不规则抗体筛选

实验步骤
取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。
受检者血清 筛选用红细胞悬液1# 筛选用红细胞悬液2# 1滴 筛选用红细胞悬液3# 1滴 受检者5%红细胞悬液 1滴 LIM液 （12滴） 0.6ml 0.6ml 0.6ml 0.6ml 混匀后室温静置1分钟。然后各加入Polybrene试剂1滴，混匀 后3400rpm 离心 15秒，轻扣观察有无凝集。 向试管中各加入重悬液 1滴，轻摇观察凝集是否散开。
抗体筛选检查
一、什么叫“抗体筛选”检查 1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以 外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如 抗D、抗N、抗M、jk-抗体。 2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意 义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清 （含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示 病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选” 阳性。
试剂
抗体筛选用红细胞悬液（1#、2#、3#） 试剂红细胞必须含有下列抗原： D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb ,Jka,和Jkb LIM 液、Polybrene及重悬液 抗球蛋白血清 受检者血清 受检者5%红细胞悬液
盐水法
原理： 原理：盐水介质中的红细胞膜上的抗原 与相应抗体结合，交叉联结形成肉眼可 见的凝集块。
Polybrene法
原理： 原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶 液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的 负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞 的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细 胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红 细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发 生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸 橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚 凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而 真正的凝集不消失。(见图).
抗体特异性鉴定（了解）
使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细胞 一般由8-16种含有不同抗原的O型红细胞 配套组成，根据谱细胞的反应格局一般 可以鉴定常见的抗体。 实验方法和抗体筛选实验相同
二 实验原理
血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在 ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种 ABO A B 抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型 鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清 （含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗 体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者 红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系 统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、 B、AB、O四型。 见下表
注意事项
必须进行间接抗人球蛋白试验。 必须进行间接抗人球蛋白试验。 间接抗人球蛋白试验 必须同时作自身抗体的检查， 必须同时作自身抗体的检查，即患者血清与自身红细胞的反 以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。 应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。 观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、 观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转 速、。 观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性， 观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起 事故。 事故。 若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时， 若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进 一步进行抗体特异性的鉴定.( .(以判断抗体的临床意义并给予 一步进行抗体特异性的鉴定.(以判断抗体的临床意义并给予 配合型血液输注， 配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生 儿溶血病等疾病) 儿溶血病等疾病) 建议： 建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法
实验步骤
取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。 1# 2# 3# 自身 受检者血清 2滴 2滴 2滴 2滴 筛选用红细胞悬液1# 1滴 筛选用红细胞悬液2# 1滴 筛选用红细胞悬液3# 1滴 受检者5%红细胞悬液 1滴 混匀后3400rpm离心15秒，立即观察结果 同前
注意事项
标本编号清楚！！ 试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐 水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用，否 则会因污染、抗原丢失导致试验错误。 加血清和红细胞悬液的量必须准确不能多加， 少加,以免引起前带和后带效应 转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短， 以免引起假阳性或假阴性。
2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临 床医师重视。 （理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、 不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl), 保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天 后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要 考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来 选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情 的延误。
1、目前已知红细胞有26个抗原系统 目前已知红细胞有26个抗原系统（确认21 目前已知红细胞有26个抗原系统 个，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等），500 多种抗原（确认200多种）。红细胞抗原的多 样性决定了抗体的多样性，检测抗A、抗B、抗 D（ABO血型、Rh血型）可确保绝大多数病人的 输血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、 Rh血型以外）而引发的溶血。
1# 2滴 1滴
2# 2滴
3# 2滴
自身 2滴
注意事项
标本尽可能不用肝素抗凝血，如果用需要多加1滴聚凝胺。肝素是 大分子的阴离子物质,可以中和凝聚胺的阳离子，导致假阴性。
在接收标本时，要询问抽血时是否正在输液或者刚输过液，如果有这种 情况则要咨询临床医师液体中是否含有止血敏 ， KCL，VitC ，这些药 KCL， 品会干扰聚凝胺的作用导致假阴性，引起事故。 加血清量不能多加，否则会提高致敏过程中的离子强度，降低致敏效果。 加聚凝胺，只需加1滴，多加可能导致重悬液无法充分解散非特异性凝集， 出现假凝集，导致假阳性。 看结果：阴性结果---红细胞迅速散开，并在1分钟内完全散开。可在镜 下观察。 阳性结果---红细胞不完全散开，弱凝集可能在30分钟内明显减 弱或消失，因此以立即看的结果为准。 转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。
抗球蛋白试验
原理： 原理：抗体分子和补体成分都是球蛋白， 用这些球蛋白免疫动物使之产生抗体即 抗人球蛋白，抗球蛋白试剂可以和致敏 在红细胞上的人球蛋白（抗体分子和补 体分子）反应，通过架桥作用使致敏红 细胞出现凝集。见图
抗球蛋白试验
抗球蛋 白
实验步骤
1# 2滴 受检者血清 筛选用红细胞悬液1# 1滴 筛选用红细胞悬液 筛选用红细胞悬液2# 筛选用红细胞悬液 筛选用红细胞悬液3# 筛选用红细胞悬液 受检者5%红细胞悬液 红细胞悬液 受检者 2# 2滴 1滴 1滴 1滴 3# 2滴 自身 2滴
混匀后置37℃水浴30分钟后，用生理盐水洗 涤3次（怎么洗）最后1次用吸水纸吸尽盐水， 然后加1滴抗球蛋白血清，混匀后以3400rpm 离心15秒钟，轻摇，观察结果。
结果意义
筛选红细胞1、2、3 自身红细胞 血清中存在的抗体
+ +
— +
同种抗体
自身抗体，或自身抗 体和同种抗体同时存 在
—
+
自身抗体
抗体筛选检查
2006-10-17
《临床输血技术规范》
明确规定部分病人应做“抗体筛选” 检测，第四章第17条：“凡遇以下情况 必须按《全国临床检验操作规程》有关 必须 规定做抗体筛选试验：1、交叉配血不 合的； 2、对有输血史、妊娠史或短期 内需接受多次输血者。
为什么要开展输血前的“抗体筛 选”检查
抗体筛选技术要求
尽可能多的检测出有临床意义的抗体。 尽可能少的检测出无临床意义的抗体。 尽可能快的完成抗体检测
方法选择：每种方法都有自己的 特点，适应于不同范围及情况
盐水法：可以用于检测干扰ABO定型的盐水反 应活性抗体，如：MN、P血型抗体。但此方法 会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素 冷凝集素抗 冷凝集素 －I及抗－IH等，而且会漏检IgG性质的抗体。 低离子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需试验时间 少（3～5分钟）、方法灵敏度高，准确性高， 但无法排除无临床意义抗体的干扰。 间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗 体的方法，同时此方法可以有效的避免无临 床意义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多。
Байду номын сангаас
谢谢