点击化学制备新型手性配体交换色谱固定相
L_异亮氨酸聚合物手性配体交换固定相的制备及对DL_氨基酸的拆分
研究论文L 2异亮氨酸聚合物手性配体交换固定相的制备及对DL 2氨基酸的拆分马桂娟a 龚波林a,b 3 阎 超b(a 宁夏大学能源化工重点实验室 银川750021;b 上海通微分析技术有限公司 上海201203)摘 要 单分散亲水交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯2甲基丙烯酸乙二醇双酯树脂(P G MA /E D MA )和手性配体L 2异亮氨酸反应,再与铜离子进行配位,得到一种新型的L 2异亮氨酸聚合物键合高效手性配体交换固定相。
在流动相为012mol/L Na Ac +011mmol/L Cu (Ac )2水溶液和检测波长为254n m 条件下,固定相拆分了12种DL 2氨基酸对映体,分离因子在1123～2133之间。
详细考察了流动相pH 、流速及柱温等色谱条件对DL 2氨基酸对映体拆分的影响,并探讨了拆分过程热力学。
结果表明,以单分散亲水性聚合物为基质的新型手性配体交换色谱固定相制备简单、操作方便、成本低廉,柱性能稳定。
在配体交换模式下,固定相对12种DL 2氨基酸对映体进行了良好的拆分。
关键词 手性配体交换色谱固定相,单分散树脂,L 2异亮氨酸,DL 2氨基酸,对映体分离中图分类号:O658 文献标识码:A 文章编号:100020518(2009)022*******2008201219收稿,2008204209修回科技部国际合作重点项目(2006DF A33690)、教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET 20420986)和上海市博士后科研基金(06R214202)资助项目通讯联系人:龚波林,博士,教授;E 2mail:gongbl@nxu .edu .cn;研究方向:色谱固定相的制备及应用在DL 2氨基酸对映体的色谱拆分方法中,高效配体交换色谱法(ligand 2exchange chr omat ography,LEC )具有样品毋需衍生,对映体选择性高,且色谱柱再生容易等优点,是最佳的色谱拆分方法之一[1～3]。
手性高效液相色谱法
手性高效液相色谱法手性药物对映体在人体内与受体、酶等生物大分子互相作用，展现出复杂的对映体挑选性，进一步表现为不同的药理作用、代谢过程和毒性反应。
对于手性药物，可能其中一个对映体活性高、疗效好，为活性对映体(优对映体)；另外的活性低甚至没有活性的为劣对映体。
因为劣对映体没有药效或药效较低，甚至可能产生严峻的不良反应，基于此，FDA 于1992年领先发布了手性药物指导原则，我国亦于2006年颁布了《手性药物质量控制讨论指导原则》。
为了评价手性药物的生物活性，监测对映体的光学纯度，建立和进展迅速精确的药物对映体分别办法具有重要的意义。
手性高效液相色谱法通常分为挺直法和间接法。
间接法又称手性衍生化试剂法(chiral derivatization reagent, CDR)，是将对映体与手性光学试剂反应，生成一对非对映异构体之后以常规固定相分别，因此是对手性衍生物的非手性分别。
而挺直法则是采纳手性固定相法(chiral stationary phase, CSP)或将手性化合物加入到流淌相中，再用常规固定相分别的手性流淌相法(chiral mobile phase, CMP)。
手性固定相法因其用法简便快捷、重复性好、精确度高、应用范围广而倍受青睐。
一、手性色谱柱的分类目前，已商品化的手性固定相有100多种，按照手性固定相和溶剂的互相作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系：第1类：通过氢键、π-π作用、偶极-偶极作用形成复合物；第2类：既有1类中的互相作用，又存在包埋复合物。
此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱；第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。
这类手性色谱柱中最典型的是环糊精型手性柱，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚(苯基甲基甲基丙烯酸酯)形成的手性色谱柱也属于此类；第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankv 开发的手性分别技术，也称为．手性配位交换色谱(CLEC)；第5类：蛋白质型手性色谱柱，手性分别是基于疏水互相作用和极性互相作用得以实现的。
手性药物的制备技术
外消旋化(racemization)
手性药物作用机理
生物体内大分子 （如蛋白质、多 糖、核苷和酶等）
生物大分子多为手性分子，手性药物的空间构型不同，其与生物大 药物主要通过与体内酶、核酸等大分子中固有的结合位点产生诱 分子间的作用力亦有差异，进而导致药物的吸收、分布、转化和排 导契合，从而抑制（或激活）该大分子的生理活性，达到治疗的 泄过程存在差异，使药物表现出不同的治疗作用和毒副作用。 目的。
(S)-Enantiomer (Crystal) (S)-Enantiomer (Crystal)
将外消旋混合物的过饱和溶液依次通入含有不同对映体晶种 的两个结晶室，同时得到两种对映体结晶。剩余溶液再与新 进入系统的外消旋混合物混合，加热形成过饱和溶液。 P106
有择结晶法（preferential cystallization）
第四章 手性药物的制备技术
手性的概念 Chirality，源自希腊文cheir，手或handedness A chiral object is not superimposible on its mirror image.
Examples include hands, screws, propellers, and keys
结晶法拆分外消旋混合物
结晶拆分法的原理在于溶解平衡存在差异，主要受分子间 作用力影响。对映体分子之间（同种异构体之间、不同异 构体之间）存在相互作用力，尤其在固态、纯溶液、浓溶 液状态下，分子间作用影响结晶过程（溶液态转变为固 态）。
外消旋化合物
不同构型分子间作用力大于同种构型分 子间作用力。结晶时，一个晶核内两种 异构体等量共存。 S R
Solution Solutionof of Solution of (S)-enantiomer(50g) (S)-enantiomer(45g) (S)-enantiomer(50g) (S)-enantiomer(50g) (S)-enantiomer(55g) (R)-enantiomer(40g) (R)-enantiomer(45g) (R)-enantiomer(50g) (R)-enantiomer(50g) (R)-enantiomer(45g) Crystal of (S)(R)enantiomer(15g) (S)-Enantiomer Racemate (R)-Enantiomer Racemate 5g 10g 10g 5g (Crystal) (Crystal) (Crystal)
手性固定相
手性固定相手性HPLC中，手性固定相是实现对映体拆分的基础，并有多种类型。
手性固定相可以根据其化学类型分类为：①“刷型”手性固定相；②手性聚合物固定相；③环糊精类手性固定相；④大环抗生素手性固定相；⑤蛋白质手性固定相；⑥配体交换手性固定相；⑦冠醚手性固定相等。
手性固定相也可以根据它们与被拆分的对映异构体间的作用机制进行分类：第一类是通过氢键、π—π或偶极吸引等相互作用与对映异构体形成配合物进行拆分的手性固定相，N—硝基苯甲酰基氨基酸或N—萘基氨基酸酯手性固定相属于该类；第二类是通过吸引和包合作，用进行拆分的手性固定相，纤维素衍生物手性固定相大都属于该类；第三类是具有手性空穴的手性固定相，对映异构体进入手性空穴后形成包合配合物被拆分，这类手性固定相主要为环糊精，冠醚手性固定相和螺旋型聚合物(如三苯甲基丁烯酸酯)也属于该类；第四类是通过对映异构金属配合物进行拆分的手性固定相，也称为手性配体交换色谱(chiral ligand exchange chromatography,CLEC)；第五类是通过疏水和极性相互作用进行手性拆分的蛋白质手性固定相。
手性固定相的分类手性固定相按其分离机理分为以下几类：含有手性空腔的手性固定相：其中包括衍生化纤维素手性固定相、环糊精手性固定相、冠醚手性固定相、合成手性聚合物、手性印迹凝胶相。
纤维素是纯天然高聚物，具有高度有序螺旋状结构。
这种结构可对对映体有一定的识别作用。
将其羟基衍生化后，降低了它的极性，增加了手性固定相与被拆分分子的作用点处的空间位阻，从而改善了它的色谱行为和选择性。
将纤维素衍生化后涂覆或键合于硅胶微球上，增加其机械稳定性。
目前大赛路公司（Daicel）的手性固定相制备技术很成熟。
它现有的商品柱及其性质见下表：其中O系列的都是涂覆型手性固定相；I系列的都是键合型手性固定相。
环糊精为D-吡喃葡萄糖单元以α-1,4-糖苷键相互结合互为椅式构象的环状低聚糖，通常含有6~12个吡喃葡萄糖单元，其中有实用意义的是含有6、7、8个单元的α-CD, β-CD, γ-CD。
HPLC中的手性固定相
经典手性固定相
• 配体交换型手性固定相：
经典手性固定相
• 配体交换型手性固定相：
– 配体结合型的手性固定相主要用于生物相关性 物质的手性分离，如氨基酸和羟基酸。只有那 些具有2个或以上可供螯合的基团的对映体， 才能在这一类固定相上分离。 – 常见的金属离子，有Cu（II）、Zn（II）、Ni （II）等，其中以Cu（II）为多用，Zn（II）分 离含羟基的氨基酸效果最好。 – 如分子结构中含有芳香基团或杂原子时，分离 情况会有所不同。
经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
经典手性固定相
• 环糊精型手性固定相：
– 大多数环糊精手性固定相只适用于反相色谱， 分可以被用于正 相色谱，如Cyclobond I RN或SN，因其可作为 π电子供体，具有π电子接受能力的被分析物可 以正相色谱的方式保留在这种手性固定相上。
经典手性固定相
• 人工合成多聚体型手性固定相：
– 通过加聚反应制备的含手性基团的线性聚合单 螺旋聚丙烯酸酯和聚（甲基）丙烯酰胺，是这 类手性固定相的主要代表，最早的该类手性固 定相是1979年合成的单螺旋三苯甲基-甲基丙 烯酸酯。 – 螺旋形是该类固定相产生手性识别能力的主要 原因，碳水化合物、醚类、胺类、卤化物和有 机含磷化合物都有在该类固定相上分离的成功 例子。
经典手性固定相
• Pirkle型手性固定相：
– Pirkle型手性固定相最早于1970年代末由Pirkle课题组 研制。该类手性固定相是将小分子手性选择物质键合 到固体载体（如硅胶）上得到，通常被称作Pirkle型、 刷型或π电子给予或π电子接受型手性固定相。 – 刷型固定相的手性分子主要分布在惰性基质的表面， 容易接触到被分析物质。在被分离物与固定相间的主 要相互作用是π-π相互作用，同时也存在其他类型的相 互作用，如氢键、偶极-偶极作用、空间位阻等。 – 由于良好的载样能力，Pirkle型固定相非常适用于临床 前少量药物的HPLC手性分离制备。
色谱固定相的制备二
MOFs 在液相色谱中的应用进展
MOFs 直接 作为液相色 谱固定相
核-壳型 MOF@SiO2
固定相
MOFs-聚合 物整体柱
ＭＯＦｓ 是基于有机多齿配体与无机过渡金属离 子或者金属簇之间络合 形成的一类超分子微孔网络状结构材料。ＭＯＦｓ 材料因其结构可设计 性、多孔 性、高比表面积、良好的化学和热稳定性等特点，作 为 ＧＣ 固 定相表现出很好的应用潜力。
色谱固定相的制备
一、金属有机框架色谱固定相
• 金属有机框架( MOFs) 是由金属离子或金属簇与有机配体通过配 位作用自组装形成的一类新型多孔材料． MOFs 具有独特的拓扑 结构、丰富的孔隙结构、可调的孔道尺寸、巨大的比表面积以及 灵活的表面修饰等特征，是色 谱分离领域颇受关注的一类新型固 定相。
2 个噻吩单元（Ｔ ＤＴ）
3 个噻吩单元（Ｔ ＴＴ）
含氧噻吩单元 （Ｅ ＤＯＴＴ）
特点总结展望
• 这 3 种固定相对非极性或者 弱极性组分具有高选择性，但对极性 组分的选择性 较低。固定相极性的增加有利于提高其对极性 组 分的选择性和分离性能。例如，ＥＤＯＴＴ 对酚类 和醇类等异 构体的分离能力明显提高。上述三 聚茚类固定相在色谱选择性上 具有互补性。三聚茚 类固定相具有结构可设计性强、色谱选择性 高、热稳 定性高、溶解性好等特点，具有很好的应用前景。值 得指出的是，三聚茚类材料的结构比较复杂，其合成 纯化周期较 长，发展简易可行的合成及纯化方法有 利于促进该类材料在色谱 领域的应用。
展望
• 与传统方法固相萃取相比， 既避免了反复萃取又避免过 SPE 小柱 费时，既环保又节约成本. 试验对磁性固相萃取的条件如磁性氧 化石墨烯与离子液体的质量比、萃取时间、解吸条件、离子强度 等进行了优化. 在最佳条件下，5 种除 草剂的平均回收率在 81.2%—90.2% 之间，相对标准偏差为 1.9%—3.9%，最小检出限为 0.036— 0.053 μg·L−1，定量限为 0.12—0.18 µg·L−1，并将该方 法用于实际样品的检测，基质效应没有明显影响， 适用于环境水 中除草剂的萃取和检测.
苯基丙酮还原胺化产物的酒石酸拆分研究
一：还原胺化反应的定义：还原胺化反应，又称鲍奇还原（Borch reduction，区别于伯奇Birch还原反应），是一种简便的把醛酮转换成胺的方法。
将羰基跟胺反应生成亚胺（席夫碱），然后用硼氢化钠或者氰基硼氢化钠还原成胺。
反应应在弱酸条件下进行，因为弱酸条件一方面使羰基质子化增强了亲电性促进了反应，另一方面也避免了胺过度质子化造成亲核性下降的发生。
用氰代硼氢化钠比硼氢化钠要好，因为氰基的吸电诱导效应削弱了硼氢键的活性，使得氰代硼氢化钠只能选择性地还原西弗碱而不会还原醛、酮的羰基，从而避免了副反应的发生。
还原胺化反应结束，后处理后我们得到的是外消体DL型甲基苯丙胺。
而还原胺化得到的DL型甲基苯丙胺药效则要差很多，药效的差异是因为一个叫做“手性”的化学现象，而与纯度无关。
正如人的左右手是各自的镜像一样，虽然外形一样，但其实是相反的，两种有机化合物也能以相互的镜像形式存在。
由于甲基苯丙胺有一个手性中心，它有两种不同的称为“对映异构体”的镜像形式，也就是D型与L型，其中D型与L型各占一半。
（按取代基的先后顺序来分是R型和S型，按与平面偏振光的作用来分是D型和L型，L是左旋，用-标识，D为右旋，用+标识，一般使用D型作为拆分剂）。
因为平面的苯基丙酮—亚甲胺没有手性，因而氢加成在平面亚胺键两侧发生的几率是相同的。
对映异构体一般有着完全不同的生物效应，虽然它们看上去是一样的，在分子含量、结构以及外观上并没有区别，可以说完全一样，只是在紫外线的照射下，反射回来的光偏向不一样，往左偏的是“L型甲基苯丙胺”，往右偏的是“D型甲基苯丙胺”。
但它们的作用形式并不总是一样的，主要在药效上不同。
其中D型甲基苯丙胺有典型的兴奋作用，而L型甲基苯丙胺的兴奋作用很弱，D型甲基苯丙胺对人体大脑中枢神经的兴奋作用是L型甲基苯丙胺的20倍。
而甲基苯丙胺的对映异构体之间相互转化不是很容易，因为它手性中心上没有酸性氢。
二：酒石酸的性质与用途介绍：中文名:酒石酸外文名:tartaric acid分子质量:150.09CAS号:87-69-4，526-83-0简称:TA状态:单斜晶体（无水）英文别名：2,3-Dihydroxybutanedioic acid熔点：171-174密度：1.7598（20）折光率：1.4955溶解度：溶于水、丙酮、乙醇存在：酒石酸在水中溶解度：右旋酒石酸139，左旋酒石酸139，内消旋酒石酸125，外消旋酒石酸20.6。
手性配体交换色谱
手性配体交换色谱By wanli 发表于 2006-4-16 14:39:00配体交换色谱(Ligand Exchange Chromatography,LEC)技术是1961年由Helfferich首次提出的[1],这一技术结合了离子交换和配体化学两个领域的特征，从而可以实现上述仁一过程所不能单独完成的工作。
用于配位的事先金属离子(如Cu2+,Cu+,Ni2+,Ag+,Co2+等)结合在聚合物载体上，待分离物通过与金属离子的配位络合作用或与金属离子络合的配体发生交换以实现分离。
不同于只能够用于交换相反电荷离子的传统的离子交换色谱，配体交换色谱可以分离氨、有机胺、多元醇、链烯、乙炔衍生物以及有机酸和氨基酸阴离子等。
配体交换色谱具有其它传统色谱技术所不具备的优势： 1)配位络合作用力很强，可以保证分离物与固定相有很强的吸附作用，例如，采用1mg Cu2+或 Ni2+ 配位交换离子，即可吸附10升水的10ppm的脂肪胺。
2)配位络合作用有着很强的选择性，不同分离物的配位能力差别较大，因而可以保证很好的选择性。
3)配位交换色谱具有很强的灵活性，通过不同金属离子的选择可以满足不同分离物的分离。
此后，通过Rogozhin和Davankov等人的进一步发展[2,3]，将配位交换色谱技术成功应用于手性分离，成为了一种很有用的分离方法。
1968年，Davankov 首次将L-脯氨酸键合到聚苯乙烯树酯上作为手性选择子，引入铜离子形成铜离子配合物，第一次实现了液相色谱完全分离对映异构体，也证明了配体交换色谱的实际应用价值，并由此精确定义了配体交换色谱法，他认为配体交换色谱应定义为一种过程，在该过程中，当络合离子在络合范围内形成络合键时，固定相与待分离的分子间才有相互作用发生。
由此配体交换色谱不同于离子交换，吸附色谱及其它类型的色谱，分离物并不直接作用于固定相，而是通过中心金属离子与其良好的配体发生交换而实现的，故称为配体交换色谱。
原子转移自由基聚合技术制备L-苯丙氨酸手性配体交换色谱固定相及其对手性化合物的拆分
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优 点 ， 得 的 共 聚 物 结 构 精 确 、 对 分 子 质 量 分 布 制 相
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《体内药物分析》第08章在线测试
《体内药物分析》第08章在线测试《体内药物分析》第08章在线测试剩余时间：59:06答题须知：1、本卷满分20分。
2、答完题后，请一定要单击下面的“交卷”按钮交卷，否则无法记录本试卷的成绩。
3、在交卷之前，不要刷新本网页，否则你的答题结果将会被清空。
第一题、单项选择题（每题1分，5道题共5分）1、药物分子结构中四面体碳原子上连接4个互不相同的基团时，该碳原子被称为手性中心或不对称中心，相应的药物称为（C）A、拆分药物B、手性分子C、手性药物D、非手性药物2、合成的手性药物中仅有10％以上的手性药物是以(A )对映体给药。
A、单个B、多个C、非D、多个非3、药物的肾脏消除过程中（C ）无立体选择性A、主动分泌B、主动分泌C、肾小球过主动分泌滤D、被动再吸收4、体内手性药物的测定中（A ）必不可少A、立体选择性的测定B、一个对映体的浓度C、两个对映体的总浓度D、立体异构的测定5、体内手性药物测定的方法中最常用的是CA、超临界流体色谱法B、高效毛细管电泳法C、手性色谱法D、免疫测定法第二题、多项选择题（每题2分，5道题共10分）1、常用的TLC手性固定相拆分法有（ABCD ）A、纤维素及其衍生物B、B－环糊精C、手性氨基酸金属配体交换D、手性试剂浸渍性固定相E、添加手性离子对试剂2、药物的肾脏消除是（ABCD ）的综合结果A、肾小球过滤B、主动分泌C、主动再吸收D、被动再吸收3、药物在体内吸收一般可分为（AC ）A、主动吸收B、选择性吸收C、被动吸收D、非选择性吸收E、水溶性吸收4、关于手性配体交换色谱固定相的正确说法是（ABCD ）A、手性配体一般有氨基酸衍生物制成B、该固定相是利用手性配体与对映异构体之间形成具有不同稳定性的铜复合物而进行色谱分离C、当待拆分对映体为氨基酸时复合物以离子键吸附于硅胶的疏水表面上D、该法要求被拆分的对映异构体具有能与铜形成复合物的结构5、常用的TLC手性流动相拆分法有（ABC ）A、添加B-环糊精B、添加B-CD及其衍生物C、添加手性离子对试剂D、添加手性试剂浸渍E、添加酸、碱试剂浸渍第三题、判断题（每题1分，5道题共5分）1、对映体是指分子结构中的各基团在三维空间不能重叠而互相呈祥关系的立体异构体 A正确错误2、在手性药物中对于具有最高活性或亲和性的对映体称为劣对映体或低效体 B正确错误3、在手性药物中对于具有最低活性或亲和性的对映体称为强对映体或高效体 B正确错误4、在外消旋体药物中对映体的药理活性通常具有较大差异 A正确错误5、在临床治疗过程是以纯的对映体还是以外消旋体给药，应根据不同手性药物各对映体的药理作用的具体情况而定。
色谱固定相的制备
样品制备
● 酰胺类物质、核苷和核碱基类物质、苯胺类物质溶解在乙腈或水中，过0.45 μm滤膜，备用.酰胺 类物质质量浓度为45～120 μg/mL;核苷和核碱基类物质质量浓度为70～250 μg/mL苯胺类物质 质量浓度为25～100 μg/mL. PC和PE标准品采用三氯甲烷-甲醇(体积比为2∶1)配制，过0.45 μm滤膜，备用.
反相/亲水混合模式色谱
● 反相色谱作为研究人员最早接触的色谱技术之一，发展相对成熟，被广泛应用于非极性物质的分 离，但对极性化合物的分离并不敏感，限制了反相色谱的应用。亲水作用谱有效弥补了反相色 谱在这方面的不足，目前在蛋白质纯化、糖肽富集、极性化合物分离等领域中发挥重要作用。然
而受高比例有机溶液流动相的影响，存在难以分离水不溶性或难溶性物质的缺点。反相/亲水混合 模式色谱结合了两种模式色谱的优点，可以有效用于非极性和极性物质的分离，拥有更高的分离
VIMF键合色谱固定相的制备
● 第1步：将干燥的硅球2.1 g悬浮于40 mL无水甲苯中，随后加入3.2 g MPS,混匀，在氮气保护下 于110 ℃磁力搅拌反应24 h, 反应结束并冷却至室温，所得产物经甲醇离心洗涤后于60 ℃真空干 燥24 h, 得到MPS修饰硅球(Sil-MPS)
● 第2步：在100 mL圆底烧瓶中，首先将1.9 g VIMF 超声溶解于10 mL甲醇中，随后向烧瓶中加 入2.0 g Sil-MPS和40 mL甲醇，然后将20.8 mg AIBN溶解于1 mL甲醇，快速加入上述反应体系. 反应物混匀，在氮气保护下，使其于65 ℃反应24 h.反应结束并冷却至室温后，依次使用甲醇、 水-甲醇多次离心洗涤，将其置于烘箱中60 ℃真空干燥24 h, 得到VIMF键合色谱固定相(SilVIMF)(图1)
色谱固定相的制备
用于超临界流体色谱的新型可切换水固定相
背景：
• 超临界流体色谱（SFC）是一种成熟的分离方法，与气相色谱（GC）和液相色 谱（LC）相辅相成 ，广泛用于各个领域，在SFC中最常见的流动相是CO2，其 具有温和的关键参数，无毒，环境绿色，高纯度，低成本以及与理想的通用 火焰电离检测器（FID）接口。 但与GC和LC一样，SFC流动相在分离过程中通 常会发生变化，从而影响分析物保留。
• 近年来出现了一些独特的方法，这些方法侧重于在分离过程中动态切换固定 相特性，以影响分析物保留。由于可切换的固定相方法在增强分析物选择性 和分离控制方面具有潜在的巨大优势，因此继续研究它们非常有必要。
• 在这里，使用这种方法，我们提出了一种用于SFC的新型外部pH可切换水固定 相。通过压力/温度操纵或向系统添加/去除碱，可以根据需要直接且可重复地 切换固定相pH值，从而可以独特而直接地控制有机酸和碱分析物的洗脱。介 绍了该系统的一般运行特性，并确认了这些观察的机制。最后，在样品分析 中演示并讨论了该系统的应用。
使用 NH 的分析物保留和固定相切换 4OH添加/去除
• 如上所示，压力和温度可以有效地用于切换固定相pH值并改变分析物的保留特 性。然而，由于压力和温度是SFC分离中的关键优化参数，因此在某些情况下， 如果它们能够与切换固定相pH的能力分离，将会很有用。具体而言，由于它的 缺失/存在可以很容易地将水固定相pH从酸性切换到碱性，因此它的添加/去除 提供了另一个机会，通过在恒定温度和压力条件下SFC分离期间切换来主动控制 分析物保留。
用于混合模式液相色谱的复合水凝胶改性硅胶固定相
简介:
• 固定相根据其与分析物的相互作用类型，可分为单模固定相和混合模式固定相。由于分离机理单一， 单模式固定相）在复杂样品的分离中通常面临挑战。与单模色谱不同，混合模式在分析复杂样品时由 于多种分离机理而表现出更高的选择性和优异的分离性能。因此，具有多种分离机理的混合模式固定 相色谱得到了广泛的研究。在过去的几十年中，已经设计，制备了各种新型色谱固定相，并进一步用 于混合模式液相色谱的复杂样品的分离。然而，目前混合模式固定相的类型仍然非常有限。其中，二 氧化硅基核壳固定相因其孔径可调、相互作用位点多、稳定性好、孔结构丰富等优点而得到了广泛的 研究.
Eupergit手性配体交换色谱固定相的制备及应用
Ｄａ ｎｎｅ ｅ １ ． Ｈａ ｎｓ ． Ｔ ｎ ｒ ｇｅ ｎ
（ 德 国北威 州利普 高校应 用生物化 学实验 室， 代特 莫 尔德 ３ ２ ７ ５ ６ ） 【 摘要】 介 绍 了ｖ Ｘ Ｅ ｕ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ ｔ 。 ｃ ２ ５ ０ Ｌ 为载体 ，Ｌ 一 羟脯氨 酸盐为手性 配体 ，通过 两者 间的 “ 一步 交联反应 ” ，制备 出一种 新型的Ｅ ｕ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ ｔ 手性 配体 交换 固定相 。交联反 应过 程 简单 、高效 、副反应 少。尝试通过 此大颗粒的Ｅ ｕ ｐ ｅ ｒ ｔ 手性 配体
Ｈ ｅ ｉ ｄ ｏ ｌ ｐ ｈ ５ ０ ０ ６ － ￣道 蠕 动 泵 ； Ｈ Ａ Ａ Ｋ Ｅ Ｃ １ ０ ． Ｐ ５ 加 热 循 环 器 水浴 ； Ｋ ｒ ｏ ｎ ｌ ａ ｂ 色谱 柱； Ｅ ｌ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｒ Ｃ Ｈ Ｎ Ｓ Ｖ ａ ｒ ｉ ｏ Ｍａ ｋ ｒ ｏ 元 素
分 析仪 。
制备型手性拆分柱进行研究 ，自主合成拆分柱填料 ，优
化 拆 分 柱 制 备 技 术 以 及对 拆 分 方 法 的 进 一 步 验 证 和 完
Ｄ Ｌ ． 丝氨 酸 （ Ｄ Ｌ ． Ｓ ｅ ｒ ） 、醋 酸 钠 、茚 三 酮 、还 原 茚 三
酮二 水 、 甲醇 、异 丙醇 、乙二 醇 单 甲 醚 、 醋 酸 酮 ，均
近几 年 来 ，手性 氨 基酸 通 过色 谱技 术 进行 拆 分受 到
人们 越 来越 多 的 重视 ，该 技 术可 以直接 对 手性 氨基 酸 进
手性配体交换色谱法直接拆分DL-氨基酸
１〕马建标、何炳林，高等学校化学学 ０ 报，待发表． １ 袁直、何炳林，科学通报，３ ５１ １ ５ ９
（９０ １９）．
１〕 Ｇ ２ Ｇｕ ｉ ｂｔ Ｗ ｚ Ｊｌ ｎ ｅ ａ． Ｊ ｅ ｅ ｚ ｔ ｌ ｌ ．
Ｃ ｅ ５ ５８１８） ｈｍ． ６２９（９４．
Ｇｌｎ Ｒ ｉ ｏ Ｌ ｓｅ ｅ ａ Ｊ ｅ ｍ ｔ ｌ ． ｈ ．
定相的 负载量。
２ ．Ａ ｄｂｒ ．Ｌｑ ｈｏ ｔｇ． ， 〕Ｒ ｕｅｅ，Ｊ ｉ．Ｃ ｒｍｏｒ ｔ ，２
１６（ ７） ０ ３１ ９． ９ ３ ＶＡＤ ｖｎ ｏ ， Ｃ Ｃ ｎ ｂｏ ｏ 〕 ．．ａ ａｋ ｖ Ｒ Ｈａｄ ｏｋ ｆ
Ｈ ＰＣ ｒ Ｓ ａ ｔｎ Ａ ｏｏ ｆ ｔ ｅ ｒｉ ｏ ｍ ｎ ｏ ｈ ｐ ａｏ ｆ ｅ
分研究论文总数的一半 〔 进入八十年代，该 ２。
色谱技术 在手性 固定相的 合成 、手性流 动相的选 择 、拆分 机理 探讨等 方 面都获 得 了长足 的发展 。 本文对此进行简要评述 。 手性固定相拆分法
碱性氨基酸往往例外。上述固定相虽然对映体选 择性强， 但疏水性太高， 氨基酸在色谱过程中传质困
物碳链骨架与固定配体之间的侧链上含有羰基或
羟基 、胺基等 基团 。这 些基团一方 面增加 了固定
面影响到固定相对ＤＬ 氨基酸的对映体选择性， － 使 Ｄ 氨基酸先于Ｌ 异构体流出色谱柱，流出顺 － － 序与固定相 和Ⅱ所得结果相反。 蛩
相的亲水性，使氨基酸的传质阻力减小；另一方
与固定相 和Ⅱ相比，固定相Ⅲ＂Ⅵ对氨基 蛳 蟆 龆 — 酸传质阻力小，能实现 ＤＬ 氨基酸的快速拆分。 － 但这些固定相的机械强度较差，难以满足高效液 相色谱对填料的要求。Ｇ ｂｚ ｕｉ 等人使手性配体与 ｔ
手性氨基酸的制备及生物活性研究进展
手性氨基酸的合成及生物活性研究进展专业:物理化学学号:M110393 姓名:秦锦摘要:综述了近年来手性氨基酸的制备方法及其生物活性,包括化学拆分法、不对称合成法、结晶法、微生物法、酶法、配位萃取法、膜拆分法以及色谱法等制备方法,还介绍了手性氨基酸作为手性药物的生物活性作用,并对其研究的前景进行了展望。
关键词:手性,氨基酸,制备,拆分,生物活性随着人们对手性氨基酸的深入研究,发现有些物质的D-(-)-异构体和L -(+)-异构体在生物体中的活性差异很大。
对这一问题的探讨,有助于了解生命过程中药物作用的化学基础与生物基础。
本文综述了近年来手性氨基酸的制备方法及其生物活性作用,并展望了其研究的前景。
1 手性氨基酸化合物的制备方法1.1 化学拆分法DL-对羟基苯甘氨酸可用化学拆分剂进行拆分,常用的拆分剂有溴化樟脑磺酸a-苯基乙胺,酒石酸,脱氢枞胺等。
Yamada S.等用溴化樟脑磺酸(d-BCS)作为拆分剂,对DL-对羟基苯甘氧酸进行拆分,D-对羟基苯甘氨酸的收率可达92%。
但此法反应步骤长、收率低,关键是选择使用周期长、回收容易的拆分剂。
严兆明等应用嗜热菌蛋白酶通过酶促由DL-苯丙氨酸-I-C与Z-L-广丙氨酸合成Z-L-Ala-L-Phe-OMe(1-C)二肽,藉此达到消旋苯丙氨酸的拆分,然后将二肽用嗜热菌蛋白酶在N-甲基吗啉缓冲溶液中进行酶促水解反应,从而获得L-苯丙氨酸。
Umemura等开发了由麦芽假丝酵母不对称降解DL-丙氨酸生产制备D-丙氨酸的实用工艺。
最适降解条件为3O摄氏度、pH6.0、通风量1.0vvm和振荡(1200r/min)。
此工艺在200g/L DL-丙氨酸规模下,L-丙氨酸在40h内完全降解,剩余的D-丙氨酸可很容易地从反应混合液中分离出来,最终可得99.0%的化学纯和99.9%旋光纯度的D-丙氨酸90g。
Yokoaeki等以醛为原料,经Bucherer反应合成DL-5-取代乙内酰脲,然后用恶臭假单胞菌的二氢嘧啶酶催化选择性水解为N-氨甲酰D-氨基酸,再经化学法或酶法脱氨甲酰基得D-氨基酸,拆分DL-5-对羟基苯乙内酰胺生产D-对羟基苯甘酸,由30 g/L DL-5氨-对羟基苯乙内酰胺生产D-对羟基苯甘氨酸,收率达92%。
药物分析文献综述
2016—20 17学年第1 学期文献综述名称高效液相色谱法手性固定相分手性药物研究进展专业2016级药物化学学号161320217姓名李松子导师柯美荣指导老师林子俺时间2016年12月19日高效液相色谱法手性固定相分手性药物研究进展摘要手性（chirality)是指化合物的分子式和结构式相同，因分子空间排列不同导致两个分子互为镜像和实物的现象。
手性药物（chiral drug）是指药物分子结构中引人手性中心后得到的一对互为实物与镜像的对映异构体(enantiomer）这些对映构体的理化性质基本相似，仅旋光性质有所差别。
目前在约2000种常用药物中有近500种药物以外消旋体的形式存在。
外消旋体药物中可能只有一种对映异构体有药效,其镜像分子却有毒副作用或药效相反或无药效:如左旋巴比妥酸盐抑制神经活动而右旋巴比妥酸盐却兴奋神经；右旋甲状腺素钠可降低血脂而左旋甲状腺素钠对心脏有毒副作用;抗菌药左旋氧氣沙星的药效高于其右旋体数倍对映异构体也对香料化学和农业化学方面有重要作用:如S —型的香芹酮有香菜味,而R-型却具有荷兰薄荷香味; 农药溴氰菊酯的8个异构体中,（3R,1R,S）异构体的杀虫活性是（3S, lS，R）的70多倍.手性药物的分离分析在生物和化学领域一直是研究热点。
色谱法利用固定相与外消旋体之间的作用力不同使流动相洗脱时各组分保留时间不同而实现分离的目的。
色谱法以其优良的识别能力成为目前应用最广泛的手性拆分方法,尤其在性药物的分离分析和纯度检测等方面.常用的手性色谱分离技术包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法(GC)、毛细管电色谱法（CEC)等根据侍分离化合物的分子结构选择合适的手性色谱非常重要。
在用HPLC法分离手性物质时,可以通过改变色谱柱的流动相和固定相来改变改善HPLC的分离效果。
根据手性固定相的不同来源，可分为天然、半合成和全合成三大类。
本文介绍国内外近几年手性固定相拆分手性药物的研究进展，包括几种经典类型及一些新型手性固定相。
L-脯氨酸聚合物键合手性配体交换色谱固定相Ⅰ的制备及应用
酸） 记 的死 时 间；手 性 分离 因子 ａ ＝ ｋ ’ ｋ ’ ，其 中ｋ ， 标 ２／ｌ １ 是先 洗 脱 对 映体 的容 量 因子 ；
１３ 色 谱 固定 相 的 制备 ． １ ３１ Ｌ脯氨酸与单分散ＰＭ ／Ｄ Ａ ．． － ＧＡ ＥＭ 微球反应 在三颈瓶 中加入３０ ． ｇ 单 分散Ｐ Ｍ ／Ｄ Ａ 脂 ，２ｍ ￣ 氧六 环 ，３０ Ｌ 羟脯 氨酸 （ ２ ＧＡ ＥＭ 树 ０Ｌ ． ｇ－ 用 ３ Ｌ ｏ／Ｎ 。Ｏ水 ，于５ ℃恒 温 水浴 反应 ２ 小时 。反 应 ０ ４ 体交 换 色 谱 固定 相 拆 分机 理 是 基 于 固定 相 手性 配 体 、金 属 离 子 与 ｍ ｌｍ ｌ ＬａＣ 溶液 溶解 ） 被 分 离 溶 质对 映体 形 成一 对 非 对 映 的配 合 物 ，二 者 的热 力 学 稳 定 产 物 依次 用水 和 丙酮洗 涤 ，真 空干 燥 。 １３ ２Ｌ 脯氨 酸 手性键 合 固定相 与Ｃ ．． 一 ｕ 络合 在 三 颈瓶 中加 入 ３０ ｇ ． 性 差异 导 致 了色 谱分 离 。 上 步 反应 的产 物 ，０ １ ｏ ／ Ｃ （ｃ。 泡 ｌ 时 后于 室温 下搅 拌 ． ｍ ｌ Ｌ ｕ Ａ ）浸 小 １实验 部 分 络合 ４ ｄ 时 ，产 物 用 蒸馏 水 洗 至 无ｃ 离 子 检 出 。再 依 次用 乙醇 和 ８， ｕ １ １仪 器 与 试 剂 ． 丙酮 洗涤 ，真 空 干燥 。总 的 反应 式如 图 １ 所示 ： 高效 液 相 色 谱 仪 （ 岛津 一 Ｃ ０ ） Ｇ 一 ０ 型 高 压 气 动 泵 ； Ｌ ２ Ａ ；Ｃ Ｙ １ ０
２ １年 第 ｌ 期 ０１ ２ （ 总第２ ２ ） ６期
吉 林 农 业
Ｊ Ｌ Ｎ ＡＧＲＩ ＩＩ ＣＵＬＴＵＲＥ
Ｎ Ｏ ． ２． ２ １ １ ０１
手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展
摘要】自然界很多药物是手性药物，手性药物的开发已成为制药领域的必然趋势，其分析测定方法也得到快速发展。高效液相色谱法作为经典实用的分析测定方法，得到了广泛的运用。本文综合国内外文献，综述了手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展，为手性药物的含量测定和生物分析提供思路。【关键词】手性药物高效液相色谱法拆分手性是自然界的本质属性之一，作为生命活动重要基础的生物大分子和许多作用于受体的活性物质均具有手性特征。对手性药物而言，两个对映体并非具有相同的药效。HPLC分离药物对映体可分为间接法和直接法，前者又称为手性试剂衍生化(CDR)法，后者可分为手性流动相添加剂(CMPA子内，而CMPA法和CSP法则是将不对称中心引入分子间。1 CDR法CDR法是将药物对映体先与高光学纯度衍生化试剂(CDR)反应形成非对映异构体，再进行色谱分离测定，适用于不宜直接拆分的样品。该法的优点是衍生化后可用通用的非手性柱分离，无需使用价格昂贵的手性柱，而且可选择衍生化试剂引入发色团提高检测灵敏度。金银秀等[1]采用手性衍生化试剂GITC对美西律进行柱前手性衍生化，建立了美西律对映体在人血清白蛋白中的测定方法。2 CMPA法CMPA法是将手性选择剂添加到流动相中，利用手性选择剂与药物消旋体中各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异，实现对映体的分离。此法的优点在于：不需对样品进行衍生化，可采用普通的色谱柱，手性添加剂可流出，也可更换，同时添加物的可变范围较宽，使用比较方便。目前常用的手性流动相添加剂有：环糊精(CD)及其衍生物、配位基手性选择剂、手性离子对添加剂、蛋白质、大分子抗生素。2.1配体交换型手性添加剂此类添加剂多为氨基酸及其衍生物与二价金属离子铜、锌、镍等结合，以适当浓度分布于流动相中，然后外消旋体共同形成非对映的配位络合物进行拆分。2.2环糊精添加剂常用的环糊精主要为β-CD，β-CD络合的化学计量关系通常为1：1，但是其它比例也存在，在添加CD的RP色谱中，存在两个平衡流动相中游离溶质和CD络合物在固定相上的吸附平衡，其影响因素包括有机溶剂的用量及酸度等。如杨青等[2]以C18为分析柱，将β-CD、2,6-二甲基β-CD、2,3,6-三甲基β-CD分别作为手性流动相添加剂，系统地研究了酮基布洛芬对映体在HPLC系统中的拆分。2.3手性离子对添加剂此方法为对映体与手性离子对试剂形成非对映离子对，利用其在固定相和流动相之间不同的分配比来分离，手性离子对必须具有3点作用模式。3 CSP法手性固定相(CSP)是由具有光学活性的单体固定在硅胶或其它聚合物上制成的，在拆分中CSP直接与对映体相互作用，而其中一个生成具有不稳定的短暂的对映体复合物，造成在色谱柱内保留时间的不同，从而达到分离的目的。3.1天然高分子手性固定相这种固定相主要有蛋白质类、环糊精类、多糖及其衍生物类、冠醚等。其中，以环糊精类目前应用较多，同时CD分子上的手性中心也能选择性地与对映体作用。目前，以β-CD应用最多。不同的环糊精的空腔大小不同，α-CD适于分离小分子药物对映体，γ-CD适于分离大分子药物，β-CD对形成包合物有最佳大小的空腔，适用于大多数对映体的位阻和电子特征，如酮咯酸氨丁三醇盐对映体，佐匹克隆对映体，萘普生乙酯对映体的分离[3]。冠醚具有亲水性内腔和亲脂性外壳，可键合在硅胶或聚苯乙烯基质上制成手性固定相。根据主－客化学原理，用于含有能够质子化的伯胺功能团的药物对映体的分离，将(+)-18-冠醚-6-2,3,11,12-四羧酸键合至氨基丙基硅胶上作手性固定相，不仅可以分离具有伯氨基的药物对映体，如肌肉松弛药物氟喹酮、抗疟药伯氟喹等。3.1.1合成高分子固定相主要包括聚丙烯酞胺、聚甲基丙烯酸醋等含光学活性中心的高分子物质。运用较多的是交联聚酞胺，其分离机理一般认为是对映体与高分子聚合物本身的手性空间结合，同时还受到聚合物分子量，溶剂pH值等因素的影响。3.1.2氨基酸型手性固定相该固定相是以硅胶为起始原料，硅烷化成梭基型键合物，最后与有光学活性的氨基酸反应制得。其机理是对映体与固定相的氢键形成不同的非对映体络合物而分离。适于分离α-氨基酸衍生物、α-氨基烃基磷酸衍生物、二肽等，缺点是价格较贵。3.2配体交换型固定相该固定相是以某种聚合物，如交联的氯甲基苯乙烯与手性氨基酸结合而成，同时，还需过渡金属离子的参与，如Cu2＋等。被拆分物质通过金属络合物与固定相上的配位基发生配体交换，络合在固定相上。由于这种络合是可逆的，因此这种方法的分离效果较好，一般用来分离各种氨基酸。3.3蛋白质类固定相AGP是一种键合的蛋白类手性柱，特别适用于阳离子型化合物，手性选择性强。蛋白质手性固定相主要靠氢键及范德华力维持其稳定，可以通过调节流动相缓冲液的组成、PH值和温度来改变手性选择性。蛋白质手性柱的最大优点在于，可使对映体在非衍生形式下得到分离，同时由于采用水相流动相，因此水相样品可直接注射，其中α1-AGP柱尤其适合于对映体药物的分离。傅强等[5]研究了在卵类糖蛋白手性柱上影响钙离子拮抗剂尼卡地平对映体拆分的主要因素，建立了尼卡地平对映体的拆分方法。大环抗生素是近年来比较流行的手性选择剂，大环抗生素具多个手性中心，多个官能团及特定的三维空间结构，它的手性识别机理结合了环糊精、蛋白质、多糖的性质，这类手性固定相拥有较大的对映体选择性，优异的拆分效率和较短的分析时间等优点，使之成为继环糊精之后的常规分析级手性固定相。参考文献[1]金银秀,曾苏.柱前衍生化RP-HPLC测定人血清白蛋白中美西律对映体[J].中国药学杂志, 2007, 42(11)：860-862. [2]杨青,唐瑞仁,曾莎莎.高效液相色谱手性流动相法拆分酮基布洛芬对映体[J].分析试验室, 2007, 26(8):84-86. [3]刁全平,侯冬岩,回瑞华,等.高效液相色谱法拆分酮咯酸氨丁三醇盐对映体[J].鞍山师范学院学报, 2005, 7 ( 6) : 58- 60.
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DO I :10.3724/S P.J .1096.2010.01011点击化学制备新型手性配体交换色谱固定相付春梅1石宏宇2李章万1钱广生*11(四川大学华西药学院,成都610041)2(北京东西分析仪器有限公司,北京102308)摘 要 采用点击化学反应制备了一种新型L 脯氨酰胺衍生物键合手性配体交换色谱固定相。
硅胶与 氯丙基三乙氧基硅烷反应后,再与叠氮化钠反应制备得到叠氮化硅胶。
在甲醇溶液中,以溴化亚铜为催化剂,叠氮化硅胶与合成的手性选择子N 炔丙基脯氨酰胺,室温反应48h ,而键合上手性官能团。
手性选择子的键合量达0.47mmo l/g ,操作简单,反应条件温和。
制备的手性固定相以0.2mm o l/L Cu(A c)2水溶液为流动相,在配体交换模式下拆分了8种D,L 氨基酸,对映体选择因子 在1.14~2.42之间。
手性分离能力和稳定性研究表明,点击化学在手性配体交换色谱固定相的制备中具有极大潜力。
关键词 点击化学;手性配体交换色谱固定相;L 脯氨酰胺;D,L 氨基酸2009 10 16收稿;2009 11 23接受*E m ai:l s cu001@163.co m1 引 言点击化学(C lick che m istry)是近年发展起来的一种快速合成大量化合物的新方法。
自诺贝尔化学奖获得者美国化学家Sharpless 等提出点击化学的概念[1],点击化学在众多研究领域得到迅速发展[2]。
点击化学形象地把化学反应过程描述为像点击鼠标一样简单、高效、通用。
该方法主要具有以下特征:反应原料易得,反应简单可靠,对氧气、水不敏感,产物立体选择性好、产率高,反应后处理及产物分离简单方便,反应副产物对环境友好。
目前,得到广泛应用的点击化学反应是通过Cu +催化,炔基与叠氮基反应生成单一的反式三氮唑分子[3,4],该反应属于1,3 双偶极H u isgen 环加成反应。
目前,点击化学反应已成功用于色谱固定相的制备,例如文献[5~7]利用点击化学反应制备了多种反相H PLC 固定相和环糊精键合硅胶手性固定相;Kacprzak 等[8]利用该反应制备了金鸡纳生物碱键合硅胶手性固定相;S later 等[9]利用该反应制备了刷型手性固定相。
本研究利用Cu +催化的点击化学反应将L 脯氨酰胺衍生物键合到叠氮化改性硅胶上,制备了一种新型手性配体交换色谱固定相(C li c k CSP)。
研究表明,合成的C lick CSP 能有效拆分D,L 氨基酸。
2 实验部分2.1 仪器与试剂高效液相色谱系统,由W aters 6000A 输液泵、W aters 440紫外检测器、Rheodyne 7725i 进样阀、Pho toelectron CBL M odel 100柱温箱和四川知本ZB 2010色谱工作站组成;A lltech 1666匀浆装柱机(美国A lltech 公司);Carlo E rba 110b 元素分析仪(意大利M ilaro 公司)。
无定形硅胶(5 m ,天津市化学试剂二厂);CuB r 、五甲基二乙撑三胺(化学纯,国药集团化学试剂有限公司);所有氨基酸均为生化纯(上海生化试剂厂);水为超纯水;其余试剂均为分析纯。
2.2 色谱固定相的制备手性键合固定相的制备路线如图1所示。
2.2.1 N 炔丙基脯氨酰胺的合成 在100mL 圆底烧瓶中分别加入1.14g L 脯氨酰胺、0.4g N a OH 、3 4mL 氯丙炔(60%甲苯溶液)、50mL 乙醇,搅拌,室温反应8h ,减压蒸干得淡黄色粗产物,经硅胶柱分离得1.22g N 炔丙基脯氨酰胺,产率81%。
2.2.2 氯丙基硅胶的制备 在100m L 圆底烧瓶中加入2.0g 无定形硅胶、2.0mL 氯丙基三乙氧基第38卷2010年7月分析化学(FENX I HUAXUE ) 研究简报Ch i nese Journal o fA na l y ti ca l Che m istry第7期1011~1014图1 手性键合固定相的制备路线F i g .1 P repa ra tion route of ch ira l stati ona ry phase(a)L 脯氨酰胺(L Proli na m ide),NaO H,氯丙炔(Propargyl chlori de),乙醇(E thanol),室温8h (Roo m te m perat u re 8h );(b)无定形硅胶(S ilica gel ), 氯丙基三乙氧基硅烷( Ch l orop ropyltri et hoxysilane),甲苯(Tol u ene),回流5h (R efl ux 5h );(c)迭氮化钠(N a N 3),二甲基甲酰胺(N,N D i m et hyl for m a m i de),120 ,5h ;(d)N 炔丙基脯氨酰胺(N Prop argyl p roli na m i de),CuB r ,五甲基二乙撑三胺(Penta m et hy l d i et hy l enetri a m i ne),甲醇(M ethanol),室温48h (Roo m te m perat ure 48h)。
硅烷、50mL 甲苯,回流反应5h ,过滤,依次用甲苯和甲醇洗涤得氯丙基硅胶。
2.2.3 叠氮化硅胶的制备 将氯丙基硅胶置于100圆底烧瓶中,分别加入1.0g 迭氮化钠、50mL D M F ,120 反应5h ,过滤,依次用DMF 和TH F 洗涤得叠氮化硅胶。
2.2.4 手性固定相的制备 将叠氮化硅胶置于100mL 三颈瓶中,分别加入1.2g N 炔丙基脯氨酰胺、0.05g CuBr 、0.1mL 五甲基二乙撑三胺、50mL 甲醇,氮气保护下室温反应48h ,过滤,用甲醇洗涤得手性固定相C lick CSP 。
2.3 色谱柱的填充及色谱条件色谱柱(150mm 4.6mm .i d .);装柱压力:35M Pa ;匀浆液:二氧六环 四氯化碳(1!2,V /V );顶替液:甲醇。
色谱条件:流动相为0.2mm o l/L Cu (Ac)2水溶液,柱温:40 ,流速:0.8mL /m i n ,检测波长:254nm 。
样品为D,L 氨基酸水溶液,死时间用N a NO 3溶液测定。
3 结果与讨论3.1 合成手性固定相的表征对各步键合硅胶进行元素分析,氯丙基硅胶:C 6.17%,H 1.59%,N 0.00%;叠氮化硅胶:C 5.97%,H 1.30%,N 4.25%;C lick CSP 手性固定相:C 10.48%,H 1.74%,N 4.99%。
以含碳量的增加计算手性选择子(L 脯氨酰胺)在硅胶上的键合量为0.47mm ol/g 。
3.2 D,L 氨基酸的拆分表1为一些D,L 氨基酸在C lick CSP 色谱柱上的拆分数据,所拆分D,L 氨基酸在该柱上对映体选择因子 为1.14~2.42。
图2为D,L Pro 、D,L Ser 和D,L Thr 的拆分色谱图。
对色谱条件(Cu 2+浓度、柱温、流动相pH 值和流速等)对D,L Pro 、D,L Ser 和D,L Thr 手性拆分的影响进行了考察。
结果表明,随着Cu 2+浓度在0.1~0.5mm ol/L 范围增加,流动相的洗脱能力增大;柱温从10 升至40 ,样品保留降低, 值变化不大,分离度R s 和柱效随温度升高而增加;流动相p H 值在6.1~4.3范围降低,其洗脱能力增强,分离选择性下降;当流动相流速从0.8mL /m i n 升至1.2mL /m i n 时,D,L Pro 和D,L Ser 在固定相上R s 由2.29, 1.32分别降至1.74,1.17。
综合考虑分离选择性和色谱柱的稳定性,选择本实验的色谱条件:流动相为0.2mm o l/L Cu(A c)2溶液,柱温:40 ,流速:0.8mL /m i n ,检测波长:254nm 。
1012分析化学第38卷表1 D,L 氨基酸的拆分结果T able 1 R esu lts o f reso l uti on of D,L a m i no acids分析物Anal yte容量因子C apacity f actork ∀1容量因子Capacit y factork ∀2选择因子S el ecti vity factor分离度Resol u tion R sD,L 脯氨酸D,L Pro (Proli ne)3.107.532.422.29D,L 丝氨酸D,L Ser (S eri n e)2.62 3.641.391.32D,L 苏氨酸D,L Thr (Th reon i n e)2.74 3.961.451.37D,L 瓜氨酸D,L C it (C itrulli ne)3.57 4.301.200.70D,L 亮氨酸D,L Leu (Leu ci ne)7.909.001.140.51D,L 缬氨酸D,L V al (V ali ne)4.70 5.521.170.51D,L 苯丙氨酸D,L Ph e (Ph enyl a l an i ne)23.8227.321.150.50D,L 对羟基苯甘氨酸D,L H pg (4 H ydroxyphenylgl yci ne)17.0019.671.160.52流动相(M ob il e phase):0.2mm ol/L Cu (Ac)2;检测波长(Detecti on w avel ength):254nm,柱温(Colu m n te mperat u re):40 ;流速(Fol w rate):0.8mL /m i n。
图2 3种D,L 氨基酸的拆分色谱图F i g .2Chro m atog rams o f enanti om eric separation of so m eD,L a m i no ac i dsa .D,L 脯氨酸(D,L Pro);b .D,L 丝氨酸(D,L Ser);c .D,L 苏氨酸(D,L Th r)。
3.3 色谱柱的稳定性用3000mL 0.2mm ol/L Cu(A c)2水溶液作流动相,40 柱温下以0.8mL /m i n 的流速冲洗色谱柱后,样品的保留和分离未出现明显的变化。
本研究通过合成N 炔丙基脯氨酰胺手性选择子,采用Cu +催化的点击化学反应将其键合到叠氮化改性的硅胶上,制备了一种新的脯氨酰胺衍生物手性配体交换色谱固定相,键合反应条件温和,键合量高。
对多种D,L 氨基酸的手性拆分及色谱柱稳定性的考察证实了点击化学在制备手性配体交换色谱固定相中的巨大潜力。
R eferences1 K olb H C ,F i nn M G,Sharp l ess K B .A nge w.Che m.Int .Ed .,2001,40:2004~20212 ZHANG T ao (张涛),ZHENG Zhao H u i (郑朝晖),CHENG X u (成煦),D I NG X iao B i n (丁小斌),PENG Y u X i ng(彭宇行).P rogress i n Che m is t ry (化学进展),2008,20:1090~11013 H i m o F,Love ll T,H ilgraf R,Ro stovtsev V V,Nood l eman L ,Sharpless K B ,F oki n V V.J.Am.Che m.Soc .,2005,127:210~2164 R ostov tsev V V,G reen L G,F ok i n V V,Sha rpless K B .A nge w.Che m.Int .Ed .,2002,41:2596~25995 Guo Z ,L ei A,L iang X,X u Q.Che mun .,2006:4512~45146 L i u Y,G uo Z ,Ji n Y,Xue X,Xu Q,Zhang F,L iang X.J.Chromatogr.A ,2008,1206(2):153~1597 Guo Z ,Ji n Y,L iang T,L iu Y,Xu Q,L i ang X,L e iA.J.Chromatogr .A,2009,1216(2):257~2638 K acprzak K M,M a i e r N M,L i ndne rW.T etrahe dron Lett .,2006,47(49):8721~87269 S later M D,F r che t JM J ,Svec F.J.Se p.Sci .,2009,32(1):21~281013第7期付春梅等:点击化学制备新型手性配体交换色谱固定相Preparati on of A N ovel Ch i ral L igand Exchange Chro m atograph icStati onary Phase by C li ck Che m istryFU Chun M ei 1,S H I H ong Y u 2,L I Zhang W an 1,Q I AN G uang Sheng *11(W est Ch i na School of P har m acy,S ichuan Uni versity,Chengdu 610041)2(East&W es tA nal y tical Ins t ru m ents ,Inc .,B eijing 102308)Abst ract C lick che m istr y w as applied to i m m ob ilize L pr o li n a m i d e deri v ati v e onto azi d e m odifi e d silica gel to prepare a nove l ch iral stati o nary phase for li g and exchange chro m atography (C lick CSP).A zi d e functionaliti e s w ere i n troduced onto the silica gel by reacti n g chloropropy ltriet h oxysilane w it h silica ge,l and then theobtai n ed productw as reacted w it h sodium azi d e .The azi d e m odified silica gel reacted w ith N propar gy l proli na m i d e ch ira l se lector prepared i n m ethano l a t roo m te m perature for 48h i n the presence of copper(#)bro m ide to g ive a nove l ch ira l stationary phase for ligand exchange chro m atography .The deve loped protoco l co m b i n es the benefits of operati o na l si m plicity ,exceptionally m il d conditions and h i g h surface loadi n gs up to 0.47mm ol/g .The enanti o m eric separati o n of so m e D,L a m ino ac i d s w ere achieved on the syn t h esized chiral li g and ex change chro m atograph ic stati o nary phase usi n g 0.2mm ol/L Cu(A c)2so l u ti o n as mobile phase at co l um n te m perature o f 40 w it h se lecti v ity factors fr o m 1.14to 2.42.The chr o m atographic reso l u tions o f so m e D,L a m ino ac i d s and the stab ility o f the C lick CSP fir m ly ill u strate t h e potential o f c lick che m istry for preparati o n ch iral stationary phase f o r ligand ex change chro m atog raphy .K eywords C lick che m istry ;Ch ira l li g and exchange chro m atograph ic stati o nary phase ;L Prolina m ide ;D,L Am ino ac i d(R eceived 16Oct ob er 2009;accepted 23N ove mber 2009)∃中药红外光谱分析与鉴定%中药是成分复杂的混合物,其分析研究与质量控制一直是科研和实践领域的重大难题。