电化学发光检验的原理ppt课件
化学发光原理及检测项目PPT课件
The Intestines Constipation4 Decreased GI motility4
泛的影响
The Brain
Depression1 Decreased concentration1 General lack of interest1 Impaired fetal intellectual
The Kidneys Decreased function5 Fluid retention and edema5
1. Nemeroff CB. Clinical significance of psychoneuroendocrinology in psychiatry: focus on the thyroid and adrenal. J Clin Psychiatry. 1989;50(suppl):13-20. 2. Klausen IC, Nielsen FE, Hegedüs L, Gerdes LU, Charles P, Faergeman O.Treatment of hypothyroidism reduces low-density lipoproteins but not lipoprotein (a) Metabolism. 1992;41:911-914. 3. Polikar R, Burger AG, Scherrer U, Nicod P. The thyroid and the heart. Circulation. 1993;87:1435-1441. 4. Vassilopoulou-Sellin R, Sellin JH. The gastrointestinal tract and liver in hypothyroidism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:816-820. 5. Moses AM, Scheinman SJ. The kidneys and electrolyte metabolism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:812-815. 6. Emerson CH.Thyroid function and disease in the female. In: Gold JJ, Josimovich JB, eds. Gynecologic Endocrinology. 4th ed. New York, NY:Plenum Publishing Corp; 1987:109-133. 7. Haddow JE, Palomaki GE, Allan WC, et al. Maternal thyroid deficiency during pregnancy and subsequent neuropsychological development of the child. N Engl J Med. 1999;341:549-555.
化学发光原理及应用ppt课件
Part III. 化学发光法的临床应用
甲状腺功能的免疫分析 糖代谢紊乱的免疫分析 常见肿瘤标志物及其免疫分析 常见传染性疾病的免疫检测
– – –
病毒性肝炎 HIV感染 严重急性呼吸综合征(SARS)
其他免疫检测项目
甲状腺功能的免疫分析
• 甲状腺机能的常见评价指标及其临床
意义 1.甲状腺机能亢进 2.甲状腺功能减退 3.低T3和低T3、T4综合征
C肽
C肽测定用于了解II型糖尿病人是否需要胰岛素治疗,如 果C肽水平较低,葡萄糖刺激反应差,则表示表明立即或 最终需要胰岛素治疗,也可用于评价糖尿病酮症酸中毒病 人的胰岛功能。C肽的另一个重要的临床用途是各种低血 糖病因的鉴别。C肽水平升高科见于轻型糖尿病患者,常 见空腹血糖升高不多者C肽大多高于正常。胰岛素瘤患者, 如血中存在胰岛素抗体,血清C肽大都增高。胰腺肿瘤患 者行胰腺切除后,如血清C肽仍可测出,提示手术未能全 部切除胰腺组织。如果手术后一度阴性,后又称为阳性, 提示肿瘤复发或转移。 在肝硬化时,血浆胰岛素有升高趋势,其原因在于肝脏摄 取和降解胰岛素减少;但空腹血糖正常。
癌胚铁蛋白 糖蛋白 肝 癌胚抗原 糖蛋白 结肠、直肠、胰 腺、肺、乳腺
胰癌胚抗原 糖蛋白 胰腺
鳞状细胞抗 糖蛋白 肺、皮肤、头和 原 颈部
组织多肽抗 细胞角 乳腺、结肠 原 蛋白
CEA
• 原发性结肠癌,患者CEA升高者占45-90%. • 胰腺癌、胆管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系 •
三、低T3和低T3、T4综合征
• 低T3综合征是一种由于非甲状腺疾病 造成的甲状
腺激素异常,其发生与机体的代谢状态,基础疾 病的性质和严重程度以及外来因素,如用药等有 关。代谢状态差、基础病情加重时其发生率随之 增高;当病情好转、机体健康状况趋于正常时, 低T3状态可自行消失。
《化学发光分析》课件
本课程将介绍化学发光分析的工作原理、分类、常用试剂和仪器、典型实验 操作步骤以及优点和应用。让我们一起探索这一极具活力和创新性的化学分 析技术。
化学发光分析概述
什么是化学发光分析?
化学发光分析是指利用发光剂 (luminophore)与感光器 (photodetector)在光激发条件下 发生发光反应进行分析的技术。
发光机制和原理
发光反应主要包括螯合发光、化学 发光、电化学发光和生物发光,其 基本原理为激发能量从分析物传递 到发光剂。
化学发光分析的分类
化学发光分析主要分为储能法、电 化学发光法、免疫分析法、分子印 迹技术法和气相化学发光分析 (GPCA)等。
优点和应用
快速、敏感、高效
化学发光法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短和快速分析等优势,被广泛应用于临床、 食品、环境、药学、安全等领域。
数据统计和分析
4
利用计算机等工具进行数据的整理、计算与 分析,得出结果,并进行结果的验证和确认。
取样
用适当的方法取得样品,并得到有效的样品。
发光检测
激发分析样品使其产生发光,并利用仪器对 其进行检测。
案例分析和总结
CRO公司使用化学发光分析技术加 快药代动力学评估
合同研究组织(CRO)将计划100名志愿者的药代动力 学模拟研究里程碑提前了八个月,其采用了高通量类 似物筛选、高通量药代动力学测定和新一代大规模并 行化药代动力学建模等技术。这些技术包括,化学发 光法作为测定细胞器的特异性标记的方法。
电化学发光分析
电化学发光分析仪(ECL)是用于 电化学发光分析的专用设备,适用 于光谱分析和光度测定等分பைடு நூலகம்。
酶标仪
酶标仪是一种测量酶反应的光度仪 器,通常用于免疫学、生化学等领 域的分析。
罗氏电化学发光原理PPT
电极
在电化学反应中用于导通 电流并发生电化学反应的 界面。
电极反应与电子转移
电极反应
在电极上发生的化学反应, 通常伴随着电子的得失。
电子转移
在电化学反应中,电子从 一个原子或分子转移到另 一个原子或分子的过程。
氧化还原反应
涉及电子得失的反应,其 中某些物质被氧化(失去 电子),而另一些物质被 还原(获得电子)。
食品工业
用于检测食品中的有害物质和营养成分,保证食 品安全和营养价值。
农业领域
可用于检测农产品中的农药残留和营养成分,提 高农产品的质量和安全性。
05
结论
罗氏电化学发光原理的意义与价值
罗氏电化学发光原理在电化学和发光领域具有重要地位,为相关领域的研究和应用提供了重要的理论 支撑和实践指导。
该原理的应用范围广泛,包括生物传感器、环境监测、医学诊断等领域,对推动相关领域的技术进步和 产业发展具有重要意义。
罗氏电化学发光原理
• 引言 • 电化学基础知识 • 罗氏电化学发光原理详解 • 罗氏电化学发光的应用 • 结论
01
引言
目的和背景
01
探索罗氏电化学发光原理的基本 概念和应用领域。
02
分析该原理在医学、生物技术和 环境监测等领域的重要性和潜力 。
罗氏电化学发光原理概述
罗氏电化学发光是一种基于电化 学反应和发光现象的检测技术。
04
罗氏电化学发光的应用
在生物检测领域的应用
生物分子检测
罗氏电化学发光技术可用于检测 生物分子,如DNA、RNA、蛋白 质等,具有高灵敏度和特异性。
免疫分析
通过与抗体或抗原结合,用于检测 各种生物标志物,如肿瘤标志物、 激素、药物等。
常见化学发光技术PPT课件
它利用化学反应过程中释放的能 量激发发光物质,使其发出特定 波长的光,从而实现物质的检测 。
化学发光技术的原理
当某些物质被某种能量激发时,这些 物质会吸收能量并跃迁至激发态。
在化学发光反应中,通常需要加入特 殊的化学物质作为发光物质,这些物 质在反应过程中被激发并发出光辐射 。
当这些物质从激发态回到基态时,会 以光子的形式释放能量,从而产生光 辐射。
化学发光反应通常比较简单,所需的仪器 设备相对不复杂,操作简便,检测快速。
缺点
背景光干扰
化学发光反应中可能伴随有背景光的产生 ,对检测结果造成干扰,影响检测的准确
性。
特定性不强
某些化学发光反应可能不仅仅与目标物质 发生反应,也可能与其他类似物质发生反
应,导致检测的特异性不够强。
试剂昂贵且不稳定
某些化学发光试剂比较昂贵且容易分解变 质,需要妥善保存,增加了实验成本和难 度。
03
CATALOGUE
化学发光技术的优缺点
优点
高灵敏度
宽线性范围
化学发光技术具有很高的灵敏度,能够检 测到极低浓度的物质,因此在生物医学、 环境监测和食品安全等领域有广泛应用。
该技术线性范围较宽,可以适应不同浓度 的样品检测,减少了样品稀释和浓缩的繁 琐步骤。
非放射性
简单快捷
化学发光反应产生的光子不带电荷,因此 没有放射性污染,对实验人员和环境安全 。
在生物医学研究中的应用
蛋白质组学研究
利用化学发光技术对蛋白 质进行标记和检测,有助 于蛋白质相互作用、定位 和功能研究。
基因表达分析
通过化学发光技术检测基 因表达水平,研究基因调 控和疾病发生机制。
细胞成像与定位
利用化学发光技术对细胞 内分子进行标记和成像, 研究细胞结构和功能。
化学发光法的原理技术要点及评价应用 PPT
第一节 发光与化学发光剂
一、发光 一种物质由电子激发态回复到基态时, 释放出的能量表现为光的发射。
1.光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激 发态,当回复至基态时发出较长波长的可见光。
2.生物发光:反应底物在荧光素酶的催化下利用 ATP产能,生成激发态的氧化荧光素,后者在回 复到基态时多余的能量以光子形式放出。
技术要点
1.抗原抗体结合反应 将包被McAb的磁颗粒和待 测标本加入到反应管中,标本中待测Ag与磁珠 上Ab结合,再加上AE标记Ab,经过温育,形成 磁珠Ab-Ag-AE标记Ab复合物。
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后,很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中,加入H2O2和 pH纠正液NaOH,这时AE不需要催化剂即分解并 发光,由集光器接收,经光电倍增管放大,记 录1S内所产生的光子能,其积分与被测物含量
体料是通包微 利过被珠 光用酶强度对标 记 的发抗 光测体 定底而物样抗 本原催直接化进作A M行用P P定而D 量直。接发光,
电化学发光原理图
• 这一过程可在电极表面周而复始地进行 • 产生许多光子,使光信号增强
TPA+●
电极
●
TPA
R u ( b p y )33 +
R u ( b p y )32 +
常用试剂:吖啶酯(acridinium,AE)
CH 3
N+
- HO 2
CO
O
R
CH 3 N
O CO O
R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
电化学发光免疫分析法课件
通过实验技巧的分享,帮助读者更好地掌握电化学发光免 疫分析法的实验操作和优化方法。
案例三:疑难问题解答
案例名称
解决电化学发光免疫分析法中的常见问题
案例描述
列举一些在电化学发光免疫分析法中常见的疑难问题,如信号干扰、非特异性吸附等,并 提供相应的解决方案和注意事项。
案例总结
通过疑难问题解答,帮助读者更好地规避实验中可能出现的问题,提高实验的准确性和可 靠性。
03
实验步骤
样本准备
样本采集
采集血液、尿液等生物样本,确 保样本质量和代表性。
样本处理
对样本进行离心、分离、稀释等 操作,以去除杂质并获得纯度较 高的待测组分。
加样和反应
加样
将处理后的样本加入到电化学发光免 疫分析试剂中,确保加样量准确。
反应条件
控制温度、pH值等反应条件,确保反 应顺利进行。
电化学发光免疫分析法PPT课件
目录
• 引言 • 工作原理 • 实验步骤 • 仪器与试剂 • 结果解读 • 应用与优势 • 案例分析
01
引言
目的和背景
01
介绍电化学发光免疫分析法的目 的和背景,包括其在医学、生物 、环境等领域的应用。
02
分析电化学发光免疫分析法的发 展历程,以及当前的研究热点和 挑战。
定期对仪器进行校准和维护,保 证检测结果的准确性和可靠性。
05
结果解读
结果判读方法
确定参考值范围
根据不同年龄、性别和生理状态 ,确定各项指标的正常参考值范
围。
观察指标变化趋势
注意各项指标的变化趋势,如逐 渐升高或降低,可能提示某种疾
病或生理变化。
综合分析
结合其他检查结果和患者的临床 表现,进行综合分析,以得出准
电化学发光检测原理
电化学发光检测原理
电化学发光检测原理是一种基于电化学反应产生发光信号的分析技术。
其基本原理是通过电化学方法激发分析物或电化学系统中的发光物质,使其在特定电位下产生可见光发射,然后利用光电检测器检测并测量发光强度或发光光谱,从而实现对分析物的检测和测量。
电化学发光检测原理涉及到两个关键步骤:电化学激发和发光检测。
在电化学激发过程中,通过人为施加电位差或电流来改变电极表面的电荷态,导致电化学系统中的发光物质发生激发或退激发。
这一过程涉及到电极材料的选择、电解液的成分以及施加的电位差或电流的调节等因素。
通过调节这些条件,可以控制电极表面的电荷态和分析物的浓度,从而实现对分析物的选择性激发。
在发光检测过程中,激发后的分析物将在有限的时间内发光。
发光信号可以是持续的或瞬时的,其强度和发射光谱特征与分析物的种类、浓度以及电化学反应的条件密切相关。
常用的发光检测方法包括荧光法、化学发光法和电化学发光法等。
这些方法利用光电检测器对发光信号进行灵敏的检测和测量,可以实现对分析物的定量和定性分析。
电化学发光检测原理在生物、环境、食品等领域具有广泛的应用。
通过选择合适的电化学系统和发光物质,结合灵敏的光电检测器,可以实现对微量或痕量分析物的高灵敏度检测。
同时,
电化学发光检测原理还具有快速、简便、无标记等特点,成为一种重要的分析技术。
电化学发光免疫检测原理
电化学发光免疫检测原理电化学发光免疫测定的基本原理 (Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。
它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程。
ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应,而CL是通过化合物混合启动发光反应。
ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA,RNA探针检测。
2+其检测原理(以TSH检测为例):第一步:结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)] + N3羟基琥珀酰胺酯(NHS)的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。
第二步:将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中,再次孵育9分钟,使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体,形成双抗体夹心法。
2+下一步,蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)],抗体,抗原,抗体,磁珠复合体吸入流动测量室,此3时,磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。
同时,游离的TSH抗体(与生物素结合的和2+与[Ru(bpy)]结合的抗体)也被吸出测量室。
3紧接着,蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液,同时电极加电压,启动ECL反应过程。
发光2+剂 [Ru(bpy)]和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应,使二价的32++?[Ru(bpy)]被氧化成三价,后者是一种强氧化剂;另一方面,TPA 被氧化成阳离子自由基TPA,3+?后者很不稳定,可自发失去一个质子(H),形成自由基TPA,这是一种很强的还原剂,可将3+2+一个电子给三价的[Ru(bpy)],使其形成激发态的[Ru(bpy)],而TPA自身被氧化成二丙胺332+和丙醛。
罗氏电化学发光原理PPT
操作不规范
实验操作过程中需遵循标准操作规范,避免 操作失误导致误差。
试剂质量问题
使用过期或质量不佳的试剂会影响实验结果, 需确保试剂质量。
仪器校准不准确
定期对仪器进行校准,确保仪器准确性。
安全防护措施建议
实验室安全制度
建立完善的实验室安全制度,确保实 验人员遵守安全规定。
化学发光反应
光信号检测
通过光电倍增管等光检测器件将光信 号转换为电信号,并进行放大和处理, 最终得到待测物质的浓度信息。
化学发光活性物质在特定条件下与发 光试剂发生化学反应,产生光信号。
02 电化学发光反应机制
反应物与条件选择
发光物质选择
罗氏电化学发光技术通常使用三联吡 啶钌作为发光物质,其具有良好的电 化学性能和发光效率。
02
检测器
将发光信号转换为电信号,并进行放大和处理,以便进行后续的数据分
析和处理。检测器的性能直接影响到仪器的灵敏度和准确性。
03
控制系统
通过精确控制仪器的各个部件,确保整个电化学发光过程的自动化和智
能化。同时,控制系统还可以对采集到的数据进行处理和分析,提供准
确的检测结果。
操作流程演示
开机自检
试剂准备
个人防护装备
实验人员需佩戴合适的个人防护装备, 如实验服、手套、眼镜等。
化学品管理
严格管理化学品,确保化学品存放和 使用安全。
废弃物处理
实验废弃物需分类处理,避免对环境 和人员造成危害。
06 未来发展趋势与挑战
技术创新方向预测
1 2 3
提高发光效率和稳定性
通过改进发光材料和电极材料,提高电化学发光 反应的效率和稳定性,实现更高灵敏度和更长使 用寿命。
电化学发光测定原理.
电化学发光免疫测定电化学发光免疫测定电化学发光反应:电化学发光(electro-chemiluminescence,ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光两个过程。
化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy3]2+(图1和电子供体三丙胺(TPA在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应(图2。
二价的[Ru(bpy3]2+被氧化成三价,后者是一种强氧化剂。
TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+*(参见图2,后者很不稳定,自发地失去一个质子(H+,形成自由基TPA*,这是一种非常强的还原剂。
这两个高反应基团在电极表面迅速反应,三价的[Ru(bpy3]3+被还原形成激发态的二价[Ru(bpy3]2+*,能量来源于[Ru(bpy3]3+和TPA*之间存在的高电化学电位差。
TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。
接着激发态的 [Ru(bpy3]2+*衰减成基态的[Ru(bpy3]2+,同时发射一个波长620nm的光子。
这一过程在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,使光信号得以增强。
图1 三联吡啶钌NHSRu2+*-H+光子TPA* Ru3+ Ru2+TPA+*TPA+ -e -e +图2 在电极表面的ECL反应Ru2+: [ Ru(bpy3] 2+基态Ru3+: [Ru(bpy3]3+氧化态Ru2+*: [Ru(bpy3]2+* 激发态二、电化学发光免疫测定以三联吡啶钌作为标记物,标记抗原或抗体,通过免疫反应及ECL反应,即可进行电化学发光免疫测定(ECLIA。
在实际应用中则尚有特定的仪器和试剂。
瑞士罗氏公司(ROCHE的Elecsys ECLIA系统,综合了各种先进技术,具有独特的优越性,已在医学检验中取得广泛应用。
Elecsys全自动分析仪分成两个部分:在试管内化学反应部分和在流动池内的ECL反应部分。
(一试管内的化学反应1、试剂的组成在Elecsys试剂的制备中,包括电化学发光剂的标记和抗原或抗体的固相化,应用了多种先进技术,简述如下:(1电化学发光剂的标记[Ru(bpy3]2+需经化学修饰形成活化的衍生物后才能与抗体或抗原形成结合物。
电化学发光检测技术原理课件
电化学发光启动条件: 直流电场
反应产物: 三丙胺自由基(TPA*)
+ 620nm的光子
反应特点: 迅速,可控,循环发光
“催化” 三联吡啶钌
三丙胺 发出可见光
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电化学发光免疫检测原理—电化学发光的反应过程
失e-
阳离子三丙胺自由基
标记免疫技术的发展-电化学发光(ECLIA)
• 标记物:三联吡啶钌 • 发光底物:三丙胺 • 激发物:直流电场 • 最终检测信号:可见光强度 • 代表产品:
–罗氏公司 e411,E170,e601,e602
主要内容 文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。
标记免疫技术的发展 电化学发光检测原理 电化学发光的技术特点 校准概念及溯源性 校准报警分析 常见数据报警分析 试剂特性解读 检测菜单介绍
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电化学发光免疫检测原理-名称的由来
ELECTRO CHEMI LUMINESCENCE I MMUNO ASSAY
电 化学 发光 免疫 分析
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标记免疫技术的发展-放射免疫测定法(RIA)
标记物: 碘125 底物: 无需底物
• 优点
–分子量小,免疫损耗小 –简便、灵敏、特异 –可自行设计试剂盒 –应用范围广
• 缺点 半衰期短,试剂货架期短 标记物不稳定 每次需做标准曲线 反应时间长,不易自动化检测 使用放射性核素,需要一定防护
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电化学发光法检测原理
电化学发光法检测原理电化学发光法作为一种新型的检测方法,在食品安全、化学分析等领域有着广泛的应用。
其检测原理主要是依托于化学发光技术和电化学技术的结合,通过在电解液中添加一定浓度的特定发光物质,当电极施加正反向电压时,发光物质分子将在其中产生更为剧烈的化学反应,生成大量的激发态发光峰。
这些发射光子就是电化学发光法检测荧光信号的依据。
下面我们就来详细了解一下电化学发光法检测的原理及应用。
一、电化学原理和发光原理电化学反应是指在电极上发生的化学反应,直接或间接地与电流和电动势有关。
化学发光是遇到化学反应所诱导的发光现象。
典型的化学发光原理是通过氧化、还原、荧光转移和氧化酸还原等过程实现。
电化学荧光法是以上述电化学原理和发光原理为基础的检测方法。
二、电化学发光法检测原理利用荧光分子受光激发后光谱发射特性符合特定发射光峰的荧光分子与氧化还原反应之间的关系,通过使光谱发射特性受到控制产生一定的氧化还原反应,促使荧光分子向激发态向下跃迁而发射荧光,利用检测设备检测荧光信号的方法,可以实现电荧光原位测定;或通过对荧光分子本身受外部激发所致的脉冲响应和荧光自身仪器漂移特性的研究,实现物质的检测和分析。
三、电化学发光法技术发展应用电化学发光技术是继吸附性产生的固态化学发光、液相化学发光和气相化学发光之后,近些年火热发展的新型分析方法之一。
该技术已广泛应用于环境、食品、生物、医药、能源和纳米等多个领域,具有快速、准确、灵敏和无损伤等特点。
应用领域也越来越广泛,如环境应用领域中,电化学发光法被用来研究环境样品中的有毒物质、重金属和有机污染物等。
在生物领域中,电化学发光法可作为生物分子的高灵敏度检测方法,如与免疫反应结合,成为标准的免疫学测试法。
其他领域,如能源领域,电化学发光法可被用于高效的太阳能电池的研究,纳米材料领域,电化学发光法可被用于纳米材料的生长、形态及物性变化的研究。
综上所述,电化学发光法作为化学发光技术和电化学技术的结合,其检测原理主要是通过在电解液中添加一定浓度的特定发光物质,当电极施加正反向电压时,发光物质分子将在其中产生更为剧烈的化学反应,生成大量的激发态发光峰。
电化学发光检测技术原理
电化学发光检测技术原理电化学发光检测技术通过控制电流或电压来激发样品中的发光物质产生发光,并根据发光强度或发光光谱来判断和分析样品中的化学物质。
该技术具有高灵敏度、高选择性、低成本和易操作等优点,在环境监测、生命科学研究以及临床诊断等领域有着广泛的应用。
电化学发光检测技术主要基于电化学原理,结合化学还原或氧化反应,将光化学发光与电化学方法结合在一起,以产生电流或电压来使样品发光。
其原理主要包括电化学发光物质的选择、电化学发光机制以及电化学发光的检测方法。
首先,选择适合的电化学发光物质非常重要。
一般来说,电化学发光物质应具备较高的量子产率和发光效率,发光强度要足够高,同时还要具备良好的化学稳定性和电化学活性。
例如,不同金属离子的溶液可以发光,其中铑(Ⅱ)和铂(Ⅱ)的离子溶液具有较高的发光强度和发光效率。
其次,电化学发光机制是实现发光的关键。
电化学发光一般包括化学发光和电化学发光两种机制。
化学发光是通过氧化还原反应产生高能态中间体,再经过激激发态到基态的过程而产生光。
电化学发光是通过电极上的氧化还原反应产生发光物质,并利用电化学方法控制反应过程和光产生的过程。
电化学发光的机制较为复杂,涉及到电极表面的电化学反应、溶液中的离子交换和电子传递等过程。
最后,电化学发光的检测方法是判断和定量分析样品中的化学物质。
常用的电化学发光检测方法有电化学发光法、电化学发光光谱法和电化学发光扫描法等。
其中,电化学发光法通过测量发光的强度来定量分析溶液中的物质浓度,其灵敏度一般介于毫微克到纳克级。
电化学发光光谱法可以通过测量发光光谱的形状和峰值位置来确定样品中的物质种类和浓度。
电化学发光扫描法可以根据发光强度随电压变化的规律来判断样品中的化学物质的种类和浓度。
总而言之,电化学发光检测技术通过控制电流或电压使样品中的发光物质产生发光,并根据发光强度或发光光谱来判断和分析样品中的化学物质。
该技术的原理包括选择适合的电化学发光物质、电化学发光机制以及电化学发光的检测方法。
电化学发光检验的原理PPT课件
特点
1.高特异性 ↆ
高度特异性结 合
2.高敏感性 ↆ
4个结合位点 3.高稳定性
ↆ 亲和常数高, 解离常数很低。
15
4 最终在反应杯里形成磁颗粒连接的抗原抗体复合物
编辑版pppt
16
5 反应杯中的复合物被转移至测量池
测量池中启动磁场,吸附磁颗粒连接的免疫复合物。
加入Procell溶液,去除反应体系杂质并提供三丙胺TPA 。
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23
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8
2.电化学发光反应原理
顾名思义,电化学发光(ECL)是电场参与化学发光所产生的结果,是指通过施加一定的电压进行电 化学反应:
[Ru(bpy)3]2+:三联吡啶钌,是一种电化学发光剂 TPA:三丙胺,电子供体。
失电子
(阳离子自由基,不稳定) ↆ
TPA-e¯→TPA+·- H+ → TPA·(强还原剂)
电化学发光原理及应用
• 2017.10
编辑版pppt
1
目录
1 免疫检测技术的发展 2 电化学发光系统及其原理 3 电化学发光技术的优势
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一.免疫检测技术的发展
电化学发光
放免
酶免 荧光免疫 化学发光
1959 1970~80‘S
2000‘S
免疫检测技术三个重要的历程
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放射免疫分析
1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法(RIA),大大提高了 免疫测定的敏感度,这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。
缺点 半衰期短,试剂货架期不长。 标记物不断变化,试剂批间、批内变化大,标准曲线不能保存。 反应时间长,操作步骤很难自动化。 使用放射性核素,对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。
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目录
1 免疫检测技术的发展 2 电化学发光系统及其原理 3 电化学发光技术的优势
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一.免疫检测技术的发展
电化学发光
放免
1959
酶免 荧光免疫 化学发光
1970~80‘S
2000‘S
免疫检测技术三个重要的历程
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放射免疫分析
1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法(RIA),大大提高了 免疫测定的敏感度,这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。
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酶免疫测定法
1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法(ELISA),这种非放 射标记免疫测定在临床检验,特别是感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。 缺点 试剂制备困难。 操作步骤复杂,耗时长。 影响因素多,质量控制难以保证。 最后测定的是颜色的光密度,其精密度和敏感性不如发光免疫技术。
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电化学发光免疫技术
电化学发光免疫测定法(ECLIA)发展于 1996年,它在 发光反应中加入了电化学反应,是继放射免疫、酶免疫、 化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术,是 电化学和免疫测定相结合的产物。
世界公认的 最先进 的临床免疫检测技术
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二.电化学发光技术的发展史及其原理 1.发展历程
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化学发光免疫测定法
化学发光免疫测定法出现于20世纪90年代初。由于最后测定的是光子的量, 不但对检测者无害,其敏感度和精密度均优于RIA,而且试剂较稳定,并可 进行全自动分析。
缺点
采用标记催化酶(如辣根过氧化物酶)或化学发光分子(如鲁米诺)的方 法,其化学反应一般不稳定,为间断的、闪烁性发光,而且在反应过程中 易发生裂变,导致反应结果不稳定。 检测时需对结合相与游离相进行分离,操作步骤多。 反应原理相对落后。(间接发光)
1996年德国宝灵曼公司推出Elecsys 2010系统 世界上第一台 应用电化学发光技术的全自动免疫分析仪 1998年罗氏公司收购宝灵曼公司 2001年罗氏推出电化学发光免疫模块E 170 罗氏是全球唯一 应用电化学发光免疫技术制造仪器的厂商 2006年罗氏推出电化学发光免疫模块e601 2007年罗氏推出电化学发光免疫模块e411
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7 测量池中的工作电极采集光信号
数字信号转化成浓度,报结果。The end!
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总结
双抗体夹心法: 1)测定大分子抗 原 2)测定成正比: 信号低=浓度低, 信号高=浓度高
检测有多个结合 位点的抗原,如 TG,TSH,PRL, FSH,LH等。
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竞争法: 1)测定小分子抗 原 2)测定成反比: 信号低=浓度高, 信号高=浓度低
[Ru(bpy)3]2+-e¯→ [Ru(bpy)3]3+(强氧化剂)
TPA·+ [Ru(bpy)3]3+ → [Ru(bpy)3]2++ TPA
ↆ γ光子(620nm)
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电化学发光原理
底物:三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3] N羟基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA)
在电极阳极表面,以上两种电化学活性物质同时失去电子发生氧 化反应,2价的[Ru(bpy)2+3] 标记物被氧化成3价的[Ru(bpy)3+3] 的标 记物,TPA被氧化成阳离子自由基TPA+* , TPA+* 很不稳定,自发地失 去一个质子而形成自由基TPA* ,其为强还原剂,将一个电子给3价的 [Ru(bpy)3+3] ,使其成为激发态的Ru(bpy)2+3 ,而TPA自身被氧化成氧 化产物。激发态的Ru(bpy)2+3衰减时发射一个波长620nm的光子,重新 形成基态的Ru(bpy)2+3 。这一过程在电极表面周而复始进行,产生许 多光子。使得光信号增强。
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电化学发光的反应步骤
① 双抗体夹心法
② 竞争法
两种方法在反应原理上并没有什么不同,最后都是检测钌标记回到基态 所释放的光信号。只不过竞争法多加入了一种竞争物,和放射免疫分析 有异曲同工之处。
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双抗体夹心法
1 试剂/样本加入反应杯
第一抗体标记生物素(与微磁珠结合) 第二抗体标记钌Ruthenium(产生光信号)
4个结合位点
3.高稳定性 ↆ
亲和常数高, 解离常数很低。
4 最终在反应杯里形成磁颗粒连接的抗原抗体复合物
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5 反应杯中的复合物被转移至测量池
测量池中启动磁场,吸附磁颗粒连接的免疫复合物。 加入Procell溶液,去除反应体系杂质并提供三丙胺TPA 。
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6 在测量池电场环境下TPA提供电子,激发钌发出光信号
检测仅一个结合 位点的抗原,如 FT3,FT4,TT3, TT4,TG-Ab,TRAb,E2,孕酮, 睾酮等。
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电化学发光技术的优势
与其它几种标记免疫测定技术相比,电化学发光具有更多的优点: 1. 高灵敏度,检测下限达pmol; 2. 线形范围宽,达7个数量级; 3. 快速,出第一个结果的时间仅需数分钟; 4. 应用范围广,可以同样的灵敏度和线性范围检测各种物质,包括DNA; 5. 试剂稳定,无污染和衰变问题; 6. 自动化程度高。
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2.电化学发光反应原理
顾名思义,电化学发光(ECL)是电场参与化学发光所产生的结果,是指通过施加一定的电压进行电 化学反应:
[Ru(bpy)3]2+:三联吡啶钌,是一种电化学发光剂 TPA:三丙胺,电子供体。
失电子
(阳离子自由基,不稳定) ↆ
TPA-e¯→TPA+·- H+ → TPA·(强还原剂)
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2 两种抗体皆能与靶抗原特异性结合,生成抗原抗体复合物
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3 加入链霉亲和素包被的磁珠
磁珠直径2.8um, 表面凸凹,链霉亲和素包被,与生物素结合,生 物素-链霉亲和素特异亲和作用是目前已知的最牢固的非共价生物结 合作用。
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生物素-亲和素放大系统
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特点
1.高特异性 ↆ
高度特异性结 合
2.高敏感性 ↆ
缺点 半衰期短,试剂货架期不长。 标记物不断变化,试剂批间、批内变化大,标准曲线不能保存。 反应时间长,操作步骤很难自动化。 使用放射性核素,对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。
放射免疫分析技术开创了体液微量物质定量分析的新领域,并为其他标记免疫分析奠定了基础。放 射免疫技术是临床实验室l重要检测手段,已广泛应用于激素、维生素、药物、肿瘤标志物、病原 微生物抗原(抗体)的定量分析。