病原学诊断——倪语星

细菌感染的病原学诊断题库3-0-8

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]主要用于未染色的活菌检查的显微镜是（） A.普通光学显微镜 B.暗视野显微镜 C.荧光显微镜 D.倒置显微镜 E.电子显微镜暗视野显微镜主要用于未染色的活菌的观察。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]脑脊液离心涂片染色，镜检发现白细胞内外均有革兰阴性双球菌，该病人可诊断为（） A.结核性脑膜炎 B.流行性乙型脑炎 C.流行性脑脊髓膜炎 D.新型隐球菌性脑膜炎 E.脱髓鞘脑脊髓膜炎在疑似流行性脑脊髓膜炎的脑脊液染色涂片中，如发现中性粒细胞内外均有革兰阴性双球菌，常成双排列，即可作出初步诊断。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]在观察不染色活细菌和螺旋体形态和运动时，应用何种显微镜（） A.普通显微镜 B.荧光显微镜 C.暗视野显微镜 D.倒置显微镜 E.照像显微镜暗视野显微镜可以在黑暗的背景下看到发亮的菌体，明暗反差提高了观察效果，多用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动。 (11选5 https://www.360docs.net/doc/31713390.html,)

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]常用的碱性染料是（） A.伊红 B.刚果红 C.结晶紫 D.瑞氏染料 E.吉姆萨染料常用的碱性染料是碱性复红、结晶紫、美蓝等。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]在普通光学显微镜下看不见的细菌结构是（） A.荚膜 B.芽孢 C.鞭毛 D.异染颗粒 E.菌毛荚膜、芽孢和异染颗粒用普通光学显微镜均可以观察到。鞭毛通常需用电子显微镜观察，但经特殊染色法使其增粗后也能在普通光学显微镜下看到。菌毛比鞭毛更细更短，在普通光学显微镜下看不到，必须用电子显微镜观察。

基因诊断试题

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(一）选择题 A型题１．判定基因结构异常最直接的方法是 A．PCR法 B．核酸分子杂交 C．DNＡ序列测定Ｄ．RFLP分析 E．ＳSCP分析 2．不符合基因诊断特点的是 A.特异性强 B．灵敏度高 C.易于做出早期诊断Ｄ．样品获取便利 E．检测对象仅为自体基因３．遗传病基因诊断的最重要的前提是 A.了解患者的家族史 B.疾病表型与基因型关系已被阐明 C.了解相关基因的染色体定位Ｄ．了解相关的基因克隆和功能分析等知识 E.进行个体的基因分型４.若要采用Soutｈern或Ｎｏrthern印迹方法分析某特定基因及其表达产物,需要 A．制备固定在支持物上的组织或细胞

B.收集组织或细胞样品，然后从中提取总DNA或ＲNＡＣ．利用PCＲ技术直接从标本中扩增出待分析的片段Ｄ．收集组织或细胞样品,然后从中提取蛋白质Ｅ.收集培养细胞的上清液 5．目前基因诊断常用的分子杂交技术不包括哪一项A．Sｏuthern印迹 B.Wｅsterｎ印迹Ｃ.Noｒthern印迹 D．ＤＮA芯片技术 E．等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 6.SNP的实质是Ａ．碱基缺失 B.碱基插入 C.碱基替换 D．移码突变 E．转录异常７.DNＡ指纹的遗传学基础是Ａ.连锁不平衡 B.DNA的多态性Ｃ.串联重复序列 D．MHC的限制性 E．ＭHC的多样性

8．在对临床病例进行基因诊断时，若遇到不能检测出已知类型突变的情况，如果表型明确指向某种疾病,适用下列哪一类筛查技术 A．PCR法 B．AＳO分子杂交Ｃ.反向点杂交 D．变性高效液相色谱(DＨPLC） E．ＳTR拷贝异常的诊断 9.生殖细胞若发生基因结构突变可引起哪种疾病 A.肿瘤Ｂ．高血压Ｃ．糖尿病 D．遗传病Ｅ．传染病 10.PCR技术容易出现Ａ.假阴性结果 B．假阳性结果 C.灵敏度不高 D．适用不广Ｅ．操作繁冗 1１．目前检测血清中乙肝病毒最敏感的方法是 A.斑点杂交试验 B.等位基因特异性寡核苷酸分子杂交 C．Sｏutｈern印迹

基因突变的检测方法

基因突变的检测方法基因突变的研已成为当今生命科学研究的热点之一，检测方法也随之迅速发展。人类细胞癌基因的突变类型已如上所述，对于基因突变的检测，1985以前，利用Southern印迹法，可以筛选出基因的缺失、插入和移码重组等突变形式。对于用该法法不能检测的突变，只能应用复杂费时的DNA序列测定分析法。多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术是突变研究中的最重大进展，使基因突变检测技术有了长足的发展，目前几乎所有的基因突变检测的分子诊断技术都是建立于PCR的基础之上，并且由PCR衍生出的新方法不断出现，目前已达二十余种，自动化程度也愈来愈高，分析时间大大缩短，分析结果的准确性也有很大很提高。其中包括单链构象多态性（single-strand comformational polymorphism,SSCP）和异源双链分析法（heteroduplex analysis,HA）。下面分别介绍几种PCR衍生技术及经典突变检测方法，可根据检测目的和实验室条件选择时参考。 PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时，检出率仅为50％左右，该法可能会存在1％的假阳性率。应用PCR-SSCP法应注意电泳的最佳条件，一般突变类型对检测的灵敏度无大的影响，同时该法不能测定突变的准确位点，还需通过序列分析来确定。Sarkar等认为对于大于200bp的片段，用其RNA分子来做SSCP会提高其录敏度。应用PCR-SSCP检测点突变已见报道于人类大部分的肿瘤组织或细胞，如乳腺癌、食管癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌等。检测的基因包括多种癌基因及抑癌基因，也是检测抑癌基因p53突变最常用的方法，仅检测第5-8外显子即可发现85％以上的p53基因突变。由于该法简便快速，特别适合大样本基因突变研究的筛选工作。异源双链分析法（HA） HA法直接在变性凝胶上分离杂交的突变型一野生型DNA双链。由于突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起，在非变性凝胶中电泳时，会产生与相应的同源双DNA不同的迁移率。该法与SSCP相似，所不同的是SSCP分离的是单链DNA，HA法分离的是双链DNA，也只适合于小片段的分析。但HA对一些不能用SSCP 检出的突变有互补作用，两者结合使用，可使突变检出率提高到近100％。

基因测序技术的优缺点及应用

基因测序技术的优缺点及应用随着人类基因组计划的完成,人类对自身遗传信息的了解和掌握有了前所未有的进步。与此同时,分子水平的基因检测技术平台不断发展和完善,使得基因检测技术得到了迅猛发展,基因检测效率不断提高。从最初第一代以 Sanger 测序为代表的直接检测技术和以连锁分析为代表的间接测序技术,到 2005 年,以Illumina 公司的 Solexa技术和 ABI 公司的 SOLiD 技术为标志的新一代测序 (next-generation sequencing,NGS) 的相继出现,测序效率明显提升,时间明显缩短,费用明显降低,基因检测手段有了革命性的变化。其技术正向着大规模、工业化的方向发展,极大地提高了基因检测的检出率,并扩展了疾病在基因水平的研究范围。2009 年 3 月,约翰霍普金斯大学的研究人员在《Science》杂志上发表了通过 NGS外显子测序技术,发现了一个新的遗传性胰腺癌的致病基因PALB2,标志着 NGS 测序技术成功应用于致病基因的鉴定研究。同年,《Nature》发表了采用 NGS 技术发现罕见弗里曼谢尔登综合征MYH3 致病基因突变和《Nat Genet》发表了遗传疾病米勒综合征致病基因。此后,通过 NGS 技术,与遗传相关的致病基因不断被发现,NGS 技术已成为里程碑式的进步。2010 年,《Science》杂志将这一技术评选为当年“十大科学进展”。近两年,基因检测成为临床诊断和科学研究的热点,得到了突飞猛进和日新月异的发展,越来越多的临床和科研成果不断涌现出来。同时,基因检测已经从单一的遗传疾病专业范畴扩展到复杂疾病和个体化应用更加广阔的领域,其临床检测范围包括高危疾病的新生儿筛查、遗传疾病的诊断和基因携带的检测以及基因药物检测用于指导个体化用药剂量、选择和药物反应等诸多方面的研究。目前,基因检测在临床诊断和医学研究的应用正越来越受到医生的普遍重视和引起研究人员的极大的兴趣。本文介绍了几种 DNA 水平基因检测常见的方法,比较其优缺点和在临床诊断和科学研究中的应用,对指导研究生和临床医生课外学习,推进临床科研工作和提升科研教学水平有着指导意义。 1、第一代测序 1.1 Sanger 测序采用的是直接测序法。1977年,Frederick Sanger 等发明了双脱氧链末端终止法,这一技术随后成为最为常用的基因测序技术。2001 年,Allan Maxam 和 Walter Gibert 发明了 Sanger 测序法,并在此后的 10 年里成为基因检测的金标准。其基本原理即双脱氧核苷三磷酸(dideoxyribonucleoside triphosphate,ddNTP) 缺乏PCR 延伸所需的 3'-OH,因此每当 DNA 链加入分子 ddNTP,延伸便终止。每一次 DNA 测序是由 4个独立的反应组成,将模板、引物和 4 种含有不同的放射性同位素标记的核苷酸的ddNTP 分别与DNA 聚合酶混合形成长短不一的片段,大量起始点相同、终止点不同的 DNA 片段存在于反应体系中,具有单个碱基差别的 DNA 序列可以被聚丙烯酰胺变性凝胶电泳分离出来,得到放射性同位素自显影条带。依据电泳条带读取DNA 双链的碱基序列。人类基因组的测序正是基于该技术完成的。Sanger 测序这种直接测序方法具有高度的准确性和简单、快捷等特点。目前,依然对于一些临床上小样本遗传疾病基因的鉴定具有很高的实用价值。例如,临床上采用 Sanger 直接测序 FGFR 2 基因证实单基因 Apert 综合征和直接测序 TCOF1 基因可以检出多达 90% 的

快速检测技术终极版

1.食品加工中危害分为哪三个方面，每一方面包括哪些因素？ ⑴生物性危害：细菌性危害、真菌性危害、病毒性危害、寄生虫危害、虫鼠害 ⑵化学性危害：天然毒素及过敏原、农药残留、兽药残留、激素残留、重金属超标、添加剂滥用和非法使用、包装材料、容器与设备带来危害 ⑶物理性危害：非正常外来杂质（如玻璃、石头、金属、塑料等）。 2.简述快速检测定义？在短时间内，如几分钟、十几分钟，采用不同方式方法检测出被检物质是否处于正常状态，检测得到的结果是否符合标准规定值，被检物质本身是不是有毒有害物质，由此而发生的操作行为称之为快速检测。 3.简述食品安全快速检测意义？ ①快速检测是食品安全监管人员的有利工具：在日常卫生监督过程中，除感官检测外，采用现场快速检测方法，及时发现可疑问题，迅速采取相应措施，这对提高监督工作效率和力度，保障食品安全有着重要的意义。②快速检测是实验室常规检测的有益补充: 采用快速检测，可使食品安全预警前移，可以扩大食品安全控制范围。对有问题的样品必要时送实验室进一步检测，既提高了监督监测效率，又能提出有针对性的检测项目，达到现场检测与实验室检测的有益互补。③快速检测是大型活动卫生保障与应急事件处理的有效措施：在大型活动卫生保障中，为了防止发生群发性食物中毒④快速检测是中国国情的一种需要：中国在提高食品安全整体水平方面仍有很长的路要走，快速检测将会在其中起到积极有效的作用。 4.现场快速检测方法形式有哪些？试纸法:用试纸直接显色来定性并作为限量指示、用试纸层析显色或层析后胶体金显色来定性或作为限量指示、用试纸显色的深浅来半定量。试管法：用速测管显色来定性、用速测管显色的深浅半定量。滴瓶法：将标准溶液放在滴瓶中，根据消耗的滴数来判定被检物质的含量。便携式仪器法 5.快速检测结果表述形式有哪些？ ①定性检测：即快速地得出被检样品中是否含有有毒有害物质，或其本身就是有毒有害物质。通常以阴性或阳性表述。阴性表示用本方法未检出要检测的物质。阳性表示检出了有毒有害物质。②限量检测：即快速地得出被检样品中有毒有害物质是否超出标准规定值或有效物质是否达到标准规定值。通常以合格或不合格表述。③半定量检测：能够快速地得出所测物质的大概含量，通常以合格或不合格表述，也可标示出具体数值。④定量检测：如温度、湿度、消毒间紫外线辅照强度、纯净水电导率等物理指标的检测。通常以具体数值表述。 6.简述快速检测注意事项及采样的注意事项？检测注意事项：①对于阳性结果以及不合格结果的样品：应重复测试，排除偶然误差。重要样品，如含急性中毒物质或可能会对后期处理带来较大社会影响或较大经济损失的样品，应注意留样，并将样品送实验室进一步确证。②对于阴性与阳性、合格与不合格之间不易判定的样品：应重复测试，以多次重复相同的结果报告之。采样注意事项：①为了监测总体样品的安全卫生状况，应注意采样的代表性原则。均衡地，不加选择地从全部批次的各部分随机性采样。②为了检验样品掺假、投毒或怀疑中毒的食物等，应注意采样的典型性原则。根据已掌握的情况有针对性地采样。如怀疑某种食物可能是食物中毒的原因食品，或者感官上已初步判定出该食品存在卫生质量问题，而进行有针对性的选择采样。③当检出阳性样品或不合格样品时，应考虑采样方法是否正确。必要时送实验室进一步检测。 7.简述利用农药速测卡快速检测有机磷农药的基本原理，并简述基于农药速测卡采用表面测定法快速检测蔬菜中有机磷农药的方法过程？利用对有机磷和氨基甲酸脂类农药高敏感的胆碱酯酶和显色剂做成的试纸。胆碱酯酶

病原学诊断与防治复习题.doc

病原学诊断与防治复习题一、选择题 A型题 1?下列除哪项外，均为革兰染色的意义 A. 细菌的分类 B.选择治疗药物 C.鉴定细菌的依据 D. 观察细菌结构 E.与细菌致病性有关 2. 不符合脑膜炎球菌送检标本要求的一项是 A. 采集标木注意无菌操作 B.根据该病原菌主要存在部位取材 C. 采集标木一般应在使用抗菌药物之询 D.采集的标本要立即送检 E. 标本送检过程中要保持低温和干燥 3. 不能用于细菌检测的方法是 A. 蚀斑测定 B.噬菌体分型 C.细菌素分型 D.聚合酶链反应 E.气液相色谱法 4. 从有正常菌群存在的部位所采取的标木应接种在哪种培养基中分离培养病原菌 A. 增菌培养基 B.营养培养基 C.选择、鉴别培养基 D.特殊培养基 5. 关于直接涂片镜检的叙述，下列哪项是正确的 A. 适川与所冇细菌感染疾病的初步诊断 B.方法简便易行 C. 只适用与形态和染色性上具冇特征的病原菌 D.英结果必须结合脸］床表现方冇诊断价值 E.以上都不是 6. 利用细菌生化反应鉴定细菌是根据 A. 细菌酶活性差异 B.细菌毒素活性差异 C.细菌酚含量的差异 D. 细菌毒素种类的差界 E.细菌分解代谢产物的差界 7. 用马血清制备的抗毒素的缺点是 A. 制备较困难 B.纯度不高 C.产量低 D. 可产生变态反应 E.不易保存 8. 内种球蛋白的优点是 A. 來源广 B.易制备 C.易保存 D.含多种微牛?物的抗体 E.免疫效果好 9. 向类毒索中加入佐剂氢氧化铝或磷酸铝便可制成 A. 内毒素 B.精致类毒素 C.外毒素 D.神经毒素 E.细胞毒素 10. 抗毒素主要用于外毒素所致疾病的治疗和应急预防，但使用界种抗毒素吋应注意下列何种问题的发生 A. I型超敏反应 B.II型超敏反应 C.III型超敏反应 D.IV型超敏反应 E.以上都包括

基因表达的检测的几种方法

基因表达检测的最终技术目标是能确定所关注的任何组织、细胞的 RNA的绝对表达量。可以先从样本中抽提RNA，再标记RNA，然后将这些标记物作探针与芯片杂交，就可得出原始样本中不同 RNA的量。然而用于杂交的某个特定基因的RNA的量与在一个相应杂交反应中的信号强度之间的关系十分复杂，它取决于多种因素，包括标记方法、杂交条件、目的基因的特征和序列。所以芯片的方法最好用于检验两个或多个样本中的某种RNA的相对表达量。样本之间某个基因表达的差异性（包括表达的时间、空间特性及受干扰时的改变）是基因表达最重要的，而了解RNA 的绝对表达丰度只为进一步的应用或多或少地起一些作用。基因表达的检测有几种方法。经典的方法（仍然重要）是根据在细胞或生物体中所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分离技术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。随着重组DNA技术的运用，现在有可能检测．分析任何基因的转录产物。目前有好几种方法广泛应用于于研究特定RNA分子。这些方法包括原位杂交．NORTHERN凝胶分析．打点或印迹打点．S－1核酸酶分析和RNA酶保护研究。这里描述RT-PCR从RNA水平上检查基因表达的应用。8 f3 f- |2 L) K) b7 ]- ~- | RT-PCR检测基因表达的问题讨论

关于RT-PCR技术方法的描述参见PCR技术应用进展，在此主要讨论它在应用中的问题。理论上1μL细胞质总RNA对稀有mRNA扩增是足够了（每个细胞有1个或几个拷贝）。1μL差不多相当于50－100，000个典型哺乳动物细胞的细胞质中所含RNA的数量，靶分子的数量通常大于50，000，因此扩增是很容易的。该方法所能检测的最低靶分子的数量可能与通常的DNAPCR相同；例如它能检测出单个RNA分子。当已知量的转录RNA（用T7RNA聚合酶体外合成）经一系列稀释，实验结果表明通过PCR的方法可检测出10个分子或低于10个分子，这是反映其灵敏度的一个实例。用此技术现已从不到1个philadelphia染色体阳性细胞株K562中检测到了白血病特异的MRNA的转录子。因此没必要分离polyA+RNA，RNA/PCR法有足够的灵敏度来满足绝大多数实验条件的需要。 7 H+ F& _* S6 W( a8 p: [, @- d, { 将PCR缓冲液同时用于反转录酶反应和PCR反应，可简化实验步骤。我们发现整个反应过程皆用PCR缓冲液的结果相当于或优于先用反转录缓冲液合成CDNA，然后PCR缓冲液进行PCR扩增循环。当然，值得注意的是PCR缓冲液并不最适合第一条DNA链的合成。我们对不同的缓冲液用于大片段DNA 合成是否成功还没有进行过严格的研究。

快速、准确诊断故障的方法

“诊断”在现代汽车维修中的作用是人所共知的，“七分诊断三分维修”的理念也为大多数汽车维修人员所接受。但用什么方法进行诊断才能快速而且准确，大家的认识并不统一，一度出现了一味追求和依赖高端设备的倾向，甚至完全忽视了其他行之有效的方法，这是一种不正确的观念。笔者认为，对于我们这些“汽车医生”而言，真正的高手应该是那些用尽可能少、尽可能简单的仪器设备，就能准确而快速判断出故障的人。在现代汽车诊断中，“快速”和“准确”是适应现代社会快节奏的一个基本前提。尽可能少用设备，利用快捷、简单的设备，是保证“快速”的基本前提；要达到“快而准”的目的，专业人员需要具有丰富的经验、扎实的专业知识，同时还必须选择正确的诊断方法。一般来说，“快而准”的诊断方法有：“经验诊断法”、“原车电脑信息法”、“置换法”、“检测诊断法”等。一、经验诊断法——基于诊断人员的经验与专业水平的方法汽车技术不论如何进步，很多常见故障仍然是可以通过经验来判断的。只有故障现象并非由常见的故障原因引起时，才需要借助进一步的诊断方法来确定故障点。因此，笔者不同意所谓“依靠经验无法进行现代汽车故障诊断”之类的极端说法。以下几种情况，在实践中经常遇到。故障与生产厂家、车型、档次没有太大关系，绝大多数情况下根本用不着启用诊断程序，利用经验就可以立即解决（不排除少数例外情况）：汽车加速不畅，常见原因为油路部分阻塞或油泵工作不良; 急加速时“挫车”，常见原因为高压漏电或接触不良; 装备自动变速器的汽车行驶一段后失去挡位，熄火几分钟后再起步，挡位恢复，行驶一段后又失去挡位，其常见原因为变速器油脏污，造成滤网阻塞；某些车经维修人员修理后，怠速时，开空调发动机熄火，但怠速阀反应正常，其常见原因为点火时刻过早。诸如此类的故障现象不胜枚举，不过作为“汽车医生”，应该清楚各种故障现象与故障原因之间的因果关系。上面提到的“怠速时，开空调发动机熄火”是什么原因呢？说起来很简单，开空调时，ECU为了提升怠速，在打开怠速阀的同时还要将点火时刻提前，以弥补怠速阀和气流反应的滞后。安装时造成点火时刻过早，打开空调后，点火时刻更早，导致发动机熄火。而这一点在许多书籍中并没有提及。因此，仅仅依靠书本或利用解码仪之类高级设备，往往连此类简单的故障原因也难以找到。此时，经验让我们几分钟就能解决问题，书本和高级设备却让我们误入歧途，或许几天都找不到故障点。自动变速器产生换挡冲击、换挡打滑或无挡等故障现象，不同车型所表现出的现象也不一样。有时经验会告诉我们——“加错油了！”不用启动复杂的诊断程序，只需鉴别一下油品即可。只要我们有一些自动变速器油品方面的专业知识，这其中的道理不言自明。当然，利用经验诊断法，需要经验和专业知识。经验靠积累，专业知识靠学习，没有多少捷径可走。如果说有捷径的话，那就是多与别人交流（包括交谈、会议、阅读杂志等多种方式），把别

基因诊断与基因治疗

第二十一章基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗能够在比较短的时间从理论设想变为现实，主要是由于分子生物学的理论及技术方法，特别是重组DNA技术的迅速发展，使人们可以在实验室构建各种载体、克隆及分析目标基因。所以对疾病能够深入至分子水平的研究，并已取得了重大的进展。因此在20世纪70年代末诞生了基因诊断(gene diagnosis)；随后于1990年美国实施了第一个基因治疗(gene therapy)的临床试验方案。可见，基因诊断和基因治疗是现代分子生物学的理论和技术与医学相结合的范例。第一节基因诊断一. 基因诊断的含义传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为依据，如患者的症状、血尿各项指标的变化，或物理检查的异常结果，然而表型的改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生的一定时间后才出现，因此常不能及时作出明确的诊断。现知各种表型的改变是由基因异常造成的，也就是说基因的改变是引起疾病的根本原因。基因诊断是指采用分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的结构（DNA水平）或功能（RNA水平）是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断。基因诊断有时也称为分子诊断或DNA诊断(DNA diagnosis)。基因诊断是病因的诊断，既特异又灵敏，可以揭示尚未出现症状时与疾病相关的基因状态，从而可以对表型正常的携带者及某种疾病的易感者作出诊断和预测，特别对确定有遗传疾病家族史的个体或产前的胎儿是否携带致病基因的检测具有指导意义。二. 基因诊断的原理及方法

（一）基因诊断的原理疾病的发生不仅与基因结构的变异有关，而且与其表达功能异常有关。基因诊断的基本原理就是检测相关基因的结构及其表达功能特别是RNA产物是否正常。由于DNA的突变、缺失、插入、倒位和基因融合等均可造成相关基因结构变异，因此，可以直接检测上述的变化或利用连锁方法进行分析，这就是DNA诊断。对表达产物mRNA质和量变化的分析为RNA诊断(RNA diagnosis)。（二）基因诊断的方法基因诊断是以核酸分子杂交(nucleic acid molecular hybridization)和聚合酶链反应（PCR）为核心发展起来的多种方法，同时配合DNA序列分析，近年新兴的基因芯片可能会发展成为一种很有用的基因诊断方法。 1.DNA诊断常用检测致病基因结构异常的方法有下列几种。 ⑴斑点杂交：根据待测DNA 样本与标记的DNA探针杂交的图谱，可以判断目标基因或相关的DNA片段是否存在，根据杂交点的强度可以了解待测基因的数量。 ⑵等位基因特异的寡核苷酸探针（allele-specific oligonucleotide probe, ASO probe）杂交：是一种检测基因点突变的方法，根据点突变位点上下游核苷酸序列，人工合成约19个核苷酸长度的片段，突变的碱基位于当中，经放射性核素或地高辛标记后可作为探针，在严格杂交条件下，只有该点突变的DNA样本，才出现杂交点，即使只有一个碱基不配对，也不可能形成杂交点。一般尚合成正常基因同一序列，同一大小的寡核苷酸片段作为正常探针。如果受检的DNA样本只能与突变ASO探针，不与正常ASO探针杂交，说明受检二条染色体上的基因都发生这种突变，为突变纯合子；如果既能与突变ASO探针又能与正常ASO探针杂交，

基因诊断和治疗的医学应用

基因诊断和治疗的医学应用郭龙飞（保山学院资源环境学院云南保山678000）摘要：各种癌症和恶性肿瘤是目前危害人类健康最为严重的疾病之一，且死亡率很高，现在还没有一种有效的治疗方法。传统的手术、放疗和化疗等方法对中晚期的患者治疗疗效已经明显不足。因此。找到一种新的治疗癌症和恶性肿瘤的治疗方法对人类健康发展是意义重大的。而基因治疗则是用各种手段从基因水平上来治疗各种疾病。于是，基因治疗为众多患者提供了希望，成为了现在医学界的热门话题。本文就是依据前人的研究成果，以基因治疗癌症和恶性肿瘤为主来论述基因治疗在医学上的应用。关键词：基因诊断基因治疗癌症恶性肿瘤 1基因治疗概述基因治疗的基本含义是通过遗传或分子生物学技术在基因水平上治疗各种疾病[1]。它是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞,以纠正基因缺陷或者发挥治疗作用,从而达到治疗疾病的目的。广义的基因治疗是指利用基因药物的治疗,而通常所称狭义的基因治疗是指用完整的基因进行基因替代治疗,一般用DNA序列[2]。它是运用基因工程技术直接纠正肿肿瘤细胞基因的结构及（或）功能缺陷，或者间接通过增强宿主对肿瘤的杀伤力和机体的防御功能来治疗肿瘤。通过外源基因的导入，激活机体抗瘤免疫，增强对肿瘤细胞的识别能力、抑制或阻断肿瘤相关基因的异常表达或增加肿瘤细胞对药物的敏感性，这些基因主要包括细胞因子基因、抗肿瘤基因、肿瘤药物相关基因和病毒基因等[3]。目前基因治疗的方式(type of gene therapy)主要有3种：①基因矫正或置换：即对缺陷基因的异常序列进行矫正，对缺陷基因精确地原位修复，或以正常基因原位置换异常基因，因此不涉及基因组的任何改变。②基因增补：不去除异常基因，而是通过外源基因的导人，使其表达正常产物，从而补偿缺陷基因的功能。③基因封闭：有些基因异常过度表达，如癌基因或病毒基因可导致疾病，可用反义核酸技术、核酶或诱饵转录因子来封闭或消除这些有害基因的表达[4]。 2基因诊断应用 2.1基因诊断新生儿脊髓性肌萎缩目前报道有一些较严重的SMA I型患儿会出现关节挛缩、骨折、呼吸困难和感觉神经元受损的表现，但机制还不清楚，可能与5ql3缺失大小有关。SMA尚无特异的治疗方法，临床主要是对症治疗，如早期发现SMA患儿呼吸系统受累并干预性通气治疗可以延长疾病的病程、改善患儿生活质量、减少肺部继发性感染及呼吸衰竭发生。本例患儿经抗炎、吸氧、吸痰、补充维生素、给予丙种球蛋白等对症治疗和支持治疗，呼吸困难逐渐缓解，双肺痰鸣音减少，但最终家长考虑远期预后不良而放弃治疗[5]。最近，在体外实验研究中发现丁酸纳、丙戊酸和Htra—ISl的调节因子可以增加SMN2基蛋白的作用，而且对细胞几乎没有毒性作用，但研究工作还处于动物实验阶段，没有正式应用于临床，该类药物可能为SMA的治疗开辟了新的途径[5]。 2.2早期胰腺藩的基因诊断近年来，胰腺癌的发病率和死亡率呈逐渐上升趋势，每年有新发病例约20万人，占全部恶性肿瘤发病的2％。其发病匿，早期缺乏特异表现，恶性程度高，极易出现转移，80％-90％的胰腺癌病人就诊时，已经到了晚期，手术切除率只有15％，年生存率为1％-5％。而早期胰腺癌的手术切除率为90-100％，5年生存率可达70％- 100％。另有研究表明，肿瘤的大小是重要的生存率预测因子，如果直径

病原学本科班复习题

名词解释: 1.共栖： 2.互利共生寄生： 3.寄生虫： 4.生活史： 5.生活史直接型： 6.生活史间接型； 7.土源性蠕虫； 8.生物原性蠕虫；偶然寄生虫： 9.感染阶段： 10.专性寄生虫： 11.兼性寄生虫： 12.机会致病寄生虫： 13.中间宿主： 14.终宿主： 15.保虫宿主： 16.转续宿主： 17. ADCC效应： 18.免疫效应： 19.免疫逃避： 20.自然疫源性： 21.带虫免疫： 22.伴随免疫： 23.带虫者： 24.幼虫移行症： 25.夜现周期性： 26.血吸虫可溶性虫卵抗原： 27.中绦期： 28.囊虫病： 29.包虫病： 30.囊砂： 31.自体内感染： 32.自体外感染： 33.滋养体： 34.包囊： 35.世代交替:机会性致病原虫： 36.阿米巴带虫者： 37.阿米巴穿孔素 38.：肠外阿米巴病： 39.动基体： 40.paroxysm：即疟疾发作， 41.recrudescence：即疟疾的再燃， 42.relapse：即疟疾的复发，简答题： 1.寄生虫整个生活史过程包括哪些内容？ 2.寄生虫的生殖潜能表现为哪几方面？

3.寄生虫对宿主的致病作用有哪些？ 4.寄生虫逃避宿主免疫的机制有哪些？ 5.寄生虫病的病原学诊断有何优缺点？ 6.检测循环抗原有何意义？ 7.影响寄生虫病的流行因素有哪些？ 8.寄生虫病的综合防治措施包括哪些内容？ 9.什么叫自然疫源地？了解自然疫源地有何实用意义 10.为什么蛔虫病在国内广泛传播? 11.蛔虫引起的常见并发症有那些，这与蛔虫的什么习性有关？ 12.钩虫为什么能够引起宿主的慢性失血性贫血？ 13.旋毛虫的生活史有何特点?人是如何感染旋毛虫的，对人体的致病阶段是什么? 14.蛲虫的生活史有何特点，蛲虫病为何不易预防？ 15.虫卵使肉芽肿形成的机制如何? 16.包虫病能否做穿刺诊断，为什么？ 17.若人生吃包虫感染的羊肝会不会的包虫病，为什么？ 18.牛带绦虫牛和和猪带绦虫哪个对人体的危害性大，为什么？ 19.黑热病患者为何会出现肝、脾肿大？ 20.黑热病患者贫血的特点及贫血机理？ 21.试述蓝氏贾第鞭毛虫的致病因素有哪些？ 22.论述阴道毛滴虫的致病机理及传播方式。 23.疟疾的发作机理及为什么会呈周期性? 24.疟疾贫血的原理? 25.弓形虫的感染途径有哪些? 26.弓形虫为什么与优生优育有关? 论述题： 1.详细描述包虫病对人体的危害 2.论述细粒棘球蚴的结构和单房包虫病的临床表现 3.什么棘球蚴病易在牧区流行？我们应如何预防棘球蚴病？ 4.讨论猪带绦虫和牛带绦虫在形态和致病上的不同点. 模拟题I 一、选择题（每题1分，共60分） A、寄生有人体寄生虫的脊椎动物 B、寄生有人体寄生虫的原生动物 C、寄生有寄生虫的脊椎动物 D、寄生有人体寄生虫的节肢动物 E、以上都是 2、寄生虫的世代交替指的是 A、父代与子代交替 B、母代与子代交替 C、不同宿主 D、有性生殖与无性生殖的交替 E、寄生虫一代与另一代的交替 3、有些人畜共患寄生虫的脊椎动物宿主，在流行病学上称这些动物是寄生虫的 A、中间宿主 B、终末宿主 C、转续宿主 D、保虫宿主 E、媒介宿主. 4、为我国5大寄生虫病之一的原虫是

基因诊断常用技术与应用

基因诊断的概念一、基本概念： 1．人类的绝大多数疾病都与基因有关，基因变异引起疾病两种类型： ①内源基因变异：由于先天遗传和后天内外环境因素的影响，人类的基因结构及表达的各个环节都可发生异常，从而导致疾病。分基因结构突变和表达异常。 ②外源基因的入侵：各种病原体感染人体后，其特异的基因被带入人体并在体内增殖引起各种疾病。基因改变引起各种表型改变，从而引起疾病，从基因水平探测分析病因和疾病的发病机制，并采用针对性的手段矫正疾病是近年基础和临床的方向。２．基因诊断：利用现代生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构及表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。二、基因诊断的特点： 1．以基因做检查材料和检查目标针对性强； 2．分子杂交选用特定基因序列作探针，故特异性强； 3．分子杂交和PCR具有放大效应，故有较大的灵敏度； 4．适用性强，诊断范围广。基因诊断的常用技术一、核酸分子杂交：核酸杂交是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法。其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开，而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行，因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交（Southern blot hybridization ）和RNA印迹杂交（Northern blot hybridization）。（一）核酸分子杂交的基本过程： ①DNA或RNA的制备：将待测样品用一定方法提取DNA或RNA。

②制备探针； ③杂交； ④检测。 1．DNA或RNA的制备：将待测样品用一定方法提取DNA或RNA。 2．基因探针的概念： ①基因探针（probe）就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 ②探针的来源： DNA探针根据其来源有3种：一种来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe）；另一种是从相应的基因转录获得了mRNA，再通过逆转录得到的探针，称为cDNA 探针（cDNA probe）。与基因组探针不同的是，cDNA探针不含有内含子序列。此外，还可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段，称为寡核苷酸探针。 ③探针的制备：进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进，应先制备基因组文库，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外重组到运载体（噬菌体、质粒等）中去，再将后者转染适当的宿主细胞如大肠杆菌，这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑，通过原位杂交，从中可筛出含有目的基因片段的克隆，然后通过细胞扩增，制备出大量的探针。为了制备cDNA 探针，首先需分离纯化相应mRNA，这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到，如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆转录酶的作用下，就可以合成与之互补的DNA(即cDNA)，cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序，但内含子已在加工过程中切除。寡核苷酸探针是人工合成的，与已知基因DNA互补的，长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量，也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列，并用化学方法合成。 ④探针的标记：

简易快速诊断技术

一．简易快速诊断技术 1.根据体表症状的快速诊断一般情况下体表充血、发炎、鳞片脱落则多赤皮病，若病鱼仅鳃盖或鳍条基部充血，皮肤充血不明显，撕开表皮发现肌肉呈充血状或块状淤血则为出血病；病鱼腹部膨大，肛门红肿呈紫红色，轻压腹部有黄色粘液流出，则多为肠炎病；尾柄及腹部两侧有火烙样的红斑或表皮腐烂呈印章状，则多为打印病；体表有棉絮状的白色物为水霉病；体有粘液较多，并有小米米粒大小、形似臭虫状的虫体为鲺病；体表有白色亮点，离水2小时后亮点消失则为小瓜虫病；部分鳞片处发炎红肿，有红点并伴随针状虫体寄生则为锚头鳋病；鱼苗、鱼种成群沿池塘边或池水表面狂游，且头部充血呈红点，死亡多且快，一般为车轮虫病；病鱼尾柄表皮发白则为白皮病；病鱼在水中头部或嘴部明显发白，离水后又不明显的为白头白嘴病；鱼下唇突出呈簸箕状则可能为池塘中缺氧浮头引起的；病鱼眼睛突出，且鳞片松立，一般为池塘中有中毒物所致；鱼体呈弯曲状可能是由于营养不良或有机磷中毒所致，营养不良性疾病属慢性病，而有机磷中毒则为急性中毒症，生产上根据经验容易将两者区别诊断。 2.根据鳃瓣症状诊断打开病鱼鳃盖，检查鳃有无异常，正常的鳃丝整齐、紧密、呈鲜红色。鳃丝腐烂、尖端软骨外露，并有污泥和粘液者则多为烂鳃病；鳃丝因盆血而发白，很可能是鳃霉病或球虫病；鳃丝末端挂着蝇明一样的白色小虫则为中华鲺病；鳃部浮肿，鳃盖张开不能闭合、鳃丝失去鲜红色呈暗淡色则为指环虫；鳃丝呈紫红色，粘液较少风吹草动可能为池塘中缺氧所致；鳃丝呈紫红色，并伴有大量粘液，则应考虑是否为中毒性疾病，如过量使用有机氯消毒剂时，这种现象较常见。 3.根据肠道症状快速诊断剖开病鱼腹部，检查肠道，正常鱼的肠道充满食物或粪便，肠壁呈肉红色。若肠道全部或局部出现充血，肠壁不发炎者为出血病；充血发炎且伴有大量黄色粘液者，则为肠炎病；前肠段肿大，但肠道颜色外观正常，肠壁内含有许多白色絮状物小结，则为球虫病或粘孢子虫病。

疟疾快速诊断试剂卡说明书

疟疾快速检测试卡使用说明书一、产品用途用于全血标本中恶性疟原虫抗原和四种疟原虫（恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫）共有抗原的鉴别性检测二、产品信息三、产品描述 BinaxNOW?疟疾快速检测试剂是一种用来定性的检测全血标本中的疟原虫抗原的体外快速诊断试剂（RDT）。它不仅可以在15分钟内检测人是否感染疟疾，而且可以判断所感染的是恶性疟（P.f.）还是其它3中疟原虫【间日疟（P.v.）、卵形疟（P.o.）、三日疟（P.m.）】或恶性疟与其它3种疟原虫的混合感染。四、疟疾相关知识疟疾是一种可向各年龄的人传播的疾病。它是由疟原虫种类的寄生虫引起的，通过受感染蚊虫的叮咬在人际传播。如未及时进行治疗，疟疾可引起通常致命的严重疾病。类型：恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫。最常见的是恶性疟原虫和间日疟原虫。恶性疟原虫是到目前为止最致命的一种疟疾感染。危害：每30秒就有一名儿童死于疟疾。每年有100多万人死于疟疾，主要是婴幼儿和孕妇。易感人群：大多数病例和死亡发生在撒哈拉以南非洲。但是，亚洲、拉丁美洲、中东以及欧洲部分地区也受到影响。从无疟疾地区往有疟疾传播地区的旅行者极其脆弱。他们免疫力很弱或没有免疫力，通常在回国之后面临延迟或错误的疟疾诊断。五、作用原理产品应用免疫层析技术（ICT）。一个试剂条中应用了2种不同单克隆抗体，分别来检验血样中是否有 HRPII抗原（恶性疟独有）及“泛疟疾抗原” （Pan-malaria）（四种疟原虫共有）。两种不同的单克隆抗体以及另外一种质控抗体，被固定在膜支撑物上，形成了三条不同的线。膜支撑物与加样垫相连，加样垫浸渍了已经结合可视粒子的质控抗体与抗－疟原虫抗体。结合在一起的膜支撑物与加样垫组成了完整的检测条。该检测条与洗脱垫与吸收垫被一起置于一个书形、铰链状的检测卡中。这就构成了一个完整的快速检测试剂卡。检测时，将全血加到加样垫上，血样中存在的疟原虫抗原与抗疟原虫抗体结合物结合。将A 试剂液加到检测条的底部，使抗原结合物复合物沿检测条流动。固定的抗－疟原虫抗体捕获抗原结合物，形成检测线。固定的质控抗体捕获质控结合物，形成质控线。一旦血样流过检测条，将检测卡闭合，使加到冲洗垫中的A 试剂把检测条上多余的血液洗去。

快速检测技术终极版

快速检测技术终极版文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]

1.食品加工中危害分为哪三个方面，每一方面包括哪些因素 ⑴生物性危害：细菌性危害、真菌性危害、病毒性危害、寄生虫危害、虫鼠害 ⑵化学性危害：天然毒素及过敏原、农药残留、兽药残留、激素残留、重金属超标、添加剂滥用和非法使用、包装材料、容器与设备带来危害 ⑶物理性危害：非正常外来杂质（如玻璃、石头、金属、塑料等）。 2.简述快速检测定义在短时间内，如几分钟、十几分钟，采用不同方式方法检测出被检物质是否处于正常状态，检测得到的结果是否符合标准规定值，被检物质本身是不是有毒有害物质，由此而发生的操作行为称之为快速检测。 3.简述食品安全快速检测意义 ①快速检测是食品安全监管人员的有利工具：在日常卫生监督过程中，除感官检测外，采用现场快速检测方法，及时发现可疑问题，迅速采取相应措施，这对提高监督工作效率和力度，保障食品安全有着重要的意义。②快速检测是实验室常规检测的有益补充: 采用快速检测，可使食品安全预警前移，可以扩大食品安全控制范围。对有问题的样品必要时送实验室进一步检测，既提高了监督监测效率，又能提出有针对性的检测项目，达到现场检测与实验室检测的有益互补。③快速检测是大型活动卫生保障与应急事件处理的有效措施：在大型活动卫生保障中，为了防止发生群发性食物中毒④快速检测是中国国情的一种需要：中国在提高食品安全整体水平方面仍有很长的路要走，快速检测将会在其中起到积极有效的作用。 4.现场快速检测方法形式有哪些试纸法:用试纸直接显色来定性并作为限量指示、用试纸层析显色或层析后胶体金显色来定性或作为限量指示、用试纸显色的深浅来半定量。试管法：用速测管显色来定性、

第三代试管婴儿PGSPGD基因筛查诊断技术

第三代试管婴儿 P G S P G D基因筛查诊断技术内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）

第三代试管婴儿PGS/PGD基因筛查诊断技术第三代试管婴儿PGS/PGD基因筛查诊断技术的出现，为众多有家族遗传病史的患者带来了希望，第三代试管婴儿先进的基因筛查诊断技术不仅可以对家族遗传病筛查，也可以为大龄夫妇诊断染色体是否有异常，。第三代试管婴儿技术的好处在于，能为各种原因引起的染色体异常提供精确的检测，从根源上防止了宝宝先天性疾病的发生，现在第三代试管婴儿技术已经得到较广泛的应用，但是值得一提的是，第三代试管婴儿技术最先进的是美国，例如在美国梦美（HRC）生殖医疗中心，可以筛查出125种遗传病，这是其他国家的水平所达不到的。为了解决这一社会难题，一直工作在不孕不育和试管婴儿领域的专家们，在原有的第一代常规试管婴儿(IVF-ET)和第二代单精子注射技术(ICSI)的基础上拓展了试管婴儿的应用领域：第三代试管婴儿胚胎植入前遗传学筛查诊断(PGS/PGD)应运而生。看到这里，您是否有“千呼万唤始出来”的感觉，但它并不是“犹抱琵琶半遮面”。PGS/PGD基因筛查诊断在保证宝宝出生后健康方面上成效是巨大的。美国梦美（HRC）能对125种遗传学疾病做出最准确的判断。试管婴儿助孕技术简单地说就是把精子和卵子取出体外，在体外使精卵结合形成受精卵，把受精卵培养至第五天对胚胎进行PGS/PGD遗传学疾病筛查诊断，该数据会帮助医生选择染色体数目和结构正常的胚胎移植到母体内，淘汰遗传学非正常胚胎。然后将健康的胚胎移植到女性子宫内着床、妊娠，并发育成胎儿，怀孕十月，最后成功分娩。那么，试管婴儿PGS/PGD遗传病筛查诊断是怎么做到鉴定胚胎的健康与否的呢? 美国梦美（HRC）专家说，一个健康的卵细胞含有46个染色体，排列成23对，但在卵细胞受精之前，先要进行一次减数分裂，每对染色体一分为二，其中