实验二 红细胞比容、血红蛋白及渗透脆性测定

方法与步骤
1、溶液配制：取10个小试管，配制出 种不同浓 、溶液配制： 个小试管， 个小试管 配制出10种不同浓 度的氯化钠低渗溶液（ 度的氯化钠低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%， ， ， ， 0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%， ， ， ， ， ， ， 0.9%）。 ）。 2、加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各 、加抗凝血：用滴管吸取抗凝血， 加一滴，轻轻摇匀，静置1～ 。 加一滴，轻轻摇匀，静置 ～2 h。 3、观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不 、观察结果： 判断红细胞脆性。 同，判断红细胞脆性。 ①未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀， 未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀， 上层为无色透明，表明无红细胞破裂。 上层为无色透明，表明无红细胞破裂。
二、红细胞脆性的测定 • 目的 学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞 学习测定红细胞渗透脆性的方法， 外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要 性。 • 原理 正常红细悬浮于等渗的血浆中，若置于高 正常红细悬浮于等渗的血浆中， 渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之， 渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置 于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。 于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。 如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而 如环境渗透压继续下降， 破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。 破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对 低渗溶液具有一定的抵抗力， 低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称为红细 胞的渗透脆性。 胞的渗透脆性。
实验二 红细胞比容测定 红细胞脆性的测定 血红蛋白测定
一、红细胞比容测定 掌握红细胞比容的测定方法。 目的 掌握红细胞比容的测定方法。 原理 将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中，定时、定速 将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中，定时、 离心后,有形成分和血浆分离 有形成分和血浆分离， 离心后 有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血 中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（ 浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细 ），下层为暗红色的红细胞 下层为暗红色的红细胞， 胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的 正常形态。根据红细胞柱及全血高度， 正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在 全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积） 全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积） 。
【注意事项】 注意事项】 •
血液要准确吸取20 ， 血液要准确吸取 µl，若有气泡或 血液被吸入采血管的乳胶头中都应将 吸管洗涤干净，重新吸血。 吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法 先用清水将血迹洗去， 是：先用清水将血迹洗去，然后再依 次吸取蒸馏水、 酒精、 次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤 酒精 采血管1～ 次 使采血管内干净、 采血管 ～2次，使采血管内干净、干 燥。
具体测定方法如下： 具体测定方法如下： ①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度 用滴管加5 0.1mol·L- HCl到刻度 管内,(约加到管下方刻度”2”或ຫໍສະໝຸດ Baidu或10%处 ,(约加到管下方刻度 或多或10% 管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。 ②用微量采血管吸血至20μl，仔细揩去吸管外 用微量采血管吸血至20μl， 20μl 的血液。 的血液。 ③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部， 将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部， 再吸上清液洗吸管3 操作时勿产生气泡, 再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以 免影响比色。用细玻棒轻轻搅动， 免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐 酸充分混合，静置10 min， 酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血 红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。 红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。
[注意事项 注意事项] 注意事项 • 选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、 选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、 溶解。本实验采用柠檬酸钠抗凝。 溶解。本实验采用柠檬酸钠抗凝。 • 血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧 血液与抗凝剂混合、 烈引起红细胞破裂。 烈引起红细胞破裂。 • 温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛 温氏分血管内壁要充分干燥。 细管内的刻度读数要精确， 细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有 气泡。 气泡。
三、血红蛋白的测定
• 目的 掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。 掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。 • 原理 血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。 血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。 但当用一定的氧化剂将其氧化时， 但当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为 稳定、棕色的高铁血红蛋白， 稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋 白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准 或高铁血红蛋白）的浓度成正比。 色进行对比，求出血红蛋白的浓度， 色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液 中含血红蛋白克数（g·L中含血红蛋白克数（g·L-1）。
NaCl浓度 浓度(ml) 0.75 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 浓度
[注意事项 注意事项] 注意事项 • • • 小试管要干燥，加抗凝血的量要一致， 小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只 加一滴。 加一滴。 混匀时，轻轻倾倒 ～ 次 减少机械震动， 混匀时，轻轻倾倒1～2次，减少机械震动， 避免人为溶血。 避免人为溶血。 配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、 溶液时应力求准确、 配制不同浓度的 溶液时应力求准确 无误。 无误。
1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液 稀释成不同浓度的低渗溶液 1 试管号 1%NaCl(ml) 蒸馏水(ml) 蒸馏水 1.50 1.40 1.30 1.20 1.10 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 2 3 4 5 6 7 8 9 10
②部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀， 部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀， 上层出现透明淡红（淡红棕） 上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细 胞已经破裂，称为不完全溶血。 胞已经破裂，称为不完全溶血。 ③红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色， 红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色， 管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂， 管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为 完全溶血。 完全溶血。
方法与步骤
温氏分血管比容法 • 用带有长注针头的注射器，取抗凝血将其插入分 用带有长注针头的注射器， 血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头， 血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头， 使血液精确到10 刻度处。 使血液精确到 cm刻度处。 刻度处 • 离心：将分血管以3000 r/min离心 min，取出 离心：将分血管以 离心30 离心 ， 分血管，读取红细胞柱的高度， 分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速 离心5 离心 min，再读取红细胞柱的高度，如果记录 ，再读取红细胞柱的高度， 相同，该读数的10倍即为红细胞比容 倍即为红细胞比容（ 相同，该读数的 倍即为红细胞比容（容积百分 比）。
• 红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细 红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大， 胞在低渗溶液中越不容易发生溶血， 胞在低渗溶液中越不容易发生溶血，即红 细胞渗透脆性越小。 细胞渗透脆性越小。将血液滴入不同的低 渗溶液中， 渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液 抵抗力的大小。 抵抗力的大小。开始出现溶血现象的低渗 溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力； 溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力； 出现完全溶血时的低渗溶液浓度， 出现完全溶血时的低渗溶液浓度，则为该 血液红细胞的最大抵抗力。 血液红细胞的最大抵抗力。
方法与步骤
沙里氏血红蛋白计测定 • • 沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁 使血红蛋白酸化形成棕色的高铁 沙里氏比色法是用 血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方 沙里血红蛋白计 主要具有标准褐色玻璃比色箱和 只方 形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度； 形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧 为血红蛋白量的绝对值， 为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含 每 血液中所含 血红蛋白的克数)表示 表示， 血红蛋白的克数 表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白 ～ ； 相对值， 相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示， （即相当于正常平均值的百分数）来表示， 从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此 ～ 。为避免所使用的平均值不一致， 一般采用绝对值来表示。 一般采用绝对值来表示。
④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。 把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。 ⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光 使无刻度的两面位于空格的前后方向， 和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水， 和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水， 并不断搅匀，边滴，边观察、 并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进 行比色， 行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色 一致为止。 一致为止。 ⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中 读出管内液体面所在的克数，即是每 血中 所含的血红蛋白的克数。比色前， 所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽 出来，其上面的液体应沥干净， 出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液 凹面最低处相一致的刻度为准。 凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血 液中含血红蛋白克数（ 液中含血红蛋白克数（g·L-1）。 ）。