φ50mm）酒精灯，电子打火消毒喷枪，不锈钢镊子、无菌均质袋(无菌锥形瓶）、不锈钢剪刀、电子天平
2、环境要求：C+A检验前先开紫外灯和空调净化系统半小时。

3、样品外包装在准备室用75%乙醇或0.1%的新洁尔灭溶液浸泡10秒钟，然后通过传递窗传到检测室超净工作台内
4、供试液制备:在超净工作台内，用无菌剪刀打开外包装，根据样品稀释要求，称取适量供试品，加入稀释液。

（一般称取10g样品，加入90ml胰酪大豆胨液体培养基中）
5、过滤：先用消毒枪对过滤头消毒，然后用无菌镊子把无菌滤膜贴这绿色面朝上贴在过滤头上，在把一次性滤杯放在上面，先用稀释液20ml润湿滤膜，取样品1ml过滤，用适量冲洗液冲洗滤膜。

取下一次性滤杯，用无菌镊子小心取下滤膜，菌面朝上贴在放有胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基上。

6、培养：培养皿倒置于培养箱内，胰酪大豆胨琼脂培养基，33℃培养5天。

沙氏葡萄糖琼脂培养基，23℃培养7天。

注：1、操作过程中一定要有无菌意识，防止对样品和环境造成污染。

2、此操作没有具体到品种，如果要具体到品种，冲洗量要在符合药典和法规要求的同时通过方法验证来得到。

3、稀释倍数根据样品污染程度进行，次稀释倍数也要经过验证来得到。

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案

4、验证结果符合设计要求和 GMP 原则要求�可以投入使用。
5、
组分或检验条件改变时须重新验证。
以上情况�请验证委员会审批�
验证小组� 年月日
9
药品生产、质量管理文件
试验报告审批表
微生物限度检查方法�薄膜
验证名称
编号
过滤法�验证
验证内容
审质
阅量
会部
签
审核人�
验证委员会意见�
年月日
批准人�
10
菌落计数�cfu/皿�
试验组
供试品对照组菌液组
回收率
大肠埃希菌
平均值
金黄色葡萄球菌平均值
枯草芽孢杆菌平均值
白色念珠菌
平均值
黑曲霉
平均值
表中�回收率=�试验组的平均菌落数�供试品对照组的平均菌落数�÷菌液组的平均菌落数×100%。
7.结论�
7.1 经过验证�大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率分别
4
5.试验结果 5.1 产品试验组微生物生长检查情况� 批号�
菌种名称
产品试验组计数结果�cfu/皿�
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
5.2 供试品对照组微生物生长检查情况� 批号�
菌种名称
供试品对照组计数结果�cfu/皿�
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
5.3 稀释剂对照组微生物生长检查情况� 批号�
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微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案
1
药品生产、质量管理文件
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)

薄膜过滤反注培养基法检查抑菌药品微生物限度分析

薄膜过滤反注培养基法检查抑菌药品微生物限度分析摘要】目的：研究薄膜过滤反注培养基法在抑菌药品微生物限度检查过程，分析其方法实施的可行性。

方法：采用活菌培养计数，倾注法回收率按100%计，比较反注法与贴膜法的差异。

结果：金黄色葡萄球菌: 反注法回收率为95.23%, 贴膜法回收率为95.01%，两种方法差异无统计学意义（P > 0.05）；大肠杆菌回收率分别为95.66%和95.01%，两种方法差异无统计学意义（P > 0.05）；白色念珠菌回收率分别为91. 95% 和93.50%，两种方法差异无统计学意义（P > 0.05）。

结论: 对标准菌株培养计数回收率进行检验，发现反注法与贴膜法比较差异无统计学意义，但反注法能简化实验操作, 减少操作污染，值得在实践检查过程中应用。

【关键词】薄膜过滤反注培养基法贴膜法抑菌药品微生物限度检查【中图分类号】R446.5 【文献标识码】B 【文章编号】1672-5085（2014）03-0262-02微生物学检查方法包括微生物限度检查法和无菌检查法。

微生物限度检查法是检查非规定灭菌制剂及原辅料受微生物污染程度，包括细菌、霉菌等菌种的数目及控制菌检查。

无菌检查法是检查药典要求的无菌药品、原辅料等是否无菌。

薄膜过滤法,较多应用于含抑菌成分供试品微生物限度检查, 但实际工作中很容易被污染，本研究设计了一种薄膜过滤计数培养器,完成过滤冲洗后,不取出滤膜,直接在滤膜背面注入培养基培养计数，被称为薄膜过滤反注培养基法。

为了检验该方法应用效果,并与贴膜法进行了比较。

现报告如下。

1 材料1.1 试验材料薄膜过滤计数培养器（自制），薄膜过滤器100mL，两者滤膜直径和孔径分别均为50mm和0.45μm (杭州高得医疗器械有限公司)；白色念珠菌(CMCC (F)98001)、金黄色葡萄球菌( CMCC(B) 26003) 、大肠杆菌(CMCC (B) 44103 )。

03微生物控制菌检查方法薄膜过滤法验证方案

微生物控制菌检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物控制菌检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的本实验是关于的微生物控制菌检查试验的验证。

验证结果应显示的微生物控制菌试验方法，对检品中可能存在的微生物没有抑制作用，符合验证要求。

1.2原理按照已建立的药品微生物控制菌检查方法，通过已知菌数试液的对照菌的培训对照，验证其操作方法适合该药品的微生物控制菌的检测的正确性。

2.验证方法步骤2.1验证前的准备：将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应选择相应的阴性对照菌。

2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品按照微生物控制菌检测方法进行平行试验，通过观测是否长菌来判断。

2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物控制菌检查试验对检品中微生物的抑菌性。

试验结果应显示；阴性菌对照组不得检出阴性对照菌，试验组应检出试验菌。

3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于5pa。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌培养皿（直径90mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法4.1试验菌种的制备和稀释接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至相应的营养肉汤或BL增菌液10ml中,30～35℃培养18～24小时。

微生物限度检查方法薄膜过滤法验证方案

微生物限度检查方法薄膜过滤法验证方案 Document number【SA80SAB-SAA9SYT-SAATC-SA6UT-SA18】微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

无菌检查(薄膜过滤法)SOP

无菌检查SOP（薄膜过滤法）1.目的为规范无菌检查方法及无菌检查全过程的操作，最大限度防止试验操作过程造成的污染，确保结果准确。

2.范围本SOP适用于生物制品的中间产品（包括原液、纯化产物、半成品、生产中的液体、辅料等）、成品的无菌检查。

只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。

3.定义无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。

5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6.材料6.1.无菌检查用物品、物料要求：所有物品、物料进入无菌室前，均应经过高压蒸汽灭菌（121℃40分钟，放灭菌指示卡）或180℃干烤2小时或其它经过验证的方法消毒后传入无菌室；如不能用前者消毒方式消毒的物品，须经消毒液浸泡、擦拭后传入无菌室。

6.2.无菌检查环境要求：应在环境洁净度万级下的局部洁净度百级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

6.3.仪器、设备与设施集菌仪、显微镜、台式灭菌器、无菌试验室（万级）、超净工作台（万级背景下的局部百级）：每月环境检测（沉降菌、浮游菌、尘埃粒子）合格后，方可使用。

20-25℃培养房或培养箱、30-35℃培养房或培养箱。

6.4.试验用具：洁净工作服（洁净底服、十万级工作服、万级工作服、鞋套）、工作鞋、口罩及帽子；无菌医用手套或一次性乳胶医用手套：试验前及试验过程中用消毒液浸泡消毒；封闭式集菌培养器（双针头、三联及单针头、三联）：薄膜孔径不大于0.45μm，直径约为 50mm。

根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。

薄膜过滤微生物测试法

薄膜过滤微生物测试法一、培养皿的准备1．配备与待测样品数相同的无菌培养皿，另上一个作对照组（每种培养剂一个对照组），在每个培养皿上标上待测样品的记号2．用烧过的镊子将无菌吸收垫从包装袋中取出，放入每个培养皿中，每取一个吸收垫，镊子需用火烧一次3．打开培养皿盖子到刚能加上约1.8ml的培养剂在吸收垫上，强烈建议使用装有培养剂的小安瓿瓶、小瓶或小管，当处理大量样品时，可使用无菌的吸管来分配培养剂二、培养剂的种类：总菌数橙血清培养剂酵母和霉菌数橙血清培养剂大肠杆菌数MF-Endo培养剂粪便大肠杆菌数M-FC培养剂4应有足够的培养剂加入每个培养皿，使过滤膜能适当地粘附着吸收垫。

但过多的培养剂会引起菌落扩展重叠，常常得不到正确的计数结果。

有需要时，建议调整推荐的培养剂数，以便粘附和菌落生长。

三.过滤器支架的准备：1.打开预先灭菌的过滤器支架或将过滤器座、漏斗和漏斗盖在沸水中浸没一分钟作消毒。

若没有沸水，用95%酒精喷洒于漏斗和漏斗盖，然后将其点燃，在火熄灭以后，让过滤器冷却至40℃以下，如果必须使用酒精，漏斗必须用耐火材料制造。

2.用水煮过或火焰灭菌钳子，将无菌过滤器的底座部分安装于过滤烧瓶或真空管道上。

3.用火烧过的镊子放一张无菌薄膜在过滤器底座上，根据测试目的，使用特定的过滤膜：总菌数/大肠杆菌数：0.45um薄膜酵母菌和霉菌：0.80um薄膜4.用水煮过或火焰灭菌钳子，将过滤器漏斗和漏斗盖放置于底座上。

如漏斗盖带有管口，则在管口处装上过滤器，或予以封住。

待过滤器的温度低于40℃后才可加样品。

5.重复以上步骤，直到所有样品都完成过滤。

四.样品的过滤和平板培养1.无菌地将样品直接倒入消毒和冷却的过滤器漏斗中。

盖上过滤器漏斗的盖子。

若使用勺，须将勺放在95%的酒精的烧杯中。

2.施加真空，使样品通过薄膜。

无菌地打开装有无菌水的玻璃瓶，先用火烧螺纹处，然后倒入约20毫升无菌水于过滤漏斗内，进行冲洗。

施加真空，使无菌水通过薄膜。

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

薄膜过滤法微生物限度检查操作要点

薄膜过滤法微生物限度检查操作要点1. 设备、仪器1.1 无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。

1.1.1 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。

操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。

1.1.2 缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。

缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。

1.1.3 在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。

然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。

1.1.4 无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min 后将盖盖上。

在30～350C培养箱内倒置培养48h，取出检查。

3个平板生长的平均菌落数不超过1个。

1.2 仪器1.2.1 恒温培养箱（30～350C）、生化培养箱（23～280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器。

1.2.2 玻璃器皿烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。

玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。

玻璃器皿均应用牛皮纸（或双层报纸）严密包裹置蒸汽灭菌器高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干。

或于160℃干热灭菌2h，备用。

2培养基及其制备方法2.1 营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基34g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。

2.2 玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。

2.3 胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基36g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。

微生物限度-薄膜过滤法

微生物限度（薄膜过滤法）
1、用到的设备和仪器：
微生物限度仪，一次性过滤杯，无菌滤膜（0.45um，Φ50mm）酒精灯，电子打火消毒喷枪，不锈钢镊子、无菌均质袋(无菌锥形瓶）、不锈钢剪刀、电子天平
2、环境要求：C+A检验前先开紫外灯和空调净化系统半小时。

3、样品外包装在准备室用75%乙醇或0.1%的新洁尔灭溶液浸泡10秒钟，然后通过传递窗传到检测室超净工作台内
4、供试液制备:在超净工作台内，用无菌剪刀打开外包装，根据样品稀释要求，称取适量供试品，加入稀释液。

（一般称取10g样品，加入90ml胰酪大豆胨液体培养基中）
5、过滤：先用消毒枪对过滤头消毒，然后用无菌镊子把无菌滤膜贴这绿色面朝上贴在过滤头上，在把一次性滤杯放在上面，先用稀释液20ml润湿滤膜，取样品1ml过滤，用适量冲洗液冲洗滤膜。

取下一次性滤杯，用无菌镊子小心取下滤膜，菌面朝上贴在放有胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基上。

6、培养：培养皿倒置于培养箱内，胰酪大豆胨琼脂培养基，33℃培养5天。

沙氏葡萄糖琼脂培养基，23℃培养7天。

注：1、操作过程中一定要有无菌意识，防止对样品和环境造成污染。

2、此操作没有具体到品种，如果要具体到品种，冲洗量要在符合药典和法规要求的同时通过方法验证来得到。

3、稀释倍数根据样品污染程度进行，次稀释倍数也要经过验证来得到。

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

微生物控制菌检查方法验证方案

微生物控制菌检查方法验证方案一、背景介绍在制药、食品、医疗器械等行业中，微生物控制是非常重要的环节之一。

为了确保产品的安全性和合规性，对微生物的检查方法进行验证就显得尤为重要。

本文旨在提出一种可行的微生物控制菌检查方法验证方案。

二、方法验证目的本方案的目的是验证微生物控制菌检查方法的准确性、重复性、中间值和检测限度等关键指标，以确保该方法在实际应用中的可靠性。

三、验证方案1. 选择验证样品- 针对待验证的微生物控制菌检查方法，选择适当的微生物控制菌株作为验证样品。

验证样品应包含革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌等常见微生物类型。

- 确保验证样品的纯度和活性，并按照国际、行业规定的标准方法进行检测。

2. 实验设计- 确定验证实验的设计方案，包括样品分组、样品数量、重复次数等。

- 考虑到实验条件对验证结果的影响，应合理设置对照组和正试验组。

3. 数据采集与处理- 在验证实验中，记录样品的检测结果、测试方法和环境因素等重要信息。

- 利用统计学方法对验证结果进行分析，计算实验数据的平均值、标准差、变异系数等，并进行显著性分析。

4. 验证指标- 准确性：评估该微生物控制菌检查方法的准确性，即其与已知标准方法结果的一致性。

- 重复性：通过对同一样品在相同条件下进行多次测试来评估方法的重复性，计算重复测定之间的变异程度。

- 中间值：通过对同一样品在不同批次进行测试来评估方法的中间值，计算不同批次之间的变异程度。

- 检测限度：确定该方法能够可靠地检测到微生物的最低浓度水平。

五、验证结果分析根据数据采集和处理的结果，对所验证的微生物控制菌检查方法进行评估，如准确性、重复性等指标是否符合要求。

若验证结果不符合要求，则需对该方法进行优化或调整，重新进行验证。

六、验证报告根据验证结果编写验证报告，并包括实验设计、数据采集与处理、验证结果分析等内容。

报告应具备准确性、完整性和清晰度，以便他人能够理解和复现验证过程。

七、验证结果的应用验证结果应用于实际微生物控制菌检查方法的应用中，作为判定产品合格与否的依据。

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。

验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。

3.规性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。

4.验证实施：4.4.1 试验前的准备:4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天使用。

4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。

4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。

4.4.2 试验菌的制备和稀释：4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：4.4.2.1.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至10ml营养肉汤中，在30～35℃培养18～24小时；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，在23～28℃培养24～48小时；取黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天。

2010版药典细菌、霉菌下的薄膜过滤法

2010版药典细菌、霉菌下的薄膜过滤法“2010版药典细菌、霉菌下的薄膜过滤法”是一个重要而复杂的主题，需要我们从多个角度来深入探讨。

在本文中，我们将根据这个主题对薄膜过滤法进行全面评估，并讨论其在药典中的应用和意义。

一、薄膜过滤法的基本原理和技术特点薄膜过滤法是一种常见的微生物检测方法，其原理是利用微孔滤膜对样品中的微生物进行物理隔离和捕捉。

通过合理选择滤膜孔径和过滤压力，可以有效地去除样品中的细菌和霉菌，保证药品的纯度和安全性。

薄膜过滤法还具有操作简便、成本低廉和适用范围广等特点，因此在药典中得到了广泛的应用。

二、2010版药典对薄膜过滤法的要求和标准根据2010版药典的规定，对于药品中的微生物限度，需要采用严格的检测方法来保证其质量和安全性。

薄膜过滤法作为一种常用的微生物检测方法，受到了药典的重视。

药典对薄膜过滤法的要求主要包括滤膜孔径、适用范围、操作流程、结果判定等方面的标准，以确保其在药品检测中的准确性和可靠性。

三、薄膜过滤法在药典中的应用与意义薄膜过滤法作为一种高效、可靠的微生物检测方法，在药典中扮演着重要的角色。

通过对药品样品进行薄膜过滤处理，可以有效地去除其中的细菌和霉菌，保证药品的质量和安全性。

薄膜过滤法还可以应用于微生物限度试验、水质检测、食品安全等多个领域，具有广泛的应用前景和社会意义。

四、个人观点和理解作为我的文章写手，我对“2010版药典细菌、霉菌下的薄膜过滤法”这一主题有着深刻的理解和认识。

在我看来，薄膜过滤法作为一种重要的微生物检测方法，具有广泛的应用前景和社会意义。

随着科学技术的不断进步和发展，我相信薄膜过滤法将在药品检测和安全保障中发挥越来越重要的作用。

通过本文的分析和讨论，相信读者对“2010版药典细菌、霉菌下的薄膜过滤法”这一主题有了更深入和全面的了解。

薄膜过滤法作为一种重要的微生物检测方法，在药典中的应用和意义不容忽视。

希望本文能够为广大读者提供有益的信息和启发，促进薄膜过滤法在药品检测中的更广泛应用和推广。

微生物控制菌检查方法(薄膜过滤法)验证方案

微生物控制菌检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物控制菌检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的本实验是关于的微生物控制菌检查试验的验证。

验证结果应显示的微生物控制菌试验方法，对检品中可能存在的微生物没有抑制作用，符合验证要求。

1.2原理按照已建立的药品微生物控制菌检查方法，通过已知菌数试液的对照菌的培训对照，验证其操作方法适合该药品的微生物控制菌的检测的正确性。

2.验证方法步骤2.1验证前的准备：将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应选择相应的阴性对照菌。

2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品按照微生物控制菌检测方法进行平行试验，通过观测是否长菌来判断。

2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物控制菌检查试验对检品中微生物的抑菌性。

试验结果应显示；阴性菌对照组不得检出阴性对照菌，试验组应检出试验菌。

3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于5pa。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌培养皿（直径90mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法4.1试验菌种的制备和稀释接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至相应的营养肉汤或BL增菌液10ml中,30～35℃培养18～24小时。

2010版药典细菌、霉菌下的薄膜过滤法

文章题目：探秘2010版药典中的细菌、霉菌下的薄膜过滤法在2010版药典中，关于细菌和霉菌的检测方法，薄膜过滤法被广泛应用。

这一方法以其高效、准确的特点，成为药品生产中不可或缺的重要环节。

接下来，我们将深入探讨2010版药典中的细菌、霉菌下的薄膜过滤法。

1、薄膜过滤法的原理薄膜过滤法是一种利用微孔薄膜对细菌、霉菌进行快速过滤和检测的方法。

其原理是利用薄膜上的微孔，将含有微生物的溶液通过薄膜滤过，从而捕获细菌和霉菌，然后通过培养和计数的方式进行检测。

这一方法具有操作简便、灵敏度高、结果可靠等优点，因此在药品生产中得到广泛应用。

2、薄膜过滤法在细菌、霉菌检测中的应用在药品生产过程中，细菌、霉菌的检测是非常重要的环节。

2010版药典要求对药品中的细菌、霉菌进行严格检测和控制，以确保药品的质量和安全性。

而薄膜过滤法作为一种高效、准确的检测方法，被广泛应用于药品生产中，特别是生物制剂、注射剂等无菌制剂的生产过程中。

3、薄膜过滤法的优势和局限性薄膜过滤法相比传统的细菌、霉菌检测方法，具有操作简便、快速、结果可靠等优点。

薄膜过滤法还可以在较短的时间内完成对微生物的检测，提高了生产效率和工作效率。

然而，薄膜过滤法在某些情况下也存在局限性，比如在检测某些特定的细菌和霉菌时可能会受到一些因素的影响，导致检测结果不够准确。

4、个人观点和理解从个人的角度来看，薄膜过滤法作为一种现代化、高效的细菌、霉菌检测方法，在药品生产中具有非常重要的意义。

其操作简便、结果可靠，能够满足对药品质量和安全性的严格要求。

然而，在应用过程中也需要注意方法的局限性，综合运用各种检测方法，保证检测结果的准确性和可靠性。

总结细菌、霉菌下的薄膜过滤法在2010版药典中被广泛应用，成为药品生产过程中不可或缺的重要环节。

其高效、准确的特点，使其成为药品生产中细菌、霉菌检测的首选方法之一。

然而，在应用过程中也需要注意方法的局限性，综合运用各种检测方法，保证检测结果的准确性和可靠性。

微生物限度薄膜过滤法操作步骤

微生物限度薄膜过滤法操作步骤嘿，咱今儿就来唠唠这微生物限度薄膜过滤法的操作步骤哈！这可真是个精细活儿呢！
先得把那些个要检测的样品准备好呀，就像要上战场的士兵，得先把武器装备齐了不是？然后呢，选好合适的滤膜，这滤膜就好比是个筛子，专门把那些微生物给筛出来。

接下来，把样品小心地倒在过滤装置上，让它慢慢地渗过滤膜。

这过程可不能急，得慢慢来，就像绣花一样，得有耐心。

你想啊，如果太着急了，把滤膜给弄破了，那不就前功尽弃啦！
等样品都过滤完了，可别以为就大功告成了哦。

还得用合适的冲洗液把滤膜冲洗干净呢，把那些可能残留的杂质啥的都给冲掉。

这就好比是给滤膜洗个澡，让它干干净净的。

然后呢，把滤膜取下来，放到合适的培养基上培养。

这培养基就像是微生物的家，让它们能在里面舒舒服服地生长。

这时候就得等啦，等这些微生物慢慢地长大。

在等待的过程中，你可别闲着呀，可以想象一下那些微生物在培养基上一点点长大的样子，是不是还挺有意思的？
等培养好了，就可以观察结果啦！看看都有哪些微生物，数量有多少。

这就像是开奖一样，充满了期待呢！
哎呀，这微生物限度薄膜过滤法说起来简单，做起来可不容易呢！每一步都得小心翼翼的，不能有丝毫的马虎。

就像走钢丝一样，稍有不慎就可能掉下去。

但只要咱认真对待，按照步骤一步一步来，肯定能得到准确的结果呀！这可关系到很多产品的质量和安全呢，可不能小瞧了它！所以呀，大家在操作的时候一定要打起十二分的精神，把每个细节都做好，这样才能保证结果的可靠呀！你说是不是呢？。

药品微生物限度检查方法验证步骤及示教

药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。

细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。

特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。

2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。

（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。

（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。

6. 写出验证资料。

示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。

2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。

霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。

2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。

薄膜过滤法微生物限度检查操作要点

薄膜过滤法微死物极限查看支配重心之阳早格格创做1. 设备、仪器1.1 无菌室微死物极限查看应有单独的无菌室，每个无菌室应有独力的净化气氛系统.1.1.1 支配间支配间应拆置气氛除菌过滤层流拆置.环境净净度没有该矮于10000级，局部净净度为100级（或者搁置共等第净化处事台）.支配间或者净化处事台的净净气氛应脆持对于环境产死正压，没有矮于4.9Pa.支配台上备有电子天仄，乙醇灯，洋火，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等.1.1.2 慢冲间慢冲间内应有洗脚盆，无菌衣、帽、心罩、拖鞋等.慢冲间内没有得搁置培植箱战其余纯物.1.1.3 正在屡屡支配前、后，用75%乙醇溶液或者其余消毒液揩拭支配台及大概传染的死角.而后开用层流净化拆置，共时用紫中杀菌灯映照30min.1.1.4 无菌室支配台消毒揩拭后，先开用层流净化拆置30min，将备妥的营养琼脂仄板3个（经30～350C预培植48h，说明无菌降死少），以无菌办法移进支配间，置净化台左、中、左各1个，开盖，表露30min后将盖盖上.正在30～350C培植箱内倒置培植48h，与出查看.3个仄板死少的仄衡菌降数没有超出1个.1.2 仪器1.2.1 恒温培植箱（30～350C）、死化培植箱（23～280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器.1.2.2 玻璃器皿烧杯、培植皿、量筒、试管及塞、吸管.玻璃器皿用前应洗涤搞净，吸管、量筒没有挂火滴，无残留抗菌物量.玻璃器皿均应用牛皮纸（或者单层报纸）周到包裹置蒸汽灭菌器下压蒸汽121℃灭菌30min，烘搞.或者于160℃搞热灭菌2h，备用.2培植基及其造备要领2.1 营养琼脂培植基：与营养琼脂培植基34g，加1000ml蒸馏火，加热溶解，分拆，121℃下压灭菌15分钟.2.2 玫瑰黑钠琼脂培植基：与玫瑰黑钠琼脂培植基30.5g，加1000ml蒸馏火，加热溶解，分拆，121℃下压灭菌15分钟.2.3 胆盐乳糖培植基：与胆盐乳糖培植基36g，加1000ml蒸馏火，加热溶解，分拆，121℃下压灭菌15分钟.3稀释剂3.1 0.9%无菌氯化钠溶液：与氯化钠，加火溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟.3.2PH7.0无菌氯化钠-蛋黑胨慢冲液：与磷酸两氢钾，磷酸氢两钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋黑胨1.0g，加火1000ml，微温溶解，分拆，过滤，灭菌.4 供试液的造备4.1与供试品10g，加经搞热灭菌的5%吐温-80 0.2ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋黑胨慢冲液稀释至100ml，边加边振摇使成混悬液，停行5分钟使分层，倾与上浑液置离心机中500r/min离心5分钟，与上浑液动做供试品溶液.5 查看要领采与薄膜过滤法，滤膜孔径为0.45um，曲径为50mm.滤膜及滤器正在使用前采与121℃下压灭菌30钟.考查历程中，应脆持滤膜前后的完备性.将造备佳的供试液过滤，而后用100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋黑胨慢冲液（注意脆持供试品溶液覆盖所有滤膜表面）.浑洗后，用镊子与出滤膜，菌里往上揭于营养琼脂培植基或者玫瑰黑钠琼脂培植基仄板上培植.细菌于30～35℃培植48小时，霉菌于23～28℃培植72小时.。