糖尿病大鼠造模STZ

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糖尿病大鼠造模过程

糖尿病大鼠造模过程1 材料与方法1. 1 实验动物SPF级SD雄性大鼠39只, 10周龄, 体重180~200 g。

1. 2 试剂与高脂饲料配方STZ购自Sigama公司, 胆固醇、胆酸钠由上海蓝季科技发展有限公司提供。

高脂饲料配方: 2%胆固醇, 0. 3%三号胆盐,20%蔗糖, 10%猪油, 67. 7%基础饲料。

1. 3 动物分组与饲养SPF级雄性3周龄SD大鼠39只, 体重180g~200g, 适应性饲养一周后, 随机分为正常对照组10只, 模型组34只。

模型组大鼠禁食12h后, 单次腹腔注射35mg /kg的STZ。

STZ用灭菌的0. 1mmo l/L, pH4. 4d的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配成2%溶液, 现配现用。

正常组只注射等量的缓冲液。

72h后取尾静脉血测空腹血糖高于7. 0mmo l/L 和餐后血糖均高于11. 1mmo l/L为糖尿病模型建立。

一次注射未成模, 立即仍按原剂量补注一次STZ, 未成者淘汰,成模但缓解者淘汰。

糖尿病大鼠成模后给予要付治疗，分别是药物A+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）10只；药物B+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物C+多糖1组（25ug/ml/天，灌胃给药）5只；药物A+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物B+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；药物C+多糖2组（25ug/ml/天，随饮水给药）5只；正常对照组（5只），多糖组和二甲双胍组给予每天灌胃，七叶皂甙钠组给予腹腔注射。

除正常对照组外其他SD大鼠给予高脂高糖饲料喂养。

1. 4 标本采集4周后，除取材组外，其他大鼠进行尾静脉取血，约300微升，30min 后用3000r /min 离心15min, 分离血清。

并且对糖尿病模型组3只，正常对照组1只进行取材（肾脏、胰腺、血管和心脏），动物称重后，分别于空腹状态下予水合氯醛麻醉（1ml/kg）,腹主动脉脉采血10mL, 30min后用3000r /min 离心15min, 分离血清。

大鼠糖尿病造模成功的标准

大鼠糖尿病造模成功的标准大鼠糖尿病造模成功的标准糖尿病是一种常见的代谢性疾病，其特点是血糖水平异常升高。

为了更好地研究糖尿病的发病机制和寻找新的治疗方法，科学家们常常使用动物模型进行实验研究。

而大鼠作为一种常用的实验动物，其糖尿病模型的建立和评价就显得尤为重要。

大鼠糖尿病模型的建立主要有两种方法：化学诱导和基因突变。

化学诱导法是通过给予大鼠某些化学物质，如链脲佐菌素（STZ）或高脂饮食，来诱导其发生糖尿病。

而基因突变法则是通过基因工程技术改变大鼠体内某些基因的表达，使其模拟人类糖尿病的发生过程。

无论是哪种方法，大鼠糖尿病模型的建立都需要满足一定的标准才能被认为是成功的。

下面将介绍大鼠糖尿病模型成功的标准。

1. 血糖水平异常升高：大鼠糖尿病模型的核心特征就是血糖水平异常升高。

正常情况下，大鼠的空腹血糖水平应该在3.9-6.1 mmol/L之间，而糖尿病模型大鼠的空腹血糖水平应该明显高于正常范围。

2. 葡萄糖耐量异常：正常情况下，大鼠在葡萄糖负荷后，血糖水平会在一定时间内迅速上升，然后逐渐恢复到正常范围。

而糖尿病模型大鼠在葡萄糖负荷后，血糖水平上升明显较高，并且恢复较慢。

3. 胰岛功能异常：胰岛是调节血糖水平的重要脏器，而胰岛功能异常是导致糖尿病发生的主要原因之一。

在大鼠糖尿病模型中，胰岛功能异常表现为胰岛细胞数量减少、胰岛素分泌减少或胰岛素抵抗增加等。

4. 病理学变化：糖尿病是一种慢性代谢性疾病，其发展过程中会引起一系列的组织和器官损伤。

在大鼠糖尿病模型中，可以观察到胰岛组织结构异常、肝脏脂肪变性、肾小球硬化等病理学变化。

5. 症状表现：大鼠在发生糖尿病后会出现一系列的临床表现，如多饮、多尿、消瘦等。

这些临床表现也是评价大鼠糖尿病模型是否成功的重要指标之一。

综上所述，大鼠糖尿病模型成功的标准主要包括血糖水平异常升高、葡萄糖耐量异常、胰岛功能异常、病理学变化和临床表现。

只有同时满足这些标准，才能认定大鼠糖尿病模型的建立是成功的。

STZ复制糖尿病肾病大鼠模型的研究近况

ＳＴＺ复制糖尿病肾病大鼠模型的研究近况关键词糖尿病肾动物模型大鼠糖尿病系继心血管病和肿瘤之后的第三大非传染病，其微血管并发症之一糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)已成为终末期肾衰竭主要原因之一，亦是导致糖尿病患者生存质量下降和过早死亡的主要原因。

且其患病率呈逐年上升趋势，国外有人据研究发现糖尿病肾脏损害不是仅局限于肾小球硬化亦存在肾小管间质的损伤，基于此建议更名为糖尿病肾脏损害（diabetic kidney disease ,DKD）。

但其发病机制尚未完全阐明，防治也不十分完善，因此正确建立较理想的动物模型以深入研究是非常重要的。

目前主要采用链脲佐菌素（streptozotoein，STZ)诱导糖尿病动物模型，其建模技术主要采用单纯药物和药物结合手术两种方法，但各家对STZ的用量、配制、用药途径以及手术建模方法学等不尽相同，对选用动物与建模标准及模型成熟时间和病理变化也无一致结果，现复习相关文献后就STZ复制糖尿病大鼠动物模型的研究情况综述如下：1 STZ的作用原理STZ为一种广谱抗生素，具有抗菌、抗肿瘤作用和致糖尿病的副作用。

STZ 对实验动物的胰岛B细胞具有高度选择性毒性作用，是目前使用最广泛的糖尿病动物模型化学诱导剂，其可使多种动物如大鼠、小鼠、狗、猴、小羊、中国地鼠、豚鼠和兔等产生糖尿病。

STZ的分子结构有一个高度活性的葡萄糖侧链，使胰岛B细胞对其进行错误性识别，并进入细胞内，进一步导致多聚ADP-核糖体激活，从而引起胞内NAD +和ATP消耗，最终导致大量反应性氧化簇产生。

其余部分则是STZ的毒性基团，对胰岛B细胞产生毒性作用，破坏B细胞，这种毒性可能通过给予某种物质或改变某些条件使之减弱或消失，如葡萄糖或其类似物，这便是实验前给动物充分禁食的依据。

2 动物的选择由于鼠成本低，易获得，而小鼠造模需SIZ量大且易死亡，故目前多采用大鼠造模。

主要包括Wistar大鼠和SD大鼠。

糖尿病大鼠模型

［10］周敏.实验性糖尿病动物模型研究及其进展［J］.浙江中医学院学报,2001,25(5)：79.
［13］郑里翔.STZ和alloxan联合使用复制实验性糖尿病大鼠模型［J］.中国病理生理杂志,1999,15(8)：758
2.2.1 链脲佐菌素（streptoxolocin,STZ）
STZ是一种广谱抗菌素，具有抗菌、抗肿瘤的性能和致糖尿病的副作用，对实验动物的胰岛β细胞具有高度选择性的毒性作用【5】。STZ诱导的糖尿病因给药方式不同，其成模效果也有所差别，如采用小剂量分次给药的方法，则建立与人类1型糖尿病表现相似的大鼠模型，如采用较大剂量一次性注射的给药方法，则建立与人类2型糖尿病表现相似的大鼠模型，其原理可能与胰岛的损伤程度有关【6】。
1型糖尿病模型（IDDM模型）：静脉或腹腔一次大剂量注射STZ所制得的速发型糖尿病系胰岛β细胞直接受损害所致：按55mg/kg给大鼠腹腔内注射STZ，由于STZ对胰岛β细胞的直接损害，胰岛的分泌减少而致血糖升高，出现糖尿病的各种表现【6】。多次小剂量注射所制得的迟发型糖尿病模型则与T淋巴细胞介导的β细胞不断破坏有关：应用30mg/kg多次注射STZ诱导大鼠DM，逐渐加重胰岛功能损伤，终达失代偿，可有效模拟糖尿病病程及发病机理，并降低动物模型的死亡率【7】。这样建立的动物模型与人类IDDM更接近。
［6］黄波,刘学政,庞东渤.不同途径注射链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的研究［J］.锦州医学院学报,2003,24(1):19.
［8］司晓晨，尚文斌，卞慧敏，等.链脲佐菌素加高脂膳食诱导2型糖尿病大鼠模型［J］.安徽中医临床杂志,2003,15(5)：383.
［9］郭啸华，刘志红，李恒，等高糖高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠模型及其肾病特点［J］.中国糖尿病杂志,2002,10(5)：290.

尾静脉注射STZ制备1型糖尿病大鼠模型实验的技巧

王继红，刘学政，杨雪佳
（．辽宁中医药大学，辽宁沈阳１０３；２１１０２．辽宁医学院，辽宁锦州１１０２００）
摘要：目的
探讨ＳＺ尾静脉不同给药方法和补造模时不同给药剂量致大鼠糖尿病成模状况的差异。方法Ｔ
本实验通
过尾静脉不同的给药方法（非盐水导入组、盐水导入组）以建立大鼠糖尿病模型。以及未成模的大鼠给予不同剂量的ＳＺＴ补造模（全量组、２３全量组）／。观察给药后大鼠成模情况、一般状况及检测各组成模后３ｄ、８Ｗ血糖值的变化。结、４Ｗ果盐水导入方法可以大幅度降低ＳＺ尾静脉注射造模时的死亡率（．２，并提高成模率（３９。补造模时２３剂Ｔ６５％）７．％）／
ｉａｔｏｉｅｅｔａｄｔｎｍｏｎｓｏＴｎｔｅｉｄｃｉｎｏｉｅｉｄｌａｓｂｅｖｄｍｐｃｆｆｒｎｄｉｏａａｕｔｆＳＺｏｕｔｆｄａｔｍｏｅｓａｏｏｓｒｅ．Ｔｅｐｒｅｔｇｆｉｂｔｄｌ，ｄｉｌｈｎｏｂｃｗｌｈｅｃｎａｅｏａｅｉｍｏｅｓｄｃ
盐水导入的尾静脉给药方量组死亡率降低（．７，Ｐ００）且成模后血糖各组间，各时间点无差异（００）６６％＜．５Ｐ＞．５。结论法是注射链脲佐茵素致大鼠糖尿病模型的最佳途径，补造模时以２３剂量为宜。／关键词：链脲佐茵素；盐水导入法；糖尿病模型；大鼠

糖尿病大鼠模型的建立

糖尿病大鼠模型的建立101实验动物SD大鼠，体重200-250克，8周龄。

02实验试剂1）STZ(链脲佐菌素)无色固体2-8℃干燥避光保存，115℃可分解为气体水溶液不稳定，溶于双蒸水或盐溶液。

但在低温下pH4-4.5是较为稳定。

2）柠檬酸钠，柠檬酸用于调制缓冲溶液。

03实验器材1ml注射器，大鼠固定器。

04试剂配制1）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH=4.5.0.1mol/L）配制0.1mol/L柠檬酸钠溶液，在用柠檬酸和氢氧化钠调节pH至4.5。

2）称量140mgSTZ溶解于10ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，配制成14mg/mlSTZ溶液。

05动物分组及造模1）大鼠自由摄食，饮水，动物房保持室温20-25℃，并维持一定的光照。

三天后，将大鼠随机分为实验组和对照组。

2）所有大鼠实验开始前12小时开始禁食但不禁水，禁食时间可根据情况顺延至18小时，但不要超过24小时。

3）将配置好的STZ溶液用锡箔纸包裹做避光处理并保存在冰水中，并在配制成功后30分钟内完整注射造模。

4）称量大鼠体重，采用腹腔注射给药进行造模，剂量为70mg/kg。

对照组注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。

06模型指标检测血糖测定：实验过程中腹腔注射STZ 48小时和72小时分段测定大鼠血糖并记录，采用剪尾采血法，使用血糖试纸进行检测。

※两次检测血糖浓度均高于16.8mmol/ml，即可认为造模成功。

07后期饲养糖尿病大鼠会有很明显的“三多一少”症状，所以尽量分笼饲养，勤换垫料，并保证足够的饲料和饮水供给。

糖尿病大鼠慢性溃疡伤口模型201实验动物SD糖尿病大鼠（八周以上大鼠，并糖尿病造模时间超过1周并少于2周）普通SD大鼠（八周以上，时间相近）。

02实验试剂1）水合氯醛（或戊巴比妥钠）用于麻醉实验大鼠。

2）医用酒精，表层消毒。

3）龙胆紫（或苦味酸，碘酊）创口标记染液。

4）试纸，标记创口，提前裁成直径为2cm的小圆片，并浸入标记染液中。

STZ诱发的糖尿病动物模型构建技术原理

STZ诱发的糖尿病动物模型构建技术原理
STZ全称链脲佐菌素，这种药物的亚硝基脲结构能够选择性地损伤胰岛β细胞，损伤后的胰岛重构，继而纤维化。

显然，STZ的剂量是关键因素，注射剂量大则完全损伤胰岛，胰岛素绝对缺乏，形成1型糖尿病。

(STZ分子结构)
大鼠需要禁食不禁水12h，尽可能使用雄性，因为雌性对STZ的反应并不均一，这可能与雌激素水平有关。

STZ一般是现用现配2%浓度，采用单次腹腔注射即可，注射量50mg/kg(一定要注意回抽，严格禁止注入胃肠道)。

注射STZ溶液2天或者3天后，连续3天采用尿糖检测试纸检测尿糖水平，血糖水平采用葡萄糖氧化酶法检测即可，若尿糖≥3+，血糖持续升高，说明注射是没问题。

一周后大鼠可出现三多一少症状，再次检测，若尿糖≥3+，血糖≥16.67mmol/L，说明造模成功。

注意事项：
（1）尽量不用小鼠，因为小鼠对STZ敏感度不高，容易造成组内差异较大。

（2）上面提到的血糖、尿糖指标以及测定时间是比较很多资料后得出的，公认性也较强，是可用的。

（3）单次大剂量注射才是可取的，小剂量只会造成胰岛炎。

（4）血糖越高，动物死亡率越高，因此要严格控制STZ的注射剂量，预实验摸索条件是必须的；可以适当的补充胰岛素，防止低血糖导致的大量动物死亡。

（5）STZ造模比较适合长期观察，因为这种药物导致的胰岛损伤不易修复，大鼠不易代偿。

（6）静脉注射的死亡率比腹腔注射高。

大鼠二型糖尿病造模方法

大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约8.3%的成年人患有糖尿病。

到2035年，该病患者人数预计会上升至5.92亿。

在2013年，全球约有3.82亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为1.14亿。

糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。

2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。

6%，60岁以上老年人患病率高达19.6%。

因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。

因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。

得出结果为：使用体重在190g ~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。

关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ，糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。

病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。

长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。

糖尿病分为1型糖尿病（Type 1 diabetes）和2型糖尿病（Type 2 diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。

糖尿病实验报告

食量对比图
40 30 20 10 01 2 3 4 5 6 实验鼠食量/g 22.4 21.2 21.6 26.8 29 28.8 对照鼠食量/g 27.4 23.1 25.1 17.7 19.1 18.8
天数
实验鼠食量/g 对照鼠食量/g
结果：
由图知：实验鼠的食量增加，对照鼠的食量变化不明显。
糖尿病
2009级临床2班第一组组员；曹霞陈佳龙
马燕郭亚妹郭瑜吴嘉楠
一、实验材料
（1）、实验动物：实验鼠体重 300g,对照鼠253g,健康大鼠。
（2）、实验材料：链脲霉素（ＳＴＺ）、人胰岛素、血糖仪及同批号血糖试纸、微量注射泵、水合氯醛、无水葡萄糖、枸橼酸—枸橼酸钠缓冲液。
二、Ｉ型糖尿病与胰岛素干预糖尿病模型制备
29.0
６ 282.0
28.8
75
33.1 耸毛、乳黄活动减少、
萎靡
115
76.6 耸毛、乳黄活动减少、
萎靡
← 第一天
第六天 →
对照鼠观察结果：
天体重/g 数
１ 262.0
食量/g 27.4
饮水量 /ml
25
尿量/g 毛色 14.5 乳白
２ 263.0
23.1
21
6.6 乳白
３ 262.0
三、实验鼠观察结果：
天体重/g 数
１ 293.0
食量/g 22.4
２ 288.3
21.2
饮水量 /ml
25
85
尿量/g 20.0 77.5
毛色
精神状态
乳白、有光泽
耸毛、乳白
正常正常
３ 286.8
21.6

STZ诱导的大鼠糖尿病模型

STZ诱导的大鼠糖尿病模型糖尿病（diabetes mellitus，DM）是胰岛素抵抗和胰岛素缺乏导致的以高血糖为主要特征表现的代谢紊乱综合征，易发生心、脑、肾等并发症。

糖尿病状态下血浆游离脂肪酸异常增高，心肌耗能增加，葡萄糖代谢下降，脂肪酸代谢增加，心脏内过量的脂肪酸摄取和氧化导致心肌内脂肪代谢产物的积聚引起心脏脂质毒性，并在此基袖上出现氧化应激，导致细胞调亡、内皮功能紊乱、炎症反应增加，同时出现心肌的损伤，心肌的结构和功能均发生改变，最后导致糖尿病患者的死亡。

1.实验动物SPF级SD小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为180g~200g。

2.实验分组：实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3. 模型周期4W4.主要试剂及配制方法柠檬酸、柠檬酸三钠、链脲佐霉素(Streptozocin, STZ)1. 柠檬酸钠缓冲液配制：将2.10 g柠檬酸加入双蒸水100 ml配成柠檬酸母液，称为A液；将2.94g柠檬酸三钠加入双蒸水100 ml配成柠檬酸钠母液，称为B液；将A、B液按1:1.32比例混合，pH计测定pH值，调定溶液pH=4.0，即是所需配制STZ的0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液。

2. STZ溶液的配制：将STZ溶于0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液中，新鲜配制成10 mg/mL浓度的STZ溶液，并用0.22μm滤菌器过滤除菌。

注意避光配制，现用现配。

5.建模方法1.术前12h禁食2. 模型组小鼠按照55 mg/kg 剂量的STZ 进行腹腔注射，对照组给予给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。

3. STZ注射7 d后，测空腹血糖，选择血糖为13.5-25mmol/L纳入正式实验。

4. STZ注射后，每周测血糖，称体重，观察体重血糖变化。

5. 第4周检测各组大鼠的体重和空腹血糖值后，摘眼球采血，室温静置2h 后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。

高脂高糖饮食加STZ大鼠动物模型

高脂高糖饮食加STZ大鼠动物模型
这种模型就是先给大鼠喂高脂高糖饲料，以诱发胰岛素抵抗，随后再腹腔注射小剂量的STZ不完全损伤胰岛β细胞，以诱发分泌障碍；最终就造成了大鼠2型糖尿病。

一直以来，使用高脂高糖饲料造模的各种动物模型，饲料的配方比较关键，大家也比较关注这个问题。

可以买商用的饲料，但是有点贵。

如果自己配制，可以参考以下配方，该配方来自《人类疾病动物模型的复制》第2版。

“猪油10%，2.5%胆固醇，20%蔗糖，1%胆酸盐，66.5%普通饲料。

”
造模很简单。

高脂高糖饲料喂4周；然后25mg/kg的剂量注射STZ(浓度为0.25%），接着继续高脂高糖饲料喂养4周。

也可以将STZ剂量提高到30，每周1次，连续2周。

都是可行的。

验证模型的标准是血糖大于7.8以及胰岛素敏感指数下降。

注意事项：
（1）高脂高糖饮食的动物非常容易死亡，尤其是在注射了STZ之后依然采用高质高糖喂养，这个死亡率真的说不准。

（2）糖尿病动物极易发生感染，动物间的撕咬伤也不易愈合；此外要经常换垫料，因为动物都是多尿的，潮湿的饲养笼更容易出问题。

唯一的办法就是勤快点，细心照料你的动物。

实验三大鼠糖尿病模型的复制

3 载玻片和盖玻片的处理：（1）清洗：新载玻片上有油污，必须经过清洁液浸泡 12～24h，流水充分漂洗后用蒸馏水清洗5遍以上，浸泡在95%酒精内2h，用绸布擦干或用红外线烤箱烤干均可，贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄，以上处理程序必须缩短，清洁液浸泡只需2h，流水冲洗注意勿损伤玻片等。（2）载玻片上涂粘附剂：多聚赖氨酸液：多聚赖氨酸 0.1g，加蒸馏水10ml，混合后即可涂片。
冰冻切片前处理
1取材：组织标本主要取之于活组织检查标本、手术切除标本、动物模型标本以及尸体解剖标本等。前三者均为新鲜组织，后者是机体死亡2h以上的组织，可能有不同程度的自溶，其抗原可能有变性消失，严重弥散现象，因此，尸检组织应尽快固定处理， 2固定：为了更好的保持细胞和组织原有的形态结构，防止组织自溶，有必要对细胞和组织进行固定。固定液：4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.4（多聚甲醛 40g,0.1mol/L PBS液pH7.4500ml，两者混合加热至60℃，搅拌并滴加1n NaOH至清晰为止，冷却后加PBS液至总量 1000ml）。方法：浸入法，将组织浸泡在固定液中
操作方法：
Ⅰ型糖尿病造模方法：
1. 链脲佐菌素(stz)建模，造模前的喂养 Ⅰ型糖尿病模型成模比较快，通常大鼠在普通饲料适应性喂养2周后即可开始造模。禁食12小时以上(一般过夜禁食，不禁水)。禁食的时间越长， STZ对胰岛β细胞的破坏力越明显，即药效越高。所以相对禁食时间延长，可以降低STZ的用量。 2. 测正常大鼠血糖，给药，链脲菌素溶于枸缘酸缓冲液或柠檬酸缓冲液（pH值为4.0－4.5）中， 70~65mg/kg给大鼠腹腔注射；35、45、55、 65mg/kg（0.35、0.45、0.55、0.65ml/100g）。

尾静脉注射STZ制备1型糖尿病大鼠模型实验的技巧

尾静脉注射STZ制备1型糖尿病大鼠模型实验的技巧【摘要】目的探讨STZ尾静脉不同给药方法和补造模时不同给药剂量致大鼠糖尿病成模状况的差异。

方法本实验通过尾静脉不同的给药方法(非盐水导入组、盐水导入组)以建立大鼠糖尿病模型。

以及未成模的大鼠给予不同剂量的STZ补造模(全量组、2/3全量组)。

观察给药后大鼠成模情况、一般状况及检测各组成模后3 d、4 w、8 w血糖值的变化。

结果盐水导入方法可以大幅度降低STZ尾静脉注射造模时的死亡率(6.52%)，并提高成模率(73.9%)。

补造模时2/3剂量组死亡率降低(6.67%，P<0.05)且成模后血糖各组间，各时间点无差异(P>0.05)。

结论盐水导入的尾静脉给药方法是注射链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的最佳途径，补造模时以2/3剂量为宜。

【关键词】链脲佐菌素;盐水导入法;糖尿病模型;大鼠Empirical Skills of Establishing Type 1 Diabetie Model Rat by InjectionThrough Vena Caudalis StreptozotocinWANG Jihong1， LIU Xuezheng2， YANG Xuejia2(1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine ，Shenyang 110032 China;2.Liaoning Medical University， Jinzhou 121000 China)Abstract: Objective To explore the impact on induction of diabetes in rat models with different STZ administration and dosage. Methods SD rats received caudal vein injection of STZ to induce diabetes， with or without saline preceding the STZ injection. The impact of different additional amounts of STZ on the induction of diabetic model was also observed. The percentage of diabetic models，general condition and the blood glucose were determined on 3d， 4w and 8w after STZ injection. Results The method of saline usage significantly decreased the mortality(6.52%) and increased the percentage of diabetic models(73.9%). The additional amount of STZ had its lowest mortality (6.67%) when 2/3 routine amount was used， meanwhile the differences of blood glucose remained no significant compared with the control group. Conclusions The administration of saline preceding STZ injection is better than STZ injection alone， and if necessary， a 2/3 additional amount of STZ should be used.Key words:streptozotocin; importing with liquor natrii chloride; diabetie model; rats近几十年来，随着生活水平的提高和人口的老龄化，糖尿病患病率出现世界性的上升趋势，对人群总体健康的危害程度已居慢性非传染性疾病的第3位[1]。

STZ诱导的I型糖尿病肾病大鼠模型自噬相关蛋白的表达

STZ诱导的I型糖尿病肾病大鼠模型自噬相关蛋白的表达摘要：目的观察I型糖尿病肾病大鼠模型肾脏中自噻相关蛋白LC3、p62的表达情况。

方法①建立STZ诱导的I型DN大鼠模型：将20只雄性SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病肾病模型组。

采用鼠尾静脉注射STZ的方法诱发SD大鼠糖尿病肾病（STZ为50mg/kg）。

对照组注射相同体积的枸橼酸盐缓冲液，3天后开始测定血糖和尿糖值，当血糖值≥16.7mmol/L，尿糖值为3+-4+者可确定为糖尿病模型。

成模后第八周处死大鼠，留部分肾皮质组织，4%多聚甲醛固定。

②进行HE染色观察两组间肾组织病理改变。

③免疫组织化学检测两组间肾组织LC3和P62蛋白表达及分布情况。

④采用Pearson相关分析评判LC3、p62与STZ大鼠蛋白尿、肌酐的相关性。

结果①STZ诱导的I型DN大鼠的血尿生化检测结果：血糖波动在19.2-23.3mmol/l；血肌酐波动在72.5-122.7umol/l；尿蛋白波动在4.63-9.19g/24h②STZ大鼠模型基本病理改变：与正常对照组相比，可见肾小球体积明显增大，肾小管局灶性萎缩，小管间质造型纤维化，基底膜增厚，系膜细胞及系膜基质增多。

③p63、LC3免疫组化结果：肾组织小管上皮中，p62表达明显增加，LC3表达明显下降，定量分析结果显示，STZ大鼠肾组织小管中，p62较正常组增加2.5倍，LC3下降35%（p<0.01）④p62、LC3表达与蛋白尿、血肌酐的相关性分析，提示：p62与STZ大鼠蛋白尿、肌酐呈正相关（P<0.01），LC3与STZ大鼠蛋白尿、肌酐呈负相关（P<0.05）。

结论STZ诱导的I型DN大鼠模型中，自噬相关蛋白P62 表达明显增加，LC3表达明显下降，并于大鼠蛋白尿、血肌酐呈相关。

关键词：糖尿病肾病；自噬相关蛋白；妊娠The expression of autophagy related protein in type I induced diabetic nephropathyrats induced by STZXiaoxia1 LIhui2（Hunan maternity and child health care hospital，Hu Nan Chang Sha 410000；2The First Hospital of Changsha，，Hu Nan Chang Sha 410000；）Abstract：Objective To observe the expression of LC3 and p62 in kidneys of type I diabetic nephropathy rats.Method：Firstly，A STZ induced tpye I DN rat model was established：20 male SDrats were randomly divided into normal control group and diabetic nephropathy model group.The diabetic nephropathy of SD rats was induced by injection of STZ into rat tail vein（STZ = 50mg/kg）.The control group was injected with the same volume of citrate buffer.After 3 days，the blood sugar and urine sugar were measured.When the blood sugar was more than 16.7mmol/L and the urine sugar was 3+-4+，the diabetes model was determined.The rats were sacrificed eighth weeks after modeling，leaving part of the renal cortex and fixed by 4% paraformaldehyde.Secondly，The HE staining was used to observe the pathological changes of renal tissue between the two groups.Thirdly，Immunohistochemical staining was used to detect the expression and distribution of LC3 and P62 protein in two groups.At the end，The correlation between LC3，p62 and proteinuria and creatinine in STZ rats was evaluated by Pearson correlation analysis.Results：The biochemical test results of STZ induced I DN rats：blood glucose fluctuation at 19.2-23.3mmol/l；serum creatinine fluctuation at 72.5-122.7umol/l；urine protein fluctuation in 4.63-9.19g/24h.The basic pathological changes in the STZrat model：compared with the normal control group，the glomerular volume was obviously increased，the renal tubule was atrophied，the tubulointerstitial fibrosis，the thickening of the basement membrane，and the increase of mesangial cells and mesangial matrix.P63 and LC3 immunohistochemical results：in the renal tubular epithelium，the expression of p62 was obviously increased and the expression of LC3 decreased obviously.The quantitative analysis showed that in the renal tubules of STZ rats，p62 was 2.5 times higher than that of the normal group，and the LC3 decreased by 35%（p<0.01）.The correlation analysis of p62 and LC3 expression with proteinuria and serum creatinine showed that p62 was positively correlated with proteinuria and creatinine in STZ rats（P<0.01）.LC3 was negatively correlated with proteinuria and creatinine in STZ rats（P<0.05）.Conclusion：The expression of autophagy related protein P62 was significantly increased in the I DN rat model induced by STZ，and the expression of LC3 was obviously decreased，and it was related to proteinuria and serum creatinine in rats. Key Word：Diabetic nephropathy；autophagy related protein；pregnancy 糖尿病肾病是威胁女性妊娠的重要的独立的危险因素，患有糖尿病合并肾病的女性必须在安全的情况下才可以正常妊娠。

STZ糖尿病模型(来自丁香园)

造模方法（1）链脲佐菌素（Streptozotocin）诱导大鼠糖尿病模型方法将大鼠禁食12h，按60mg/kg体重腹腔注射STZ，每日1次，连续2次，成功制备Ⅰ型糖尿病大鼠模型，并且该模型具有高血糖、体重减轻、多饮多食多尿的特点，与临床Ⅰ型糖尿病吻合；但在此实验中，若造模组只腹腔注射STZ一次，并给予高热量饲料饲养12周，则可制备Ⅱ型糖尿病动物模型，且按该法制备出的模型具有超重、糖耐量减低、血脂升高、血清胰岛素升高及胰岛素受体结合力降低伴胰岛素抵抗的特点，类似于Ⅱ型糖尿病病人的临床特征。

Ⅰ型糖尿病与Ⅱ型糖尿病动物模型的制备可能与STZ注射的剂量有关系：大剂量（常为120mg/kg）注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成Ⅰ型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类Ⅱ型糖尿病的动物模型。

/bbs/actions/archive/post/5636508_0.html（2）你还是采用腹腔的比较好！按65或是70给都可以。

最好是给STZ后7天开始测定血糖分组为好，这样血糖已经稳定了！我给我的一个朋友用ALLOXAN，尾静脉。

大鼠，50mg/kg,全都死亡了！给STZ前有的说禁食，有的说不用，但还是禁的好些，给STZ后，也不要立即给予食物，1小时后再给。

还有腹腔注射的手法要正确！！给STZ要快，最好在冰水中冷却溶液！/bbs/actions/archive/post/672237_0.html（3）链脲霉素（STZ）诱导的高血糖动物模型STZ水溶液不稳定，对小鼠的生物半衰期仅有5min左右，需要快速静脉注射。

造型剂量犬50mg/kg，静注，可引起糖尿病，动物死亡率较高；如15mg/kg，连续3天也可。

大鼠60-80mg/kg，iv或ip，小鼠100-200mg/kg，iv或ip。

stz造模[宝典]

链脲佐菌素(Streptozocin,STZ )诱发糖尿病动物模型的原理:STZ对一定种属动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用，能诱发许多动物产生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造动物模型。

国外有学者报道选用雄性大鼠制造模型的成模率明显高于雌性大鼠。

1型糖尿病与2型糖尿病动物模型的制备与STZ注射的剂量有关系：大剂量注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成1型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类2型糖尿病的动物模型。

造膜前的喂养:Ⅰ型糖尿病模型成模比较快，通常大鼠在普通饲料适应性喂养2周后即可开始造模。

Ⅱ型糖尿病模型：高脂饮食诱导加小剂量STZ。

造模前喂以高脂(高糖)饲料，诱发出胰岛素抵抗。

高脂(高糖)饲料：高脂(高糖)饲料成分：其中含10蔗糖，10猪油，5胆固醇。

由基础鼠饲料加蔗糖、炼猪油和蛋黄按比搭配制作高脂高糖饲料：其比例为猪油18 ,蔗糖20 ,蛋黄3 ,基础饲料59 。

预实验的重要性：很重要。

实验时STZ的给药量应参照预实验的结果，尽量不要盲目按照文献上或他人的给药量来直接使用，鼠均重和空腹(低糖状态)抗药力、禁食时长、注射选时、以及之前饲养过程、测糖选时等都不相同，通过预实验来确定符合自己实验鼠的给药计量，才是最科学的。

常用给药剂量：Ⅰ型糖尿病模型：大鼠剂量为70～65mg/KgⅡ型糖尿病模型：高糖高脂喂养1～2 个月的大鼠,STZ 剂量在25～40mg/Kg 。

或参考文献（鼠均重不同，本剂量以200克均重为例）。

配置STZ液：柠檬酸缓冲液的配制：柠檬酸(FW:210.14) 2.1g加入双蒸水100mL中配成A液；柠檬酸钠(FW:294.10)2.94g加入双蒸水100mL中配成B液。

用时将A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH计测定ph值,调节ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。