生物化学实验

生物化学实验

一、糖的颜色反应及还原作用

实验一：糖的颜色反应

实验1.1 莫氏实验

一、目的

掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。

二、原理

糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：

利用这一性质可以鉴定糖。

三、实验器材

1、棉花或滤纸。

2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。

3、试管1.5*15cm(*4)。

四、实验试剂

1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。

2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。

3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.

4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。最后以沸蒸馏水稀释至100ml。

五、操作

于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。

六、注意事项

1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。

2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。

3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。

思考题：

1、解释α-苯酚反应的原理。

2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？

试验1.2 塞氏试验

一、目的

掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。

二、原理

酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：

三、实验器材

1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。

2、试管1.5cm*15cm（*3）。

3、水浴锅。

四、实验试剂

O):V(HCl)=2:1],临用

1、塞氏试剂：溶50mg间苯二酚于100ml盐酸中[V(H

2

时配制。

2、1%果糖溶液：称取果糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。

3、1%葡萄糖溶液：见实验1.1。

4、1%蔗糖溶液：见实验1.1。

五、操作

于3支试管中分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%果糖溶液各0.5ml。各加塞氏试剂2.5ml，摇匀。同时至沸水浴内。比较各管颜色变化及红色出现的先后次序。

六、注意事项

1、试管中加入各种糖后，应做好标记，并按顺序置于沸水锅内。

2、实验过程中，要仔细观察溶液颜色的变化情况。

思考题

1、在塞氏实验中，反应产生的沉淀为何能够溶于乙醇溶液并产生鲜红色？

2、蔗糖为何有塞氏反应？

实验1.3 杜氏实验

一、目的

掌握杜氏（Tollen）实验鉴定戊糖的原理和方法。

二、原理

戊糖在浓硫酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质：本实验虽常用以鉴定戊糖，但并非戊糖的特有反应。果糖、半乳糖和糠醛等都是呈阳性反应、戊糖反应最快，通常在45s内即产生樱桃红色沉淀。

三、实验器材

1、吸管1.0ml(*3)

2、试管1.5cm*15cm(*3)

3、水浴锅

四、实验试剂

1、杜氏试剂：2%间苯三酚乙醇溶液（2g间苯三酚溶于100ml95%乙醇中）3ml，缓缓加入浓盐酸15ml及蒸馏水9ml即得，临时用配制。

2、1%阿拉伯糖溶液：称取阿拉伯糖1g，溶于蒸馏水并稀释至100ml。

3、1%葡萄糖溶液，见实验1.1。

4、1%半乳糖溶液：称取半乳糖1g，溶于蒸馏水并稀释至100ml。

五、操作

于三支试管中加入杜氏试剂1ml，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，摇匀。将试管同时加入沸水浴中，观察颜色变化，并

记录颜色变化的时间。

六．注意事项

1、试管中加入各种糖后，应做好标记，并按顺序置于沸水浴锅中。

2、实验过程中，要仔细观察溶液颜色的变化情况。

思考题

1、在Tollen反应分析位置样品时，应注意些什么问题？

2、列表总结和比较本实验三种颜色反应的原理及其应用。

二、多糖的性质

多糖的实验

一、目的

1、熟悉淀粉多糖的碘实验反应原理和方法。

2、进一步了解淀粉的水解过程。

二、原理

淀粉分布于植物界，谷、果实、种子、块茎中含量丰富，工业用的淀粉主要来源于玉米、山芋、马铃薯。本实验以马铃薯为原料，利用淀粉不溶于或难溶于水的的性质来制备淀粉。

淀粉遇碘呈蓝色1，是由于碘被吸附在淀粉上，形成一复合物，此复合物不稳定，极易被醇、氢氧化钠和加热等使颜色褪去，其他多糖大多数能与碘呈特异的颜色，此类呈颜色物质也不稳定。

淀粉在酸催化下加热，逐步水解成分子较小的糖、最后水解成葡萄糖，

（C

6H

10

O

5

）（C

4

H10O5） C

17

H

22

O

11

C

4

H

12

O

4

淀粉各种糊精麦芽糖葡萄糖淀粉完全水解后，失去与碘的作用，同时出现单糖的还原性。

三、实验器材

1、马铃薯 3、布氏漏斗（*1）、抽滤瓶500ml（*1）

2、纱布、研钵（*1） 4、表面皿10cm（*1）、白瓷板、皮头滴管

5、试管1.5cm*15cm(*4) 8、量筒25ml（*1）

6、电炉、石棉网 9、吸管1.0ml(*1)

7、烧杯50ml（*1） 10、木质试管

四、实验试剂

1、稀释液：配制2%碘化钾溶液，加入适量碘，使溶液呈淡棕黄色即可。

2、0.1%淀粉：称取淀粉1g，加少量水，调匀，倾入沸水，边加边搅，并以热水稀释至1000ml，可加数滴甲苯防腐。

3、10%NaOH溶液:称取NaOH10g，溶于蒸馏水并稀释至100ml。

4、本尼迪特试剂：见实验2.

5、20%硫酸（V/V）：量取蒸馏水78ml置烧杯中，加入浓硫酸20ml（相对密