章抗原抗体反应ppt课件

（二）酸碱度
• Ag、Ab多为蛋白质，具两性电离特性，有其故 有的PI , pH过高或过低均可影响Ag、Ab反应。
• 一般：pH6～8为宜，补体参与时pH7.2～7.4。 • 注意：自凝现象------即pH达到或接近颗粒性抗
原的PI时，引起的抗原非特异性自身凝集现象。
（三）温度—影响反应速度
一般：15～40 ℃为宜， 最适温度：37℃, 过高（>56）: Ag-Ab解离， Ag、Ab变性，
1010 Avidity
第二节 抗原抗体反应的特点
一、特异性（specificity）
概念：一种抗原只能与其相应的抗体结合起反应（eg.）
分子基础：Ag-AD HVR-Ab空间结构高度互补
VH和VL各具三个HVR与AD互补
免检中常用已知Ag 查 未知Ab ，反之亦然。
意义 相对性：当抗原之间有相同或相似结构的AD时
与抗体的结合 价直接相关。 亲合力高， 与抗原结合 牢固不易解离。
Avidity
• The overall strength of binding between an Ag with many determinants and multivalent Abs
Keq =
104
Affinity
106 Avidity
指抗原抗体的量比关系，即只有当抗原抗 体的浓度比例适当时，才出现可见反应。
以沉淀反应为例（Ab量固定,Ag量递增）
图
Question： 等价带 前带 后带
WhHale Waihona Puke Baidu?
抗原抗体反应比例性示意图
抗原多价，抗体双价 二者比例合适 Ag/Ab过剩
网格 学说
二者比例合适：
网格学说（图）
抗体的两个Fab段分别 结合两个Ag分子，相 互 交叉结合连接成巨大的 网格状立体聚合物， （可见）。
生引力，其作用取决于分子空间构型，如：凹
槽与凸起互补，抗原与抗体，酶与底物。能量
小于静电引力。
（3）氢键结合力（hydrogen bounding force）
指供氢体氢原子与受氢体原子之间的
引力—“氢键桥梁” ，能量大于范德华引力。
4.疏水作用力 （ hydrophobic force ）
指疏水基团间排斥水分子，相互聚集 的
可见反应阶段
数分～数小时 肉眼可见
第三节 影响抗原抗体反应的因素
一、Ag/Ab自身因素 （一）Ag
理化性状：颗粒性Ag、可溶性Ag、 R型细菌Ag等出现不 同的Ag-Ab reaction.
AD的种类与数目：单价Ag
（二）Ab
R型Ab ：等价带宽， 易出现可见反应。 来源 H型Ab ：等价带窄，易出现前带或后带现象
（共同抗原）
干扰结果 实验诊断
交叉反应（cross reaction） 如何解决？ 如何利用？
交叉反应（cross reactions）
两种不同 的抗原分 子具有相 同或类似 结构的抗 原表位， 可与彼此 相应的抗 血清发生 反应
抗原抗体交叉反应示意图
二、比例性 (proportionality)
Ab/Ag过剩 过剩方的结合价得不到饱和，大多数游离存在，只形 成小分子复合物（不可见）。
网格学说（图）
切记！！！！
确定 Ag/Ab的浓度非常重要，即在实验中需 对Ag/Ab进行适当的 ，稀释调整二者的比 例，产生可见反应。
一般原则：固定 低含量（ Ag/Ab ）的浓度， 稀释 含量高的 (Ab / Ag)。
本章内容：
§1 抗原抗体反应的原理 §2 抗原抗体反应的特点 §3 影响抗原抗体反应的因素 §4 免疫学检测的类型
第一节 抗原抗体反应的原理
基本原理：
特异性（AD----HVR）
结合力(4种)
可见性（凝集、沉淀、溶血等）
2.范德华引力（Van der Waals forces）
分子间（或原子间)相互接近，分子极化产
学好临床免疫检验，必须掌握“一个 核心，三个要素与四个标记”。
一个核心： 抗原抗体反应 (Antigen-antibody interaction) •三个要素：抗原、抗体和免疫细 胞
•四个标记：酶标记技术、放射免疫标记 技术、荧光素标记技术与化学发光标记 技术。
第二章抗原抗体反应 （antigen-antibody reaction）
力。作用力最强，占总结合力的50％。
抗原抗体结合力
• 大小都与两分子间的距离密切相关 • 只有两分子表面密切接触时，才能
产生足够的力使其结合 • 抗原与抗体之间高度的空间互补结
构恰好为这些结合力的发挥提供了 条件
结合力的大小
表示
亲和力 （affinity）
亲合力 （avidity）
亲和力（affinity）：
目的 掌握:
1.抗原抗体反应原理及特点。 2.带现象、前带、后带、亲合力、
亲和力概念。 熟悉:
影响抗原抗体反应的因素。 了解:
免疫学检测的类型。
概念：抗原抗体反应是指抗原抗体的特 异性结合反应
杀菌、溶菌、调理、中和毒素 体内
免疫病理损伤—超敏反应、免疫性疾病等
体外：凝集、沉淀、溶细胞、中和毒素、补体结合等 曾称：serological reaction
一般可溶性Ag稀释Ag ，颗粒性Ag，稀 释 Ab。
三、可逆性（reversibility）或表面性
1. Ag + Ab 一定条件 Ag —Ab（动态平衡）
解离
动态平衡公式:
[Ag] + [Ab]
K1 K2
[Ag-Ab]
K1:结合常数；K2：解离常数
四、阶段性
两个阶段
特异性结合
数秒～数分钟， 肉眼不可见
McAb:不宜用于凝集和沉淀反应。
浓度：相对Ag而言，比例要和适，故实验前 需滴定，以求最适Ag与Ab比例。
特异性与亲合力：关键因素，选择特异性 与亲合力高的Ab。
二、环境因素
（一）电解质 作用：中和胶体表面电荷，破坏水化层， 使Ag-Ab聚集。 常用：8.5g/L NaCl溶液，缓冲液、Ca2+、 Mg2+等。 注意：盐析（salting）即电解质浓度过高 引起的非特异性蛋白质沉淀。
一个抗体结合点与一个抗原表位间的结合强度。 “（single point－－－ single point ）” 亲和力用平衡常数表示：K=K1 / K2
即：结合常数/解离常数 K值越大，亲和力越高， 与抗原的结合越牢固
亲合力 指整个抗体分（子与a抗vi原d表ity位）之间结合的
强度
“all points-------all points”