DNS-氨基酸的双向聚讲义酰胺薄膜层析-课件PPT(演示稿)
聚酰胺薄膜层析法分离氨基酸——DNS-Cl法 实验报告
生物化学实验报告
题目：聚酰胺薄膜层析法分离氨基酸——DNS-Cl法
姓名：余振洋学号：200900140156系年级：09级生科3班
查阅资料得到以下几条结论：
1. DNS-丙氨酸的相对分子质量体积最小,非极性最强，形成氢键最弱，展层速度最快，因而在最上方；而Lys由于与聚酰胺表面形成2个氢键，极性强，所以展层速度慢；Phe的极性处于两者之间，因而展层速度也在两者之间。所以本实验的结果主要与氨基酸的极性和所形成的氢键有关。
2.聚酰胺薄膜层析是一类特殊的分配层析。混合物随展层液通过聚酰胺薄膜时，由于被分离氨基酸与薄膜形成氢键，而各氨基酸形成氢键的能力不同，决定吸附力的差异，吸附力强,展层速度慢，吸附力弱，展层速度快。导致所展示的层析结果。
2. 展层速度要快，单析（ 7×7cm ）一般只需 15 -20min。
3. 不会将氨基酸或者聚酰胺薄膜破坏，影响其实验结果。
4．被分离物质在溶剂与聚酰胺薄膜表面之间的分配系数有差异。
5．展层剂的组成应该是固定的，因此配制时各组分比例要正确。
6．展层剂的纯度要注意，一般溶剂采用分析纯试剂即可，必要时可精制后使用。
同组者：张刚刚时间：2011/4/16
一．【实验目的】
1.了解并掌握DNS-氨基酸制备和鉴定的原理及方法。
2.掌握聚酰胺薄膜层析法分离氨基酸的操作和方法。
二．【实验原理】
荧光试剂5-二甲氨基-1-萘磺酰氯（5-dimethylamino-1-naphthylene sulfonyl chloride，Dansyl ch1oride，简称DNS-Cl）在弱碱性（pH9.0 左右）条件下可与氨基酸的α-氨基反应，生成带黄色荧光的 DNS- 氨基酸。
学习指南6 DNS-氨基酸的制备和鉴定
DNS-氨基酸的制备和鉴定——学习指南l 学习重点1. 掌握薄膜层析的基本原理和操作。
2. 学习DNS-标记法在氨基酸、肽和蛋白质分析中的应用。
l 知识要点1. 层析：利用混合物的各组分在固定相和流动相分配系数的差异，从而达到分离的目的。
根据支持介质的不同，层析可分为纸层析、薄膜层析、薄层层析和柱层析等。
本实验采用双向层析法，I 向和II 向展层选用不同的溶剂系统，可获得更好的分离效果。
2. 迁移率R f 值：样品点移动距离与溶剂移动距离的比值。
在同一展层系统中，R f 值差异越大，分离效果越好。
3. 聚酰胺：己二酸和己二胺的高聚物，含有大量酰胺基团，能与多种极性基团，如氨基酸的羧基和侧链基团形成氢键。
化合物中不同分离物质在溶剂与聚酰胺薄膜之间的分配系数不同，以达到分离的目的。
(CH 2)6C O(CH 2)4COn4. DNS-Cl ：又称5-二甲氨基-1-萘磺酰氯，是一种荧光试剂。
在弱碱性条件下可与氨基酸的α-氨基反应，生成DNS-氨基酸。
在紫外光照射下，DNS-氨基酸可产生黄绿色荧光，具有很高的检测灵敏度。
黄绿色荧光l 试剂1. 2.5mg/mL DNS-Cl 丙酮溶液。
2. 三种氨基酸混合液（Gly 、Phe 、His ）。
3. 三乙胺。
4. 展层液I ：苯:冰醋酸（V/V ）=9:1； 展层液II ：甲酸:水（V/V ）=1.5:100。
l 仪器聚酰胺薄膜、毛细点样管、旋涡混合仪、层析缸、恒温水浴锅、电吹风、紫外分析仪 l 操作l 注意事项1. 严格控制点样位置以及点样直径，点样点应始终保持在展层溶剂液面以上，点样需少量分次，保证点样点小且圆。
2. I 向层析结束后，注意聚酰胺薄膜转动的方向，便于和标准图谱对照。
3. 苯对人身体有害，实验应在通风橱中进行并保持室内通风良好。
生化实验三 Dansyl—氨基酸的聚酰胺薄膜层析法
实验四Dansyl—氨基酸的聚酰胺薄膜层析法实验目的1．学习聚酰胺薄膜层析法的原理。
2．学习利用Dansyl—氨基酸分析蛋白质N末端氨基酸及蛋白质组成的原理。
3．掌握制备Dansyl氨基酸和聚酰胺薄膜层析法的操作和方法。
实验原理聚酰胺是一类化学纤维原料，又称锦纶或尼龙。
它对许多极性化合物有吸附作用，具有特异的分辨性能，可用于柱层析、薄层层析及薄膜层析。
聚酰胺薄膜是将锦纶涂布于涤纶片上，形成质地均匀的紧密的多孔薄膜，层析性能十分优良。
聚酰胺的化学结构如右。
由于聚酰胺的—C=O基及—NH基可与被分离物质形成氢键，因此可以吸附酸类、酚类、醌类、硝基及胺基化合物等。
由于各种物质与聚酰胺形成氢键的能力不同，即聚酰胺对各种物质的吸附能力不同。
而在层析过程中，展层溶剂与被分离物质在聚酰胺表面竞相形成氢键。
因此，选择适当的层层溶剂，可使各种待分离物质在聚酰胺表面与溶剂之间有不同的分配系数，经过吸附与解吸附的展层过程，各自按一定次序分离开来。
与纸层析及纸电泳等方法相比，聚酰胺薄膜层析在分析氨基酸衍生物时具有灵敏度高、分辨力强、速度快、操作方便等优点。
除用于氨基酸衍生物的分析外，还可用于碱基、核苷酸、核苷、酚类、酚类糖苷、硝基化合物、杂环化合物、环酮、抗菌素、磺胺、合成染料等十几类化合物。
荧光试剂Dansyl—C1(二甲基氨基萘磺酰氯)可与氨基酸结合成带有荧光的Dansyl —氨基酸。
Dansyl—氨基酸在酸性条件下可被乙酸乙酯萃取出来，经聚酰胺薄膜层析后斑点集中，仅10—9至10—10克分子即可被检识，所以灵敏度很高。
用作蛋白质末端基分析，比DNP氨基酸纸层析法灵敏度高100倍；用于氨基酸组成的微量分析，比茚三酮显色法灵敏度高10多倍。
聚酰胺薄膜层析的展层速度也比纸层析快得多，单向层层7厘米只需15—20分钟。
但用于定量，需要特殊仪器，目前多用于定性鉴定。
Dansyl—C1能与所有的氨基酸作用生成具荧光的衍生物。
03第三章_层析.ppt.Convertor
第三章层析概论一、层析以基质为固定相(柱状或薄层状)，以液体或气体为流动相，有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、吸附或交换作用，最终结果是使混合物得到分离。
目前，这种方法已作为纯化或鉴定各种化合物的一种重要手段。
1903年俄国植物学家茨维特首先将碳酸钙细粉装入玻璃管内使其成柱形，然后把石油醚抽提的植物色素溶液倾入，让其通过碳酸钙柱，接着用石油醚洗涤发现，各种色层彼此可分开，柱上端呈黄色，较下端呈绿色，这就是早期的吸附层析碳酸钙细粉植物色素溶液石油醚洗涤二、层析类型层析方法可根据不同的标准分成若干类型：按流动相分类：液相层析和气相层析；按固定相“床”的形式分类：柱层析、薄板(层)层析、薄膜层析等等，详见表3~1。
三、层析常用术语1．固定相固定相是由层析基质组成的。
其基质包括：固体物质(如吸附剂、离子交换剂)液体物质(如固定在纤维素或硅胶上的溶液)，这些物质能与相关的化合物进行可逆性的吸附、溶解和交换作用。
2．流动相在层析过程中推动固定相上的物质向一定方向移动的液体或气体称为流动相。
在柱层析时，流动相又称洗脱剂或洗涤剂(即推动有效成分或杂质向一定方面移动的溶液)。
在薄层层析时，流动相又称展层剂。
3．操作容量即在特定条件下，某种成分与基质反应达到平衡时，存在于基质上的饱和容量；一般以每克(或毫升)基质结合某种成分的毫摩尔数或毫克数来表示。
(mmol/g, mg/g, mmol/ml, mg/ml)其数值大，表明基质对某种成分的结合力强；否则反之。
4．床体积(Vt)通常床体积是指膨胀后的基质在层析柱中所占有的体积(Vt)。
Vt是基质的外水体积(V0)和内水体积(Vi)以及自身体积(Vg)的总和，即:Vt = V0+ Vi + Vg(详见图3-1)5．外水体积(V0)外水体积指基质颗粒之间体积的总和。
6．内水体积(Vi)内水体积是指基质颗粒内部体积的总和。
7．基质体积(Vg)基质体积是指基质自身所具有的体积。
《氨基酸的薄层层析》课件
薄层板的制备
薄层板选择
选择适合氨基酸分离的薄层板，如硅胶板、氧化铝板等。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ薄层板的活化
对薄层板进行活化处理，使其表面具有较好的吸附性能。
点样
点样工具选择
选择适当的点样工具，如微量注射器或点样模板。
点样位置和量
在薄层板上标记点样位置，并控制点样量，以便于后续的展开和分离。
展开
展开溶剂选择
选择适合氨基酸分离的展开溶剂，确保 能够将氨基酸充分展开。
氨基酸的鉴定
斑点颜色
不同氨基酸在薄层层析后呈现不同的颜色，可初 步判断氨基酸的种类。
斑点Rf值
不同氨基酸在薄层层析后的迁移率不同，得到的 Rf值也不同，可用来鉴定氨基酸的种类。
斑点质谱分析
对薄层层析后的斑点进行质谱分析，可确定氨基 酸的分子量和结构，进一步确定氨基酸的种类。
定量分析
斑点面积法
通过测量薄层层析后斑点的面积，计算斑点中氨基酸的含量。该方法简单易行，但误差 较大。
在生物科学研究中的应用
氨基酸薄层层析在生物科学研究中常 用于分离和鉴定蛋白质和多肽，是研 究蛋白质组学和生物大分子相互作用 的重要手段之一。
通过氨基酸薄层层析技术，可以分离 出不同蛋白质组分，进一步进行质谱 分析和功能研究，有助于深入了解生 物体内蛋白质的种类、结构和功能。
在医学和临床诊断中的应用
分离效果的评价
分离度
层析后各氨基酸斑点的清晰度和 分离度，可用分离度数值表示。 分离度数值越大，分离效果越好
。
分辨率
层析后各氨基酸斑点间的距离和清 晰度，分辨率越高，分离效果越好 。
重复性
层析实验的重复性，包括多次层析 结果的重复性和同一份样品多次层 析结果的重复性。重复性越好，分 离效果越稳定。
薄层层析色谱(点板)PPT课件
吸附剂的吸附能力常称为活度，用罗马字 母Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ表示。
活度
减少
含水量
增大
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2、常用吸附剂 极性：氧化铝
硅胶 非极性：纤维素
聚酰胺：a.合成：己二酸、己二胺 b.特点：氢键吸附剂
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聚酰胺是—类化学纤维原料，即锦纶 (又称尼龙)。由己二酸与己二胺聚合 而成的称锦纶66 。
因为在这类物质分子中都含有大量酰胺 基团，故统称聚酰胺。
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（二）溶剂 不同溶剂具有不同的结构性质，依极性大小
各种溶剂的洗脱能力各不相同。 一般所选溶剂要求： a.纯度合格 b.黏度要小，易与样品中各组分相分离 c.与所欲分离样品和吸附剂不起化学反应
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溶剂选择考虑因素： 1、溶剂与吸附剂之间的相互作用力 2、溶剂与样品之间的作用因素 溶剂的选择可通过实验来确定。
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三、薄层层析的应用
（一）定性分析：将已知化合物作为标准品 与样品一起进行层析后对照，可初步确定 未知化合物的组成。
（二）定量分析：可直接在薄板上测定，无 须破坏薄层；
用工具将斑点从薄层上取下，用溶剂洗脱， 再用其他方法测定。
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（三）临床生化上的应用 1.氨基酸的分离 2.核苷、核苷酸和核酸的分析
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Pour solvent into the beaker to a depth of just less than 0.5 cm.
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To aid in the saturation of the TLC chamber with solvent vapors, line part of the inside of the beaker with filter paper
层析法-理论ppt课件
方法：
(1) oligo(dT)-纤维素层 析柱法
(2) oligo(dT)-纤维素液 相结合离心法
(3)磁珠分离法
oligo(dT)-纤维素层析柱法
磁 珠 分 离 法
配体与载体结合
(固相化)
亲和层析
装柱
的基本过程
(亲和层析柱)
解吸附 洗柱
亲和吸附
(生物高分子与配体专一结合)
配体与载体的联接方法
固定相——滤纸上的吸附水 流动相——溶剂(乙醇、丙醇、丙酮及与水不相溶
的溶剂)
分离示意图
层 析 纸
层析缸
溶剂前沿
y x2
x1 起始线
(原点)
展开剂
Rf > 0.02 ，A 、B可分离. 与标样比较可定性鉴定
. 如果两种氨基酸的迁移速率相近，
或者氨基酸的Rf值相同，如何来分
离？
氨基酸的Rf值
展开剂 正丁醇+吡啶+水
名称
分离原理
固定相只能与一种待分离
亲和层析法 组份专一结合，以此和无 亲和力的其它组份分离
层析法的分类
• 按操作形式不同分类
名称
操作形式
柱层析法 固定相装于柱内，使样品沿着 一个方向前移而达分离
纸层析法 用滤纸作液体的载体，点样后 用流动相展开，使各组份分离
将适当的高分子有机吸附剂制成 薄膜层析法 薄膜，以类似纸层析方法进行物
加入样品 层析后
实验：胡萝卜的 柱层析分离法
柱层析示意图
薄层吸附层析
( Thin layer absorption chromatography)
薄层吸附层析是将吸附剂 均匀地在玻璃板上铺成薄层， 再把样品点在薄层板上，点样 的位置靠近板的一端。然后将 板的这端浸入适当的溶剂(流 动相)中，使溶剂在薄层板上 扩散，并在此过程中通过吸附 →解吸→再吸附→再解吸的反 复进行，而将样品各个组分分 离出来。
实验三 Dansyl—氨基酸的聚酰胺薄膜层析法
实验四 Dansyl —氨基酸的聚酰胺薄膜层析法实验目的1．学习聚酰胺薄膜层析法的原理。
2．学习利用Dansyl —氨基酸分析蛋白质N 末端氨基酸及蛋白质组成的原理。
3．掌握制备Dansyl 氨基酸和聚酰胺薄膜层析法的操作和方法。
实验原理聚酰胺是一类化学纤维原料，又称锦纶或尼龙。
它对许多极性化合物有吸附作用，具有特异的分辨性能，可用于柱层析、薄层层析及薄膜层析。
与纸层析及纸电泳等方法相比，聚酰胺薄膜层析在分析氨基酸衍生物时具有灵敏度高、分辨力强、速度快、操作方便等优点。
除用于氨基酸衍生物的分析外，还可用于碱基、核苷酸、核苷、酚类、酚类糖苷、硝基化合物、杂环化合物、环酮、抗菌素、磺胺、合成染料等十几类化合物。
荧光试剂Dansyl —C1(二甲基氨基萘磺酰氯)可与氨基酸结合成带有荧光的Dansyl —氨基酸。
Dansyl —氨基酸在酸性条件下可被乙酸乙酯萃取出来，经聚酰胺薄膜层析后斑点集中，仅10—9至10—10克分子即可被检识，所以灵敏度很高。
用作蛋白质末端基分析，比DNP 氨基酸纸层析法灵敏度高100倍；用于氨基酸组成的微量分析，比茚三酮显色法灵敏度高10多倍。
聚酰胺薄膜层析的展层速度也比纸层析快得多，单向层层7厘米只需15—20分钟。
但用于定量，需要特殊仪器，目前多用于定性鉴定。
Dansyl —C1能与所有的氨基酸作用生成具荧光的衍生物。
这些衍生物都相当稳定，在5.7N 盐酸溶液中经105℃加热22小时，除Dansyl —色氨酸全部被破坏以及Dansyl聚酰胺薄膜是将锦纶涂布于涤纶片上，形成质地均匀的紧密的多孔薄膜，层析性能十分优良。
聚酰胺的化学结构如右。
由于聚酰胺的—C=O 基及—NH 基可与被分离物质形成氢键，因此可以吸附酸类、酚类、醌类、硝基及胺基化合物等。
由于各种物质与聚酰胺形成氢键的能力不同，即聚酰胺对各种物质的吸附能力不同。
而在层析过程中，展层溶剂与被分离物质在聚酰胺表面竞相形成氢键。
氨基酸聚酰胺薄膜层析
氨基酸聚酰胺薄膜层析——DNS-Cl法一、实验目的：1．掌握聚酰胺薄膜层析技术的基本方法和应用。
2．熟悉蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法。
二、实验原理：.1.层析技术①概念：是利用化合物中各组分的物理性质的差别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性等）使各组分在两相中的分布不同，从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而达到分离的目的。
②特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的物质。
不仅可用于少量物质的分离纯分，也可用于大量物质的分离纯化和制备。
③层析法的分类气相层析（以气体为流动相的层析法）液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生物化学领域里常用的方法）I.吸附层析：薄层吸附层析、吸附柱层析II.分配层析：纸层析、柱层析、薄层层析III.离子交换层析IV.凝胶层析：柱层析、薄膜层析V.亲和层析④纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。
纸层析法是用滤纸为支持物进行层析的方法，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。
将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。
由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：Rf=原点到层析斑点的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf 值是常数，故可根据Rf值作定性判断。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。
氨基酸纸层析ppt课件
2023/12/31
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三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：
谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、亮氨酸标准品
2、仪器：
(1)毛细管 (2)电热吹风机 (3)层析缸 (4)层析滤纸
(5)小型玻璃喷雾器(6)铅笔、直尺等。
3、试剂：
(1)氨基酸标准溶液：亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、
组氨酸标准品。
(2)溶剂系统：
正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇来自；2023/12/31
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（6）展开方式：
上行法Rf小；下行法（层析缸上部有一盛展开剂的 液槽，滤纸点样端向上进入槽中，重现性差，斑点易 扩散） Rf大；环行法（最好用无方向性的特制滤纸） 用圆形滤纸层析时，由于内圈较外圈小，限制了溶剂 的流动，Rf较小。
（7）样品溶液中杂质：
如氯化钠的存在会影响氨基酸的Rf值。
实验一
氨基酸纸层析
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一、实验目的：
1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层 析的原理和操作技术；
2、掌握分配层析法； 3、掌握影响分配系数的因素。
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层析技术(chromatography 色谱技术)
一、发展史：
层析分离技术在20世纪初就已得到应用： ➢ 1903年用于植物色素的分离,各种色素以不同的速率流动后形成不
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溶剂系统： 正丁醇：甲酸：水=15：3：2 固定相：水和滤纸纤维素有较强的亲和力， 因而其扩散作用降低形成固定相;
流动相：有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在 滤纸毛细管中自由流动，形成流动相。
由于混合液中各种氨基酸的α值不同，所以移
动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到 分离的目的。
氨基酸聚酰胺薄膜层析
氨基酸聚酰胺薄膜层析——DNS-Cl法一、实验目的：1．掌握聚酰胺薄膜层析技术的基本方法和应用。
2．熟悉蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法。
二、实验原理：.1.层析技术①概念：是利用化合物中各组分的物理性质的差别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性等）使各组分在两相中的分布不同，从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而达到分离的目的。
②特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的物质。
不仅可用于少量物质的分离纯分，也可用于大量物质的分离纯化和制备。
③层析法的分类气相层析（以气体为流动相的层析法）液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生物化学领域里常用的方法）I.吸附层析：薄层吸附层析、吸附柱层析II.分配层析：纸层析、柱层析、薄层层析III.离子交换层析IV.凝胶层析：柱层析、薄膜层析V.亲和层析④纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。
纸层析法是用滤纸为支持物进行层析的方法，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。
将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。
由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：Rf=原点到层析斑点的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf 值是常数，故可根据Rf值作定性判断。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。
DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析
Spot the TLC plate
add a few drops of solvent . . .
. . . swirl until dissolved
dip the microcap into solution - the arrow points to the microcap, it is tiny and hard to see
注意
（1）严格控制点样位置以及点样直径。 （2）展层时勿将点样浸入溶剂系统。 （3）展层后必须经电吹风将膜吹干。 （4）使用紫外照射时要注意使用时间短.
Procedure for TLC
1. Prepare the developing container. The developing container for TLC can be a specially designed chamber, a jar with a lid, or a beaker with a watch glass on the top:
Measure 0.5 cm from the bottom of the plate. Take care not to press so hard with the pencil that you disturb the adsorbent.
Using a pencil, draw a line across the plate at the 0.5 cm mark. This is the origin: the line on which you will "spot" the plate.
吸附剂的吸附能力
常称为活度，用罗马字母Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、 Ⅴ表示。
活度 强
弱
-DNS-AA双向聚酰胺薄膜层析1ppt课件
叶绿素通过碳酸钙管柱所形成的色谱图
层析的两种相
固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换 剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分 离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。
流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体 或超临界体等，都称为流动相。在柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。
按层析过程的机理分类： 分配层析: 根据不同组分在不同溶剂中分配系数不同而使物质分离的方法称为分配
层析。 吸附层析:吸附是两相成一界面，溶质在表面密集的现象。以吸附剂为固定相，根
据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离目的的一种层析技术称为吸附层析。 常用吸附剂：活性碳、硅。 离子交换层析: 是以离子交换剂为固定相，根据物质酸碱度、极性和分子大小差异 而将物质予以分离的一种方法。 凝胶层析（分子筛）利用凝胶颗粒形成具有三维空间多孔性网络结构的物质，不带 电荷，可起滤过或“筛”的作用。 亲和层析是利用生物分子间所具有的专一性亲和力的层析技术。
层析法分类
按两相所处的状态分类： 流动相有两种状态：液体作为流动相 气体作为流动相 固定相也有两种状态：固体吸附剂作为固定相 以吸附在固体上的液体作为固定
相
按两相所处的状态分为流动相
液体 固体
液体 （液相层析)
液-液层析 液-固层析
气体 （固相层析）
气-液层析 气-固层析
分配层析技术 （液-液层析法）
原理：利用混合物在两种不相混溶的液相（固定相和流动相）之间的分配系数的 不同而达到分离各组分的目的。纸层析是最广泛的一种分配层析。