实验三 蛋白质的颜色反应和沉淀反应
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告蛋白质的沉淀反应实验报告引言：蛋白质是生物体内一类重要的有机化合物，它们在细胞的结构和功能中起着重要的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们通过一系列实验来深入探索。
本实验旨在通过蛋白质的沉淀反应，研究其在溶液中的特性和行为。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 鸡蛋清溶液- 醋酸铵溶液- 硫酸铵溶液- 乙醇- 甲醇- 氯仿- 玻璃棒- 离心机- 试管- 显微镜2. 实验方法：- 步骤一：取适量鸡蛋清溶液放入试管中。
- 步骤二：加入醋酸铵溶液，轻轻搅拌均匀。
- 步骤三：将试管放入离心机，以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤四：将上清液倒掉，留下沉淀。
- 步骤五：加入硫酸铵溶液，用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤六：将试管放入离心机，以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤七：将上清液倒掉，留下沉淀。
- 步骤八：加入乙醇，用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤九：将试管放入离心机，以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十：将上清液倒掉，留下沉淀。
- 步骤十一：加入甲醇，用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤十二：将试管放入离心机，以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十三：将上清液倒掉，留下沉淀。
- 步骤十四：加入氯仿，用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤十五：将试管放入离心机，以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十六：将上清液倒掉，留下沉淀。
- 步骤十七：观察沉淀的形态和颜色，并使用显微镜进行进一步观察。
结果和讨论：经过实验，我们观察到了蛋白质的沉淀反应。
在添加醋酸铵溶液后，鸡蛋清中的蛋白质发生了沉淀。
通过离心的过程，我们得到了一系列沉淀物。
在加入硫酸铵溶液后，沉淀物变得更加明显，颜色也发生了变化。
随后，通过加入乙醇、甲醇和氯仿，我们可以观察到沉淀物的进一步变化。
根据观察结果，我们可以得出一些结论。
首先，蛋白质在醋酸铵的作用下发生了沉淀，说明醋酸铵可以用作蛋白质的沉淀剂。
其次，随着添加硫酸铵、乙醇、甲醇和氯仿，沉淀物的形态和颜色发生了变化，这表明不同的溶剂可以对蛋白质的沉淀产生不同的影响。
蛋白质的沉淀反应(实验)
记录沉淀物的生成速度，可以反映蛋白质的稳定 性以及溶液中其他成分对蛋白质的影响。
离心后沉淀
通过离心实验，观察离心后上清液和沉淀物的变 化，判断蛋白质的溶解度和聚集状态。
蛋白质结构变化分析
紫外可见光谱分析
通过紫外可见光谱分析，观察蛋白质在沉淀前后吸收峰的变化， 判断蛋白质结构的变化。
傅里叶变换红外光谱分析
观察沉淀物
观察沉淀物的形态、颜色和质地，判断沉淀 是否完全。
绘制图表
将实验数据整理成表格或图表，便于分析和 比较。
测量数据
使用测量工具测量沉淀物的重量、体积等数 据，记录实验结果。
分析结论
根据实验结果和数据，分析蛋白质的沉淀反 应性质和条件，得出结论。
04
结果分析
沉淀现象分析
沉淀物形态
观察沉淀物的形态，如颗粒大小、颜色、透明度 等，以判断蛋白质的纯度和聚集状态。
酶
在某些情况下，可能需要 使用酶来水解蛋白质，以 促进沉淀或改变蛋白质的 构象。
pH调节剂
用于调节溶液的pH值，以 适应不同蛋白质的稳定性 和活性。
03
实验操作过程
准备阶段
实验材料
需要准备实验所需的蛋白质溶液、 沉淀剂、离心管、离心机等实验 器材。
实验原理
了解蛋白质的沉淀反应原理，即通 过改变蛋白质溶解度或电荷性质， 使其从溶液中析出。
沉淀剂
01
02
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
03
盐类
常用的沉淀剂包括硫酸铵、 氯化钠、磷酸钠等盐类， 通过增加离子强度使蛋白 质析出。
有机溶剂
如乙醇、丙酮等有机溶剂， 通过降低水分子与蛋白质 的结合力使蛋白质沉淀。
重金属盐
如硫酸铅、硝酸银等重金 属盐，与蛋白质结合形成 不溶性的复合物而沉淀。
沉淀反应实验报告
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。
如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、 0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%cuso：1g cuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 446、10%naoh：10g naoh溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）米伦（millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。
沉淀反应实验报告-沉淀实验实验报告
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。
如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、 0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%cuso：1g cuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 446、10%naoh：10g naoh溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）米伦（millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。
蛋白质的颜色反应
实验二、蛋白质的颜色反应 二、实验内容：
（二）茚三酮反应
1．原理： 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸 及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 β—丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿酸、二酮吡 唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均 有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨 基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。 该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应， 是一种常用的氨基酸定量测定方法。 茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛， 水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三 酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应 实验二、蛋白质的颜色反应 二、实验内容 二、实验内容：
（一）双缩脲反应 1．原理： 尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分氨。双缩脲 在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩 脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生 此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。 反应式如下：
取1只试管加卵清蛋白1ml及浓硝酸34滴稍加热冷却后加5滴10naoh观察颜色变化操作茚三酮反应除脯氨酸羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外所有氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质
实验二、蛋白质的颜色反应 一、实验目的：
1．了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式； 2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理； 3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
实验二、蛋白质的颜色反应和沉淀反应 实验二、蛋白质的颜色反应 二、实验内容 二、实验内容：
硫酸铵的鉴定实验报告
硫酸铵的鉴定实验报告沉淀反应实验报告实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。
如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、millon’s试剂：40g汞溶于60ml 浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%cuso：1g cuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 446、10%naoh：10g naoh溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）米伦（millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml 于试管中，加millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。
实验3蛋白质的等电点测定和沉淀反应
实验3蛋白质的等电点测定和沉淀反应实验3 蛋白质的等电点测定和沉淀反应华南师范大学杨兴举一、目的1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
1、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
二、原理蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有特异的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋白质沉淀与凝固。
蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜鸡蛋（二）试剂1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 200ml取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40—50?的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。
蛋白质的颜色反应和沉淀反应
蛋白质作为食品添加剂
ห้องสมุดไป่ตู้
01
蛋白质可以作为食品添加剂，如乳化剂、增稠剂等，改善食品
的口感和质地。
蛋白质作为营养强化剂
02
蛋白质可以作为营养强化剂添加到食品中，提高食品的营养价
值。
蛋白质在功能性食品中的应用
03
蛋白质可以用于制备功能性食品，如低脂、低糖、高纤维等。
在农业领域的应用
1 2
蛋白质作为肥料
蛋白质可以作为有机肥料，提供植物所需的营养 元素，促进植物生长。
质谱分析法
总结词
通过测量蛋白质离子的质量和电荷比值，可 确定蛋白质的分子量和结构。
详细描述
质谱分析法利用高能电子束或激光将蛋白质 离子化，然后在电场和磁场中进行分离和检 测。通过测量离子的质量和电荷比值，可以 确定蛋白质的分子量和结构。质谱分析法具 有高灵敏度和高分辨率的特点，是蛋白质纯 度检测的重要手段之一。
详细描述
考马斯亮蓝G-250是一种灵敏的染料，可以与蛋白质结合产生颜色变化，通过比色法可以测定蛋白质的含量。该 方法具有高灵敏度和准确性，被广泛应用于生物化学实验中蛋白质的定量分析。
02
蛋白质的沉淀反应
盐析法
总结词
通过向蛋白质溶液中加入高浓度的盐 溶液，降低蛋白质溶解度，使其从溶 液中沉淀出来。
紫外吸收法
总结词
紫外吸收法是一种利用蛋白质在紫外光区有特征吸收峰 的性质来定量测定蛋白质含量的方法。
详细描述
紫外吸收法的基本原理是蛋白质分子中的共轭双键在紫 外光区有特征吸收峰，通过测定特定波长下的吸光度值 ，可以计算蛋白质的含量。该方法具有较高的灵敏度和 准确性，适用于测定各种蛋白质，包括球蛋白、纤维蛋 白等。
实验蛋白质的沉淀反应和颜色反应
实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应一、实验目的掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。
二、实验原理蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。
不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。
另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。
蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。
如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。
三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅7、移液管四、实验试剂1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏备用。
2、0.5%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。
3、Millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（水浴加温助溶）溶解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。
此试剂可长期保存。
4、尿素晶体5、1%CuSO4：1g CuSO4晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml6、10%NaOH：10g NaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.9、冰醋酸10、浓硫酸11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。
12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。
13、95%乙醇。
14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml15、氯化钠晶体16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。
18、1%醋酸溶液。
五、实验步骤蛋白质的颜色反应（一）米伦（Millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加Millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握几种常用的使蛋白质沉淀的方法。
2、理解蛋白质沉淀的原理和应用。
二、实验原理蛋白质是一种大分子化合物，在溶液中以胶体状态存在。
当溶液条件发生改变时，蛋白质的胶体稳定性被破坏，从而发生沉淀。
常见的使蛋白质沉淀的方法有以下几种：1、盐析法：在蛋白质溶液中加入大量中性盐（如硫酸铵、氯化钠等），破坏蛋白质的水化膜和电荷，使其溶解度降低而沉淀。
2、有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂（如乙醇、丙酮等），降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子间的静电引力，导致蛋白质沉淀。
3、重金属盐沉淀法：重金属离子（如汞离子、铅离子等）与蛋白质分子中的巯基等基团结合，使蛋白质变性沉淀。
4、生物碱试剂沉淀法：生物碱试剂（如苦味酸、鞣酸等）能与蛋白质分子中的碱性基团结合，生成不溶性盐而沉淀。
三、实验材料和仪器1、材料鸡蛋白溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清用蒸馏水稀释 10 倍。
10%硫酸铵溶液、饱和硫酸铵溶液、3%硝酸银溶液、01mol/L 硫酸铜溶液、5%三氯乙酸溶液、95%乙醇、1%醋酸铅溶液、10%氢氧化钠溶液、1%醋酸溶液、苦味酸饱和溶液、鞣酸饱和溶液。
2、仪器试管、试管架、滴管、玻璃棒、离心机。
四、实验步骤1、盐析法取两支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向其中一支试管中逐滴加入 10%硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况。
向另一支试管中加入 2mL 饱和硫酸铵溶液，振荡均匀。
静置一段时间后，观察沉淀现象。
2、有机溶剂沉淀法取两支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向其中一支试管中逐滴加入 95%乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况。
向另一支试管中加入 2mL 丙酮，振荡均匀。
静置一段时间后，观察沉淀现象。
3、重金属盐沉淀法取三支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向第一支试管中滴加 3%硝酸银溶液 2~3 滴，振荡均匀，观察沉淀的生成情况。
实验三 蛋白质及氨基酸的呈色反应
实验三蛋白质及氨基酸的呈色反应一、实验目的1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验内容对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等颜色及沉淀反应进行定性确定。
三、实验操作（一）双缩脲反应1、实验原理当尿素加热到180℃左右时，两个分子的尿素缩合可放出一个分子氨后形成双缩脲，双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的红色配合物，此呈色反应称为双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有多个肽键，其结构与双缩脲相似，故能呈此反应，而形成紫红色或蓝紫色的配合物。
此反应常用作蛋白质的定性或定量的测定。
2、试剂(1)尿素(2)10%NaOH溶液(3)1%CuSO4溶液(4)蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，3层纱布过滤，滤液冷藏备用。
3、操作（1）取少许结晶尿素放在干燥试管，微火加热，则尿素开始熔化，并形成双缩脲，释放的氨可用湿润的红色石蕊试纸鉴定。
待熔融的尿素开始硬化，试管内有白色固体出现，停止加热，让试管缓慢冷却。
然后加10% NaOH溶液 1 ml和1% CuSO4 2~3滴，混匀后观察颜色的变化。
（2）另取一试管，加蛋白质溶液1ml、10% NaOH溶液2ml及1% CuSO42~3滴，振荡后将出现的紫红色与双缩脲反应所产生的颜色相对比。
（二）茚三酮反应1、实验原理除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮作用生成黄色物质外，所有α-氨基酸与茚三酮发生反应生成紫红色物质，最终形成蓝紫色化合物。
1︰1500000浓度的氨基酸水溶液即能发生反应而显色。
反应的适宜pH为5~7。
此反应目前广泛地应用于氨基酸定量测定。
2、试剂蛋白质溶液（同前）；0.5% 甘氨酸；0.5%茚三酮水溶液3、操作取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液各1 ml，再各加0.5 ml 0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴加热2~3分钟，观察颜色变化。
（三）蛋白黄色反应1、实验原理蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等，这类蛋白质可被浓硝酸硝化生成黄色的硝基苯的衍生物。
生化实验实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应
⽣化实验实验三蛋⽩质颜⾊反应及沉淀反应实验三蛋⽩质颜⾊反应及沉淀反应⼀、⽬的1、掌握鉴定蛋⽩质的原理及⽅法。
2、熟悉蛋⽩质的沉淀反应。
3、进⼀步掌握蛋⽩质的有关性质。
⼆、原理蛋⽩质分⼦中的某种或某些基团与显⾊剂作⽤，可产⽣特定的颜⾊反应，不同蛋⽩质所含氨基酸种类不同，颜⾊反应亦不同。
颜⾊反应不是蛋⽩质的专⼀反应，⼀些⾮蛋⽩物质亦可产⽣相同的颜⾊反应，因此不能仅根据颜⾊反应的结果决定被测物质是否是蛋⽩质。
颜⾊反应是⼀些常⽤的蛋⽩质定量测定的依据。
多数蛋⽩质是亲⽔胶体，当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产⽣沉淀。
三、实验器材1、鸡蛋⽩2、试管3、吸管4、滴管5、⽔浴锅等四、实验试剂1、卵清蛋⽩液：将鸡蛋⽩⽤蒸馏⽔稀释20-40倍，2-3层纱布过滤，滤液冷藏备⽤。
2、0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%⼄醇并稀释⾄100ml。
3、10%氢氧化钠溶液：10g氢氧化钠溶于蒸馏⽔并稀释⾄100ml。
4、浓硝酸：⽐重1.42。
5、1%硫酸铜溶液：硫酸铜1g溶于蒸馏⽔，稀释⾄100ml。
6、饱和硫酸铵溶液：蒸馏⽔100ml加硫酸铵⾄饱和。
7、95%⼄醇。
8、结晶氯化钠。
9、1%醋酸铅：1g醋酸铅溶于蒸馏⽔并稀释⾄100ml。
10、饱和苦味酸溶液。
11、1%醋酸溶液：冰醋酸1ml⽤蒸馏⽔稀释⾄100ml。
五、操作1、颜⾊反应：A、双缩脲反应：蛋⽩质分⼦中含有肽键，与两分⼦尿素经过加热形成的双缩脲的结构相似，能与硫酸铜结合成红紫⾊的络合物。
取⼀⽀试管，加蛋⽩质溶液10滴，再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰⾊。
B、黄⾊反应：蛋⽩质分⼦中含有苯环结构的氨基酸。
遇硝酸可硝化成黄⾊物质，此物质在碱性环境中变为橘黄⾊的硝苯衍⽣物。
于⼀试管中加蛋⽩质溶液10滴及浓硝酸3-4滴，加热，冷却后再加10%NaOH溶液5滴，观察颜⾊变化。
C、茚三酮反应：蛋⽩质与茚三酮共热，则产⽣蓝紫⾊的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。
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实验三蛋白质的颜色反应和沉淀反应
一、目的：
1.熟悉蛋白质的沉淀反应、颜色反应及其机理。
二、原理：
(一)蛋白质的颜色反应原理
蛋白质分子中的某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。
颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。
颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。
(二)蛋白质的沉淀反应原理
蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如—NH3+，—COO-，—SH，—CONH2等和水有高度亲和性，当蛋白质与水相遇时，就很容易被蛋白质吸住，在蛋白质颗粒外面形成一层水膜(又称水化层)。
水膜的存在使蛋白颗粒相互隔开，颗粒之间不会碰撞而聚成大颗粒。
因此蛋白质在溶液中比较稳定而不会沉淀。
蛋白质能形成较稳定的亲水胶体的另一个原因，是因为蛋白质颗粒在非等电状态时带有相同电荷，使蛋白质颗粒之间相互排斥，保持一定距离，不致相互凝集沉淀。
蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。
当某些物理化学因素破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷，则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。
三、仪器、试剂和材料
1. 卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释20～40倍，2～3层纱布过滤，滤液冷藏备用。
2. 饱和硫酸铵溶液：称硫酸铵850g 加于1000mL 蒸馏水中，在70～80℃下搅拌促溶，室温中放置过夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸铵溶液。
3. 1%醋酸铅溶液
4. 1%硫酸铜溶液
5. 0.1%茚三酮溶液：0.1g 茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100mL。
6. 浓硝酸：比重1.42。
7.试管及试管架、吸管、量筒、布氏漏斗。
四、操作步骤
(一)蛋白质的沉淀反应
1.盐析作用：取1支试管加入3mL 蛋白质氯化钠溶液和3mL 饱和硫酸铵溶液，混匀，静置约10min，球蛋白则沉淀析出。
过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解达到饱和为止，析出的沉淀为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。
2.乙醇沉淀蛋白质：取1支试管架蛋白质溶液1mL，加晶体氯化钠少许(加速沉淀并使沉淀完全)待溶解后再加入95%乙醇2mL 混匀。
观察有无沉淀析出。
3.重金属盐沉淀蛋白质取：2支试管各加蛋白质溶液2mL，一管内滴加1%醋酸铅溶液，另一管内滴加1%硫酸铜溶液，观察沉淀生成。
(二)蛋白质的颜色反应
1.双缩脲反应
①取少许结晶尿素放在干燥试管中，微火加热，尿素溶化并形成双缩脲，释出的氨可用红色石蕊试纸试之。
至试管内有白色固体出现，停止加热，冷却。
然后加10%NaOH 溶液1mL 混匀，观察有无紫色出现。
②另取一试管，加蛋白质溶液10滴，再加10% NaOH 溶液10滴及1%CuSO4溶液4滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色。
注意事项：硫酸铜不能多加，否则将产生蓝色的Cu(OH)2。
此外在碱溶液中氨或铵盐与铜盐作用生成深蓝色的络离子Cu(NH3)42+，妨碍此颜色反应的观察。
2.蛋白质的黄色反应
在一试管内，加蛋白质溶液10滴及浓硝酸3～4滴，加热，冷却后再加10%NaOH 溶液5滴，观察颜色反应。
3.茚三酮反应
取1mL 蛋白质溶液置于试管中，加2滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现(注意：此反应必须在pH5～7进行)。
五、思考题：
1.能否利用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质的存在？为什么？
2.为什么蛋清可以作为铅或汞中毒的解毒剂？。