II荧光检测操作指南
Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）
Roche 480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）1 目的：确保Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪正确及正常使用。
2 适用范围：Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪。
3操作人 ** **4标准操作方法：4.1在打开电源以前，先确认以下内容：4.1.1确认电源线插头已插入电源插座中。
4.1.2 Line-Gene与计算机及电源的连接是否可靠。
4.2．核酸扩增仪操作方法：4.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入“荧光定量PCR检测系统”界面；4.2.2模板制好后，按模拟模板反应孔的样式放入扩增仪反应槽，注意阴阳性、阳性标准品、质控品位置，标本不够用空白管填补；4.2.3打开PCR仪电源开关,预热5分钟；4.2.4点击“运行”键，打开“运行”文件中“达安”试剂程序；4.2.3点击工具栏中的“样本资料”按钮，输入样本资料，并清空缺省样本号；点击“确认”保存样本资料信息，保存的文件名为：年月日+批次（批次用a、b、c表示）如20030516a 文件自动形成后缀名为*.flr4.2.4点击仪器运行的红色按钮“！！”，仪器进入运行状态。
4.2.5检测结果分析：a.程序运行结束后，系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存，在荧光定量PCR检测系统界面单击“数据分析”键，进入结果分析界面。
b.定量分析：1）单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令，在分析方法选择中可选择样点拟合法。
2）样点数选择：样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点，系统根据选择的样点数，将被选中的样点拟合成直线，该直线与域值的交叉点即为CT值（仅适合于样点拟合）。
3）击“零点调整”，在弹出零点调整对话框进行设置——手动调整：以设置的起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光强度稳定（用“达安”试剂在Line-Gene荧光定量扩增仪对标本及控制品4）检测，通常起始及终止为5-15，结果较理想）。
荧光分析法标准操作规程
荧光分析法标准操作规程1 简述某些物质受紫外光或可见光照射激发后，它会在极短时间内发射出较照射光波长为长的光，而当照射光源停止照射时，这种光线也随之消失，这种光称为荧光。
荧光通常发生于具有共轭双键体系的分子。
荧光分光光度法具有灵敏度高、选择性强、试样量少和方法简便等优点。
荧光光谱包括激发光谱和发射光谱，激发光谱是指不同激发波长的光引起物质发射某一波长荧光的相对效率，即发射波长不变，将激发波长进行扫描。
发射光谱是指某一激发波长的光引起物质发射不同波长荧光的相对效率，即激发波长不变，将发射波长进行扫描。
物质的激发光谱和荧光发射光谱，可用作定性分析。
当激发波长、强度、所用溶剂等条件固定时，物质在较稀的一定浓度范围内其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可用作定量分析。
荧光强度的测量用下式表示F=K＇ΦI0（1—e-εbc）式中F是荧光强度，K＇是仪器常数，Φ是量子效率，I0是激发光强度，ε是摩尔吸收系数，b是样品池光程，c是样品的浓度。
由式可见荧光强度与仪器条件有关，以此供试品必须与对照品在相同条件下测定。
2 仪器和用具、溶剂2.1 仪器荧光分析法所用的仪器为荧光分光光度计或荧光计，它由激发光源、激发单色器和发射单色器、样品池、检测器及记录仪表组成。
光源：多采用高压氙灯，它在紫外光区和可见光区都能给出连续辐射（220~700nm）。
单色光器：由光栅和狭缝组成。
有两组，一组为激发单色器，光源的连续辐射经激发单色器得到单色光照射到样品池，供试品溶液经激发光照射后产生的荧光则常以激发光源呈900的角度照射到发射单色器，发射单色器分光以后照到光电倍增管转换为电信号，送入显示或记录仪表读数或记录。
样品池：常用石英池，质地应较纯，不含荧光杂质，固定受光面标志。
如拟配对使用，则可盛稀硫酸奎宁溶液（1×10-8g/ ml），激发波长350nm，发射波长450nm，调节仪器示值为95％，选择各池荧光强度相差不大于1.0％者成对使用。
双荧光报告实验步骤
双荧光报告实验步骤1. 实验目的本实验旨在使用双荧光报告基因体系，通过改变操作步骤，观察荧光信号的变化，从而了解该基因体系在实验条件下的表达情况。
2. 实验材料•双荧光报告基因体系•细胞培养基（适合目标细胞的培养基）•细胞培养器具（细胞培养箱、培养皿、离心管等）•显微镜和荧光显微镜•实验操作工具（离心机、移液器等）3. 实验步骤步骤一：细胞培养1.选取适合目标细胞的培养基，并按照相关规定配制培养基。
2.将培养基分装至培养皿中，保持无菌状态。
3.用吸管将目标细胞悬浮液加入培养皿，使细胞均匀附着在培养皿底部。
4.将培养皿置于细胞培养箱中，控制好温度、湿度和二氧化碳浓度。
5.在适当的时间点观察细胞的生长情况。
步骤二：转染双荧光报告基因体系1.将待转染的细胞收集至离心管中，进行离心。
去除上清液，保留沉淀。
2.使用合适的转染试剂将双荧光报告基因体系导入细胞。
3.转染后，将细胞培养于适合其生长的培养基中，并继续培养。
步骤三：观察荧光信号1.在一定时间后，取出培养皿，观察转染细胞的形态。
2.使用显微镜观察细胞的荧光信号。
3.如果需要，可以使用荧光显微镜进行进一步观察。
步骤四：数据分析1.根据观察到的荧光信号，记录下各组细胞的荧光强度等数据。
2.对数据进行统计学分析，比较不同实验组之间的差异性。
3.对结果进行解读，得出实验结论。
4. 注意事项1.实验过程中需保持实验环境的无菌状态，避免细菌和其他微生物的污染。
2.实验材料和工具的选择要合适，确保实验顺利进行。
3.实验步骤中的时间、温度和湿度等参数要严格控制，以保证实验结果的可靠性。
4.实验结束后，要对实验设备和实验区域进行清理和消毒，避免交叉污染。
总结通过以上实验步骤，我们可以使用双荧光报告基因体系来观察荧光信号的变化情况。
这个实验体系可以广泛应用于生物学、医学等领域的研究中，帮助人们了解细胞的表达情况和功能特性。
在实验中，要注意保持实验环境的无菌状态，严格控制实验参数，以获得可靠的实验结果。
免疫荧光双标操作方法及注意事项
在同一组织细胞标本上需要同时检测两种抗原时，需进行双重荧光染色。
双重免疫荧光标记法（double immunofluorescence labeling method）也分为直接法和间接法。
（1）直接法双重免疫荧光标记：将标记有两种不同荧光素的抗体(如抗A和抗B)以适当比例混合,滴加在标本上孵育，然后洗去未结合的荧光抗体，在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察，即可对两种抗原进行定位和定量。
直接法简便可靠,但灵敏度较低.（2）间接法双重免疫荧光标记:用未标记的两种特异性第一抗体孵育组织或细胞,洗去多余的第一抗体后，再用两种不同的荧光素分别标记的第二抗体孵育组织或细胞,洗去多余的第二抗体，后在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察,从而对两种抗原进行定位和定量.使用此法应注意两种特异性第一抗体必须来源于不同种属，且荧光标记第二抗体的种属必须与第一抗体的种属相匹配。
免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下：1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。
2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。
3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。
4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。
条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。
5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。
6、荧光抗体染色假阳性可能会多,需要分别设定阳性和阴性对照。
二、注意事项 1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长,可能会使荧光提前衰退。
2、每次试验均需设置以下三种对照: (1) 阳性对照:阳性血清+荧光标记物；(2) 阴性对照：阴性血清+荧光标记物；(3）荧光标记物对照：PBS+荧光标记物.三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时,要求来源于两种不同的动物,我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red(红）。
II荧光检测操作指南
II荧光检测操作指南II荧光检测是一种常用的实验技术，用于检测有机或无机物质的荧光信号。
在荧光检测中，荧光物质吸收光能后再辐射出来，形成荧光信号。
荧光检测广泛应用于生物医学、生物化学、环境科学等领域。
本文将介绍II荧光检测操作指南。
1.准备工作在进行II荧光检测实验之前，需要准备一些实验材料和设备。
主要包括荧光标记试剂、荧光探针、实验试剂、试剂盒、离心机、分光光度计、荧光分析仪等。
同时，还需准备必要的实验仪器和试剂配制所需的溶液。
2.样品准备根据实验需要选择合适的样品，如细胞、蛋白质、DNA等。
对于细胞样品，需要首先培养细胞并将其收获。
对于蛋白质样品，需要从相关生物体中提取蛋白质。
对于DNA样品，需要经过提取纯化过程。
3.荧光标记荧光标记是将荧光物质与待检测样品结合的过程。
常用的荧光标记试剂有荧光染料和荧光标记蛋白质。
根据实验需求选择合适的荧光标记试剂，并按照使用说明进行标记。
4.荧光探针添加荧光探针是一种用于特定分子或物质检测的荧光分子。
根据实验需求选择合适的荧光探针，并将其添加到标记好的样品中。
注意保护样品免受光照，以防止荧光信号受到干扰。
5.反应条件优化荧光信号的强度和稳定性受到反应条件的影响。
要优化反应条件以获得最佳的荧光信号，可以调整反应时间、反应温度、试剂浓度等因素。
6.实验操作将样品和荧光探针调至合适的浓度后，可进行荧光检测实验。
根据实验需求选择适当的检测仪器，比如分光光度计或荧光分析仪。
根据仪器使用说明进行操作，记录实验参数和测量结果。
7.数据处理和分析荧光检测实验得到的数据需要进行处理和分析。
可以使用专门的荧光数据处理软件进行数据校正、数据过滤和信号分析。
常见的数据处理方法包括背景校正、荧光信号曲线拟合、信号强度比较等。
根据实验目的，可以进行数据统计和图表绘制。
8.结果解释和报告根据荧光检测实验的结果，进行结果解释和报告。
分析实验结果，总结结论，提出合理的解释，并将实验数据和分析方法详细地写入实验报告。
II荧光检测操作指南
II荧光检测操作指南荧光检测是一种常用的实验方法，用于研究样品中的荧光分子的特性。
该检测方法基于荧光分子吸收特定波长的光能，并发射较长波长的荧光光子。
本文将详细介绍荧光检测的操作指南。
1.实验前准备1.1样品准备：根据实验需求，适当选择荧光标记的样品。
可能的样品包括化合物溶液、生物标记物或荧光探针等。
确保样品的纯度和浓度。
1.2仪器准备：检测荧光的仪器通常包括荧光显微镜、荧光光谱仪或荧光酶标仪等。
根据实验需求选择合适的仪器，并进行事先的校准和预热。
2.实验操作步骤2.1样品处理：根据实验需求，对样品进行合适的处理。
可以是荧光标记化合物的稀释，细胞培养物的固定和染色，或者免疫组织学切片的处理等。
2.2荧光显微镜检测：2.2.1准备显微镜：打开荧光显微镜，并确保光源稳定。
根据实验需求选择合适的荧光滤光片。
2.2.2标本镜处理：将标本镜放到载物台上，调整焦距和视场。
使用适当的增大倍数进行观察和记录。
2.2.3荧光图像获取：根据实验需求选择合适的荧光染料激发波长。
将标本置于荧光显微镜下，调整光源和荧光滤光片，观察并记录荧光图像。
2.3荧光光谱仪检测：2.3.1准备光谱仪：打开荧光光谱仪，并进行预热和校准。
根据实验需求选择合适的荧光激发波长和检测范围。
2.3.2样品装载：将样品溶液放入光谱仪的样品架中。
避免溶液接触光谱仪的探头或光学器件。
2.3.3参数设置：设置荧光激发波长和检测范围，调节增益和积分时间，以获取清晰的荧光光谱。
2.3.4光谱记录：点击开始按钮，记录荧光光谱。
保存数据，并进行后续分析和处理。
2.4荧光酶标仪检测：2.4.1准备酶标仪：打开荧光酶标仪，并进行预热和校准。
根据实验需求选择合适的检测参数和荧光滤光片。
2.4.2样品装载：将样品溶液放入检测板中。
仔细按照板上的标记进行样品装载，确保正确定位。
2.4.3参数设置：设置荧光激发波长和检测范围，选择适当的检测模式和滤光片组合。
调节增益和积分时间。
荧光检测操作规程
荧光检测操作规程1. 引言荧光检测是一种常用的生物学实验技术，广泛应用于分子生物学、细胞生物学、药物研发等领域。
本文档旨在介绍荧光检测的基本操作规程，包括实验前准备、仪器操作、数据分析等方面的内容，以帮助实验人员正确进行荧光检测实验并获得可靠的结果。
2. 实验前准备在进行荧光检测实验之前，需要进行一些实验前准备工作。
2.1 实验材料准备准备充足的实验材料，并保证其质量和纯度。
常用的实验材料包括荧光探针、试剂盒、实验动物样品等。
根据具体实验要求，选择适当的实验材料。
2.2 仪器设备准备确保荧光检测所需的仪器设备正常运行。
常用的仪器设备包括荧光显微镜、荧光分光光度计、流式细胞仪等。
在实验开始前，检查仪器设备的状态，确保其正常工作。
2.3 样品处理准备对样品进行适当的处理和准备。
根据实验要求选择适当的样品处理方法，如提取样品总RNA、制备蛋白质样品等。
确保样品处理的准确性和实验结果的可靠性。
3. 仪器操作在进行荧光检测实验时，需要正确使用仪器设备，并根据实验要求进行仪器操作。
3.1 荧光显微镜操作荧光显微镜是用于观察荧光信号的重要仪器。
在操作荧光显微镜时，需要注意以下几点：•打开荧光显微镜前，确保其内部和镜头表面已经清洁，避免灰尘等杂质对观察结果的影响。
•根据实验要求选择合适的荧光探针，并进行标记处理。
•将标记好的样品加到载玻片上，加入适当的显微镜缓冲液。
•将载玻片放入荧光显微镜载物台上，调节适当的放大倍数和曝光时间。
•观察荧光显微镜图像，记录相关数据或拍摄图像。
3.2 荧光分光光度计操作荧光分光光度计是用于荧光信号检测和定量的重要仪器。
在操作荧光分光光度计时，需要注意以下几点：•打开荧光分光光度计前，先进行空白校准，以消除仪器背景信号的影响。
•根据实验要求选择适当的荧光探针，并进行标记处理。
•将标记好的样品加入荧光分光光度计样品池中，调节适当的激发波长和发射波长。
•测量样品的荧光强度，并记录测量结果。
OPTICON2 操作手册 v1.0(中文版)
热循环系统具有优良的温度精确度和均一性； 96 孔样品模块能和许多标准的管和平板相匹配（96 孔，低剖面的平板和 0.2ml 的条形管）； 热盖保证热循环过程无油操作； 长寿命发光二极管能激发光谱范围在 470nm 到 505nm 的荧光染料； 灵敏的光学系统，第一通道能检测发射光谱在 523nm到 543nm的荧光基 团（SYBR® Green, FAM）；第二通道则能检测 540nm以上的荧光。 直观的Opticon MonitorTM软件极大地方便实验程序的设置、运行、运行 状态查看和数据分析； 具有两种温度控制模式。包括模拟计算温控模式――能获得最大温度变 化速率及精确度；以及模块温控模式――能运行适合于其它热循环上的 程序； 紧凑的外形（47cm 长×34cm 宽×60cm 高），能适合于各种不同的实验台； Opticon 2 光学检测系统和 DNA Engine 热循环仪是独立的，有利于系统 的升级。
前言 1-2
重要的安全操作信息
用户在安全操作 DNA Engine Opticon 2 系统之前需要对仪器是如 何工作的有一个完整的了解。用户在运行 DNA Engine Opticon 2 系统之 前，请仔细阅读这本手册。不允许任何没有阅读本手册的人员操作此仪 器。
如果不按照说明书上的提示进行操作，DNA Engine Opticon 2 系统 在运行时产生的热量能造成严重的灼伤，并且能发生电击事故。请仔细 阅读本手册 iv 及 v 页中的安全警示和指导，并实施其中所有的防范措 施。
470nm-505nm 523nm-535nm, 540nm 及以上
设计与说明 2-3
梯度特性
精确度： 列内均一性： 梯度控制精确度： 温度梯度下限： 温度梯度上限： 温度梯度跨度：
美国Hygiena SystemSure II ATP荧光仪中文使用说明
10． 故障解决 10．1 仪器蜂鸣 10．2 故障一览 10．3 错误代码
11． 保修 11．1 保修期 11．2 特例
12． 术语和缩略语 13． 技术参数
1． 简介
systemSURE II 通过 ATP 生物体发光检测实施简便的卫生监控，以达到 HACCP 和食品卫生标准。 systemSURE II 系统包括两个部分：Ultrasnap 拭子和便携式读数器。 本手册详细介绍了 systemSURE II 的使用方法，以及如何维护和故障解决等事宜。 对 Ultrasnap 拭子的详细说明，请参阅 Ultrasnap 数据及插入程序说明。 如有技术问题，请与当地经销商联系。
图例： 说明：注意/警示（CAUTION / WARNING） 涉及在运输、使用各种类型的固态电力电子器械及使用 Ultrasnap 拭子需遵守的注意事项。
需注意的事项如下： 操作环境及用电注意事项 警告：不要在有或可能具有易燃易爆气体的场所中使用仪器。 注意：不要将仪器放置于极端温度中（参见 13 章节），并将用电负荷减到最小。 仪器操作 注意：请勿跌损仪器，小心取放。 电池 警告：请使用 13 章节中规定的碱性非充电电池或 NiMH 和 NiCD 充电电池。 警告：每个电池的电压应在 1.65V 以下，否则会对仪器造成持久损害。 注意：废旧电池的丢弃请遵守当地规定。
Ultrasnap 拭子的使用和插入 注意：在使用拭子之前请参阅 Ultrasnap 数据资料和插入程序的细节说明，同时还应遵守联邦、国家和地 方的环境保护法规。 注意：插入 Ultrasnap 拭子时不要挤压。除 Ultrasnap 拭子外，不要在仪器中插入其它任何东西。 注意：在插入仪器之前，应保证 Ultrasnap 拭子干净干燥。 键盘按钮 注意：不要连续按压仪器表面的键盘按钮。 RS232 接口 警告：与仪器顶端 RS232 接口相连的电脑设备必须符合 BSEN60950/IEC950 标准。 仪器部件： 警告：该仪器没有备用配件，不得擅自拆卸仪器部件。
FS-2荧光分光光度计波长扫描模式使用指南
测试模式波长扫描波长扫描模式是用来测试发射，激发和同步波谱波长扫描的测试流程：1，在FluoroMaster Plus文件夹里点击“Wave Scan”来打开波长扫描软件2，检查发射光栅运行完毕3，在工具栏里点击新建“”，将出现下面的窗口，输入文件名并点击保存4，创建新的实验对话框将显示如下。
输入一个标题,客户和用户ID,然后单击OK。
▶信息窗口:输入简短的信息关于这个实验或样品。
▶Title:输入标题的实验。
▶Customer:客户的输入信息▶User ID:应该设置用户ID来执行测量。
5，将会显示下面的窗口6，设置测量条件▶点击打开后加载之前使用的测试条件方案▶保存当前测量设置,可以另存为▶使用当前测量设置作为默认的设置,保存所有参数为默认方法7，点击开始在测试期间如果荧光强度超过65000会出现警告：这种情况下，在工具栏，有一个图标，点击后可以阻止高荧光强度对PMT的伤害8，测试完成后将会显示下面的信息，并且点击“OK”9，光谱结果和数据都将会显示10，点击可以打印出数据测试设置在波扫描模式下,发射,兴奋,和同步光谱测量数据是可用的。
1．发射光谱的测量测量发射光谱,在扫描模式下选择“Emission”A．Generala) Data Mode（数据模式）按以下设置数据模式：- Fluorescence:测量荧光频谱，当样品接触到激发光束的时候光谱被测量出来- Luminescence:测量发光光谱如生物发光,化学发光。
样品没有接触激发光束时发光光谱被测量。
- Phosphorescence:磷光光谱测量。
当磷光模式被选中时,接触时间(s)选项卡和磷光延迟(ms)选项就被创建了。
- Light Exposure Time(s)计算样品接触到激发光的时间- Phosphorescence Delay(ms) :在激发快门关闭之后测试开始之前来延迟时间。
在点击Start键,样品接触激发光的设置在发射开始波长和激发快门关闭。
ZSX PrimusII荧光光谱仪技术操作规程
ZSX PrimusII荧光光谱仪技术操作规程1.操作规程1.1仪器的开机和关机：1.1.1开水冷机组接通电源---打开水冷机组开关1.1.2开机接通电源——打开稳压器开关（稳定1min）——打开主电源开关——打开主机开关（稳定2小时）。
1.1.3开计算机接通电源——打开稳压器开关（稳定1min）——打开显示器电源——打开计算机主机电源——在桌面上双击ZSX图标——自动初始化1.1.4开X射线——点击菜单条上的“开机-关机”，选择“开机”，在“开启X射线”复选框打“√”，点击“开始”。
1.1.5 改变X射线输出功率：点击菜单条上的“开机-关机”按钮——选择“光管/光路气氛变更”——选择〈改变电压和电流〉——设定管电压值——设定管电流值——点击“开始”按钮。
1.1.6改变分析室气氛：1）在光路气氛中选择〈真空〉（或〈大气〉）2）点击“开始”按钮。
1.1.7 PHA调节：选择〈PHA调节〉。
——如果P-10气体开始流动的时间较短时，请设置等待时间——选择样品位置——选择〈PC〉和〈SC〉——点击“开始”。
1.1.8关机：选择菜单上的〈开机/关机〉按钮——选择【关机】——选择〈手动关机〉——选择〈关闭X射线〉——选择〈真空保护〉——点击“开始”按钮。
1.2样品分析1.2.1未知样品的定量分析1）点击菜单上的“分析”按钮2）点击样品ID设定窗口中的“样品ID”3）点击“定量”按钮4）选择一个样品位置5）必要时，在“样品信息”框内输入一个样品名6）必要时，在“样品信息”框内输入一个操作者名7）在“分析条件”框内选择〈定量分析〉8）在“分析条件”框内的“文件夹”中，选择一个包含分析方法的文件夹9）在“分析条件”框内选择一个分析方法10）在“重复次数”中输入重复次数11）点击OK按钮12）点击“开始”按钮进行分析。
1.3控制分析1.3.1漂移校正1）点击菜单上的“分析”按钮2）点击样品ID设定窗口中的“样品ID”3）点击“控制”4）选择一个样品位置5）必要时输入一个样品名6）必要时输入一个操作者名7）选择“分析条件”框中的〈漂移校正样品〉8）在“分析条件”框内的“文件夹”中，选择一个包含分析方法的文件夹9）选择一个极限范围名10）选择合适的“更新选择”项11）设定“重复次数”12）点击OK按钮13）点击“开始”按钮进行分析，自动计算系数1.3.2偏差修正1）点击菜单上的“分析”按钮2）点击样品ID设定窗口中的“样品ID”3）点击“控制”4）选择一个样品位置5）必要时输入一个样品名6）必要时输入一个操作者名7）选择“分析条件”框中的〈偏差修正样品〉8）在“分析条件”框内的“文件夹”中，选择一个包含分析方法的文件夹9）选择一个极限范围名10）选择合适的“更新选择”项11）设定“重复次数”12）点击OK按钮13）点击“开始”按钮进行分析，自动计算系数1.3.3检查分析1）点击菜单上的“分析”按钮2）点击样品ID设定窗口中的“样品ID”3）点击“控制”4）选择一个样品位置5）必要时输入一个样品名6）必要时输入一个操作者名7）选择“分析条件”框中的〈检查分析〉8）在“分析条件”框内的“文件夹”中，选择一个包含分析方法的文件夹9）选择一个极限范围名10）选择合适的“更新选择”项11）设定“重复次数”12）点击OK按钮13）点击“开始”按钮进行分析2. 维护规程2.1 日常维护2.1.1样品盒和面罩的清洁2.1.1.1每次放样片前清洁一次2.1.1.2样品盒和面罩的清洁要求如果面罩的内外表面弄脏了，用干净的布或纸浸湿酒精后，去除污垢。
双荧光素酶系统实验操作步骤及方法
6. 测量完毕后,请将最后检测的EP管取出后,关闭仪器. 7. 实验结果的处理与分析：采用双样本等方差t检验进行处
理,P＜0.05为差异显著,P＜0.01为差异极显著.
四、注意事项
➢ 由于温度对酶反应有影响,所以测定时样品和试剂均需达 到室温后再进行测定.
➢ Renilla荧光素酶检测工作液后需配制后立即使用,不可配制 成工作液后长期保存.
细胞2-3次.此过程必须仔细,并尽量将漂洗用PBS 吸尽（防 止细胞掉落）.
2. 24 孔板每孔加入100-150μl 1X 裂解缓冲液PLB以覆盖细胞. 然后将24孔板置摇床振摇20-30min以保证裂解缓冲液完全 裂解细胞.
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
C．双荧光素酶检测（Promega GLOMAX）
(注：系统运行时请勿触摸操作屏)
Thanks For Your Attention
1. 1X PLB裂解缓冲液配制：将4×体积水或PBS加入1×体 积5X PLB裂解缓冲液.（使用前在室温平衡1X 缓冲液,平 衡需2-3 min）.
2. Luciferase Assay Reagent II (LAR II) 配制：将Luciferase Assay Buffer II加入Luciferase Assay Substrate充分混合后, 分装,置于-20℃避光保存.（一次配好,分装成小管,避免反 复冻融）,使用前将配好的LAR II从-20℃拿出,并平衡至室 温（需20-30min）.
➢ 在测量过程中,当加入荧光素酶检测试剂II (LARII)时产 生萤火虫荧光信号,这样先测量萤火虫荧光素酶报告基因. 定量萤火虫荧光强度之后,再在同一样品中加入Stop & Glo® 试剂,将上述反应淬灭,并同时启动海肾荧光素酶反 应,同时进行第二次测量.
FS-2荧光分光光度计波长扫描模式使用指南
测试模式波长扫描波长扫描模式是用来测试发射，激发和同步波谱波长扫描的测试流程：1，在FluoroMaster Plus文件夹里点击“Wave Scan”来打开波长扫描软件2，检查发射光栅运行完毕3，在工具栏里点击新建“”，将出现下面的窗口，输入文件名并点击保存4，创建新的实验对话框将显示如下。
输入一个标题,客户和用户ID,然后单击OK。
▶信息窗口:输入简短的信息关于这个实验或样品。
▶Title:输入标题的实验。
▶Customer:客户的输入信息▶User ID:应该设置用户ID来执行测量。
5，将会显示下面的窗口6，设置测量条件▶点击打开后加载之前使用的测试条件方案▶保存当前测量设置,可以另存为▶使用当前测量设置作为默认的设置,保存所有参数为默认方法7，点击开始在测试期间如果荧光强度超过65000会出现警告：这种情况下，在工具栏，有一个图标，点击后可以阻止高荧光强度对PMT的伤害8，测试完成后将会显示下面的信息，并且点击“OK”9，光谱结果和数据都将会显示10，点击可以打印出数据测试设置在波扫描模式下,发射,兴奋,和同步光谱测量数据是可用的。
1．发射光谱的测量测量发射光谱,在扫描模式下选择“Emission”A．Generala) Data Mode（数据模式）按以下设置数据模式：- Fluorescence:测量荧光频谱，当样品接触到激发光束的时候光谱被测量出来- Luminescence:测量发光光谱如生物发光,化学发光。
样品没有接触激发光束时发光光谱被测量。
- Phosphorescence:磷光光谱测量。
当磷光模式被选中时,接触时间(s)选项卡和磷光延迟(ms)选项就被创建了。
- Light Exposure Time(s)计算样品接触到激发光的时间- Phosphorescence Delay(ms) :在激发快门关闭之后测试开始之前来延迟时间。
在点击Start键,样品接触激发光的设置在发射开始波长和激发快门关闭。
II荧光检测操作指南
II荧光检测操作指南荧光检测是一种常用的生物化学实验技术，可以用于检测和分析各种生物分子，如蛋白质、核酸和细胞等。
本文将介绍荧光检测的基本原理和操作步骤。
一、原理概述荧光是一种物质在受到激发后发出的可见光。
在荧光检测中，通常使用荧光染料或荧光探针与待测物反应，然后利用荧光光谱仪来测量荧光强度和发射波长。
荧光检测具有高灵敏度、非破坏性和实时监测等优点，因此被广泛应用于分子生物学和生物医学研究中。
二、实验准备1.准备荧光试剂和样品：根据实验需要选择合适的荧光染料或探针，以及待测物样品。
2.准备荧光光谱仪：确保荧光光谱仪正常工作，如仪器电源、光源、检测器和计算机等。
三、操作步骤1.设定仪器参数：打开荧光光谱仪软件，设定激发波长、激发和发射光路的滤光片等参数。
2.校准仪器：使用标准荧光染料进行仪器校准，确保仪器的准确性和灵敏度。
3.设置参考样品：在荧光光谱仪上设置一个参考样品，通常选择无色或低荧光强度的物质作为参考。
4.调整荧光强度：调整荧光光谱仪上的增益或灵敏度，确保测量到合适的荧光强度范围。
5.激发样品：将待测样品放入荧光检测室或荧光光谱仪测量室，选择合适的激发波长进行激发。
6.测量荧光强度：在荧光光谱仪上选择合适的发射波长，并记录测量得到的荧光强度。
7.数据分析：利用荧光光谱仪软件对得到的荧光强度和发射波长进行分析和处理，如绘制荧光光谱图、计算荧光定量等。
8.清洗工作：完成荧光检测后，及时清洗使用过的荧光仪器和实验器具。
四、注意事项1.选择合适的荧光染料或探针：根据待测物的性质和实验需求选择适宜的荧光染料或探针，以获得准确的荧光信号。
2.控制实验条件：保持实验环境的稳定性，如温度、湿度和光照等，以避免对荧光信号的干扰。
3.避免样品污染：在处理样品和试剂时，避免污染样品，以免影响实验结果。
4.校准仪器：定期对荧光光谱仪进行校准，以确保测量结果的准确性和可靠性。
5.注意安全：进行荧光检测时，注意个人防护措施，如戴手套、眼镜和实验室白大褂，以确保实验安全。
二维荧光测定条件及工艺流程及注意事项
二维荧光测定条件及工艺流程及注意事项下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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1. 光源条件。
手把手教你双荧光素酶报告实验
手把手教你双荧光素酶报告实验萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶，同时在所有的化学发光反应中，它的光产物具有最高的量子效率，检测灵敏度高。
荧光素酶报告基因被广泛用于miRNA靶基因验证。
荧光素酶报告基因的原理在于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用，可以将目的基因3’UTR区域构建至pGL3-basic载体中报告基因Luciferase的后面，构建荧光素酶质粒。
然后转染至细胞中，通过比较过表达或者干扰miRNA后，检测报告基因表达的改变（监测萤光素酶的活性变化）可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。
结合定点突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。
同时，为了减少内在的变化因素，比如：培养细胞的数目、细胞转染和裂解的效率等对实验准确性的影响，将带有海肾荧光素酶基因（Rinilla luciferase）的质粒（phRL-TK）作为对照质粒与报告基因质粒共转染细胞，提供转录效率的内对照，使测试结果不受实验条件变化的干扰。
在测量过程中，首先加入荧光素酶检测试剂Luciferase Assay Reagent II时产生萤火虫荧光信号，这样先测量萤火虫荧光素酶活性。
定量萤火虫荧光强度之后，再在同一样品中加入Stop&Glo Reagent试剂，将上述反应淬灭，并同时启动海肾荧光素酶反应，进行第二次测量，称之为双荧光素酶报告基因实验。
下面就介绍一下萤光素酶实验检测步骤：一、样品准备：1质粒转染细胞（1）细胞铺板：将细胞按50%的密度接种到细胞培养12孔板内。
（2）转染：16h左右细胞约70%时转染萤光素酶报告基因质粒，每个样品设置3个复孔。
首先设计四组：1.空白组（转染试剂+细胞）2.质粒组3.质粒+miRNA NC组4.质粒+miRNA mimics组2.1配制质粒组：按照每空50ng质粒，同时每孔20ul无血清培养基计算需用量，标记为A。
Biolum-Ⅱ手持式ATP荧光检测仪操作规程
Biolum-Ⅱ手持式ATP荧光检测仪操作规程1 目的规范Biolum-Ⅱ手持式ATP荧光检测仪操作程序，正确使用仪器，保证检测工作顺利进行，确保操作人员人身安全和设备安全。
2 适用范围2.1本仪器可用于医疗、食品、化妆品、药品、保健品等单位环境及工作人员的卫生情况检测；2.2本规程适用于Biolum-Ⅱ手持式ATP荧光检测仪的使用及维护。
3 职责3.1 操作人员：Biolum-Ⅱ手持式ATP荧光检测仪操作人员按照本规程操作仪器，对仪器进行日常维护，操作适用登记；3.2 管理人员：Biolum-Ⅱ手持式ATP荧光检测仪保管人员负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期维护、保养；3.3 仪器管理部门负责人：仪器设备适用部门负责人负责仪器综合管理。
4 技术参数4.1 主要技术参数4.1.1大屏幕清晰液晶显示器；4.1.2检测精度：10-15mol；4.1.3检测范围：0 to 9999 RLUs；4.1.4检测时间：15秒；4.1.5检出模式：RLU；4.1.6 50个用户ID 设定；4.1.7 20个检测组；4.1.8 251个上下限设定；4.1.9 2000个记忆储存；4.1.10自动判断合格；4.1.11自动统计合格率；4.1.12内置自校光源；4.1.13开机60秒自检；4.1.14配有USB接口，可将结果上传至PC ；4.1.15可更换检测仓；4.1.16使用两节标准或可充电五号电池4.18比色瓶：容量12.5mL；工作环境：0～50℃；0～90%相对湿度（不冷凝）；4.1.17电源:2节AA碱性电池5. 操作程序5.1 基本操作正确安装电池后，按下“开/关机”按钮，仪器开机，仪器蜂鸣一次，然后进入自检界面，仪器开始30秒自检，显示数字由30倒计时到0结束自检，仪器再次蜂鸣一次进入就绪状态，显示主界面；5.2 设置检测点编号、分组号和检测上下限在待测状态下，按“SET”键一次进入检测点编号设置状态，编号数字闪烁，通过按下“∧、∨”可以进行数字的升降调节，按下“OK”键确认设置的同时一次进入上限设置、下限设置、分组号设置；5.3 标本测量所有程序设置完毕后，开始进行标本测量。
AB2荧光光谱仪操作
AB2荧光光谱仪操作程序一开机自检1 先打开计算机. 检查光学台Lamp Enable 是否打到open, 然后打开光学台总开关.2 双击桌面AB2图标, 打开AB2 程序, 可听到仪器自检声, 光学台右边绿灯亮, 正面板红灯亮(指示Xenon Lamp)3 分别打开如下窗口: Stauts, Chamel, monos, sensitivity 窗口. 用水(distilled water)测试, 将slit分别打开. 在sensitivity中, 运行Auto-range, 自动建立高压, 对水进行扫描.4 Applications] 下, 选择Emission Scan (发射) 或Excitation (激发).在窗口下EmissionLower Limit 360nmUpper Limit 450nmScan rate 10.00nm/secRepetitions 1 可选3-D5 按Start, 开始扫描. (不用参比时, 就使用Eml)二测未知样找波长(给定某一溶液或样品, 然后找激发和荧光波长)1 使用sensitive, (减负高压) 用手动调节, 使Green bar 变小, 不要为零2 在Monos中, 在Emission中调节Wave, 使Green bar为最大, 找到合适的Emission 波长(如514nm) Bandpass使用4nm3 再找Excitation 波长(方法同上, 如403nm)三定量分析1 在sensitive中, 选择offset used (同时将空白放入sample cell 中)仪器自动将空白扣除.2 在start下,作标准曲线(依次放入1号测试2号测试等) (1) 做完标准曲线后, 在make Quantitative Standard-Manual Control (该图标自动出现). 按Stop 终止分析.(2) 在显示曲线相关系数和数据的那张数据图中, 按File, Store, 将文件存在STD2 自动文件名中.(3) 在Application中下拉菜单, 点击Quantitative analysis, 然后点击Retrieve出现一个小窗口选择你刚才所存的标准曲线文件OK刚才的内容.(4) 然后再从Start 下, 做定量分析.数据请保存在D盘下!!!。
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M200酶标仪快速操作指南II –荧光测量
1、开机运行：打开计算机，打开酶标仪电源，待酶标仪电源指示灯不再闪烁后，运行Magellan6软件，联机成功后微孔板托架自动弹出，将样品板放在托架上，A1孔位置处于左上方。
在Magellan软件的主界面：
选择软件Magellan软件主菜单中的“Star measurement”，按右下角绿色三角形按钮继续，在弹出窗口中选择“Obtain RAW data”，点击右下角绿色三角形按钮继续，进入测量流程编辑窗口。
Infinite酶标仪的测量控制是一个模块化的流程设计，双击左侧指令栏中的指令即可在流程窗口中添加相应的测量或者动作，右侧信息栏中会显示当前流程的信息。
指令条的长度越长等级越高，低等级的指令从属于高等级的指令，指令流程按照自上而下的顺序执行。
一个典型的测量指令流程如上图：第一个指令Plate，选一种微孔板；第二个指令是Part of Plate，选择板上的一部分进行测量；第三个指令是一个测量。
2、荧光测量参数设置
荧光测量值范围：0－60000 RFU（相对荧光强度）。
选择板型：在Plate指令条中的下拉菜单中选择测量使用的板型。
菜单中预存的板型文件的命名规则是：前三个字母代表板的品牌；中间的数字表示孔数；后两个字母代表板底的形状和板的颜色：f-平底板、v-V型底板、u-U型底板、t-透明板、b-黑色板、w-白色板，如COS96ft，即COSTAR公司生产的Corning 96孔平底透明板。
如果使用国产板，选择“COS”-Corning板即可。
*荧光测量一般使用黑色板。
光吸收测量参数
在Wavelength项中填入测量的激发波长和发射波长；
在Read项Numbers of flashes中填写每孔读取的次数，一般选择3－5次即可，结果自动给出平均值。
在Settle times中填写静置时间，即当前孔移动到检测位置后，到开始测量的间隔时间，用以抵消微孔板移动时产生的液面波动，一般来说96孔板可设置也可以不设，但建议设置，48孔和孔数更少的板必需设置静置时间；
在Multiple reads per well选项打勾，会弹出多点测量设置窗口：
多点测量是指在一个孔中测量多个点，适于非均相样品的测量，但是要注意过多的点数会使得检测时间变得很长。
Type、Size和Border分别设置多点测量的类型、测量点距离孔边缘的距离。
在Mode项中选择顶部测量/底部测量，底部测量可检测附于板底的荧光物质，如荧光标记的贴壁细胞，底部检测要使用底部透明的黑色板；
在Integration项中填写Lag time，即激发后到检测发射光的间隔时间，一般不需设定选择为0即可，时间分辩荧光（TRF）试剂将要求设置此选项，参见具体试剂的说明书。
Integration time即检测发射光的时间，一般设置为20-40us，或参考试剂说明书；
在Gain项中选择增益值，增益值对应的是检测器的工作电压，设定恰当的增益值，会得到更好的信噪比，使得样品测量值与对照测量值的差距更加明显，
Gain值设定有三个选择：
Manual gain：人工设定，一般设定为60-255，值越大，检测得到的数值越大；
Optimal：自动优化，软件根据样品的荧光强度计算确定Gain值，Gain 值会在检测结果中显示；
Calculated from Well：用选定孔中的样品自动计算Gain值，Gain值会在检测结果中显示；
Label项中填写的是本次测量的名称，以区别同一流程中的其它测量。
荧光强度扫描有两种模式：固定激发波长，扫描发射波长；固定发射波长，扫描激发波长。
参数设置与荧光强度基本相同，需要设置固定波长，和扫描的起始波长、结束波长、波长的步进值。
3、开始测量
设置好测量参数后，点击窗口右下角的绿色三角形继在弹出窗口中填写更改结果文件名，可以做进出板和打开温控等动作，点击色三角形“START”即开始测量。
续。
绿
测量结果会在测量结束后自动显示出来，点击左上角的“Edit”菜单中的Copy to Excel”，或“Copy in ASCII-Format”可将测量值导出到Excel “文件中或文本文件中。
点击右下角绿色三角形“Finish”可以保存和关闭结果。