不规则抗体筛选
ABO血型鉴定不规则抗体筛选
为什么这次试验没有安排玻片法 的反定型？
因为存在于病人或献血者血清中的抗 Ａ及抗Ｂ，个体差异很大，如果效价较 弱，在玻片上不足以凝集大量抗原阳性 的红细胞，造成假阴牲的结果所以采用 玻片法作反定型的结果常不可靠。而用 试管离心法作反定型，则促进抗原抗体 反应，形成肉眼可见的凝块，使结果更 为可靠
谢谢
ＡＢＯ正反定型结果不一致的常 见原因有哪些？
（１）人为因素：①试剂不标准、失效或污染； ③操作中加错样本或试剂、离心速度不足或过 度、细胞与血清比例不当、结果判断错误等。 （２）客观因素：①因某些疾病导致抗原减弱 如：白血病，MDS（骨髓增生异常综合征）患 者血型抗原减弱导致误定血型。②受检者抗体 效价低（如婴幼儿、老年人、大量输液的患者， 血浆蛋白低下等）③某些药物干扰如输注右旋 糖酐后会干扰血型检定。
四 实验步骤.swf
1. 玻片法
（1） 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端 用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2） 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清 上，注意勿使滴管与血清相接触。 （3） 竹签两头分别混合，搅匀。用两根 分别用来混合A型和B型标准
二 实验原理
血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在 ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种 抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型 鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清 （含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗 体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者 红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系 统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、 B、AB、O四型。 见下表
A标准血清 B标准血清 2滴 受试者的红细胞悬液 1滴 1滴 混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 。 取出观察结果。完全凝集的管底部有红细胞的凝块， 管底细胞边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散；完全不 凝的试管，血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐，用手 轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成为 均匀的悬液;轻微凝集的，必须将液体转到载玻片上镜 检后判定凝集程度。
BIOVUE不规则抗体筛选操作规程
BioVue不规则抗体筛查操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：不规则抗体筛查2．检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
具有已知抗原的人红细胞将与血浆中相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue －poly Cassettes3．包装规格：400卡/箱试剂卡(707300);100卡/箱试剂卡(707350)4．试剂成分：抗人球蛋白(lgG,C3b/C3d)检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第1～6柱：抗人球蛋白、抗-lgG、-C3d;多特异性抗－lgG(兔)抗－C3b(鼠单克隆)(克隆F7G3) 抗－C3d(鼠单克隆)(克隆C4C7) FD＆C1＃蓝色染料FD＆C5＃黄色染料5．试剂的储存与效期：储存方法：2～25℃环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。
六、试剂准备：抗人球蛋白(IgG,C3b/C3d)检测卡为即用型产品。
每一微柱中含有仅适用于一个测试的试剂。
不规则抗体筛查流程步骤
不规则抗体筛查流程步骤下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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不规则抗体筛选操作规程
不规则抗体筛选操作规程一．试剂和仪器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液3.离心机和孵育器二．标本收集与处理1．血清或血浆都可以使用。
2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。
三．操作步骤1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。
2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。
3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。
注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。
4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。
5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
8. 从微柱正反两面判读并记录结果。
四．结果判读阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。
阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。
如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。
4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。
3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。
2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量细胞。
1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量红细胞。
阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。
五.注意事项1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。
输血前检查中不规则抗体筛选
筛选红细胞
试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生 理盐水或 Liss液洗涤后则应该在２４小时 内使用，否则会因污染、抗原（Lewis系 统抗原）丢失导致试验错误。
抗人球蛋白试剂
抗人球蛋白分类：单特异性的抗-IgG，抗C3d，多特异 性的抗IgG+C3d。 抗-IgG、抗IgG+C3d的多特异性抗球蛋白试剂都可用于 抗体检测。 抗IgG+C3d可增加一些补体依赖稀有抗体的检出，如 Kidd血型系统的一些抗体; 与单纯的抗IgG相比，抗 IgG+C3d 与这些需要补体参与反应的抗体可产生更强的 反应。 多特异性抗球蛋白试剂的缺点是容易产生假阳性反应。 使用抗IgG可以避免补体引起的非特异反应，但降低了 补体依赖抗体的检测灵敏度。
微柱凝胶法抗体筛选程序（3）
置抗IgG凝胶卡于37 ±1 ℃孵育箱中孵育15分钟 。 取出凝胶卡，用凝胶卡专用离心机离心： 将卡放入离心机转子上的卡槽中，注意要保持转 子的平衡。 扣上离心机盖板。启动运行按钮。 检查倒计时时间及离心转速符合试验要求。 离心机运转停止且盖板自动打开后取出凝胶卡。
微柱凝胶法抗体筛选程序（4）
凝胶卡试验的缺点
要精确调节红细胞浓度至0.8-1％，这较为麻烦。 将试剂瓶中的细胞加入试管要比加入如此小的凝 胶孔中要容易的多。 缗钱状凝集与不完全的小血块样本也可造成假阳 性。 可以检出大量临床无意义的抗体。
自身对照试验必要性
自身对照：即使用病人自己的血清和自 己红细胞进行抗体检测。 有助于确定抗体筛选阳性结果是同种抗 体还是自身抗体、或是缗钱引起。
抗体筛选技术（酶试验）
原理：蛋白水解酶可破坏红细胞表面的带负电荷的唾液酸 基团，使红细胞表面负电荷减少，降低了红细胞之间的排 斥力，缩短了相邻红细胞之间的距离，使IgG抗体凝集红 细胞。 程序：2滴血清、1滴2-4%红细胞，加入2滴酶，37℃孵育 15分钟，离心看结果。
不规则抗体筛选
不规则抗体筛选一、试验原理：利用不规则抗体筛选红细胞试剂对血清进行血型不规则抗体检测。
在任何介质中，只要任何单组或多组筛选红细胞产生凝集或溶血反应，则试验为阳性，表明血清中存在与筛选细胞中抗原相对应的抗体。
若抗筛试验为阳性，建议用谱细胞来检测抗体特异性。
一、注意事项：1. 建议在使用血型卡前重新离心后再应用。
2. 若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡时，不可使用。
3. 撕开凝胶卡的封口膜时，不能用力过猛，以免造成凝胶微孔间的交叉污染。
4. 红细胞悬液的浓度为0.5~0.8%，浓度过高或过低会影响检测结果。
5. 血浆标本必须充分离心去除纤维蛋白，否则会在微柱凝胶中阻止红细胞沉淀，呈现假阳性反应。
6. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，一定要认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。
7. 某些药物、疾病可导致正定型结果弱阳性反应或正反定型不相符，应进一步检查以明确原因。
8. 溶血性疾病、巨球蛋白血症、输注大分子血浆扩容剂如右旋糖酐等可能会影响实验结果。
9. 人源血液样本存在潜在的传染性，凝胶卡使用后按医疗生物垃圾废弃物处理。
二、设备及材料试剂：1、LB-3000医用低速离心机2、LB-C02-1免疫微柱孵育器3、加样枪：10μl, 25μl, 50μl 和 1000μl4、广谱抗人球蛋白卡（抗-IgG+C3d）5、不规则抗体筛选红细胞试剂三、操作流程：1、取广谱抗人球蛋白卡（抗-IgG+C3d）一张，按规定检查符合要求后，进行标记（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，受检者姓名或编码）。
2、红细胞悬液配制：不规则抗体筛选红细胞悬液：取不规则抗体筛选红细胞试剂中的I号、II号、III号红细胞，稀释4倍（1份红细胞和3份生理盐水）。
3、加样：①第1,2,3及第6孔加入受检者红细胞悬液50μl。
②第4孔加入A1型反定型试剂红细胞悬液50μl③第5孔加入B型反定型试剂红细胞悬液50μl。
实验四不规则抗体筛选与鉴定、效价测定
2.鉴定 2.鉴定
标管： ⑴标管：11支1-10、自c 加样： ⑵加样：Ps2滴+谱细胞1滴 离心、观察结果： ⑶离心、观察结果： ①直接观察 ②4℃10min观察 ③恢复室温观察，有格局为IgM ④37℃观察有无凝集 ⑤凝聚胺法或抗人球法（上谱细胞），观 察格局可判断有无IgG抗体 测效价： ⑷测效价：若有抗体，测效价
操 作
1.筛选 1.筛选
(聚凝胺法 聚凝胺法) 聚凝胺法 (抗人球法 抗人球法) 抗人球法
⑴标管8支:S1、S2、S3、S1’、S2’、S3’、K、自c 标管8 ⑵加样：受检血清2滴+上述细胞1滴检测 加样 ⑶观察结果:阳性进行不规则抗体鉴定 观察结果: ⑷测抗体效价（室温、4℃10min、恢复室温 测抗体效价 10min、37℃3min ）
注意事项 1.更换滴管， 1.更换滴管，防止干扰 更换滴管 2.防止前带现象， 2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始 防止前带现象 3.试剂细胞 3.试剂细胞 4.稀释液体积越小， 4.稀释液体积越小，产生误差越大 稀释液体积越小
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
思考题
1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水 聚凝胺、抗人球介质中进行。 聚凝胺、抗人球介质中进行。 2.抗体效价检测的临床应用 2.抗体效价检测的临床应用
目的 掌握抗体效价的测定方法 原理 Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉眼可 见“±”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。 器材 试剂 小试管、记号笔、滴管、离心机 悬浮红细胞、血清、生理盐水
实验步骤 1.标记管号 标记管号：1、2、4、8、16、32…… 标记管号 2.从2号开始各管分别加生理盐水50ul 从 号开始各管分别加生理盐水50ul 3.加血清 加血清：1、2管各加血清 加血清 4.倍比稀释 倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出50ul移入 倍比稀释 第3管，混匀；再从第3管吸出50ul移入第4 管，以此类推，至最后一管，吸出50ul弃去。 5.加悬红 加悬红：每管各加50ul ，混匀。 加悬红 6.3000r／min离心 离心15秒，直接观察结果 观察结果、 离心 观察结果 4℃10min、室温10min、37℃3min观察结果。
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。
当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。
5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。
5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。
5.4.致敏红细胞（质控细胞）。
5.5.0.9%生理盐水。
5.6.Coombs微柱凝胶卡。
6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。
7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。
如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。
不规则抗体筛选在临床输血中的应用效果
不规则抗体筛选在临床输血中的应用效果
不规则抗体是指在特定体系中出现的特异性抗体，因此与临床输血相关的不规则抗体通常是指与红细胞表面抗原相关的抗体。
不规则抗体筛选是指通过试管反应方法检测患者血清中的不规则抗体种类与滴定价，以确定临床输血可能出现的危险性，从而进行安全有效的输血治疗。
不规则抗体筛选的重要性在于其促进了安全有效的输血，特别是在有意外意义的输血反应发生前，防止了与受体不匹配的输血。
不规则抗体筛选可帮助鉴定输血者和受体之间的兼容性，包括ABO血型、Rh因子和其他不规则抗体。
在不规则抗体筛选的过程中，人类白细胞抗原（HLA）的检测也变得越来越重要。
HLA 分子在免疫系统中起着重要的作用，因此HLA抗体的产生会增加半衰期，从而增加输血反应发生的风险。
不规则抗体筛选同时也促进了合理利用临床资源。
由于不规则抗体筛选可以在给予输血前即检测到患者体内存在的抗体种类和滴定价，因此可以针对特异性问题有效开展输血治疗。
这有助于优化患者的治疗方案，提高输血的安全性和有效性。
总的来说，不规则抗体筛选在临床输血治疗中具有显著的应用效果。
该方法可以检测不规则抗体的种类和滴定价，并可以鉴定输血者和受体之间的兼容性，有效防止输血反应与不良事件发生并优化治疗。
此外，对HLA的分子检测让不规则抗体筛选更加完善，从而提高了输血治疗的精准度和安全性。
不规则抗体筛选操作规程
不规则抗体筛选操作规程一．试剂和仪器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液3.离心机和孵育器二．标本收集与处理1．血清或血浆都可以使用。
2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。
三．操作步骤1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。
2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。
3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。
注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。
4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。
5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
8. 从微柱正反两面判读并记录结果。
四．结果判读阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。
阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。
如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。
4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。
3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。
2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量细胞。
1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量红细胞。
阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。
五.注意事项1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。
实验三 不规则抗体
【标本、试剂与器材】
• 1. 标本 被检者不抗凝全血； • 2. 试剂 符合国家标准的1-10号鉴定 谱细胞、凝胶微柱卡； • 3. 器材 台式离心机、37℃水浴箱、血 液细胞洗涤离心机。
谱细胞（Panel Cell）
• 由8～12个人份的已知血型 表现型的O型RBC配套组成 • 具有各种不同的抗原成分， 分布各具特点，与抗体反应 出现不同的格局 • 能检出常见抗体和稀有抗体 • 每种抗原在谱细胞上保持一 定为1 个以上
• 4. 凝胶微柱出现凝集，而盐水介质无凝集，则提示 不规则抗体为IgG性质。
【操作步骤】
• 1. 向凝胶卡内依次加0.8-1% 1～10 号鉴定谱细胞50ul, • 2. 每孔加被检者血清25ul, • 3. 37℃温15min, • 4. 专用离心机离心10min,观察结果．
【结果判断】
【方法评价与注意事项】
• 1. 被检者自身血清加自身红细胞管应无凝集；若出 现凝集则提示存在自身免疫性抗体； • 2. ±～4+凝集为阳性结果，表示待检血清中有不规 则抗体，结合谱红细胞反应格局，确定抗体特异性； • 3. 无凝集，表示被检者血清中无不规则抗体。
【操作步骤】
待捡血清 2～5% 1号筛选谱细胞 2～5% 2号筛选谱细胞 2～5% 3号筛选谱细胞
表 一 1 1滴 1滴 2 1滴 1滴 3 1滴
1滴
1. 盐水法 按表一加样后,1000×g离心15s，轻轻摇动试管，肉眼观 察有无凝集结果，记录结果.
2. 凝聚胺 按表一加样后,依次加入低离子介质溶液、凝聚胺溶液, 1000×g离心15s，弃上清夜,摇动试管,看是否形成凝集(如没有凝集 形成需重做),加悬浮液,观察凝集是否散开,记录结果
• 3. 无凝集，表示被检者血清中不存在不规则抗体。
《不规则抗体筛选》课件
需要不断改进和创新不规 则抗体筛选技术，以适应 不同的研究需求和应用场 景。
希望本课件能够为不规则 抗体筛选领域的研究者提 供参考和思路，推动该领 域的进一步发展。
参考文献
- 引用的文献列表
当前的研究现状
不规则抗体筛选技术在科学研究 和工业应用中取得了显著的进展 和创新。
未来的发展方向
加强对不规则抗体筛选技术的研 究，进一步完善技术方法，推动 其在更多领域的应用。
结论
1 不规则抗体筛选的重 2 筛选技术的进一步完 3 期望对不规则抗体筛
要性
善和创新的必要性
选研究的贡献
不规则抗体筛选在生物医 学领域和生物技术领域具 有重要的理论意义和实际 应用价值。
《不规则抗体筛选》PPT 课件
本课件介绍了不规则抗体筛选的重要性和筛选技术的发展。通过丰富的内容 和精美的布局，旨在提供易于理解和引人入胜的知识。
不规则抗体筛选介绍
不规则抗体是指形态、结构、性质上与普通抗体不完全一致的抗体，有着独特的特征和优势。了解不规则抗体 及筛选意义。
不规则抗体筛选的基本原理
不规则抗体筛选的基本原理是通过特定的方法，从混合溶液或反应体系中筛 选出目标抗体，以获得纯化和高亲和力的抗体。
直接筛选法
1 亲和层析法
利用不规则抗体与目标分子的特异性相互作用进行层析分离。
2 免疫法
通过不规则抗体与目标分子的特异性反应来检测和筛选抗体。
间接筛选法
吸附剂法
通过将目标抗原吸附在固相载体上，间接筛选出与抗原特异结合的不规则抗体。
非吸附剂法
利用可溶性载体或晶体结合剂介导的间接筛选方法，实现不规则抗体的高效筛选。
应用举例
1
不规则抗体筛查操作方法
不规则抗体筛查操作方法抗体筛查是一种常用的实验技术，用于检测人体中是否存在某种特定的抗体。
不规则抗体指的是那些不符合正常免疫反应模式的抗体，其产生可能与某些疾病或异常情况相关。
本文将介绍一种不规则抗体筛查的操作方法，包括前处理、抗原标记、试剂制备、试管操作等环节。
1. 前处理：首先，需要准备样本，通常是血液或血浆样本。
将样本离心分离血细胞和血浆，取出血浆备用。
如果需要检测特定器官或组织的抗原，还需进行相应的前处理，如组织细胞抗原的制备。
2. 抗原标记：将待检测的抗原标记。
标记可采用放射性同位素、酶标记、荧光标记、金标记等方法。
标记时需要注意选择合适的标记物，以确保标记效果稳定和信号强度足够。
3. 试剂制备：制备抗体和其他试剂。
抗体可通过动物免疫、杂交瘤细胞技术等方法获得，然后纯化和浓缩。
其他试剂包括缓冲液、辅助试剂等。
制备试剂时需要严格控制操作条件，避免交叉污染和分装误差。
4. 试管操作：a. 将样本和标记的抗原加入试管中，混匀，使抗原与抗体充分结合。
b. 对于各类试管进行不同的操作，如剥夺试验、沉淀试验、凝集试验、间接荧光试验等。
具体操作时需要根据试管类型选择合适的剂量和条件。
c. 通过观察试管内的反应情况，判断是否存在不规则抗体。
不规则抗体的存在可通过沉淀、荧光、凝集等形式观察到，如试管内有沉淀物形成、荧光强度异常高或低、凝集抗体间距不均匀等。
5. 结果分析：根据试管内的反应结果，可判断是否存在不规则抗体。
如果需要进一步确认，还可进行其他检测方法，如免疫组织化学、免疫电镜等。
同时，还需要将结果与临床资料结合，分析不规则抗体是否与某种疾病或异常情况相关。
总结：不规则抗体筛查操作方法主要包括前处理、抗原标记、试剂制备和试管操作等环节。
通过对样本和标记抗原进行混合、加热、冷却等处理，观察试管内的反应情况，可以判断是否存在不规则抗体。
这项技术在疾病诊断和研究中具有重要意义，能够帮助医生确定病情和制定合适的治疗方案。
不规则抗体筛选试验标准操作规程(sop)
不规则抗体筛选试验标准操作规程一、目的为规范微柱凝胶抗球蛋白检测卡在红细胞不规则抗体筛选试验中的应用，保证实验结果的准确性和有效性。
二、适用范围输血科进行的微柱凝胶卡式不规则抗体试验。
三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。
四、步骤和方法1、取微柱凝胶抗球蛋白检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
2、在标记为I、II、III的各反应腔中分别加入对应的I、II、III号筛选红细胞稀释液（1滴细胞+3滴lis液）50微升，再在标记为I，II，III的各反应腔中分别加入对应的受检者血清（血浆）20微升，加入后轻轻震荡3次使其充分混合。
3、将检测卡在微柱凝胶专用孵育器中37℃孵育15min后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后取出判断结果。
5、结果判读：I、II、III型红细胞任何一种出现阳性反应，表明该血清（血浆）不规则抗体筛选阳性。
五、质量控制微柱凝胶试剂卡，试剂筛选红细胞在有效期内使用。
六、注意事项1、检测卡若在冰箱储存，使用前须放置实验室5—10min平衡至室温。
2、撕开微柱凝胶卡锡纸膜时，注意避免各微柱间特异性抗体试剂的交叉污染。
3、细菌污染，纤维蛋白析出及抗凝不佳的血，可产生假阳性结果，建议使用血清。
4、严格遵循离心力，离心时间要求，离心速度过快，离心时间过长均易产生假阴性结果。
5、由于试剂生产厂家，批号不同等因素，红细胞浓度，吸取样品的量及离心条件等环节要求有所差异，以试剂说明书为准。
不规则抗体筛选在临床输血中的应用效果
不规则抗体筛选在临床输血中的应用效果随着医学技术的不断发展，临床输血已经成为救治危重病患和手术患者的常见治疗手段之一。
但是在输血过程中可能会出现不规则抗体导致输血反应，给患者带来不良影响。
对不规则抗体的筛选和识别，对于确保输血的安全性和有效性至关重要。
本文将着重探讨不规则抗体筛选在临床输血中的应用效果。
我们先来了解一下什么是不规则抗体。
不规则抗体是指存在于受血者血液中的、通过特异抗原诱导产生的抗体，它可以识别某些特定的抗原。
当这些抗体与相应的抗原结合时，会引起输血反应，严重时会危及受血者的生命安全。
及早发现并排除这些不规则抗体对于临床输血的安全性非常重要。
不规则抗体筛选是通过实验室检验的方法来鉴定受血者血浆中的不规则抗体类型和性质。
传统的不规则抗体筛选方法主要是采用直接抗人球蛋白试验（DAT）、抗人球蛋白间接试验（IAT）等技术，通过检测红细胞表面的抗原种类和数量来确定血液类型和不规则抗体情况。
这些方法的操作步骤繁琐，需要较长的操作时间，且容易出现误差，限制了其在临床上的应用效果。
为了克服这些问题，近年来不规则抗体筛选技术得到了较大的改进和发展。
目前，流式细胞术和分子生物学技术已经被广泛应用于不规则抗体筛选中。
流式细胞术通过检测受血者血浆中不规则抗体与红细胞结合的情况，能够准确快速地识别出不规则抗体的类型和特异性。
分子生物学技术主要是利用多聚酶链反应（PCR）和序列分析等方法，对受血者的基因组进行分析，以确定其携带的不规则抗体基因类型和表达情况。
这些新技术的应用，不仅大大提高了不规则抗体筛选的准确性和灵敏度，而且能够大幅缩短筛检时间，从而更好地满足了临床输血的紧急需求。
与传统的不规则抗体筛选方法相比，新技术在临床输血中的应用效果明显更优。
新技术的应用能够帮助临床医生更快速、更准确地确定受血者的血液类型和不规则抗体情况，为输血治疗提供了更为可靠的依据。
新技术能够减少不必要的输血反应和并发症的发生，提高了输血的安全性和成功性。
2024年浅谈不规则抗体的筛查
2024年浅谈不规则抗体的筛查1. 不规则抗体定义不规则抗体（Irregular Antibodies）是指在ABO血型系统之外的抗体，也称为意外抗体或非ABO抗体。
这些抗体通常是由输血、妊娠、疾病或免疫接种等过程中产生的免疫反应所致。
不规则抗体可以是IgG或IgM类型，它们能够与红细胞表面抗原发生反应，导致红细胞凝集或溶血等不良反应。
2. 筛查意义进行不规则抗体筛查具有重要意义。
首先，不规则抗体是输血反应的主要原因之一，包括输血后溶血性反应、发热反应和过敏反应等。
通过筛查不规则抗体，可以及时发现并避免这些输血反应的发生，保障输血的安全性和有效性。
其次，不规则抗体筛查对于孕妇和新生儿也具有重要意义。
孕妇在妊娠过程中会产生不规则抗体，这些抗体可能通过胎盘进入胎儿体内，导致新生儿溶血病。
通过筛查不规则抗体，可以及时发现并采取相应的干预措施，避免新生儿溶血病的发生。
此外，不规则抗体筛查还可以为临床诊断和治疗提供重要依据，帮助医生了解患者的免疫状态和疾病情况。
3. 筛查方法不规则抗体筛查主要采用血清学方法，包括盐水法、凝聚胺法、抗球蛋白法等。
这些方法通过检测血清中的抗体与红细胞表面的抗原反应，来判断是否存在不规则抗体。
其中，抗球蛋白法是目前最常用的不规则抗体筛查方法，具有较高的灵敏度和特异性。
除了血清学方法外，还有一些新型技术如流式细胞术、基因测序等也逐渐应用于不规则抗体筛查中。
4. 筛查时机不规则抗体筛查的时机通常取决于具体的临床情况。
对于输血患者，应在输血前进行不规则抗体筛查，以确保输血的安全性和有效性。
对于孕妇，应在妊娠早期和晚期分别进行不规则抗体筛查，以监测不规则抗体的产生和变化情况。
对于需要接受器官移植、免疫治疗等特殊情况的患者，也应在相应的时机进行不规则抗体筛查。
5. 结果解读不规则抗体筛查的结果通常分为阳性和阴性。
阳性结果表示患者血清中存在不规则抗体，可能存在输血反应或新生儿溶血病的风险。
不规则抗体筛选试验标准操作规程(sop)
不规则抗体筛选试验标准操作规程一、目的为规范微柱凝胶抗球蛋白检测卡在红细胞不规则抗体筛选试验中的应用，保证实验结果的准确性和有效性。
二、适用范围输血科进行的微柱凝胶卡式不规则抗体试验。
三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。
四、步骤和方法1、取微柱凝胶抗球蛋白检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
2、在标记为I、II、III的各反应腔中分别加入对应的I、II、III号筛选红细胞稀释液（1滴细胞+3滴lis液）50微升，再在标记为I，II，III的各反应腔中分别加入对应的受检者血清（血浆）20微升，加入后轻轻震荡3次使其充分混合。
3、将检测卡在微柱凝胶专用孵育器中37℃孵育15min后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后取出判断结果。
5、结果判读：I、II、III型红细胞任何一种出现阳性反应，表明该血清（血浆）不规则抗体筛选阳性。
五、质量控制微柱凝胶试剂卡，试剂筛选红细胞在有效期内使用。
六、注意事项1、检测卡若在冰箱储存，使用前须放置实验室5—10min平衡至室温。
2、撕开微柱凝胶卡锡纸膜时，注意避免各微柱间特异性抗体试剂的交叉污染。
3、细菌污染，纤维蛋白析出及抗凝不佳的血，可产生假阳性结果，建议使用血清。
4、严格遵循离心力，离心时间要求，离心速度过快，离心时间过长均易产生假阴性结果。
5、由于试剂生产厂家，批号不同等因素，红细胞浓度，吸取样品的量及离心条件等环节要求有所差异，以试剂说明书为准。
不规则抗体筛选
不规则抗体筛选1原理用已知抗原表型的试剂红细胞组，通过直接凝集试验和间接抗球蛋白试验，筛选标本中可能存在的血型同种免疫性抗体。
避免含有临床意义的血型同种抗体随血液、血液成分制品一同输入。
2试剂与材料用于筛选的试剂红细胞必须来自至少两名无关O型供者，要求一种细胞为R1R1，另一种为R2R2表型，且表达下列抗原：M，N，S，s，Mur，Di a，k，Fy a，Fy b，Jk a，Jk b和 Le a。
并尽可能多的包含Duffy, Kidd血型系统中主要抗原的纯合子以及低频率抗原。
不可通过混合来自不同供者的细胞获得需要的抗原表达范围。
3方法血型血清学盐水悬浮细胞凝集试验、间接抗球蛋白试验。
3.1盐水悬浮细胞凝集试验:在试管或微量板中将血浆(血清)与筛选细胞1:1混合。
室温立即离心和/或37℃孵育30分钟后离心判读结果。
3.2间接抗球蛋白试验:在试管或微量板中将血浆(血清)与筛选细胞1:1混合, 37℃孵育30分钟后，弃去上清，用生理盐水洗涤三次红细胞。
加抗人球蛋白试剂，离心判读结果。
3.3必须对筛选检测出的抗体进行鉴定，评估其临床意义。
不进行抗体鉴定的实验室需将抗体筛选阳性标本送至具有资质的参比实验室进行最后鉴定或确证。
4注意事项4.1有些抗体(如-Le a,-Jk a)在盐水悬浮细胞凝集试验中可溶解抗原不配合的红细胞。
4.2在进行间接抗球蛋白试验时，必须有IgG致敏的红细胞作为阳性对照。
同时需定期使用含临床意义的弱抗体附加对照试剂 (如抗Fy a或抗-Jk a) 以确保试验步骤的敏感性和试剂红细胞抗原表达的完整性。
4.3其它方法如果已经验证和证明其适用性，可作为间接抗球蛋白试验的补充 (而非替代)，如酶处理技术或聚凝胺方法。
但对某些临床重要性抗体，间接抗球蛋白试验优先于其它可选择技术。
4.4注意血清与红细胞的比率，特别是使用Liss和PEG等促凝剂时，适当增加血清比例，防止弱抗体的漏检。
4.5抗体筛选应能检出浓度不高于0.5 IU/mL的抗-D。
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抗体筛选检查
2006-10-17
《临床输血技术规范》
明确规定部分病人应做“抗体筛选” 检测，第四章第17条：“凡遇以下情况 必须按《全国临床检验操作规程》有关 必须 规定做抗体筛选试验：1、交叉配血不 合的； 2、对有输血史、妊娠史或短期 内需接受多次输血者。
为什么要开展输血前的“抗体筛 选”检查
实验步骤
取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。
受检者血清 筛选用红细胞悬液1# 筛选用红细胞悬液2# 1滴 筛选用红细胞悬液3# 1滴 受检者5%红细胞悬液 1滴 LIM液 （12滴） 0.6ml 0.6ml 0.6ml 0.6ml 混匀后室温静置1分钟。然后各加入Polybrene试剂1滴，混匀 后3400rpm 离心 15秒，轻扣观察有无凝集。 向试管中各加入重悬液 1滴，轻摇观察凝集是否散开。
抗球蛋白试验
原理： 原理：抗体分子和补体成分都是球蛋白， 用这些球蛋白免疫动物使之产生抗体即 抗人球蛋白，抗球蛋白试剂可以和致敏 在红细胞上的人球蛋白（抗体分子和补 体分子）反应，通过架桥作用使致敏红 细胞出现凝集。见图
抗球蛋白试验
抗球蛋 白
实验步骤
1# 2滴 受检者血清 筛选用红细胞悬液1# 1滴 筛选用红细胞悬液 筛选用红细胞悬液2# 筛选用红细胞悬液 筛选用红细胞悬液3# 筛选用红细胞悬液 受检者5%红细胞悬液 红细胞悬液 受检者 2# 2滴 1滴 1滴 1滴 3# 2滴 自身 2滴
Polybrene法
原理： 原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶 液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的 负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞 的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细 胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红 细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发 生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸 橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚 凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而 真正的凝集不消失。(见图).
实验步骤
取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。 1# 2# 3# 自身 受检者血清 2滴 2滴 2滴 2滴 筛选用红细胞悬液1# 1滴 筛选用红细胞悬液2# 1滴 筛选用红细胞悬液3# 1滴 受检者5%红细胞悬液 1滴 混匀后3400rpm离心15秒，立即观察结果 同前
注意事项
标本编号清楚！！ 试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐 水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用，否 则会因污染、抗原丢失导致试验错误。 加血清和红细胞悬液的量必须准确不能多加， 少加,以免引起前带和后带效应 转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短， 以免引起假阳性或假阴性。
混匀后置37℃水浴30分钟后，用生理盐水洗 涤3次（怎么洗）最后1次用吸水纸吸尽盐水， 然后加1滴抗球蛋白血清，混匀后以3400rpm 离心15秒钟，轻摇，观察结果。
结果意义
筛选红细胞1、2、3 自身红细胞 血清中存在的抗体
+ +
— +
同种抗体
自身抗体，或自身抗 体和同种抗体同时存 在
—
+
自身抗体
试剂
抗体筛选用红细胞悬液（1#、2#、3#） 试剂红细胞必须含有下列抗原： D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb ,Jka,和Jkb LIM 液、Polybrene及重悬液 抗球蛋白血清 受检者血清 受检者5%红细胞悬液
盐水法
原理： 原理：盐水介质中的红细胞膜上的抗原 与相应抗体结合，交叉联结形成肉眼可 见的凝集块。
2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临 床医师重视。 （理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、 不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl), 保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天 后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要 考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来 选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情 的延误。
谢谢
注意事项
必须进行间接抗人球蛋白试验。 必须进行间接抗人球蛋白试验。 间接抗人球蛋白试验 必须同时作自身抗体的检查， 必须同时作自身抗体的检查，即患者血清与自身红细胞的反 以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。 应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。 观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、 观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转 速、。 观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性， 观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起 事故。 事故。 若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时， 若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进 一步进行抗体特异性的鉴定.( .(以判断抗体的临床意义并给予 一步进行抗体特异性的鉴定.(以判断抗体的临床意义并给予 配合型血液输注， 配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生 儿溶血病等疾病) 儿溶血病等疾病) 建议： 建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法
抗体筛选检查
一、什么叫“抗体筛选”检查 1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以 外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如 抗D、抗N、抗M、jk-抗体。 2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意 义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清 （含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示 病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选” 阳性。
抗体特异性鉴定（了解）
使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细胞 一般由8-16种含有不同抗原的O型红细胞 配套组成，根据谱细胞的反应格局一般 可以鉴定常见的抗体。 实验方法和抗体筛选实验相同
二 实验原理
血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在 ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种 ABO A B 抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型 鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清 （含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗 体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者 红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系 统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、 B、AB、O四型。 见下表
1# 2滴 1滴
2# 2滴
3# 2滴
自身 2滴
注意事项
标本尽可能不用肝素抗凝血，如果用需要多加1滴聚凝胺。肝素是 大分子的阴离子物质,可以中和凝聚胺的阳离子，导致假阴性。
在接收标本时，要询问抽血时是否正在输液或者刚输过液，如果有这种 情况则要咨询临床医师液体中是否含有止血敏 ， KCL，VitC ，这些药 KCL， 品会干扰聚凝胺的作用导致假阴性，引起事故。 加血清量不能多加，否则会提高致敏过程中的离子强度，降低致敏效果。 加聚凝胺，只需加1滴，多加可能导致重悬液无法充分解散非特异性凝集， 出现假凝集，导致假阳性。 看结果：阴性结果---红细胞迅速散开，并在1分钟内完全散开。可在镜 下观察。 阳性结果---红细胞不完全散开，弱凝集可能在30分钟内明显减 弱或消失，因此以立即看的结果为准。 转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。
抗体筛选技术要求
尽可能多的检测出有临床意义的抗体快的完成抗体检测
方法选择：每种方法都有自己的 特点，适应于不同范围及情况
盐水法：可以用于检测干扰ABO定型的盐水反 应活性抗体，如：MN、P血型抗体。但此方法 会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素 冷凝集素抗 冷凝集素 －I及抗－IH等，而且会漏检IgG性质的抗体。 低离子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需试验时间 少（3～5分钟）、方法灵敏度高，准确性高， 但无法排除无临床意义抗体的干扰。 间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗 体的方法，同时此方法可以有效的避免无临 床意义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多。