实验四 PEG介导的细胞融合
PEG促细胞融合实验报告
题目：PEG促细胞融合一．实验目的:1.掌握细胞融合的方法2.学习使用PEG促进细胞融合的方法和步骤二．实验原理1.细胞融合：在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
由于体外培养的细胞很少会发生自发融合融合频率大约在10−4-10−6之间，因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞融合。
2.促进细胞融合的方法a)生物方法：病毒（Sendai virus，Newcastle disease virus，Vaceine virus）b)化学方法：聚乙二醇、盐类融合剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油-醋酸酯、油酸盐、脂质、Ca2+配合物等。
PEG相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
在众多的化学试剂中，PEG应用最为广泛，因PEG液比病毒更易制备和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。
c)物理方法：电融合:电处理融合法是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，是融合率大为提高。
电脉冲作用时引起膜结构局部扰乱，出现小孔洞。
而相对的脂双层间分子在范德华力作用下，形成脂分子桥。
由于连接处的细胞膜表面曲率大，处于高张力状态，在热力学上是不稳定的，所以最终导致两细胞逐渐融合成一个圆形的大球状细胞。
与ⅣG法比较，电融合法融合率高：重复性强：诱导仅发生在质膜接触部位，对细胞或原生质体伤害小：融合是在同步状态下进行，活细胞数目多；装置精巧，方法简单，可在显微镜下观察或录象融合过程：免去PEG诱导后的洗涤过程，诱导过程可控制性强。
三．实验材料及设备1.实验材料：a)50%PEG混合液b)鸡红细胞悬液c)生理盐水d)Hanks溶液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器c)酒精灯、恒温水浴锅d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.制取鸡血红细胞悬液2.取细胞悬液1mL，移入10mL离心管，加入4mL0.85%生理盐水混匀。
实验-细胞融合
实验4 细胞融合〔实验目的〕1、了解细胞融合的原理2、掌握PEG介导细胞融合过程的操作〔实验原理〕聚乙二醇（PEG）分子能使细胞凝集，改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处的细胞膜脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞间接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
〔试剂材料〕1、仪器：倒置显微镜、水浴锅2、试剂（1）0.85%生理盐水（2）GKN液NaCl 8g, KCl 0.4g, Na2HPO4.2H2O 1.77g, NaH2PO4. H2O 0.69g, 葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000ml重蒸水中。
（3）50%PEG液临用前配制，50g PEG4000，在沸水浴中加热，冷却至50℃时加入预热至50℃的50ml GXN 液，混匀，37℃备用。
3、材料：鸡红细胞悬液〔内容方法〕1、抗凝的鸡血，加入4倍体积的0.85%生理盐水，为血细胞储备液，4℃冰箱可保存一周2、鸡血储备液1ml，加入4ml生理盐水，混匀后1200r/min离心5min，去上清，再加入生理盐水同样条件下离心一次。
血细胞沉淀加入10mlGKN液制成鸡血细胞悬液3、取悬液进行计数，用GXN将红细胞稀释至3-4×107个/毫升浓度。
4、取稀释好的红细胞悬液1ml，加入0.5ml 50%PEG混匀，37℃/39℃温浴20-30min。
5、加入GKN溶液至8ml，37℃温浴20min。
6、1200r/min离心5min，沉淀用GKN溶液再洗一次。
7、收集沉淀，涂片，镜检。
也可采用下面方法：1、细胞生理盐水洗涤后用GKN溶液制成5%悬液2、红细胞悬液1ml，1200r/min离心5min，去上清。
3、细胞沉淀用手指轻弹使细胞疏松，再逐滴滴加50%PEG溶液0.5ml，1分钟之内加完，边滴加边轻晃细胞，使PEG与血细胞混合4、混合物在37℃温浴2min。
5、加入GKN 2ml，37℃温浴5min。
6、1200r/min离心5min，去大部分上清，沉淀涂片，晾干后观察。
实验四 PEG诱导细胞融合
实验四 PEG诱导细胞融合（注：设计性试验）一、实验目的1、了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2、通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验米初步掌握细胞融合技术二、实验原理两个或两个以上的细胞合并为一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合。
在自发或人工诱导下均可发生。
自然情况下的受精过程即属于这种现象。
不同种细胞的融合也叫做细胞杂交。
基本过程包括细胞融合形成异核体、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。
20世纪30年代，科学家们相继在肺结核，天花，水痘，麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。
50年代开始人工细胞融合的研究。
60年代初，日本学者冈田（Okada）首次使用仙台病毒诱导动物细胞融合。
70年代后，逐渐采用化学融合剂（如PEG），由于具有使用方便、活性稳定、容易制备和控制等优点，已成为人工诱导细胞融合的主要手段。
80年代初出现了电融合技术，逐渐应用于科学研究。
诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（如病毒诱导融合法）、化学方法（如聚乙二醇PEG诱导融合法）、物理方法（如电场诱导融合法）。
本实验利用PEG诱导细胞融合。
聚乙二醇分子能减少细胞间的游离水，促使细胞聚集；破坏或者改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
三、实验材料（一）、试剂：1、Alsver’s液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.80g，NaCl 0.42g，溶于100ml蒸馏水中。
2、0.85％生理盐水3、GKN溶液：NaCl 8g、KCl 0.4g、Na2HPO4·2H2O 1.77g、Na2HPO4·H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000ml蒸馏水中。
4、35％PEG液：实验前临时配制，根据需要称取定量PEG（Mw=4000），放入刻度试管或刻度离心管内，在沸水浴中加热，使其熔化，待冷却至50℃时，加入预热至50℃的GKN液，混匀。
PEG诱导的细胞融合实验
【实验操作】
4、 PEG介导融合：用手指轻弹离心管底部，使沉 淀松散，然后将离心管放在37ºC水浴中； 吸取预 热至37℃的50％PEG 0.5ml ，逐滴加入到细胞沉 淀中，边加边振摇浑匀，使细胞在50％PEG 中总 时间控制在90秒之内；
PEG诱导的细胞融合实验
细胞融合（cell fusion）
• 又称细胞杂交（cell hybridization），是指 两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的 现象。
用细胞融合方法培育的薯番茄
细胞融合抗盐碱耐干旱葡萄新品种
细胞融合生产 单克隆抗体
细胞融合的诱导
1、病毒诱导：如仙台病毒（Sendaivirus） ，主要用于动
• 了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术； • 学会鉴别： 1、鸡红细胞 2、小鼠腹水瘤细胞 二、实验器材 普通离心机 水浴锅：50ºC，37ºC 计数板
三、实验试剂
1、180IU/ml肝素钠生理盐水溶液 2、Hanks溶液 3、50％PEG：将10gPEG加入带盖离心管中，
融合细胞核数 ×100％ 融合细胞核数＋未融合的细胞核数
【注意事项】
• 保持PEG温度，否则易凝固 • PEG处理时间不宜过长，否则会造成细胞
破坏或有多个细胞彼此融合形成巨大的合 胞体。 • 经PEG处理后加液混匀时应轻轻吹打，以 免刚刚融合的细胞分开。
【参考书】
1、《体外培养的原理与技术》第一版，薛庆 善编，科学出版社。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG诱导细胞融合原理。
细胞融合是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象，它在生物学研究中具有重要的意义。
PEG（聚乙二醇）是一种常用的细胞融合剂，通过PEG诱导细胞融合可以实现不同细胞的融合，从而产生新的细胞群体。
本文将介绍PEG诱导细胞融合的原理及其在细胞生物学研究中的应用。
首先，PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG的高渗透性和毒性，使细胞膜受到破坏，从而促使细胞融合。
在实验中，将两种不同类型的细胞分别与PEG混合，PEG能够破坏细胞膜，使得两种细胞的质膜融合在一起，形成一个新的细胞。
这种方法可以用于融合不同细胞系，或者将外源基因导入目的细胞中。
其次，PEG诱导细胞融合在细胞生物学研究中有着广泛的应用。
通过细胞融合技术，可以将两种不同类型的细胞融合在一起，从而研究它们的互补性和相互作用。
例如，将癌细胞与正常细胞融合，可以研究癌细胞的恶性特性和调控机制；将干细胞与成熟细胞融合，可以研究干细胞的分化能力和再生潜力。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞杂交技术，将两种不同细胞的染色体融合在一起，研究染色体的配对和重组。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞治疗和再生医学研究。
通过将患者的细胞与健康捐赠者的细胞融合，可以修复患者受损的组织和器官。
例如，将患者的干细胞与健康捐赠者的成熟细胞融合，可以使干细胞具有更强的分化能力，从而用于治疗各种疾病和损伤。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于再生医学研究，研究干细胞的再生潜力和分化机制，为再生医学的发展提供重要的实验基础。
综上所述，PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞生物学技术，通过破坏细胞膜促使细胞融合，具有广泛的应用价值。
在细胞生物学研究中，PEG诱导细胞融合可以用于研究细胞互补性和相互作用，染色体配对和重组，以及细胞治疗和再生医学研究。
相信随着科学技术的不断发展，PEG诱导细胞融合技术将会在细胞生物学和医学领域发挥越来越重要的作用。
PEG介导的细胞融合
PEG介导的细胞融合摘要：细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的现象，也称细胞杂交，可通过自发或人工诱导实现。
本实验中主要是以小鼠的脾脏淋巴细胞为融合实验材料，通过化学方法（聚乙二醇PEG）来最终使细胞达融合，主要目的是为了探究不同浓度的PEG与细胞融合率的关系。
将小鼠脾脏取出制成脾脏淋巴细胞悬液后，分别取1毫升分装到A、B、C、D、E五根离心管中，离心后加入不同浓度的融合剂各0.5毫升，实验中设置了20%、35%、50%、65%、80%五个PEG浓度梯度，经处理之后制成玻片在高倍显微镜下观察，对视野中细胞总数和融合细胞对数进行计数，就算融合率，最终得出结果。
结果表明：在一定浓度范围内（20%-70%），细胞的融合率与PEG的浓度成正比关系；当浓度过大时，细胞融合率反而会有降低。
关键词：细胞融合；PEG；融合率；不同浓度前言：人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。
由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体。
细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。
细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。
因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。
这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
1.材料与方法1.1实验材料：小鼠脾脏细胞1.2实验器材：10ml离心管、吸管、载玻片、盖玻片、离心机、恒温水浴锅、显微镜、解剖剪刀、镊子、培养皿、漏斗、尼龙布、1ml注射器、6#针头。
1.3试剂：PEG、D-Hanks液、蒸馏水、0.87%NH4Cl。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
PEG是聚乙二醇的缩写，是一种具有高分子量的线性聚合物。
PEG在
生物学研究中被广泛应用，其中最常见的应用之一就是诱导细胞融合。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合成一个单独的细胞。
这种技术被
广泛应用于生物学研究中，例如制备杂交瘤细胞、制备单克隆抗体和
产生转基因动物等。
PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG分子与细胞膜相互作用，使得两个或多个不同类型的细胞在PEG存在下发生融合。
具体来说，PEG通过以下机制促进了细胞融合：
1. 破坏细胞膜结构
PEG分子可以与水形成氢键，并且可以与亲水性区域结合。
当PEG溶液与细胞接触时，它会插入到细胞表面，并破坏部分磷脂双层结构，
从而使得两个或多个不同类型的细胞暴露出其内部的细胞质。
2. 促进细胞膜的接触
PEG分子可以通过两种方式促进细胞膜的接触。
首先，PEG可以降低水的表面张力，使得两个或多个细胞之间的距离缩小。
其次，PEG可以与细胞膜表面的亲水性区域结合，从而增加了两个或多个细胞之间的吸引力。
3. 促进细胞融合
当两个或多个不同类型的细胞表面接触时，PEG会形成一个临时性的孔道，使得两个或多个细胞质混合在一起。
这些孔道很快就会关闭，并且新形成的单一细胞会拥有所有原始细胞中所包含的遗传物质和生物学特性。
总之，PEG诱导细胞融合是一种简单、有效、广泛应用于生物学研究中的技术。
它利用PEG分子与细胞膜相互作用来促进不同类型细胞之间发生融合，并且可以产生许多重要的研究工具和应用。
利用聚乙二醇(简称PEG)为媒介物进行细胞融合实验原理及步骤
利用聚乙二醇（简称PEG）为媒介物进行细胞融合
一、溶液配制
①Alsver液（同前S）
②0。
85生理盐水液
③GKN液
NaCl 8g、KCl 0.4g、Na
2HPO
4
·2H
2
O1.77g，NaH
2
PO
4
·H
2
O 0.69g，Glucose（葡
萄糖）2g，酚红 0。
01g溶于1000ml重蒸水中。
④根据实验需要，称取少量PEG（MW=4000）放入刻度试管或刻度离心管内，在沸水浴或高压蒸汽灭菌30分钟，待冷却至50℃时，加入等体积并预热至50℃的GKN液混匀。
二、融合方法
注射器内先吸入2mlAlsver液，再从翼下静脉取鸡血2ml，注入管内，再加入Alsver液6ml，使成为悬液，混匀后放在4℃下，可使用3-4天。
取以上悬液1ml0。
85%生理盐水，混匀后，以1200rpm离心5分钟，去上清液后，再以上述条件离心两次（5分钟，10分钟）。
将最后一次离心沉淀的血球去上清液，加入适量GKN液，使成10%的悬液。
取上悬液，以血球计数法计数，再以GKN液稀释至每立方毫米含红细胞3-4万个。
取以上血球悬液1ml，加入0。
5ml 15%的PEG液混匀，在常温下2-3分钟后发即可进行镜检，并计算出融合率。
融合率指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞其细胞核的总数与此视野内所有细胞（包括已融合细胞）的细胞核总数之比。
称为融合率，通常以百分数表示，而且要进行多个视野测定，再加以平均统计，更为准确。
聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合实验原理及步骤
实验三：聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合【课前预习】1．介导细胞融合的方法有哪些？2．细胞融合技术有哪些方面的应用？【目的要求】掌握细胞融合原理以及应用PEG 诱导细胞融合的方法。
【基本原理】两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。
在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。
人工细胞融合开始于五十年代，六十年代到七十年代作为一门新兴的技术发展很快，应用范围极广。
细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。
不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。
因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。
这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。
人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域，如研究核质关系、绘制染色体基因图谱、制备单克隆抗体、育种等。
细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus) ，聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和电脉冲。
目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。
聚乙二醇(PEG)结构为：HOH2C(CH2OCH2)n CH2OH，相对分子质量在200-6000 均可用作细胞融合剂。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
peg介导细胞融合的原理
peg介导细胞融合的原理细胞融合是指将两个或更多的细胞融合成一个细胞，使它们的细胞膜和细胞质合并。
细胞融合在生物学研究和生物医学应用中起着重要的作用。
PEG（聚乙二醇）作为一种常用的介导剂，可以促进细胞融合。
PEG介导细胞融合的原理是利用PEG的特殊化学性质和细胞膜的特性。
PEG是一种高分子化合物，具有良好的生物相容性和溶解性。
当PEG溶液与细胞接触时，PEG分子会与细胞膜上的脂质双层相互作用。
PEG分子通过疏水作用与细胞膜上的疏水基团结合，形成一个覆盖在细胞膜上的PEG层。
这个PEG层可以降低细胞膜的表面能，使细胞膜变得柔软和易变形。
同时，PEG层还可以增加细胞膜之间的相互吸引力，促进细胞的接近。
当两个带有PEG层的细胞接触到一起时，PEG层会相互交叉和扩展，形成一个连续的PEG层。
这个连续的PEG层将两个细胞包裹在内，使细胞膜之间的距离缩短，进而促使细胞融合。
细胞融合发生后，细胞膜和细胞质会合并成一个整体。
融合后的细胞将具有两个或更多细胞的特性和功能。
这种细胞融合可以用于研究细胞的功能、信号传递和细胞重编程等领域。
除了PEG，还有其他一些物质也可以用作细胞融合的介导剂，如电脉冲、病毒和细胞融合素等。
不同的介导剂具有不同的融合效率和细胞存活率。
PEG介导细胞融合的优势在于操作简单、成本低、融合效率高以及对细胞的毒性较小。
然而，PEG介导细胞融合也存在一些限制。
首先，PEG介导的细胞融合需要细胞表面具有一定的疏水性，否则PEG与细胞膜的相互作用较弱，融合效果较差。
其次，PEG介导的细胞融合对细胞的膜完整性要求较高，如果细胞膜受损或破裂，将影响细胞融合的效果。
总结起来，PEG介导细胞融合的原理是通过PEG与细胞膜的相互作用，降低细胞膜的表面能，使细胞膜变得柔软和易变形，促进细胞融合。
PEG介导的细胞融合在生物学研究和生物医学应用中具有重要的作用，但也存在一些限制。
随着科学技术的进步，相信细胞融合技术会不断得到改进和应用，为生物学研究和医学治疗带来更多的突破。
PEG法诱导细胞融合
PEG法诱导细胞融合PEG法诱导细胞融合是一种常用的细胞生物学实验技术，通过聚乙二醇（PEG）作为诱导剂，促进两个或多个细胞之间的融合。
这种方法常用于制备单克隆抗体、诱导染色体加倍、诱导基因转移等研究领域。
以下是PEG法诱导细胞融合的详细步骤和注意事项。
一、实验准备1.细胞株：选择需要进行融合的细胞株，可以是两种或多种不同种类的细胞。
2.培养基：选择适合细胞生长和繁殖的培养基，一般采用含10%胎牛血清的DMEM或RPMI-1640培养基。
3.聚乙二醇（PEG）：选择合适浓度的PEG，根据实验需求选择PEG分子量。
常用的PEG分子量有4000、6000、8000等。
4.抗体：选择适当的抗体进行融合后检测，如抗细胞表面抗原的单克隆抗体、抗细胞内抗原的单克隆抗体等。
5.仪器设备：细胞融合仪、显微镜、离心机、培养箱等。
二、实验步骤1.细胞传代：将待融合的细胞株按照常规方法进行传代，使细胞生长到对数生长期。
2.细胞洗涤：将传代后的细胞洗涤两次，去除培养基中的杂质和未贴壁的细胞。
3.细胞融合：将两种或多种细胞按照一定的比例混合在一起，加入适量的PEG，充分摇匀，使细胞充分融合。
4.细胞洗涤：将融合后的细胞洗涤两次，去除未融合的细胞和PEG残留。
5.细胞培养：将融合后的细胞接种到培养基中，加入适量的抗生素和生长因子，置入培养箱中培养。
6.检测和观察：在融合后的不同时间点进行细胞形态学观察和免疫学检测，如荧光染色、ELISA等方法，以评估融合效果。
三、注意事项1.细胞株的选择：PEG法诱导细胞融合适用于大多数动物细胞，但不同种类的细胞融合难度和最佳条件可能不同。
因此，在选择细胞株时需要考虑其种类、状态和生长特性等因素。
2.PEG浓度的选择：PEG浓度是影响细胞融合的关键因素之一。
不同浓度的PEG对细胞的毒性作用和融合效果也不同。
因此，需要根据实验需求和细胞特性选择合适的PEG浓度。
3.细胞的活性：在进行细胞融合之前，需要确认细胞的活性和数量。
PEG促细胞融合实验报告
PEG促细胞融合实验报告实验目的：通过PEG促细胞融合实验，探究细胞融合的原理和过程，以及利用细胞融合实验来研究细胞生物学和生物医学相关领域的应用。
实验原理：PEG（聚乙二醇）促进细胞融合是一种流行的实验方法。
PEG具有双亲性分子，在水溶液中既溶于水，又溶于脂质双层。
通过PEG融合神经元，可以融合细胞的细胞膜，使其形成一个大的细胞。
实验材料：1.神经元细胞系2.细胞培养培养基3.聚乙二醇（PEG）4.显微镜检查设备5.细胞培养相关试剂实验步骤：1.准备两个相同类型的细胞培养皿，将细胞预先培养至适当的密度。
2.将细胞培养基抽取掉，用无血清的培养基洗涤细胞。
并将细胞置于含有2g/LPEG的无血清培养基中。
3.轻轻撤离培养皿，将第一个细胞制备物转移到第二个相匹配的细胞制备物上。
4.将含有PEG的细胞悬液迅速转运到冷缓冲液中禁止PEG分子的扩散。
并禁止PEG浓度随温度变化引起细胞融合。
5.分离悬浮细胞，使用显微镜观察新形成的细胞结构。
实验结果与讨论：在经过实验之后，我们观察到了细胞融合的现象。
在尝试不同类型的细胞融合时，我们注意到不同类型的细胞在融合后可以形成具有新功能的细胞。
细胞融合可以通过PEG分子的作用，在较短的时间内实现细胞膜的融合。
PEG作为双亲性分子，能够同时溶解在水和脂质双层中，在融合时充当桥梁的作用。
实验的关键参数之一是PEG的浓度，不同浓度的PEG可能导致不同程度的细胞融合。
较低浓度的PEG可能只形成微小的细胞团，而高浓度的PEG则可能导致更大的细胞聚集。
细胞融合实验常用于细胞融合技术的开发和细胞混合实验的需要。
该技术可以应用于多个领域，包括研究免疫细胞抗原识别，细胞生物学和生物医学研究。
细胞融合的原理和实验方法的深入理解对于相关领域的研究和应用具有重要意义。
通过细胞融合实验，可以研究不同细胞类型之间的相互作用和交流，为细胞生物学和生物医学研究提供新的视角和手段。
综上所述，PEG促细胞融合实验是一种重要的实验方法，可以用于深入研究细胞融合的原理和应用。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
细胞融合是指两个或多个细胞融合在一起形成一个细胞的过程。
细胞融合技术在生物医学领域有着广泛的应用，尤其在细胞治疗和生物医学研究中发挥着重要作用。
PEG（聚乙二醇）诱导细胞融合是一种常用的细胞融合方法，其原理是利用PEG的特殊性质将细胞膜融合在一起，促使细胞融合。
PEG是一种聚合物，具有疏水性和亲水性双重特性。
在细胞融合实验中，PEG可以渗透细胞膜，打破细胞膜的完整性，从而促使细胞融合。
具体来说，当两个细胞暴露在含有PEG的溶液中时，PEG会与细胞膜上的脂质分子相互作用，降低了细胞膜的表面张力，使细胞膜之间更容易发生融合。
在实际操作中，研究人员首先将待融合的细胞分别悬浮在含有PEG 的溶液中，然后通过离心等方法将两种细胞混合在一起。
接着，将混合后的细胞放回培养皿中进行培养，待细胞融合完成后，可以观察到形成了融合细胞。
PEG诱导细胞融合的优点在于操作简单、效率高、适用于多种类型的细胞。
然而，也存在一些局限性，比如融合后的细胞可能存在细胞周期不同、染色体数目不同等问题，需要在实验设计和数据解读时进行考虑。
除了在生物医学研究中的应用，PEG诱导细胞融合还被广泛应用于融合细胞疫苗的制备、融合抗体的生产等领域。
通过探究PEG诱导细胞融合的原理，可以更好地理解细胞融合的机制，为相关领域的研究和应用提供理论支持。
总的来说，PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞融合方法，通过利用PEG的特殊性质促使细胞融合，为细胞治疗、生物医学研究等领域提供了重要的技术手段。
随着科学技术的不断发展，相信PEG诱导细胞融合技术将在未来发挥更加重要的作用。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG（Polyethylene glycol）是一种聚合物化合物，由重复的乙二醇单元组成。
在生物学中，PEG常被用作诱导细胞融合的工具。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合在一起形成一个细胞，使其合并为一个细胞体。
PEG诱导细胞融合的原理是通过PEG的特殊性质，促进细胞膜的融合，使细胞内的物质互相交流和共享。
了解细胞融合的背景是很重要的。
细胞融合在生物学研究中有着广泛的应用，可以用于细胞的混合和杂交，从而产生新的细胞型态，用于研究细胞的功能和特性。
细胞融合还可以用于生物医学领域，例如将癌细胞与正常细胞融合，以研究癌细胞的特性和机制。
此外，细胞融合还可以用于克隆动物和干细胞研究等领域。
在细胞融合实验中，PEG起到了至关重要的作用。
PEG具有一种特殊的性质，即可以在细胞膜上形成孔道，促进细胞膜的融合。
这是因为PEG在水中具有很强的溶解性，可以与细胞膜上的脂质相互作用，改变膜的结构，使细胞膜之间的距离缩短，从而促进融合。
具体而言，PEG诱导细胞融合的过程可以分为以下几个步骤。
首先，将需要融合的细胞分别收集，并用培养基或缓冲液洗涤干净，以去除细胞外的杂质。
然后，将细胞悬浮于含有PEG的溶液中，使PEG 与细胞膜相互作用。
PEG通过与细胞膜上的脂质相互作用，改变细胞膜的结构，使细胞膜之间的距离缩短。
此时，细胞膜上会形成孔道，细胞膜之间的融合就可以发生。
最后，将处理后的细胞培养在适当的培养基中，以促进融合细胞的生长和分裂。
PEG诱导细胞融合的原理并不复杂，但它在细胞融合实验中起到了至关重要的作用。
通过PEG的作用，细胞膜之间的距离缩短，细胞膜上形成孔道，从而促进细胞融合。
细胞融合的应用领域广泛，可以用于研究细胞的功能和特性，以及生物医学领域的应用。
同时，PEG诱导细胞融合的实验过程相对简单，只需要将细胞与含有PEG 的溶液接触即可。
因此，PEG诱导细胞融合成为了一种常用的实验方法。
PEG诱导细胞融合是一种重要的实验方法，通过PEG的特殊性质，可以促进细胞膜之间的融合，实现细胞的融合。
PEG介导的动物细胞融合技术
中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006PEG 介导的动物细胞融合技术一、实验目的（１）、通过实验，对体细胞融合有一个清醒的认识（２）、通过ＰＥＧ介导鸡血细胞融合，初步掌握利用ＰＥＧ介导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核的细胞的过程称为细胞融合，通过此技术可以实现不同种类的细胞的融合。
基因型相同的细胞融合称为同核体（ｈｏｍｏｋａｒｙｏｎ），基因型不同的细胞融合称为异核体（ｈｅｔｅｒｏｋａｒｙｏｎ）目前，诱导细胞融合的技术主要有三种：病毒，聚乙二醇（ＰＥＧ），电激。
第一种方法是通过生物病毒的方式，诱导细胞与细胞之间的融合。
后两种方法通过化学物理的手段使得细胞膜的膜脂类分子的排列发生变化，去掉作用因素后，质膜分子的排列恢复原有的形态，在恢复的过程中，可以诱导相接触的细胞发生融合。
ＰＥＧ介导的细胞融合，其融合效果受到以下几个因素的影响①、ＰＥＧ的分子量与浓度ＰＥＧ的分子量及其浓度越大，细胞融合效果越明显，但对细胞的毒性也越大。
本实验使用的ＰＥＧ分子量为４０００Ｄ，浓度为５０％②、ＰＥＧ的ｐｈ值经验证，ＰＥＧ的浓度在８.０～８.２时，融合效果最好③、ＰＥＧ处理时间处理实验越长，融合效果越好，但对细胞的毒性也越大。
故一般将处理时间限制在１分钟以内。
本实验不涉及后续的细胞培养，所以处理时间可适当放宽至数分钟④、融合时的温度温度越高，细胞膜脂质的流动性越好，故在细胞可以承受的范围内，适当的提高温度有利于细胞的融合三、实验材料新鲜鸡血０.８５％生理盐水ＧＫＮ液５０％ＰＥＧ液四、实验步骤取出鸡血悬液1ml，加入0.85%生理盐水，4ml，混匀。
1200r/min离心5分钟，移除上清液加入4ml 0.85%生理盐水，重悬细胞，1200r/min，离心5min，移除上清加入4ml 0.85%生理盐水，重悬细胞，1200r/min，离心10min，移除上清向离心沉淀中加入2mlGKN，使之成为10%的细胞悬液五、实验结果本实验分为四个实验组，经PEG 处理的时间分别为：1,2,3,4分取血球悬液1ml ，加入0.5ml 50%的PEG 液，混匀，开始计时从计时开始，到盖上盖玻片在显微镜下观察为止。
实验4.鸡血细胞的融合
[实验原理 实验原理] 实验原理
PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量 的多聚体。PEG可与水分子借氢键结合,在高浓度(50 ％)的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生质 膜结构的变化，引起细胞融合。为了发挥PEG促进细 胞融合的效力，必须采用较高浓度的PEG溶液，但在 高浓度PEG溶液下，细胞可能因脱水而受到显著的破 坏。因此，选择合适的分子量、浓度及作用时间是 PEG融合技术的关键。 本实验材料为鸡红细胞，其核结构紧密，易于观察。
(2)水浴 (2)水浴
加GKN溶液至0.5m1,混匀,
39度 水浴5min 缓慢逐滴加0.25ml的50%PEG至悬液,边加边混匀, 水浴15min 加入GKN溶液至4m1, 混匀, 水浴10min 3000rpm/min,1min,弃上清
加入GKN溶液至4m1, 混匀, 3000rpm/min,1min,
(3)观察: (3)观察: 观察
弃去上清液，加入GKN溶液至1ml，混匀。 取1滴悬液滴于载玻片上，加入Janus green 染液1滴，用牙签搅匀，8min后盖上盖玻片， 观察细胞融合情况
[作业 作业] 作业 绘制显示所观察到的细胞融合情况图 [思考题 思考题] 思考题 1．细胞融合率受哪些因素的影响 ．细胞融合率受哪些因素的影响? 2．在进行细胞融合时，要注意那些问题 ．在进行细胞融合时，要注意那些问题? 注意事项 1、PEG应保持预热状态 、 应保持预热状态 2 PEG应沿管壁不同方向滴入 应沿管壁不同方向滴入
[内容与方法 内容与方法] 内容与方法
内容： 内容： 鸡血细胞的融合
方法： 方法：
(1)离心洗涤 (1)离心洗涤：
取 (1:4)鸡血悬液1 ml加0.85％生理盐水至 4m1,混 匀 000rpm/min,1min。
peg介导细胞融合最适条件的探讨
peg介导细胞融合最适条件的探讨
1.引言在基因治疗中，peg介导细胞融合是一种非常常用的手段。
Peg是一种人工合成的小分子配体，由含有PBES和PBEF结构域的多肽片段构成，具有高亲水性、易降解等特点。
目前已有研究表明在Peg介导下,细胞能够融合成具有一定功能和结构的多克隆细胞系。
本文以不同发育阶段的人胚胎干细胞（系）、人成纤维细胞（系）和人外周血淋巴细胞（系）为研究对象，利用peg介导法对不同融合条件下的细胞进行研究后发现：1.融合前培养液pH>6.5时能促进融合蛋白与目的基因的结合；
2.培养温度升高可使融合蛋白表达上调且抑制目的基因表达；
3.在合适条件下可利用peg介导法将不同发育阶段来源的细胞系进行多克隆化培养，以达到提高细胞融合率从而实现多细胞遗传改良。
4.在合适条件下进行多克隆化培养，利用单个细胞诱导多个目的基因表达；
5.在特定条件下可以将多个目的基因整合到多克隆干细胞染色体上。
6.将多克隆化后染色体整合到细胞系中可能会引起不稳定，从而影响多克隆化效率，因此可利用不同的克隆方式构建不。
细胞融合_实验报告
一、实验名称：细胞融合实验二、实验目的：1. 了解细胞融合的基本原理和过程。
2. 掌握聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合的方法。
3. 观察细胞融合过程中细胞的行为与变化。
三、实验材料与用品：1. 细胞：小鼠成纤维细胞、小鼠胚胎成纤维细胞2. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、0.25%胰酶、50%聚乙二醇（PEG）溶液、无菌水3. 器材：显微镜、离心机、水浴箱、离心管、滴管、载玻片、盖玻片四、实验原理：细胞融合是指两个或多个细胞通过质膜融合形成单个双核或多核细胞的现象。
细胞融合在生物体内和生物技术领域都有广泛的应用，如制备单克隆抗体、研究细胞信号传导等。
聚乙二醇（PEG）是一种常用的诱导剂，可以促进细胞融合。
五、实验步骤：1. 将小鼠成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞分别培养于DMEM培养基中，待细胞生长至80%融合时，收集细胞。
2. 将收集的细胞用0.25%胰酶消化，再用DMEM培养基清洗两次，制成细胞悬液。
3. 将两种细胞悬液等体积混合，在室温下静置5分钟，使细胞聚集。
4. 加入50%聚乙二醇（PEG）溶液，使溶液终浓度为1.5%，混合均匀，静置5分钟。
5. 加入无菌水，终止PEG诱导，充分混匀。
6. 将混合细胞悬液接种于载玻片上，用盖玻片覆盖。
7. 将载玻片放入二氧化碳恒温培养箱中培养，观察细胞融合情况。
六、实验结果：1. 在显微镜下观察到，细胞在PEG诱导下发生聚集，部分细胞开始融合，形成双核或多核细胞。
2. 经过一段时间培养，部分双核或多核细胞进一步融合，形成更大的细胞。
七、实验讨论：1. 细胞融合实验中，PEG诱导剂的作用是促进细胞质膜发生可逆性改变，使细胞易于融合。
2. 细胞融合过程中，细胞的行为与变化包括细胞聚集、质膜融合、细胞核融合等。
3. 实验结果表明，PEG诱导细胞融合效果较好，可以应用于细胞融合研究。
八、实验总结：本次实验成功实现了小鼠成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞的融合，掌握了PEG诱导细胞融合的方法。
实验四 PEG介导的细胞融合
实验四 PEG介导的细胞融合一、实验目的：（1）通过PEG介导的鸡血细胞融合实验，对体细胞融合有一个清楚的概念。
（2）初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理：利用PEG介导动物细胞融合的原理到目前为止还没有完全定论。
学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散，进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲和以及彼此间表面张力的作用，引起相邻的重排质膜在修复时相互合并在一起，使两细胞的胞质沟通，从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
利用PEG介导细胞融合，其融合效果受以下几种因素的影响。
1、PEG的分子量与浓度细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG得分子量越大、浓度越高，对细胞的毒性也就越大。
为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000-4000，浓度一般为40%-60%。
2、PEG的pH值经验证，PEG的pH值在8.0-8.2之间融合效果最好。
3、PEG的处理时间处理时间越长，融合效果越好，但对细胞的毒害作用也就越大。
故一般将处理时间限制在1分钟之内。
本实验中那个细胞融合后无需继续培养，故处理时间可适当放宽至数分钟。
4、融合时的温度由于生物膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。
因此，为了获得更好的融合效果，在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。
对于哺乳动物的细胞，一般采用的温度为38℃-40℃。
本实验所用材料为鸡的血细胞，这是因为：①鸡血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴别；②实验材料便宜、易得。
细胞融合与否，可通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。
细胞内只有1个核，定为未融合细胞；有2至多个核，定为融合细胞。
三、实验用品：1、材料：新鲜鸡血；2、试剂：（1）Alsever液：葡萄糖（2.05g）枸椽酸钠（0.8g）氯化钠（0.42g）重蒸水（至100mL）（2）生理盐水（0.85%）（3）GKN液：氯化钠（8g）氯化钾（0.4g） Na2HPO4•2H2O（1.77g）Na2HPO4•H2O（0.69g）葡萄糖（2g）酚红（0.01g）溶于1000mL重蒸水中（4）50%PEG液（现用现配）：根据实验需要，称取适量PEG（Mr.4000）放入刻度离心管内，在酒精灯上将其融化，待冷却至50℃，加入等体积的已预热的GKN液并充分混匀。
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实验四 PEG介导的细胞融合
一、实验目的：
（1）通过PEG介导的鸡血细胞融合实验，对体细胞融合有一个清楚的概念。
（2）初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理：
利用PEG介导动物细胞融合的原理到目前为止还没有完全定论。
学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散，进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲和以及彼此间表面张力的作用，引起相邻的重排质膜在修复时相互合并在一起，使两细胞的胞质沟通，从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
利用PEG介导细胞融合，其融合效果受以下几种因素的影响。
1、PEG的分子量与浓度
细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG得分子量越大、浓度越高，对细胞的毒性也就越大。
为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000-4000，浓度一般为40%-60%。
2、PEG的pH值
经验证，PEG的pH值在8.0-8.2之间融合效果最好。
3、PEG的处理时间
处理时间越长，融合效果越好，但对细胞的毒害作用也就越大。
故一般将处理时间限制在1分钟之内。
本实验中那个细胞融合后无需继续培养，故处理时间可适当放宽至数分钟。
4、融合时的温度
由于生物膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。
因此，为了获得更好的融合效果，在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。
对于哺乳动物的细胞，一般采用的温度为38℃-40℃。
本实验所用材料为鸡的血细胞，这是因为：①鸡血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴别；②实验材料便宜、易得。
细胞融合与否，可通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。
细胞内只有1个核，定为未融合细胞；有2至多个核，定为融合细胞。
三、实验用品：
1、材料：新鲜鸡血；
2、试剂：
（1）Alsever液：葡萄糖（2.05g）枸椽酸钠（0.8g）氯化钠（0.42g）重蒸水（至100mL）
（2）生理盐水（0.85%）
（3）GKN液：氯化钠（8g）氯化钾（0.4g） Na2HPO4•2H2O（1.77g）
Na2HPO4•H2O（0.69g）葡萄糖（2g）酚红（0.01g）
溶于1000mL重蒸水中
（4）50%PEG液（现用现配）：根据实验需要，称取适量PEG（Mr.4000）放入刻度离心管内，在酒精灯上将其融化，待冷却至50℃，加入等体积的已预热的GKN液并充分混匀。
3、器材：
（1）主要设备：普通离心机、普通光学显微镜。
（2）小型器材：100mL量筒，滴管，10mL刻度离心管，载玻片、盖玻片。
四、实验方法：
（1）注射器内先吸入2mL Alsever液，在从活鸡的翼下静脉抽取鸡血2mL，注入试管内，再加入Alsever液6mL，使之成为1：4悬液，混匀后放在4℃冰箱中，可使用3-4天。
（该步骤已经提前完成）
（2）取出上述悬液1mL加入0.85%生理盐水4mL，混匀后，1200r/min离心5分钟，除去上清液后，在以上述离心速率重复离心两次（第一次5分钟，第二次10分钟），以达到去除细胞表面黏附物质的目的。
（3）去除上清液后，将最后一次离心沉降的血球，加入适量GKN液（2mL），使之成为10%的细胞悬液。
（4）去上述调整后的血球悬液1mL，加入0.5mL 50%的PEG液混匀，吸取1-2滴，滴到一干净的载玻片上，在常温下2-3分钟后即可加上盖玻片进行镜检，并计算出融合率。
五、实验结果：
经PEG处理后，在显微镜下，可观察到未融合的单核细胞，融合后的双核细胞和融合后的多核细胞。
细胞的融合率指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞的核的总数与此视野内所有细胞的细胞核总数之比。
六、分析与讨论：
1、本实验中所用的PEG融合方法能否用于植物细胞？为什么？
答：不能。
植物细胞有细胞壁，细胞膜在细胞壁的阻碍下不能相接触，PEG无法破解这层细胞壁则无法介导其细胞融合会阻碍细胞膜融合。
应事先用纤维素酶和果胶酶处理，将植物细胞壁去除，提取其中的原生质体才可进行细胞融合。
2、本实验的材料为什么不用兔子或小鼠的血细胞？
答：因为兔子和小鼠都是哺乳动物，而哺乳动物的成熟血细胞没有细胞核，细胞融合后不便于进行实验结果的观察。