细胞黏附测定
细胞因子
一、细胞因子测定的临床应用原则
（一）应用多种方法测定 （二）测定标本的选择适当 不同标本；多次采集 （三）同时测定几种细胞因子
二、细胞因子测定作为特定疾病诊断的辅 助指标 三、评估机体的免疫状态，判断治疗效 果及预后
HIV—TNF有助于了解免疫状态 慢性乙肝—IFN、IL-6、IL-8，且与严重 程度相关
细胞因子与细胞黏附因子 的检测及应用
细胞因子
细胞因子(Cytokine, CK)由机体 免疫细胞和某些基质细胞合成和分 泌的具有生物活性多肽或蛋白质， 通过结合细胞表面的相应受体发挥 生物学效应。具有介导和调节免疫 应答及炎症反应的作用。
一、细胞因子分类
按产生CK的细胞分类 按CK作用的靶细胞类型分类 按CK的主要功能分类 按CK的结构和主要功能分类
(1) 一种CK可作用于多种不同类型的靶细胞, 而多种细胞因子也可作用于同一种靶细胞 (2) 同一种CK对不同靶细胞显示不同效应,如 TNF-α对L929,T24等是细胞毒作用,而对某些 纤维母细胞系则可促进分裂及增生
(3)不同细胞因子具有某些共同的生物学效应 :如IL-2,4,9均可维持和促进T细胞的增生 (4) 作用的时相性:一种CK的某些效应可同时 出现,另一些效应则在不同时相出现 (5) 生物学作用的双相性:适量具有生理调节 作用, 过量则可能损伤机体，如TNF
(四)
CK的产生、生物学作用、受体表达、 相互调节具有网络特点
CK主要生物学作用
参与非特异性免疫应答 介导和调节特异性免疫应答 诱导细胞凋亡(apoptosis) 刺激造血功能
测定方法分为：
1. 生物学测定方法 2. 免疫学测定法 3. 分子生物学测定法 三种方法之间相互联系，互为 补充，但不能完全替代。
细胞膜表面粘附分子的测定方法
细胞膜表面粘附分子的测定方法
目前，测定细胞膜表面粘附分子的方法主要包括免疫荧光染色法、流式细胞术法和质谱分析法等。
免疫荧光染色法是一种常用的测定方法。
该方法利用特异性抗体与细胞膜表面粘附分子结合，再用荧光标记的抗体或荧光染料进行检测。
该方法简单易行、灵敏度高，可以同时检测多种粘附分子，但需要特异性抗体。
流式细胞术法则将单个细胞通过膜孔，以便精确测量细胞表面粘附分子的数量和分布。
该方法可以分离不同种类的细胞，并在单个细胞水平上测量粘附分子，具有高通量、高分辨率和高灵敏度的特点。
但需要专用实验设备和技术。
质谱分析法则可以定量分析细胞表面粘附分子的组成和种类。
该方法利用质谱技术对细胞膜表面分子进行定量和分析，通常需要将细胞膜分离和提取蛋白质。
该方法具有高精度、高分辨率和高灵敏度的特点，但需要专业技术和设备。
以上是目前常用的几种方法，各有优缺点，需要根据实际需求选择适宜的方法。
未来，随着技术的不断发展，相信会有更加高效、精准的测定方法出现。
- 1 -。
细胞粘附实验报告
实验名称：细胞粘附实验实验目的：1. 了解细胞粘附的基本原理和过程。
2. 掌握细胞粘附实验的操作方法。
3. 分析细胞粘附的影响因素。
实验材料：1. 细胞：人肺上皮细胞（A549细胞）2. 培养基：DMEM培养基3. 试剂：0.25%胰蛋白酶、胎牛血清、青霉素、链霉素、透明质酸酶、细胞粘附抑制剂（如RGD肽）4. 仪器：细胞培养箱、显微镜、离心机、吸管、培养皿、移液器等实验方法：1. 细胞培养：将A549细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养，待细胞生长至80%左右时进行实验。
2. 细胞分离：使用0.25%胰蛋白酶将细胞从培养皿中分离，离心收集细胞沉淀。
3. 细胞浓度测定：将细胞沉淀重悬于DMEM培养基中，使用细胞计数仪测定细胞浓度。
4. 细胞粘附实验：a. 将细胞浓度调整为1×10^5个/mL。
b. 将培养皿分为实验组和对照组，实验组加入一定浓度的细胞粘附抑制剂，对照组不加。
c. 将细胞悬液加入培养皿中，置于细胞培养箱中培养。
d. 在不同时间点取出培养皿，观察细胞粘附情况，并拍照记录。
e. 使用显微镜观察细胞粘附情况，统计细胞粘附率。
实验结果：1. 实验组与对照组细胞粘附率比较：a. 在0小时时，实验组细胞粘附率为（±X）%，对照组细胞粘附率为（±Y）%。
b. 在1小时时，实验组细胞粘附率为（±X）%，对照组细胞粘附率为（±Y）%。
c. 在2小时时，实验组细胞粘附率为（±X）%，对照组细胞粘附率为（±Y）%。
2. 细胞粘附抑制剂对细胞粘附的影响：a. 在0小时时，加入RGD肽的实验组细胞粘附率为（±X）%，未加入RGD肽的对照组细胞粘附率为（±Y）%。
b. 在1小时时，加入RGD肽的实验组细胞粘附率为（±X）%，未加入RGD肽的对照组细胞粘附率为（±Y）%。
c. 在2小时时，加入RGD肽的实验组细胞粘附率为（±X）%，未加入RGD肽的对照组细胞粘附率为（±Y）%。
细胞因子与细胞粘附因子的测定题库6-2-10
细胞因子与细胞粘附因子的测定题库6-2-10问题：[单选,A2型题,A1A2型题]流式细胞术检测细胞内细胞因子操作叙述不正确的是（）A.分离和培养待测细胞B.染色与分析：用荧光素标记的细胞因子特异性单克隆抗体做荧光抗体染色C.封闭非特异性结合位点D.细胞固定：多为4%多聚甲醛E.不同荧光素标记两种以上细胞因子的单克隆抗体，不能同时检测同一细胞内2种以上不同细胞因子不同荧光素标记2种以上细胞因子的单克隆抗体，可以同时检测同一细胞内2种以上不同细胞因子。
问题：[单选,A2型题,A1A2型题]患者，男性，74岁。
转移性右下腹痛2天，高热1天。
查体：体温39℃，腹肌紧张呈板状，有压痛及反跳痛。
血培养阳性。
诊断：急性弥漫性腹膜炎并发败血症。
此时患者血清中选择素的变化是（）A.E选择素增高B.E和P选择素增高C.E和L选择素增高D.P和L选择素增高E.E、P和L选择素均增高败血症患者的E和L选择素增高。
血液中存在可溶性E选择素是内皮细胞激活的证据，一般与疾病的活动期无关，但和器官受损程度有关。
败血症患者的E选择素可增高20倍以上。
问题：[单选,A2型题,A1A2型题]患者，男性，8岁。
患血友病5年，多次接受Ⅶ因子和输血治疗，近2个月反复发热，口服抗生素治疗无效。
实验室检查：CD4细胞↓，CD8T细胞正常，CD4CD8↓，Anti-HIV阳性。
疑似：HIV感染。
此时患者血清中增高的可溶性黏附分子是（）A.P选择素B.L选择素C.E选择素D.ICAM-1E.可溶性E选择素HIV感染和AIDS患者血清中的L选择素明显增高。
/ 羽毛球比赛规则问题：[单选,A2型题,A1A2型题]CD8分子主要表达在哪一种细胞上（）A.Tc细胞B.B细胞C.Th细胞D.单核细胞E.巨噬细胞（Mφ）问题：[单选,A2型题,A1A2型题]下列不是测定细胞因子的生物学方法中细胞增殖的方法的是（）A.3H-TdR掺入法B.MTT比色法C.抗病毒活性法D.APT法E.cAMP法问题：[单选,A2型题,A1A2型题]下列哪项不是黏附分子结构（）A.活化区B.疏水区C.胞浆区D.胞内区E.胞外区问题：[单选,A2型题,A1A2型题]细胞因子测定的临床应用中不能用于（）A.特定疾病的辅助指标B.评估机体的免疫状态C.临床疾病的治疗D.临床疾病的预防E.特定疾病的确诊问题：[单选,A2型题,A1A2型题]下列有关IL-2生物活性的叙述中，哪一项是错误的（）A.刺激T细胞的生长B.诱导T细胞发挥细胞毒作用C.促进T细胞和NK细胞产生细胞因子D.抑制B细胞的生长及分化E.促进NK细胞的非特异性细胞杀伤作用。
红细胞粘附功能测定实验报告
红细胞粘附功能测定实验报告一、引言红细胞是人体内最常见的血细胞，其主要功能是携带氧气和二氧化碳。
红细胞粘附功能是指红细胞与其他细胞或物质之间相互粘附的能力，这对于维持正常的血液循环和免疫系统的正常功能非常重要。
本实验旨在通过测定红细胞粘附功能的实验方法，探究红细胞与其他细胞的粘附能力，并进一步了解其生理功能。
二、实验方法1. 实验材料准备- 血液样本：采集健康志愿者的静脉血样本，并使用抗凝剂处理，以避免血液凝固。
- 细胞培养基：选取适当的细胞培养基，如RPMI-1640，含有必需的营养物质和生长因子。
- 细胞系：选择适当的细胞系，如人类纤维母细胞或肺上皮细胞等。
- 红细胞粘附试剂：选择适当的红细胞粘附试剂，如红细胞凝集素等。
2. 实验步骤此处可根据实验方法的具体步骤进行描述，例如：- 第一步：将采集到的血液样本离心，分离红细胞。
- 第二步：将细胞系培养至对数生长期。
- 第三步：将培养的细胞与红细胞粘附试剂共同处理，观察红细胞与细胞的粘附情况。
- 第四步：采用显微镜观察和计数，记录红细胞与细胞的粘附数目。
- 第五步：根据实验结果进行数据统计和分析。
三、结果与讨论1. 结果呈现此处可根据实验结果的具体情况进行呈现，例如：- 实验结果显示，在红细胞粘附试剂处理后，红细胞与细胞之间出现了明显的粘附现象。
- 红细胞与细胞的粘附数目与粘附试剂的浓度呈正相关关系。
- 不同细胞系对红细胞的粘附能力存在差异，某些细胞系具有较高的红细胞粘附能力。
2. 结果讨论- 红细胞粘附功能是红细胞与其他细胞或物质相互作用的重要指标，它在维持正常血液循环和免疫系统功能中发挥关键作用。
- 红细胞粘附能力的增加可能与某些疾病的发生和发展有关，如血栓形成和炎症等。
- 通过测定红细胞与不同细胞系的粘附能力，可以进一步研究红细胞粘附功能与疾病之间的关系，为疾病的诊断和治疗提供参考依据。
四、结论通过本实验的红细胞粘附功能测定方法，我们成功地观察到了红细胞与细胞的粘附现象，并初步了解了红细胞粘附功能的特点。
细胞活力研究检测指标
细胞活力研究检测指标细胞活力研究通常涉及多种检测指标，以评估细胞的生理状态、代谢活性和功能。
以下是一些常见的检测指标：1. 细胞增殖能力：1)MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物）试验：通过测量活细胞中线粒体脱氢酶的活性来评估细胞增殖。
2)CCK-8（Cell Counting Kit-8）试验：类似于MTT，但使用水溶性四唑盐WST-8，减少了实验步骤。
3)BrdU（5-溴脱氧尿苷）掺入试验：通过检测BrdU在DNA合成期的掺入来评估细胞增殖。
2. 细胞存活率：1)细胞计数：直接使用血球计数板或自动细胞计数器计算活细胞数量。
2)台盼蓝染色：排除法，活细胞不会吸收台盼蓝，死细胞会被染成蓝色。
3. 细胞凋亡检测：1)Annexin V/PI染色：通过流式细胞仪检测细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻和细胞膜完整性来识别早期和晚期凋亡细胞。
2)TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记）试验：检测DNA断裂，是细胞凋亡的标志。
4. 细胞周期分析：流式细胞仪：使用PI或Hoechst染料对DNA进行染色，分析细胞周期分布。
5. 细胞代谢活性：1)ATP含量测定：ATP是细胞能量代谢的重要指标。
2)乳酸脱氢酶（LDH）释放：衡量细胞膜完整性和细胞损伤程度。
6. 氧化应激指标：1)ROS（活性氧物种）检测：使用荧光探针如DCFH-DA进行检测。
2)抗氧化酶活性：如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）等。
7. 蛋白质和基因表达：1)Western blot：检测特定蛋白质的表达水平。
2)qPCR（实时定量聚合酶链反应）：检测特定基因的mRNA表达水平。
8. 细胞信号通路活性：磷酸化蛋白检测：通过Western blot检测特定蛋白的磷酸化状态来评估信号通路的激活。
9. 细胞粘附和迁移能力：1)划痕试验：评估细胞迁移能力。
2)侵袭和迁移试验：使用Transwell小室评估细胞的侵袭和迁移能力。
红细胞粘附功能测定实验报告
红细胞粘附功能测定实验报告一、引言红细胞粘附功能是指红细胞在血液循环中黏附于血管内壁的能力。
红细胞粘附功能的异常与许多疾病的发生和发展密切相关，如血栓性疾病、心脑血管病变等。
因此，粘附功能的测定对于疾病的预防、诊断和治疗具有重要意义。
二、实验目的本实验旨在通过测定红细胞粘附功能，了解红细胞与血管内壁之间的相互作用，为相关疾病的研究提供实验依据。
三、实验原理红细胞粘附功能主要是通过红细胞表面的特定受体与血管内壁的黏附分子发生相互作用而实现的。
红细胞表面的受体主要是通过膜蛋白来实现的，而血管内壁的黏附分子主要包括选择素和整合素等。
实验中常用的红细胞粘附功能测定方法有流变学测定法、细胞粘附分析法和光学显微镜观察法等。
四、实验材料和方法1. 实验材料：- 血液样本：采集新鲜全血样本。
- 红细胞培养液：含有适宜浓度的离子、葡萄糖和血浆蛋白的缓冲液。
- 黏附分子抗体：选择与红细胞表面受体相对应的抗体。
2. 实验方法：- 步骤一：采集新鲜全血样本，并将其离心分离得到红细胞悬液。
- 步骤二：将红细胞悬液与黏附分子抗体共孵育一段时间，促使红细胞受体与抗体结合。
- 步骤三：通过离心分离红细胞，去除未结合的抗体。
- 步骤四：将处理后的红细胞悬液加入红细胞培养液中，使红细胞保持活性。
- 步骤五：利用流变学测定法、细胞粘附分析法或光学显微镜观察法，测定红细胞在不同条件下与血管内壁的粘附情况。
五、实验结果与分析根据实验所得数据，可以得出红细胞粘附功能的测定结果。
通过对红细胞在不同条件下与血管内壁的粘附情况的观察和分析，可以研究红细胞粘附功能的变化规律，为相关疾病的诊断和治疗提供依据。
六、实验结论通过红细胞粘附功能测定实验，我们可以了解红细胞与血管内壁之间的相互作用，探究红细胞粘附功能的变化规律。
这对于疾病的预防、诊断和治疗具有重要意义。
未来的研究可以进一步深入红细胞粘附功能的机制和调控方式，为相关疾病的治疗提供更加有效的手段。
第16章 细胞因子与细胞粘附因子的测定
敏感性偏低 不能判断细胞因子的生物学活性。
二、流式细胞分析法
基本步骤
1．分离和培养待检细胞 2．细胞固定 3．封闭非特异性结合位点 4．染色与分析
三、酶联免疫斑点试验(ELISPOT或ElisaSpot) T细胞产生CK的检测
加入淋巴细胞 CK
CK抗体包被的反应板 加入酶标的CK抗体
加入底物
四、免疫学测定方法学评价
6、趋化性因子 chemokine
• 一组具有趋化作用的细胞因子,能吸引免疫细胞到免疫 应答局部,参与免疫调节和免疫病理反应。 • 该家族成员依据其分子氨基端半胱氨酸的数目及其间隔， 可分为不同的亚家族： • α亚家族 ：Cys-X-Cys，如IL-8趋化中性粒细胞； • β亚家族： Cys-Cys，如单核细胞趋化蛋白，趋化单核 细胞； • γ 亚家族： Cys，如淋巴细胞趋化蛋白，趋化淋巴细 胞。
细胞因子的来源
• 活化的免疫细胞：淋巴细胞尤其是T细胞、单核细胞/巨 噬细胞、粒细胞、肥大细胞等。 • 基质细胞类：血管内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞、 中枢神经系统的小胶质细胞等。 • 某些肿瘤细胞。
细胞因子分布
• 多数细胞因子是以可溶性蛋白的形 式分布于组织间质和体液中，但某 些细胞因子如TNF可以跨膜分子形式 表达于产生细胞的表面。
标本： 1.血清（血浆）、关节液、胸腔液、脑脊液或 腹腔液等体液，适用于细胞因子和可溶性黏 附因子的检测 2.细胞体外培养后的培养上清液，只适用于细 胞因子的检测 影响因素： 标本的微生物污染
ELISA
特异、简便 易于推广和标准化等优点
可同时检测大量标本且试验废弃物便于处理
细胞因子测定的首选方法
与同位素掺入法相比
测定步骤类似
细胞因子与细胞粘附因子的测定练习题
细胞因子与细胞粘附因子的测定练习题
一、A1
1、细胞因子生物学检测是
A、特异性高
B、定量
C、定位
D、测活性
E、半定量
2、细胞因子测定的临床应用是
A、特定疾病的辅助诊断
B、评估机体的免疫状态，判断治疗效果及预后
C、临床疾病的治疗应用
D、临床疾病的预防应用
E、以上都是
3、检测细胞表面黏附分子的方法不包括
A、放射免疫测定法
B、荧光免疫测定法
C、ELISA
D、免疫电泳技术
E、流式细胞仪分析
4、关于免疫学测定细胞因子，哪项是正确的
A、特异性高
B、操作简便
C、不能确定其生物学活性
D、不能确定其分泌情况
E、以上都是
5、细胞因子不包括
A、单核细胞
B、淋巴细胞
C、生长因子
D、抗体
E、集落刺激因子
6、对于细胞表面黏附分子的检测，可考虑使用的方法为
A、反向间接血凝法
B、对流免疫电泳
C、放射免疫测定
D、双向琼脂扩散法
E、单向琼脂扩散法
7、关于分子生物学测定细胞因子的评价，哪项正确
A、特异性高
B、敏感性高
C、测细胞因子基因
D、操作简便
E、定量
8、细胞因子是
A、由免疫细胞合成
B、由非免疫细胞合成
C、小分子多肽
D、调节多种细胞生理功能
E、以上都是。
甲胎蛋白阴性肝细胞癌血清细胞间粘附分子_1的测定
普通外科专栏甲胎蛋白阴性肝细胞癌血清细胞间粘附分子 1的测定(541001 桂林) 桂林医学院附属医院肝胆外科 梅铭惠 徐 静(541001 桂林) 桂林医学院肝胆外科研究室 石青峰 覃理灵摘要! 目的 探讨甲胎蛋白(AF P)阴性的肝细胞癌患者血清细胞间粘附分子 1(sICAM 1)测定在肝细胞癌诊治中的价值。
方法 应用酶联免疫吸附分析法测定46例AF P阴性肝细胞癌sICAM 1水平及外科治疗前后的改变。
结果 46例中, A FP中位值8.6 g/L,sICA M 1中位值1146 g/L,其中sICAM 1>700 g/L有36例(78%),>1000 g/L有21例(46%)。
19例外科治疗前后sI CAM 1中位数分别是1258 g/L和745 g/L。
19例中6例术后肿瘤复发,确诊时AF P中位值15 g/ L,sICA M 11254 g/L。
结论 sICAM 1测定可进一步提高AF P阴性肝细胞癌的诊断率,同时可作为疗效判断和复发监测的指标。
关键词! 肝细胞癌 诊断 甲胎蛋白阴性 细胞间粘附分子 1Measurement of serum intercellular adhesion molecule 1in hepatocellular carcinoma with negative fetal protein.M ei M inghui,X u Jing,Shi Qingf eng et al.D ep ar tment of H ep atobiliary Sur gery,A f f iliated H osp ital,Guilin M edical College, Guilin541001Abstract! Objective T o investig ate the clinical value o f measur ement of serum intercellular adhesion molecule 1(sICAM 1) in pat ients w ith hepatocellular carcinoma(HCC)and negative fetal protein(AF P).Methods T he changes in sICA M 1levels before and after operation w er e detected in46HCC patients wit h negativ e AF P by using the method of enzy me linked immunosorbent assay (ELI SA).Results T he median of AFP and sICA M 1values in t he46cases of HCC was8.6 g/L and1146 g/L,respectively. T hir ty six patients(78%)had a lev el of sICA M 1ex ceeding700 g/L and21(46%)mor e than1000 g/L.T he pre and postoper ative medians of sICAM 1in19cases receiving sur gical tr eatment were1258 g/L and745 g/L respectively.Six of the19patients had a tumor recur rence postoperatively dur ing the follow up.T he medians of serum concentr at ion of A FP w as15 g/L in t he cases and that o f sICA M 1in the same pat ients was1254 g/L.C onclusion T he measurement of sI CAM 1in the HCC patients w ith negative AF P could further incr ease t he diagnostic rate of HCC.M oreover,sI CAM 1level could be used as a marker for assessment of surg ical therapy and monitoring posto perative recurrence of the disease.Key words! Hepatocellular carinoma Diagnosis N egative fetal pr otein I ntercellular adhesion molecule 1作者先前有关的研究报告指出,血清细胞间粘附分子 1(sICAM 1)测定对甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞癌有辅助诊断和监测术后复发的意义[1][2]。
老年肺癌患者红细胞天然免疫粘附功能的测定及意义
摄取 。 ８ 一脱氧葡萄糖 Ｐ １Ｆ ＥＴ显像是公认 的评价心肌存活力的
盎 标 准 。Ｄｌ ｉ ａ ｉｓ ｉｎ及 Ｂ ｎ ｗ０等 研 究 证 实 ， 于 心 肌 梗死 病 人 ｉｚ ｏｏ 对
ｉ ｈ ｍｉ ｈ ｔ￣ａ ｔ ｍｙ ｃ ｒ ｉｍ ｙ ｒ — ｊ ｔ ｎ ｏ ｈ ｌ ｕ ａ ｔｒ ｓ ｅ ａ ｕ ４ｈｅ ｅ ｏ ａ ｄｕ ｈ ｅ ｉ ｅ ｉ ｆ ｔ ａｌ ｍ ｆｅ ｎｃｏ ｉ
不协调 ・ 一些研究者 认为肌 浆碌染 ． 细胞核 同缩 ， 期收缩 带形 早
成 无 炎 性 细胞 浸 润 就 是心 肌顿 抑 的 形 态学 改 变 。说 明 ５ｈ内再 灌 注 可 以挽 救 大量 濒死 的 心肌 。
而梗死后 的非存 活心肌 ， 困无 Ｔ１ 摄取 ， 论在生理 负荷中和 无
ｓＴ ８ ｅＪ ｔｉ ｔｏ ｍａ ｎ Ｊ Ｎ ｇ ＪＭ ｅ １ ９ ３ ３Ｅ４ — ４ ｔｅ ８ｒ ｄｓｒｈｕ ｌｎｉ ｇｉｇ ］ Ｅｎ ［ ｄ， ９ ０’ ２ １ １ １ ５
２ Ｓ ｎ ｗ ｏ ｏ ＲＯ． ｌ ｉ ／ａ Ｖ ， ｏ ｏ ｏ Ａ ｌ ａ Ｄ／ ｓ ｚａ Ｃｕ ｃ ｌ ｅ １． Ｉ ｅ ｔ ｅ ｉ ｎ ｏ ￣ａ ｌ ｉ ｄ ｎ Ｈｉｔｏ ｆ ｈｅ ｍｙ￣ ａ ｄ ｕ ｉ ａ ｉｎ ｓ ｒ ｉ ｍ ａ ｐ ｔｅ ｔ ｗｉｈ ｈ ｒ ｎ ｃ ｏ ｏ ｒ ｉ ｅ ｓ ａ ｄ ｅ ｔ ｔ ｃ ｉｏ ｉ ｃ ｒ ｎａ ｙ ｄ ｓ ａ ｅ ｎ ｌｆ ｖ ｎ ｒｃ ］ ｒｄｙ ｆ ｎ ｔ ｔ ｃ ｍ ｐ ｒｓｏａ ｏ ｈａ ｌ ｍ ｃ ｅ ｔｇ ａ ｈ ｔ ｅ ｔ ｉｕ ａ ｓ ｕ ｅ ｉ ｔ ｏ ｏ ａ ｉ ｉ ｆｔ ｌｉ ｕ ｓ ｌｕ ｒ ｐ ｙ ｗｉｈ Ｊ
红细胞粘附功能测定实验报告
红细胞粘附功能测定实验报告实验报告：红细胞粘附功能测定一、实验目的1.学习红细胞粘附功能测定的方法与原理。
2.掌握红细胞粘附功能测定实验的操作技巧。
3.分析不同情况下红细胞粘附功能的变化。
二、实验原理红细胞粘附功能指的是红细胞与其他细胞或物质的粘附能力。
在正常情况下，红细胞表面的负电荷使其能与其他细胞或物质保持一定距离。
而当红细胞发生损伤或遭遇外界刺激时，其表面负电荷减少，导致红细胞与其他细胞或物质之间发生粘附。
通过测定红细胞的血尘管功能，可以判断红细胞的粘附能力是否受到影响。
三、实验材料和仪器1.实验动物：新鲜采集的小鼠全血。
2.甲醛（4%）。
3.85%盐酸。
4. Eppendorf离心管。
5.显微镜幻灯片。
四、实验操作步骤1.将新鲜采集的小鼠全血分别置于4%甲醛和85%盐酸中处理，使红细胞表面发生损伤。
2.将处理后的红细胞分别取出，放入离心管中，并离心10分钟。
3.将离心后得到的沉淀红细胞和上清液分开，分别滴在两块显微镜幻灯片上。
4.将两块显微镜幻灯片放入显微镜下，通过目测或使用计算机图像分析软件定量分析红细胞的粘附数量和程度。
5.记录实验结果。
五、实验结果与分析通过实验观察和计算得到的数据，可以获得不同处理方法下红细胞的粘附数量和程度。
结果显示，经过4%甲醛处理后，红细胞粘附数量和程度明显增加；而经过85%盐酸处理后，红细胞粘附数量和程度则有所减少。
这说明甲醛处理能有效地损伤红细胞表面，减少其负电荷，从而提高红细胞的粘附能力；而盐酸处理则可能导致红细胞膜的损伤，减少红细胞的粘附能力。
六、实验结论通过本实验的红细胞粘附功能测定，我们可以得出以下结论：1.红细胞的粘附功能与其表面的负电荷有关，当红细胞表面负电荷减少时，其粘附能力会增加。
2.经过甲醛处理后，红细胞的粘附数量和程度明显增加；而经过盐酸处理后，红细胞的粘附数量和程度有所减少。
3.红细胞粘附功能的变化可能与红细胞膜的损伤程度有关。
七、实验改进与展望1.本实验只对红细胞的粘附数量和程度进行了观察和分析，未对其粘附机制进行深入研究，可以在后续实验中加入更多的变量进行探究。
16 第16章 细胞因子与细胞粘附因子的测定
方法的特异性受依赖细胞 株影响；放射性污染
常见细胞因子3H-TdR掺入检测法所需细胞及参考试验条件
细胞株
D10G4.1 L929 CTLL-2
FDC-P1,32DCL-27
CT.4S CH12 B13 T88-M BCL1
Clone-K,I×N/2bx
TS1 T10
UT-7
CCL-64* DA3.15, IF M14/NES60.4
二、流式细胞分析法
流式细胞分析法，是基于荧光抗体染色技术并借助流式细胞仪敏感的分 辨力所建立的方法。该法主要用于细胞内细胞因子和细胞表面粘附分子的 检测，通过特异性的荧光抗体染色，能简单、快速地进行单个细胞水平的 细胞因子或粘附因子的检测，精确判断不同细胞亚群细胞因子和膜分子的 表达情况。
基本步骤
是介导细胞间及细胞与细胞外基质间粘附作用的 分子，其化学本质为糖蛋白，可以细胞膜表面表达 和可溶性两种形式存在。
第一节 生物学测定方法
生物学测定法分类
1.基于DNA检测的分子生物学测定法：
➢ DNA扩增法 ➢ RNA印迹法 ➢ 原位杂交法 ➢ 核酸酶保护分析
2.生物活性测定法
生物活性测定法原理
三、评估机体的免疫状态、判断治疗效果及预后
※机体免疫应答的强弱可通过细胞因子或粘附分子的表达水平来反 映，其过高或过低表达均系免疫调节异常的结果
根据抗体性质和特异性不同，夹心法ELISA可分为： 1. PcAb与McAb夹心法 2. McAb与PcAb夹心法 3. 双McAb夹心法 4. 细胞、McAb夹心法
ELISA
特异、简便 易于推广和标准化等优点 可同时检测大量标本且试验废弃物便于处理 细胞因子测定的首选方法
敏感性偏低 不能判断细胞因子的生物学活性。
小鼠试剂盒,小鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1CD54)酶联免疫检测ELISA试剂盒使用说明书
小鼠试剂盒,小鼠细胞间粘附分子1（ICAM-1/CD54）酶联免疫检测ELISA试剂盒使用说明书国内权威的科研试剂供应商，乔羽生物专业经营进口分装和原装、国产的Elisa试剂盒，品质保证，技术严格，无效果退款退货。
Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆ICAM-1/CD54试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ICAM-1/CD54浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将ICAM-1/CD54和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中ICAM-1/CD54的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制96孔配置48孔配置配制试剂盒成份（2-8℃保存）96/48小鼠份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗ICAM-1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型1/CD54抗体亲和链酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
细胞粘附的检测方法
包被： 1、 96 孔板每孔加入 100ul 包被液。 2、 将培养板置 2-8°C 过夜。 3、 移除包被液，用洗涤液洗涤 2-3 次。
细胞接种： 1、 待测定细胞处理好后，用胰酶消化，PBS 洗涤，然后用相应培养基重悬，制成细胞
悬液。 2、 按 5×104 细胞/孔接种 96 孔板，建议设 3-5 个复孔。同时设立对照组，即孵育后不
【注】：
不同细胞需要孵育的时间差异较大，需要摸索最佳孵育时间，一般孵育 30 分钟后拿出培养板
检测对照细胞孔的 450nm 的 OD 值，达到 0.8-1.0 即可。
3、 测定样品孔 OD 值。测定 450 nm 各孔的吸光值，如无 450nm 滤光片，可以使用 450-490nm 的滤光片。
4、 细胞粘附率计算。 将各测试孔的 OD 值减去空白孔（未加细胞孔）OD 值。各重复孔的 OD 值取平均数。 细胞粘附率% =（（待测细胞 OD - 空白 OD）/（对照细胞 OD - 空白 OD））×100
体损失导致试剂量不够用。 ● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬
细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。 ● 染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，
因此需要较长的培养时间。培养时间一般为 1- 4 小时，但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼观察 染色程度 (根据细胞种类而定，需要摸索一下条件)。当使用标准 96 孔板时，贴壁细胞的最小接 种量至少为 1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不 低于 2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板实验，请先计算每孔相应的接 种量，并按照每孔培养基总体积的 10%加入染色液 B。 ● 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加染色液 B 试剂时，建议斜
脑卒中患者血浆细胞粘附分子及其相关因素测定的临床意义
脑卒中患者血浆细胞粘附分子及其相关因素测定的临床意义吴岩;田凤石;王金良【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2002(024)006【摘要】目的探讨缺血性脑卒中患者外周血粘附分子及相关因素的变化及临床意义.方法分别对脑卒中患者(脑血栓30例、脑出血21例)及健康者30例外周血的可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管粘附分子-1(sVCAM-1)、血小板第4因子(PF4)和D-二聚体(D-D)进行检测.结果脑血栓组发病24h及发病1周时血的sICAM-1、sVCAM-1和PF4均明显高于对照组(P＜0.01);脑血栓组发病24h 以上各指标高于脑出血组(P＜0.01);且发病24h及1周血sICAM-1、sVCM-1和PF4均有相关性(P＜0.01).结论缺血性脑卒中患者从发病初期到发病1周sICAM-1、sVCAM-1表达增强,血小板活性增强,为缺血性脑卒中发病早期使用抗粘附分子抗体及药物治疗提供临床试验依据.【总页数】2页(P455-456)【作者】吴岩;田凤石;王金良【作者单位】300050,天津市公安医院;300050,天津市公安医院;300050,天津市公安医院【正文语种】中文【中图分类】R74【相关文献】1.缺血性脑卒中患者血浆脂蛋白相关磷脂酶 A2测定的临床意义 [J], 高宏娥;李荫桂;黄海云;梁伟2.不同类型脑卒中患者血浆溶血磷脂酸测定的临床意义 [J], 樊艳辉;李凡3.脑卒中患者血浆总同型半胱氨酸的测定及其临床意义 [J], 刘爱民;徐坚4.急性脑卒中患者血浆脑钠素水平测定及临床意义 [J], 杨红彦;刘学源;陈玉娟;边伟红5.急性脑卒中患者血浆因子Ⅶ的测定及其临床意义 [J], 朱发明;文志斌;李国良;杨期东;李俊成;贺石林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。