单克隆抗体技术相关总结
单克隆抗体工作总结怎么写
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单克隆抗体工作总结。
单克隆抗体是一种高度特异性的抗体，由单一的B细胞克隆产生，具有广泛的应用价值。
在生物医学领域，单克隆抗体已经成为一种重要的工具，用于疾病诊断、治疗和研究。
在本文中，我们将对单克隆抗体的工作原理、制备方法和应用进行总结。
首先，单克隆抗体的工作原理是基于免疫系统的原理。
当外源抗原进入机体后，免疫系统会产生一系列抗体，其中包括多克隆抗体和单克隆抗体。
多克隆抗体是由多个B细胞克隆产生，具有不同的特异性，而单克隆抗体则是由单一的B细胞克
隆产生，具有高度特异性。
这种高度特异性使得单克隆抗体成为一种理想的生物医学工具。
其次，单克隆抗体的制备方法主要包括免疫动物、细胞融合和单克隆筛选。
首先，通过免疫动物（如小鼠、兔子等）注射抗原，激发免疫反应，产生抗体。
然后，从免疫动物的脾细胞中分离出B细胞，并与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
最后，通过单克隆筛选的方法，筛选出特异性较强的单克隆抗体。
最后，单克隆抗体在生物医学领域具有广泛的应用价值。
在临床诊断中，单克
隆抗体可以用于特定疾病的检测，如癌症标志物的检测；在疾病治疗中，单克隆抗体可以用于靶向治疗，如抗肿瘤药物；在疾病研究中，单克隆抗体可以用于疾病机制的研究，如免疫组织化学染色。
总之，单克隆抗体作为一种高度特异性的抗体，在生物医学领域具有重要的应
用价值。
通过对单克隆抗体的工作原理、制备方法和应用进行总结，我们可以更好地理解和应用这一生物医学工具，为疾病诊断、治疗和研究提供有力支持。
高中生物单克隆抗体实验总结
⾼中⽣物单克隆抗体实验总结 考试是检测学⽣学习效果的重要⼿段和⽅法，考前需要做好各⽅⾯的知识储备。
下⾯是店铺为⼤家整理的⾼中⽣物单克隆抗体实验总结，希望对⼤家有所帮助! ⾼中⽣物单克隆抗体实验总结 (⼀)动物的选择 ⽬前应⽤最⼴的是⼩⽩⿏和⼤⽩⿏，尤以⼩⽩⿏为好。
就品系⽽⾔以Balb/c⼩⽩⿏应⽤最⼴，由于所有的⼩⽩⿏⾻髓瘤系均从Balb/c⼩⽩⿏系诱导出来。
Balb/c系⼩⽩⿏必须⽤纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。
⼤⽩⿏也可，能产⽣较多量的单抗体。
现在已经在⼩⿏杂交瘤的基础上，发展了⼩⿏-⼤⿏，⼩⿏-⼈以及⼈-⼈杂交瘤技术。
(⼆)免疫 ⼀般⽽⾔，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。
免疫程序、剂量和⽅法是关系到是否能得到所需要的单抗体的关键之⼀。
正常⼩⿏脾脏含有能产⽣各种不同抗体的B淋巴细胞，⼀只纯种⼩⽩⿏估计能产⽣1.0×107~5.0×107种不同的抗体。
因此⼀只正常的⼩⽩⿏的脾细胞与⼩⿏⾻髓瘤融合，只能有千万分之⼀的机会获得某⼀种特定抗体。
所以为了进步得到某种杂交瘤的机会，必须加强免疫，使产⽣特异性抗体的B淋巴细胞⼤量增加。
B淋巴细胞的不同发育阶段对获得阳性杂交瘤也有很⼤影响。
有⼈以为处在转化时期的B淋巴细胞可能更易于融合，⽽免疫以后7~8天，固然是抗体产⽣的⾼峰时期，但形成有活⼒的杂交瘤细胞的可能反⽽减少。
故⼀般以为加强免疫后的第三天应杀⿏取脾做细胞融合。
1.可溶性抗原(蛋⽩质) 以1mg/ml～5mg/ml的溶液加等量的弗⽒完全佐剂乳化，分多点⼩⿏⽪下注射，总量为0.3ml～0.6ml，间隔3～5周再同样注射⼀次，10天后，断尾取⾎⼀滴，测抗体效价，选滴度⾼的⼩⿏做融合试验。
⼀个⽉后可以经静脉(尾静脉)给予⽆佐剂抗原0.2ml～0.4ml，3～4天后，杀死⼩⿏取脾做融适⽤。
2.颗粒性抗原如抗原来源⽅便，可以不加佐剂⽽增加免疫次数，缩短间隔时间。
单克隆抗体药物关键技术分析教学总结
单克隆抗体药物关键技术分析1.高通量的动物细胞表达技术一方面，从表达体系来看，近年来，人们不断发展和完善了许多抗体分子的表达体系，如：细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞、植物细胞表达系统和体外翻译系统等。
哺乳动物细胞表达系统具有活性高、稳定性好等重要优点，已成为抗体等生物技术产品最重要的系统。
2007年销售额排名前列的6类生物技术药物中，有5类是由动物细胞表达生产（肿瘤治疗抗体类、抗TNF-α抗体类、EPO 类、β干扰素类、凝血因子类），仅胰岛素类药物是由大肠杆菌和酵母表达的。
欧美国家哺乳动物细胞表达产品种类占60%-70%，市场份额占65%以上。
另一方面，从抗体制备规模、速度和功能来看，高通量抗体制备技术的发展十分重要。
哺乳动物细胞表达生物技术产品大规模高效培养技术是生物医药产品主要的生产方式和关键“瓶颈”技术。
目前，国际上该项技术发展较快，已趋成熟，以默克公司为代表的流加培养生产规模达10,000L以上，以贝尔公司为代表的灌流培养生产规模达200L以上，蛋白表达浓度为0.5-2g/L；我国在该技术领域起步较晚，基础较差，但近年来经过努力，已经实现了该项技术的突破。
2.人源化抗体的构建及优化技术随着免疫学和分子生物学技术的发展以及抗体基因结构的阐明，DNA重组技术开始用于抗体的改造。
抗体药物已经进入基因工程抗体时代。
基因工程抗体具有以下优点：①降低人体对异种抗体的排斥反应；②减小抗体的分子量，利于其穿透血管壁，进入病灶的核心部位；③根据需要，制备新型抗体；④采用多种表达方式，大量表达抗体分子，降低生产成本。
(1)表面重塑抗体对鼠抗体表面氨基酸残基进行人源化改造。
该方法的原则是仅替换与人抗体SAR差别明显的区域，在维持抗体活性并兼顾减少异源性基础上选用与人抗体表面残基相似的氨基酸替换；另外，所替换的区段不应过多，对于影响侧链大小、电荷、疏水性，或可能形成氢键从而影响到抗体互补决定区（CDR）构象的残基尽量不替换。
单克隆抗体技术（文献综述）
文献综述—单克隆抗体技术的原理、发展与主要的实验步骤1. 单克隆抗体制备的基本原理经免疫的动物产生的致敏B淋巴细胞能分泌特异性的抗体，但这些细胞不能在体外长期存活；而骨髓瘤细胞则可以在体外大量地、无限地繁殖，但不能分泌特异性的抗体。
如果应用杂交瘤技术使骨髓瘤细胞与那些能分泌特异性抗体的细胞相融合，那么得到的杂交瘤细胞（hybridoma cell）将同时具有两种亲本细胞的特性：既能够象肿瘤细胞那样无限繁殖，又具有B淋巴细胞的不断分泌抗体的能力。
根据克隆选择学说，由于每个致敏的B淋巴细胞只能针对同一抗原决定簇产生同种的、完全一样的抗体，所以经过克隆化的杂交瘤细胞就能够分泌对某一抗原决定簇具有特异性的单克隆抗体。
这就是单克隆抗体制备的基本原理。
2. 单克隆抗体技术的诞生、发展和展望1975年，George Kohler 和 Cesar Milstein在Nature上发表了一篇文章，第一次描述了一种获得单克隆抗体的方法。
他们所创立单克隆抗体技术给免疫学乃至整个生物医学领域带来了一次巨大的革命。
Kohler 和Milstein 也因此而荣获1984年诺贝尔奖。
单克隆抗体技术诞生后，立即引起了许多研究者的注意，人们纷纷投入这一崭新领域的研究。
经过多年的发展，到二十世纪八十年代中期，单克隆抗体技术已日臻完善，单克隆抗体也开始广泛应用于生物医学研究和生物技术的各个领域，以及临床诊断和治疗的许多领域。
最初，单克隆抗体技术是以小鼠－小鼠杂交瘤为研究的中心而发展起来的。
由于小鼠源性的单克隆抗体在生产与应用中有其内在的缺点，八十年代后，小鼠－大鼠、大鼠－大鼠、小鼠－人以及人－人杂交瘤技术也被尝试并取得了不同程度的成功,有力地推动了单克隆抗体技术的发展和生物医学研究的深入。
尽管早有准备,单克隆抗体技术的影响之深远还是大大超出了人们的预想：在八十年代中到九十年代末的短短十多年中，为了满足临床诊断和治疗的需要，双特异性抗体技术及人－鼠嵌合抗体技术、人源化抗体技术、小分子抗体技术、植物基因工程抗体技术、抗体酶技术、抗体库(噬菌体显示）技术、外因鼠(XenoMouse)技术等基因工程抗体技术在经典单克隆抗体技术的基础上也被创立并得到了突飞猛进的发展。
单克隆抗体制备的主要技术
单克隆抗体制备的主要技术单克隆抗体制备的主要技术_______________________________单克隆抗体（Monoclonal Antibody，简称mAb）是一种特殊的抗体，它们可以特异性地识别抗原，并且具有极高的特异性和稳定性。
它们已经在临床治疗和诊断方面发挥了重要作用，因此单克隆抗体制备技术已成为生物医学研究的重要手段。
一、单克隆抗体制备的基本原理单克隆抗体制备的基本原理是将一种特定的抗原分子和一种抗原特异性的抗体分子连接起来，从而产生一种特定的单克隆抗体。
这种联合物可以由一种具有抗原特异性的单克隆抗体分子或多克隆抗体分子所表示。
单克隆抗体制备的基本过程可分为四个步骤：选择抗原；制备抗原；选择和培养单克隆抗体产生细胞；制备和纯化单克隆抗体。
1、选择抗原在进行单克隆抗体制备时，首先必须选择一种特定的抗原，以便于产生特异性的单克隆抗体。
常用的抗原来源有蛋白质、多肽、核酸、糖蛋白和合成化学物质。
2、制备抗原根据所选用的抗原，可采用不同的方法对其进行制备。
例如，蛋白质通常可以采用蛋白质表达或免疫原制备方法；多肽可以采用合成方法或者从天然蛋白质中分离出来；核酸可以采用合成方法或者从样品中分离出来；糖蛋白可以采用表达方法或者从天然蛋白质中分离出来；而合成化学物质可以直接合成。
3、选择和培养单克隆抗体产生细胞在单克隆抗体制备中，必须使用能够产生特异性单克隆抗体的产生细胞。
目前常用的单克隆抗体产生细胞包括B细胞、T细胞和流感株融合细胞。
在这些产生细胞中，B细胞是最常用的，因为它能够快速、有效地产生大量的特异性单克隆抗体。
4、制备和纯化单克隆抗体当B细胞产生了足够数量的单克隆抗体之后，就可以采用不同的方法将它们制备和纯化出来。
常用的方法包括浸出法、寡核苷酸酶切法、蛋白酶浸出法、杂交法和Ion-exchange chromatography。
这些方法可以帮助我们得到高度纯化的单克隆抗体。
二、单克隆抗体制备的优势单克隆抗体制备是一种高效、可靠的方法，它可以用来高通量地产生大量特异性的单克隆抗体。
单克隆抗体技术手册
单克隆抗体技术手册一、什么是单克隆抗体技术单克隆抗体技术，简单来说，就是一种能够生产出大量高纯度、高特异性抗体的生物技术。
在生物医学领域，它就像是一把精准的钥匙，能够准确地打开特定疾病的“锁”。
抗体，大家都知道，是我们身体免疫系统产生的用来对抗病原体的“武器”。
但传统方法得到的抗体往往是混合物，纯度不高，特异性也有限。
而单克隆抗体技术则改变了这一局面。
二、单克隆抗体技术的原理要理解单克隆抗体技术，得先从免疫系统说起。
当我们的身体受到病原体入侵时，免疫系统中的 B 淋巴细胞会被激活，产生抗体来对抗病原体。
每个 B 淋巴细胞产生的抗体都略有不同。
单克隆抗体技术的核心就是要从众多的 B 淋巴细胞中，筛选出一个能够产生我们所需要的特定抗体的细胞。
这个过程就像是在大海里捞针。
首先，将抗原（比如某种疾病的蛋白质）注射到小鼠体内，让小鼠的免疫系统产生反应。
然后，从小鼠的脾脏中取出产生抗体的 B 淋巴细胞。
接下来，将这些 B 淋巴细胞与一种能够无限增殖的骨髓瘤细胞融合。
这一步非常关键，因为骨髓瘤细胞可以不停地分裂生长，而 B 淋巴细胞能够产生抗体。
融合后的细胞就兼具了两者的优点，既能产生抗体，又能无限增殖。
然后，通过特定的筛选方法，找出那些能够产生我们所需要的抗体的融合细胞。
这些细胞就是单克隆抗体的“源头”。
三、单克隆抗体技术的步骤1、免疫动物选择合适的动物（通常是小鼠），给它们注射特定的抗原，激发免疫系统产生抗体反应。
2、细胞融合将免疫后的动物脾脏细胞（包含产生抗体的 B 淋巴细胞）与骨髓瘤细胞在一定条件下进行融合。
3、筛选与克隆使用特定的培养基和检测方法，筛选出能够产生目标抗体的融合细胞。
然后对这些细胞进行克隆培养，得到大量相同的细胞。
4、抗体的提取与纯化从培养的细胞上清液或细胞内提取抗体，并通过一系列的纯化方法，去除杂质，得到高纯度的单克隆抗体。
四、单克隆抗体技术的应用1、疾病诊断单克隆抗体可以特异性地识别疾病相关的标志物，用于疾病的早期诊断。
单克隆抗体高三知识点
单克隆抗体高三知识点单克隆抗体是一类由单一种克隆的细胞分泌的抗体，其具有特异性和高亲和力的特点。
现在让我们来了解一下高三生物单克隆抗体的一些重要知识点。
一、单克隆抗体的概念单克隆抗体是指通过将与特定抗原结合的淋巴细胞与癌症细胞融合，从而获得一种能够识别与之融合的抗原的抗体。
二、制备单克隆抗体的步骤1. 抗原注射：将目标抗原注射到小鼠体内。
2. 细胞融合：分离与抗原结合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞，使它们融合成为杂交瘤细胞。
3. 杂交瘤细胞筛选：利用杂交瘤细胞的克隆性，将其培养于选择性培养基中，筛选出能够产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆。
4. 杂交瘤细胞培养：将筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞克隆培养，并收集细胞培养液。
5. 检测单克隆抗体：使用不同的方法对单克隆抗体进行检测，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫组织化学（IHC）等。
三、单克隆抗体的应用1. 生命科学研究：单克隆抗体可以用于研究细胞分子组成、细胞信号传导途径、蛋白质相互作用等。
2. 临床诊断：单克隆抗体可以用于检测疾病标志物，如癌胚抗原、风湿因子等，提高疾病的早期诊断率。
3. 药物研发：单克隆抗体具有特异性和高亲和力，可以作为药物靶点，用于治疗肿瘤、自身免疫病等疾病。
4. 蛋白质纯化：单克隆抗体可以用于纯化目标蛋白质，提高纯度和产量。
四、单克隆抗体的优势和局限性1. 优势：单克隆抗体具有高特异性和高亲和力，能够准确识别目标抗原，具有较低的交叉反应性。
2. 局限性：制备单克隆抗体的过程较为复杂和耗时，制备成本较高；同时，单克隆抗体可能存在较长的保护期，需要定期验证。
五、常见的单克隆抗体药物1. 曲妥珠单抗（Rituximab）：用于治疗非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病等。
2. 重组人源化抗EGFR单抗（Cetuximab）：用于治疗表达高表皮生长因子受体的转移性结直肠癌等。
3. 格列卫单抗（Trastuzumab）：用于治疗表达高表皮生长因子受体2的早期和转移性乳腺癌等。
【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体
【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体单克隆抗体：1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。
从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
2、单克隆抗体的制备（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞（2）获得杂交瘤细胞①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
（3）克隆化培养和抗体检测（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取3、单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。
(2)用于治疗疾病和运载药物。
血清抗体与单克隆抗体的比较：名称产生特点血清抗体由B淋巴一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌特异性强，灵敏度高，能大量制备知识点拨：1、融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选。
2、筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞。
3、杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
5、单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。
知识拓展：制备单克隆抗体过程中的筛选：筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。
筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。
因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。
相关高中生物知识点：植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术：1、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。
单克隆抗体的优点及应用
单克隆抗体的优点及应用单克隆抗体指的是在体外培养中由单个克隆细胞产生的抗体，具有以下优点：1. 高度特异性：单克隆抗体只能识别和结合特定的抗原，从而实现高度特异性的识别分析。
这种高度特异性使得单克隆抗体在医学诊断、生物学研究和治疗中具有重要作用。
2. 高度稳定性：单克隆抗体经过长时间体外培养定向生产，具有较高的稳定性和一致性。
相比多克隆抗体，单克隆抗体的生产工艺更加可控，能够规避批次间的变异性。
3. 丰富的供应来源：单克隆抗体可以通过体外培养细胞的方式进行生产，而不依赖于动物体内免疫。
因此，可以实现大规模、高效率的抗体生产，并且能够满足临床和科研的需求。
4. 可调控的亲和力：通过对单克隆抗体的序列进行修饰和工程化，可以实现对其亲和力的调节。
这使得单克隆抗体在不同应用中，如免疫检测、药物传送和治疗等方面具有更高的灵活性。
单克隆抗体在各个领域都有广泛的应用：1. 临床诊断：单克隆抗体可用于各种免疫检测和诊断方法中，如ELISA、免疫荧光、免疫组织化学等。
例如，单克隆抗体可以用于检测特定癌细胞标志物，帮助早期诊断癌症，并监测疾病治疗的疗效。
2. 疾病治疗：单克隆抗体可以作为治疗药物，用于疾病的预防和治疗。
例如，单克隆抗体可以用于免疫疗法，通过结合特定抗原靶点来激活免疫系统，以治疗疾病如癌症、风湿性关节炎等。
3. 药物研发：单克隆抗体可用于药物研发的多个环节。
首先，通过单克隆抗体的选择，可以筛选出特定靶点的抗体药物。
其次，单克隆抗体也可用于药物的毒性测试和临床试验的监测，为药物的研发提供重要的技术支持。
4. 生物学研究：单克隆抗体在生物学研究中具有广泛的应用。
例如，可以利用单克隆抗体来研究特定蛋白质的功能、表达和定位。
此外，还可以利用单克隆抗体进行细胞或组织样本的免疫荧光染色，以实现对细胞和组织结构的分析。
5. 农业和食品安全：单克隆抗体也可以应用于农业和食品安全领域。
例如，可以利用单克隆抗体来检测和监测农业有害生物，或者检测食品中存在的有害物质和污染物。
单克隆抗体的制备及应用心得体会200字
单克隆抗体的制备及应用心得体会200字单克隆抗体既具有高度均一性、同时又具有针对性。
由于单克隆抗体的制备方法是杂交瘤技术，所以，研究的动物对象不需要不断地进行免疫。
为此单克隆抗体技术受到现代科技青昧和世人嘱目。
因此，在高中生物中给学生介绍一些单克隆抗体技术及应用，有利于诱导他们对生命科学的探究，也有利于他们形成生物科学发展的核心素养。
很多人因疾病而备受煎熬，疾病是人类的“天敌”，人类无时无刻不在对疾病的预防和治疗进行科学研究。
众所周知，现在最大的杀手“肿瘤”疾病的治疗成为生命科学的重要研究对象。
当今，科研人员采用单克隆抗体技术对疾病进行治疗进展显著，其中将单克隆抗体同药物的藕联，然后与病原体或肿瘤的特异抗原结合技术起到很好的疗效，并成为常态。
高二单克隆抗体知识点
高二单克隆抗体知识点随着科学技术的发展，单克隆抗体作为一种重要的生物学工具和医学研究用药得到广泛应用。
在高二生物学学习中，单克隆抗体是一个重要的知识点，下面将介绍单克隆抗体的原理、制备方法以及应用领域。
一、单克隆抗体的原理单克隆抗体是由一种单一种细胞发出的抗体分子，这种抗体与特定的抗原结合，从而识别和消灭病原体或异常细胞。
抗体分子由两个相同的重链和两个相同的轻链组成。
每个抗体分子的重链和轻链有一段不变的区域，称为恒定区，和一段可变的区域，称为可变区。
可变区决定了抗体的特异性。
在人体免疫应答的过程中，B细胞分裂增殖并产生多种不同的抗体，其中只有其中一种抗体与抗原结合效果最好。
通过将这种特异性的B细胞分离出来，可以得到单克隆抗体。
二、单克隆抗体的制备方法1. 溶瘤和免疫球蛋白分离：首先，从一个抗原接种动物的脾脏中得到淋巴细胞。
然后，利用体外培养技术使淋巴细胞大量增殖产生杂交瘤细胞。
这些杂交瘤细胞能够持续产生大量抗体，即溶瘤体（Myeloma）。
之后，将这些溶瘤体与淋巴细胞融合，形成杂交细胞。
2. 杂交瘤筛选：杂交细胞具有溶瘤体的可持续产生抗体的能力，但失去了淋巴细胞的有机体抗原识别功能。
因此，需要将杂交细胞进行筛选，以找出能够识别特定抗原的细胞。
3. 克隆和培养：筛选出特异性的细胞后，进行细胞的克隆和培养。
在特定的培养条件下，这些克隆细胞可长时间产生单一种类的抗体，即单克隆抗体。
三、单克隆抗体的应用领域1. 生物学研究：单克隆抗体在生物学研究中被广泛应用。
它们可以用于特定蛋白质的检测和定位，帮助研究人员了解细胞的功能和相互作用。
此外，单克隆抗体还可以用于疾病诊断和治疗研究中。
2. 医学诊断：单克隆抗体在医学诊断中具有重要意义。
通过与特定抗原结合，可以检测患者体内特定病原体或肿瘤标志物的存在，从而实现疾病的早期诊断和监测。
3. 药物研发：单克隆抗体还广泛应用于药物研发领域。
许多目前正在使用的生物制剂都是通过单克隆抗体制备的，例如抗肿瘤药物和自身免疫疾病药物等。
单克隆抗体制备知识点总结
单克隆抗体制备知识点总结一、流程：二、说明：1、对小鼠的处理是：注射特定的抗原蛋白2、单克隆抗体制备过程中的三个“两”（1）诱导融合的两种细胞名称及作用：①骨髓瘤细胞；无限增殖②B淋巴细胞（效应B细胞、浆细胞）；产生特定抗体（2）两次筛选的目的及方法：①第一次：筛选出杂交瘤细胞；选择培养基②第二次：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞；克隆化培养及专一抗体检测（3）培养杂交瘤细胞的两个场所：①体外培养：从培养液中提取（该方法缺点：设备复杂，要有严格的条件限制，产量低，成本高。
）②体内培养：从小鼠腹水中提取（最常用的方法）（4）单克隆抗体制备所用到的两种技术：动物细胞培养、动物细胞融合（5）两个原理：细胞增殖、细胞膜流动性3、动物细胞融合特有的方法是：灭活的病毒。
（融合率低，有一定局限性。
）4、第二次筛选出的杂交瘤细胞的特点：①无限增殖②产生所需抗体5、单克隆抗体的优点:灵敏度高，特异性强，可大量制备6、单克隆抗体的用途：①作为诊断试剂：能准确地识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
②用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于其他疾病的治疗。
“生物导弹”＝“瞄准装置”（单克隆抗体）＋“杀伤性弹头”（药物）7、抗体的传统生产方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离所需抗体。
缺点是：产量低、纯度低，特异性差、灵敏度低。
练习：1、科研人员将抗癌药物连接在单抗上制成“生物导弹”用于癌症治疗。
“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是“杀伤性弹头”，分析下列有关描述，其中不正确的是[]A．“瞄准装置”由识别肿瘤的单克隆抗体组成B．“弹头”由放射性同位素、化学药物或毒素等物质构成C．“弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能D．“生物导弹”的制备应用了细胞工程技术2、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图（1）单克隆抗体制备过程用到了技术。
单克隆抗体高考知识点
单克隆抗体高考知识点是现代医学领域中的一项重要科学技术，它在抗体工程、药物研发、疾病治疗等方面具有广泛的应用。
本文将介绍的定义、制备方法、应用领域以及未来发展前景。
一、的定义是由单一种细胞克隆产生的抗体分子，具有高度特异性和亲和力。
它与多克隆抗体相比，具有更高的纯度和一致性，能够精确识别目标抗原，并且有助于减少不良反应。
二、的制备方法的制备通常包括以下步骤：抗原预处理、动物免疫、细胞融合、筛选和鉴定。
抗原预处理：将目标抗原处理成适合免疫的形式，如重组蛋白、多肽或细胞表面抗原。
动物免疫：将抗原注射到小鼠或其他合适的动物体内，刺激其产生抗体。
免疫周期通常为几周到数月。
细胞融合：收集小鼠体内的淋巴细胞，与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，称为杂交瘤。
筛选和鉴定：对杂交瘤细胞进行筛选，选择能够产生特异性抗体的细胞克隆。
通常使用ELISA、免疫组化等技术进行筛选和鉴定。
三、的应用领域1.药物研发：是药物研发领域的重要工具。
它们可以用于发现新的疾病治疗靶点，开发创新药物，并且可以用于疾病的早期诊断和个体化治疗。
2.肿瘤治疗：在肿瘤治疗中具有广泛应用。
例如，通过结合肿瘤抗原，可以识别和杀死肿瘤细胞，并激活免疫系统，促进肿瘤抗原的表达。
3.自身免疫性疾病治疗：可以用于治疗自身免疫性疾病，如风湿性关节炎、类风湿性关节炎等。
通过抑制免疫细胞的活性，减少炎症反应，从而缓解疾病症状。
4.传染性疾病治疗：可以用于治疗传染性疾病，如流感、艾滋病等。
通过识别和中和病原体，可以阻止病原体的侵袭和复制，从而治疗传染性疾病。
四、的未来发展前景的发展前景非常广阔。
随着技术的不断进步，的制备和应用将越来越方便和高效。
同时，随着人们对个体化治疗的需求增加，将在个体化医疗中发挥重要作用。
此外，随着基因编辑技术的快速发展，人们也开始研究通过基因编辑来构建抗体库，从而实现更高效的制备和应用。
总之，是一项具有重大意义的科学技术，它在医学领域中的应用潜力巨大。
单克隆抗体的制备技术
单克隆抗体的制备技术单克隆抗体是一种特定的抗体，由同一种克隆的B细胞产生，并具有相同的抗原结合特异性。
这种抗体制备技术是通过将B细胞与瘤细胞融合而形成的杂交瘤细胞来实现的。
以下是关于单克隆抗体制备技术的详细解释。
1. 免疫原制备：要制备单克隆抗体，首先需要准备免疫原。
免疫原可以是蛋白质、多肽、糖脂或其他小分子化合物。
免疫原的选择基于所需抗体的特异性。
一般来说，免疫原应具有较高的纯度，并且能够激发免疫系统产生特定的抗体。
2. 免疫动物免疫：接下来，将免疫原注射到实验动物体内，以激发其免疫系统产生抗体。
常用的实验动物包括小鼠、大鼠或兔子。
在注射过程中，免疫原通常与佐剂混合以增强免疫反应。
注射免疫通常在一段时间内进行多次，以确保充分激发免疫系统产生抗体。
3. B细胞的筛选和融合：在动物免疫后，从其脾脏或骨髓中收集B细胞。
这些B细胞是产生抗体的主要细胞类型。
通过在培养基中培养，可以增加B细胞的数量。
然后，将这些B细胞与一种名为骨髓瘤细胞的癌细胞融合。
这种骨髓瘤细胞有着无限增殖的能力，而B细胞则提供了抗体生产所需的特定性。
4. 杂交瘤细胞的筛选：融合后的细胞形成了杂交瘤细胞。
这些细胞具有两个来源的特性，具有骨髓瘤细胞的无限增殖能力和B细胞的抗体产生能力。
为了筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞，可以使用细胞培养基中的特定抗原进行筛选。
只有与特定抗原结合的杂交瘤细胞才能存活和增殖。
5. 克隆的建立：经过筛选后，单个杂交瘤细胞被分离并单独培养，以建立纯化的单个细胞克隆。
这些克隆细胞会持续产生与免疫原结合的特定抗体。
这些单克隆抗体可以通过培养细胞并收集培养上清液来获取。
6. 单克隆抗体的纯化和特性分析：单克隆抗体的纯化是将其从其他细胞产物和杂质中分离出来。
这通常包括离心、过滤和亲和层析等步骤。
纯化后的抗体可以进行各种特性分析，如亲和性测定、特异性测定和功能性分析等。
这些测试可以验证抗体的特异性和效能。
总结：单克隆抗体的制备技术是一种通过将免疫的动物B细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞的方法。
简述单克隆抗体技术的原理及应用
简述单克隆抗体技术的原理及应用1. 单克隆抗体技术概述单克隆抗体技术（Monoclonal Antibody Technology）是一种重要的分子生物学技术，用于制备高纯度、高亲和力的单克隆抗体。
该技术的研发与应用在医学、科研和生物工程领域有重要的应用价值。
2. 技术原理单克隆抗体技术是通过克隆和复制具有相同抗原特异性的抗体细胞群体，制备出一类抗体分子。
主要的步骤包括免疫原注射、融合、筛选和扩增等。
•免疫原注射：将特定抗原注射到小鼠或其他动物的体内，触发其免疫系统产生抗原特异性的抗体。
•融合：将免疫细胞与肿瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
•筛选：通过特定抗原与杂交瘤细胞的亲和力筛选出产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
•扩增：将单个抗体细胞扩增为大量的细胞群体，使其能够进行大规模生产。
3. 应用领域单克隆抗体技术在医学、科研和生物工程领域有广泛的应用。
3.1 医学应用•疾病诊断：单克隆抗体可以特异性地识别和结合特定的抗原，用于疾病的早期诊断。
•药物研发：单克隆抗体可以作为药物的靶点，用于开发和研制新的治疗药物。
•免疫治疗：单克隆抗体可以用于治疗癌症、自身免疫性疾病等疾病。
3.2 科研应用•蛋白质研究：单克隆抗体可以用于检测特定蛋白质的表达和功能研究。
•细胞信号转导：单克隆抗体可以用于研究细胞信号转导通路的机制和调控。
•分子识别：单克隆抗体可以用于分子的定位、识别和分析。
3.3 生物工程应用•生物药物生产：单克隆抗体可以用于生产大规模的重组抗体药物。
•生物传感器：单克隆抗体可以用于构建高灵敏度和高选择性的生物传感器。
•工业酶制剂：单克隆抗体可以用于酶的定向进化和改良。
4. 发展前景随着单克隆抗体技术在医学、科研和生物工程领域的不断发展和应用，其发展前景非常乐观。
随着技术的不断进步和成本的降低，单克隆抗体技术将有更广泛的应用和深入研究，同时也会推动其他相关技术的发展。
5. 结论单克隆抗体技术是一项重要的分子生物学技术，通过克隆和复制具有相同抗原特异性的抗体细胞群体，制备出具有高纯度、高亲和力的单克隆抗体。
简述单克隆抗体技术的基本原理
简述单克隆抗体技术的基本原理单克隆抗体技术是生物技术领域的一项重要技术，在医药研发、诊断和治疗等方面都有着广泛的应用和前景。
单克隆抗体技术的基本原理是通过选择一种特定的免疫细胞，获取它产生的特异性抗体并使其进行不限制性复制，最终获得具有高度特异性和稳定性的单克隆抗体。
下面将详细介绍单克隆抗体技术的基本原理，包括鼠源性、嵌合型和人源性单克隆抗体技术，以及单克隆抗体生产的流程和应用。
一、鼠源性单克隆抗体鼠源性单克隆抗体是最早使用的单克隆抗体，其制备原理是将鼠类动物免疫一种抗原，收集其脾细胞，将其与骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞，然后将杂交瘤细胞单克隆化，即从杂交瘤中分离出单个克隆细胞并培养扩大。
鼠源性单克隆抗体的优点是制备简单、产量高，但由于小鼠免疫系统与人类的巨大差异，鼠源性抗体往往容易引起免疫原性反应，从而限制了其在临床应用中的使用。
二、嵌合型单克隆抗体为了克服鼠源性单克隆抗体的局限性，研究人员提出了嵌合型单克隆抗体技术。
嵌合型单克隆抗体是由人源性的Fc区和鼠源性的可变区域组成，它可以确保高度特异性和稳定性的又可以降低免疫原性反应。
嵌合型单克隆抗体的制备方法是将人源性的IgG1的Fc片段与包含鼠源性单克隆抗体的可变区域进行基因重组，最终获得嵌合型单克隆抗体。
嵌合型单克隆抗体优点是高度特异性和稳定性、免疫原性反应小。
嵌合型单克隆抗体的制备过程较为复杂，且其效价可能比鼠源性单克隆抗体略低。
随着生物技术的不断发展，研究人员逐渐开始研制具有人源性的单克隆抗体，其能够更加充分地体现在人体内生物学免疫动态，从而降低了潜在的体内免疫原性反应。
人源性单克隆抗体制备方法有两种，一种是在小鼠背景中将人源性单克隆抗体进行筛选和生产，另一种是通过人免疫系统获得人源性单克隆抗体。
人免疫系统产生抗体的原理与小鼠类似，但需要额外进行一系列的筛选和优化步骤，以保证细胞系的干净和稳定性。
由于人源性单克隆抗体与人体内的免疫系统具有良好的兼容性和相似性，因此在临床应用中具有极高的价值。
单克隆抗体技术相关总结
单克隆抗体技术相关总结、前言1975 年，Kohler 和Milstein 发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。
这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。
虽然单抗技术已经非常成熟，但是由于其经济价值，仍然有很多人在从事这项研究，而且其中也会遇到很多这样那样大问题。
我本人就是其中一个，由于是第一次做单抗，所以过程中遇到了很多困难，终于在前几天得到了几株阳性克隆。
鉴于此，我将单克隆抗体制备的整个过程贴出来，同时搜索了丁香园里面一些战友的求助帖以及一些经典的应助帖，希望能对将要或是正在从事这项研究的战友们有些帮助。
、动物的免疫选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。
下面以细胞性抗原为例的免疫方案：初次免疫1×10７/0.5ml ip （腹腔内注射）↓ 2～3 周后第二次免疫1×10７/0.5ml ip↓ 3 周后加强免疫（融合前三天）1×10７/0.5ml ip 或iv （静脉内注射）↓取脾融合2.可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂：福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂。
要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。
商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫Ag 1～50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射│ （一般0.8 ～1ml 0.2ml/ 点）↓ 3 周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip│（ip 剂量不宜超过0.5ml ）↓ 3 周后第三次免疫剂量同上，不加佐剂，ip│ （5～7 天后采血测其效价，检测免疫效果）↓ 2～3 周后加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip 或iv↓3 天后取脾融合目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。
高三单克隆抗体知识点
高三单克隆抗体知识点单克隆抗体是一种高度特异性的抗体，具有重要的科研和临床应用价值。
下面将介绍关于高三单克隆抗体的相关知识点。
1. 单克隆抗体的定义单克隆抗体是由单个淋巴细胞或骨髓细胞克隆产生的抗体，它只能识别并结合一个特定的抗原。
与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有更高的特异性和亲和力。
2. 单克隆抗体的制备方法目前常用的单克隆抗体制备方法主要有混合细胞瘤技术、单细胞克隆技术和重组DNA技术等。
其中，混合细胞瘤技术是最早应用的方法，它通过将抗原刺激免疫细胞，然后与瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，最终获得单克隆抗体。
3. 单克隆抗体在医学领域的应用单克隆抗体在医学领域有着广泛的应用。
例如，它可用于肿瘤治疗，通过靶向抗原表面的癌细胞，抑制肿瘤生长和扩散；还可以用于自身免疫性疾病的治疗，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等；此外，单克隆抗体还可以用于病原体检测和疫苗研发等方面。
4. 单克隆抗体在科研领域的应用单克隆抗体在科研领域具有重要的应用价值。
它可以用于蛋白质研究，通过与感兴趣的蛋白质结合，实现对其功能和表达的研究；还可以用于细胞学研究，例如可用于免疫组化染色、流式细胞术等；此外，单克隆抗体还可用于免疫印迹、免疫沉淀等实验方法。
5. 单克隆抗体的局限性虽然单克隆抗体在医学和科研领域有广泛的应用，但也存在一定的局限性。
首先，制备单克隆抗体的过程较为复杂，需要相对较长的时间和专业技术。
其次，由于单克隆抗体的高特异性，一些病原体可能会突变，导致单克隆抗体的识别效果降低。
此外，制备单克隆抗体的成本较高，也限制了其在实际应用中的推广。
综上所述，高三单克隆抗体知识点的介绍包括了单克隆抗体的定义、制备方法，以及在医学和科研领域的应用。
了解和掌握这些知识点，有助于我们更好地理解和应用单克隆抗体，促进科学研究和医学发展的进步。
单克隆抗体技术相关总结
单克隆抗体技术相关总结一、前言1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。
这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。
虽然单抗技术已经非常成熟，但是由于其经济价值，仍然有很多人在从事这项研究，而且其中也会遇到很多这样那样大问题。
我本人就是其中一个，由于是第一次做单抗，所以过程中遇到了很多困难，终于在前几天得到了几株阳性克隆。
鉴于此，我将单克隆抗体制备的整个过程贴出来，同时搜索了丁香园里面一些战友的求助帖以及一些经典的应助帖，希望能对将要或是正在从事这项研究的战友们有些帮助。
二、动物的免疫选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
1. 颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。
下面以细胞性抗原为例的免疫方案：初次免疫1×10７/0.5ml ip （腹腔内注射）↓2～3周后第二次免疫1×10７/0.5ml ip↓3周后加强免疫（融合前三天）1×10７/0.5ml ip或iv（静脉内注射）↓取脾融合2. 可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂：福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂。
要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。
商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫 Ag 1～50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射│（一般0.8～1ml 0.2ml/点）↓3周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip│（ip剂量不宜超过0.5ml）↓3周后第三次免疫剂量同上，不加佐剂，ip│（5～7天后采血测其效价，检测免疫效果）↓2～3周后加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv↓3天后取脾融合目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。
动物细胞融合与单克隆抗体知识点总结
2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合1.概念指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。
2.融合原理细胞膜的流动性3.诱导方式物理法：电激等化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒（动物细胞融合独有）病毒灭活用物理或化学方法是病毒或细菌失去感染细胞的能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构为什么可以用灭活的病毒？病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合.4.意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能5.应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段；特别是杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
二、单克隆抗体1.获得抗体的传统方法把某种抗原反复注射到动物体内↓从动物血清中分离出所需的抗体。
缺点：产量低；纯度低；特异性差2.过程3.单克隆抗体的特点和应用（1）特点特异性强、灵敏度高、可大量制备（2）应用①诊断试剂②治疗疾病和运载药物主要用于癌症治疗抗癌单克隆抗体+同位素+化学药物（或细胞毒素）=生物导弹借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在位置。
优势：既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。
疗效高，毒副作用小。
※1.B淋巴细胞要经过免疫过程，才能产生相应的抗体，所以，与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞实际上是浆细胞。
2.在单克隆抗体制备过程中，有两次筛选：第一次是筛选出杂交瘤细胞(用选择培养基)；第二次是进一步筛选出能产生人们所需要抗体的杂交瘤细胞(用抗原—抗体结合法)。
3.1体内受精和早期胚胎发育一、卵子和精子的发生1.精子的发生的过程（1）场所:睾丸的曲细精管（2）时期：初情期生殖机能衰退（青春期）（3）过程：（4）精子的变形细胞核→精子头部的主要成分高尔基体→头部的顶体中心体→精子的尾线粒体→线粒体鞘膜其他物质→原生质滴（球状）※精子细胞变成精子的过程中，细胞中很多结构会消失，而细胞核和线拉体都保留下来，对这一现象怎样理解?为什么精子中的线粒体集中在尾的基部?①细胞核是精子遗传物质储存和复制的场所，也是参与精卵结合和后代遗传特性与细胞代谢活动的控制中心。
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单克隆抗体技术相关总结、前言1975 年，Kohler 和Milstein 发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。
这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。
虽然单抗技术已经非常成熟，但是由于其经济价值，仍然有很多人在从事这项研究，而且其中也会遇到很多这样那样大问题。
我本人就是其中一个，由于是第一次做单抗，所以过程中遇到了很多困难，终于在前几天得到了几株阳性克隆。
鉴于此，我将单克隆抗体制备的整个过程贴出来，同时搜索了丁香园里面一些战友的求助帖以及一些经典的应助帖，希望能对将要或是正在从事这项研究的战友们有些帮助。
、动物的免疫选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。
下面以细胞性抗原为例的免疫方案：初次免疫1×10７/0.5ml ip （腹腔内注射）↓ 2～3 周后第二次免疫1×10７/0.5ml ip↓ 3 周后加强免疫（融合前三天）1×10７/0.5ml ip 或iv （静脉内注射）↓取脾融合2.可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂：福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂。
要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。
商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫Ag 1～50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射│ （一般0.8 ～1ml 0.2ml/ 点）↓ 3 周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip│（ip 剂量不宜超过0.5ml ）↓ 3 周后第三次免疫剂量同上，不加佐剂，ip│ （5～7 天后采血测其效价，检测免疫效果）↓ 2～3 周后加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip 或iv↓3 天后取脾融合目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。
②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。
③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，促进免疫细胞对抗原反应性。
论坛资源：免疫小鼠的选择！（求助）单抗加强免疫到融合最多几天？单抗小鼠尾静脉免疫（求助）单抗babl/c 小鼠的免疫方案请教）用质粒免疫制备单抗单抗制备最后一次加强免疫方法（求助）如何用包涵体免疫小鼠制备单抗（求助）免疫原性很弱的抗原的单抗请教做单抗时小鼠免疫的时间间隔（求助）有关制备单抗时小鼠的免疫（求助）单抗制备的免疫方法（请教）免疫小鼠的选择！雌雄？（请教）免疫小鼠雌雄的选择（求助）免疫的鼠意外怀孕了，还能继续免疫吗？（交流）首次采用脾内免疫，第二次加强用完全佐剂还是用不完全佐剂好呢？（求助）免疫动物的实验操作指导（求助）免疫方案（求助）小鼠免疫方案的几个问题（求教）制备单抗的蛋白用量问题（求救）脂多糖免疫小鼠的方案（求助）小鼠免疫方法（求购）单克隆抗体制备中的动物免疫（求助）单抗加强免疫到融合最多几天？三、骨髓瘤细胞的选取骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白，这样的瘤细胞融合后，可能影响或降低所分泌抗体的滴度，所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。
选择骨髓瘤细胞的条件：①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系，以便两者的组织相容性抗原一致；②骨髓瘤细胞必须是静息状态，不产生γ球蛋白或不分泌到细胞外；③骨髓瘤细胞生长需要一个较高的细胞密度，最好106 个细胞/ml ；④生长速度快，繁殖时间短。
目前常用的Balb/c 小鼠产生的骨髓瘤细胞株有：① S194/5XXO?BU?1；②SP2/0—Ag14（简称SP2，常用）；③P2—X？?—Ag8?6?5?3（简称653）；④ FO以653最为常用，它是由矿物油4－甲基－15 烷（Pristane，降植烷）诱发出来的一种浆细胞瘤（Minerol Oil plasmacy toma ，MOPC ）并经过培育形成一株8- 氮鸟嘌呤有抵抗力的亚系。
骨髓瘤细胞一般由有关单位直接引入，保存于-195℃液氮罐中，试验时复苏、增殖、传代即可。
由于骨髓瘤细胞是半贴壁状态，很容易脱落，因此不需要胰酶处理。
很多书上说为了防止出现返祖现象，在融合前，可将培养基内加入15μg/ml 8 －氮鸟嘌呤，我个人认为没有这个必要，因为加入8-AG 之后，骨髓瘤细胞一般状态都不会很好，这样一来对于融合的影响更大。
论坛资源：（请教）sp2/0 骨髓瘤细胞的处理（求助）骨髓瘤细胞sp20 的生长特点？求助：小鼠骨髓瘤细胞培养（原创）SP2/0 小鼠骨髓瘤细胞株（求助）小鼠骨髓瘤细胞sp20可以用MEM 后DEME 培养吗？请教骨髓瘤细胞系相关问题，谢谢！（求助）骨髓瘤细胞sp2/0（请教）用作细胞融合的骨髓瘤细胞系有哪些（求助）Sp2/0 细胞复苏及培养需注意哪些事项？（总结）肿瘤细胞培养图片汇总（求助）细胞培养时遇到的问题（求助）加入过量谷氨酰胺对细胞有没有的影响请教关于sp2/0 细胞的培养（求助）在做单抗前，SP2/0 细胞是否需要筛选一下四、关于饲养细胞在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细胞（Feeder cell ）。
在细胞融合和单克隆的选择过程中，就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体，因此在这一过程中必须使用饲养细胞。
许多种类的动物细胞都可以做饲养细胞，如正常的脾细胞、胸腺细胞、腹腔渗出细胞等，常选用腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。
应用腹腔渗出细胞的好处是：一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死亡的细胞和细胞碎片，为融合细胞的生长造成良好的环境。
腹腔细胞的来源可以是与骨髓瘤细胞同系鼠。
也可以是其他种类的小鼠，如C57 鼠，昆明小白鼠等。
1．材料（1）小鼠（Balb/c 或C57 小白鼠）若干只。
（2）11.6％蔗糖溶液（经10 磅30min 高压灭菌）。
2．操作方法（1）拉颈处死小鼠。
（2）70％酒精浸泡消毒10min。
（3）用手术剪将小鼠腹部剪开一小口，剥开皮肤，露出腹腔。
（4 ）用注射器将4ml 11.6％蔗糖溶液注入腹腔，用手指轻揉1min 仍用该注射器回抽腹腔液体，加入离心管。
（5 ）1000r/min 离心10min 。
（6）取上清，以HAT 选择培养液将细胞制成悬液。
台盼蓝染色计数活细胞，使每毫升含40 万个活细胞。
（7）以1ml 吸管将细胞种入微量培养皿，每孔0.05ml ，含2 万个细胞，放入CO2 培养箱培养，即可供细胞融合和克隆化之用。
如果在融合后发现在培养孔中饲养细胞数量少，则可以在细胞换液时再加入一些。
个人认为取饲养细胞时切忌贪心，别总是想多取一些，因为这样有可能造成一些不必要的麻烦，我又一次取饲养细胞时就曾经将不知是什么血管刺破，导致所取的饲养细胞里面出现大量的红细胞。
有人说饲养细胞可以不用，我觉得还是用一点比较好，但是一定不要太多，占到30%就足够了，太多了很影响细胞的观察，而且会导致骨髓瘤等细胞不能很好的贴壁。
论坛资源：求助：关于单抗制备中的饲养层细胞（讨论）制备单抗过程中小鼠的饲养条件请问BALB/c 小鼠冲洗腹部得到的巨噬细胞数量大约为多少？（公告）难得的加分好机会！诚邀您携手缔造细胞图片新精彩！五、取脾脏融合用的免疫脾细胞指的是处于免疫状态脾脏中B 淋巴母细胞和浆母细胞。
一般取最后一次加强免疫3 天以后的脾脏，制备成细胞悬液，由于此时B 淋巴母细胞比例较大，融合的成功率较高。
取脾脏也是一个比较重要的环节，可以说如果出现污染有很大一部分原因是由于融合过程引起的，还有一部分原因就是由于取脾脏这个环节引起的。
取脾脏的要点就是一定要尽量无菌操作，根据实际情况来看，完全无菌是不可能的，但是取脾脏的时候一定要尽量减少操作的时间，主要是研磨这一环节。
在研磨之前取脾脏之后，首先要将脾脏上面包被的膜剪掉，这样会节省很多研磨的时间。
脾细胞悬液的制备：在无菌条件下取出脾脏，用不完全的培养液洗一次，置平皿中不锈钢筛网上，用注射器针芯研磨成细胞悬液后计数。
一般免疫后脾脏体积约是正常鼠脾脏体积的2 倍，细胞数为2×10８左右。
论坛资源：（求助）如何提取脾淋巴细胞悬液？（求教）脾细胞培养（求助）脾细胞形态脾细胞如何保存（求助）脾细胞贴壁吗（求助）小鼠脾细胞分离的操作说明（求助）关于小鼠脾细胞的几个问题（求助）脾细胞能否冻存后用于SP2/0 融合六、融合与筛选最重要的一步是融合，我想这也是单抗制备过程中最难的一步了。
（一）细胞融合流程1.取对数生长的骨髓瘤细胞SP2/0，1000rpm 离心5 分钟，弃上清，用不完全培养液混悬细胞后计数，取所需的细胞数，用不完全培养液洗涤2 次。
2.同时制备免疫脾细胞悬液，用不完全培养液洗涤2 次。
3.将骨髓瘤细胞与脾细胞按1∶10 或1∶5 的比例混合在一起，在50ml 塑料离心管内用不完全培养液洗1 次，1200rpm，8 分钟。
4.弃上清，用滴管吸净残留液体，以免影响PEG 的浓度。
5.轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略加松动。
6.在室温下融合：①30 秒内加入预热的1ml45％PEG（Merek ，分子量4000）含5％DMSO ，边加边搅拌。
②作用90 秒钟，若冬天室温较低时可延长至120 秒钟。
③加预热的不完全培养液，终止PEG 作用，每隔２分钟分别加入1ml ，2ml，3ml，4ml ，5ml 和10ml。
7.离心，800rpm ，6 分钟。
8.弃上清，先用6ml 左右20％小牛血清RPMI1640 轻轻混悬，切记不能用力吹打，以免使融合在一起的细胞散开。
9.根据所用96 孔培养板的数量，补加完全培养液，10ml 一块96 孔板。
10.将融合后细胞悬液加入含有饲养细胞的96 孔板，100μl/孔，37℃、5％CO2孵箱培养。
一般一块96 孔板含有1×107脾细胞。
（二）HAT 选择杂交瘤应用HAT 选择培养液筛选杂交瘤细胞的原理已在研究生专题讲座第六专题中已经提到，这里主要介绍加HAT 选择培养的时间和浓度。
一般在融合24 小时后，加HAT 选择培养液。
HT 和HAT 均有商品化试剂50×贮存，用时1ml 加入50ml20％小牛血清完全培养液中。