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转染试剂使用注意事项

1.细胞密度：转染DNA（质粒）时，细胞密度为80-100%，转染RNA(siRNA

或miRNA)时，细胞密度为60-80%，具体细胞密度必须结合考虑核酸种类、转染试剂种类和细胞生长密度极限；

2.DNA用量：0.5-1ug/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实验

确定；

3.RNA用量：10-30 pmol/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实

验确定；

4.转染试剂的用量：转染试剂说明书推荐了一个使用范围，具体用量根据转染

效率检测实验确定；

5.根据转染效率检测实验确定核酸的用量及转染试剂的用量（核酸与转染试剂

的比例关系），转染效率检测实验一般在24孔板中进行，其他格式的培养器皿请根据底面积的比例（表1）进行计算；

6.转染试剂使用前才从4℃中取出，取用前，先短暂离心（转速达到3000RPM

时即可停止），然后放在涡旋振荡器上点动混匀三次，每次持续1秒，混匀后短暂离心（转速达到3000RPM时即可停止），上述措施是为了混匀转染试剂，保证使用效果，使用后立即放回4℃保存；

7.核酸和转染试剂分别用Opti-MEM（这是专用的转染稀释培养基，如果没有

Opti-MEM，可以用细胞对应的基础培养基代替）稀释，稀释的核酸可以通过弹匀，吹打均匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀（三次，每次持续1秒），稀释的转染试剂可以通过弹匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀（三次，每次持续1秒），不可使用吹打均匀；混匀后均需短暂离心；

8.把稀释的核酸和稀释的转染试剂复合混匀时，应该把稀释的核酸加入稀释的

转染试剂中（顺序不可调转）；加入后立即进行（不要耽搁）弹匀或颠倒混匀（稀释的核酸和稀释的转染试剂一旦复合，转染复合物的形成立即启动，如果不及时混匀，所形成的转染复合物的效率就会很低），先不进行短暂离心，待所有的管子复合完毕后，在一起进行涡旋点动混匀三次，每次持续1秒，然后短暂离心；

9.转染复合物孵育形成时尽量避光室温或37℃放置；

10.如果进行RNA转染时，尽量使用无酶及灭菌处理的耗材；

11.Opti-MEM用量参照转染说明书建议的用量；

表1：