植物检疫学

1、种子检疫的特点

（1）种子检疫以法规为依据，先进技术为后盾，现代化的管理体系为手段，实施强制性的检疫措施。（2）、坚持预防为主，防御与铲除相结合。（3）、立足于国内，放眼于世界。

2、种子检疫的重要性

（1）种子可以传播病害，在农业生产中对种子进行检验和处理可以杜绝种传病毒的传播从而避免造成农业生产中的严重减产，防止危险性病虫害的发生。（2）种子检疫可以获得经济效益、社会效益和生态效益(3) 在对外贸易和发展汇创农业方面，种子检疫作为植物检疫的一部分也起着重要的作用。（4）种子检疫作为国家的一项主权，反映一个国家的经济实力和科技水平。

3、种子检验的概念与内容

种子检验：利用感官和仪器测定等方法对花卉种子包括其他播种材料进行品质鉴定的过程。

其内容有：（1）重量测定（2）净度分析（3）生活力的生化测定（4）真实性和品种纯度鉴定（5）水分测定（6）发芽试验（7）扦样（8）种子健康测定（9）包衣种子检验

4、种子检疫的概念与程序

(1 ) 检疫许可（2）检疫申报（3）现场检验（4）实验室检测（5）检疫监管与检疫监测（6）产地检疫、预检和隔离检疫（7）检疫处理

5、种子检验与种子检疫的关系

种子检疫确定种子是否可以被引种，在通过种子检疫后还要种子进行检验确定其品质是否合格，是否在特定的地区适用，种子检验是种子检疫的后续和补充，是对种子各方面性能的全面检查。种子经过检疫和检验之后才能被最终确定是否合格。

6、种传真菌、细菌、病毒、线虫检疫方法有哪些？

常用方法有：肉眼检验、过筛检验、洗涤检验、种子解剖检验、分离培养检验、发芽检验、试植检验、特殊检验。

7、种子害虫检验的方法有哪些？

（1）种子整体透明染色法。系将供检种子在5%氢氧化钠溶液(加0.1%锥虫蓝)浸16 h，再在乳酸酚锥虫蓝溶液中煮沸12 min。取处理过的种子放在载玻片上加水作浮载液，压碎，镜检是否有病菌菌丝体，决定是否带有虫害。

（2）酶联法，在制得该菌抗血清后，用免疫酶联法检测。此法快速、准确。

（3）培养检验法.包括吸水纸检验法和琼胶基培养检验法.

（4）直接检验法。利用肉眼和扩大镜直接检验，重点检查种子中混杂的麦角，统计单位重量的种子中的麦角和麦角碎片数量。直接检验能发现各种菌核、黑粉菌菌瘿及粒线虫虫瘿。

（5）洗涤检验法。电镜扫描观察和孢子萌发试验等。

8、常用的种子除害处理有哪些？

(1)退回或者销毁处理

（2）禁止出口处理

（3）除害处理。除害处理是指采用物理或化学的方法杀灭种子中有害生物的过程，主要方法包括熏蒸处理、辐射处理、热处理、冷处理、以及气调处理。

9、口岸检疫已经合格的种子苗木等繁殖材料为什么还必须隔离试种观察？

隔离试种则是引种检疫的重要内容。隔离试种是防止危险性病虫传入的一种有效措施，是引种检疫的最后一道关口，《植物检疫条例》规定：从国处引进可能潜伏有危险性病、虫的种子、苗木和其他繁殖材料，必须隔离试种。

其理由：一是某些潜在危险性病、虫，特别是病毒、植原体的一类病害在种苗上往往表现为隐性。目前，口岸缺少快速、准确、有效的检验方法，只有在生长期间症状表现明显，易于鉴别。二是国家规定的危险性病、虫名单，主要是根据国外危险性病、虫的疫情分布情况及在国内没有或少有发生和分布。有时会出现在国外发生危害严重的病、虫传入国内后，不会造成重大损失，而某些国外发生不严重的病、虫传入国内后，由于生态条件的改变，发生危害严重而造成重大经济损失。所以只有通过隔离试种，才能了解引进种、苗携带的病虫在国内的发生危害情况。三是口岸检疫抽样具有一定的偶然性，一方面限于现有检疫技术水平，另一方面引进种苗在传带病原物和害虫数量微小的情况下，可能出现漏检现象，即使种苗传带少量的病虫，若遇适宜的生态条件，则极易引起流行危害。隔离试种则可以发挥国内检疫优势，一旦发现及时控制消灭。因此，从国外引进的种子、苗

木和其他繁殖材料，有关单位或者个人应当按照审批机关确认的地点和措施进行种植。通过隔离试种，提高检疫封锁能力，防止国外危险性病虫的传入并造成危害。

10、什么是杂种子，什么是劣种子？

杂种子：含有杂质，纯度不高的种子

劣种子：（1）质量低于国家规定的种用标准的；（2）质量低于标签标注指标的；（3）因变质不能作种子使用的；（4）杂草种子的比率超过规定的；（5）带有国家规定检疫对象的有害生物的。11、种子健康检验的目的意义及主要内容

种子健康状况是指种子是否携带病原菌（真菌、细菌、病毒）和害虫。

种子健康状况检验是检验样品中是否存在送检人指明的病原菌和害虫。感染病害的种子不仅不耐贮藏，而且播种后发芽率低，影响产苗数量，还会将病菌传播到幼苗上，危害苗木的正常生长发育，从而影响苗木质量，增加育苗投资。因此，贮藏或播种前应检验种子的病虫感染程度。

1．抽取测定样品从送检样品中随机抽取200粒或100粒种子。

2．鉴定

（1）直观检查将样品放在白纸或白瓷盘、玻璃板上，用放大镜观察，挑出有菌核、霉粒、虫瘿、活虫及病虫伤害的种子。

（2）种子中隐蔽害虫的检查将样品切开检查有虫和被虫蛀粒数。

（3）种子病源检查将种子放在温暖湿润的环境条件下培养一段时间，再用适当倍数的显微镜直接检查。有条件的，可进行洗涤检查和分离检查。

12、种子检疫的依据。

《中华人民共和国进出境动植物检疫法》、《植物检疫条例》、《中华人民共和国种子法》、我国颁布的危险性有害生物的种类（我国大陆地区颁布的检疫性有害生物、我国港澳台地区的检疫性有害生物）

13、什么是种子的田间检验、室内检验和小区种植鉴定，说明其各自的内容

田间检验：种子生产过程中在田间对品种真实性进行验证，对品种纯度进行评估，同时对作物的生长状况、异作物、杂草等进行调查，并确定其余特定要求符合性

田间检验仅对种子本身现实状况是否符合文件记录予以判定不对造成种子质量与文件记录不符的原因和后果予以分析判定。

室内检验：在作物收获脱粒之后，把种子样品取回室内进行检验，主要目的是了解种子的真实性和品种纯度。

小区种植鉴定：在田间土壤、自然气候、等环境条件下栽培种子，以实现对种子品质的实地检验。

14、种子检疫的作用

1、把关作用；

2、预防作用；

3、监督作用；

4、报告作用；

5、调解种子纠纷的重要依据；

6、其他作用——可以提供信息反馈和辅助决策作用等。.

15、根据《中华人民共和国刑法》与种子生产经营和管理等有关的刑事责任有哪几个方面的犯罪？

1、未取得种子生产许可证或者伪造、变造、买卖、租借种子生产许可证，或者未按照种子生产许可证的规定生产种子；

2、未取得种子经营许可证或者伪造、变造、买卖、租借种子经营许可证，或者未按照种子经营许可证的规定经营种子；

3、为境外制种的种子在国内销售；

4、从境外引进农作物种子进行引种试验的收获物在国内作商品种子销售；

5、未经批准私自采集或者采伐国家重点保护的天然种质资源；

6、种子行政管理人员徇私舞弊、滥用职权、玩忽职守，或者违反本法规定从事种子生产、经营活动。

16、怎样办理国外引种检疫审批手续？

根据国家关于国外引种办理检疫审批手续的规定，凡从国外引种，引种单位或个人必须办理以下手续：一、在填写订货卡片的同时，要填报《引进种子、苗木检疫审批单》，属于国务院有关部门在京单位的引种，按业务分工(农业种苗和林业种苗)分别由农业部全国植保站和林业部林政保护司审批；京外单位及各省(区、市)有关部门引种的，由所在省(区、市)农(林)业厅(局)植检站或森保站审批：二、承办引种的单位凭订货卡片和审批单办理对外引种手续，并将检疫审批单中的检疫要求列入合同和有关协议；三、当种苗到达到口岸前或到达口岸时，收货单位或其代理人应按规定向种苗入境口岸前或机关办

理检疫手续，报验时缴验引进种苗检疫审批单(第二联)，无检疫审批单的，口岸检疫机关不予检疫放行，并视情况分别按罚款并限期补办审批手续、退回或没收处理；四、从国外引进可能潜伏的危险病虫的种苗繁殖材料，引种单位在申请引种前，应安排好试种计划，否则。不予办理检疫审批手续。

17、什么是种子病害？什么是种传病害？

种子病害：影响种子正常生长发育与品质的植物病害。

种传病害：着附于种子上、通过种子传播的植物病害。

18、设计一个玉米进境检疫程序

（1）检疫审批。输入单位向国家植物检疫机关预先提出申请。

需要材料：1、进境动植物检疫许可证。2、相关进口国家出具的植物检疫证书。3、产地证书。4、FGIS出具的品质证书。5、卫生证书。

6、贸易合同或信用证及发票。

7、海运提单或装箱单。

8、代理报检委托书（仅适用于代理报检时用。

9、入境货物报检单。

（2）检疫报检

1、报检人应具备报检资格。

2、报检资料应齐全、完整和清晰。

3、审核上述报检资料签字、印章、有效期、签署日期和表述内容等，确认其是否真实有效。

4、所有单证的内容应该一致，报检单填写应该符合规定要求。

5、经审核，符合出入境检验检疫报检规定的，接受报检。否则，不予受理报检。

（3）．现场检验检疫

1、核对货证，制定植物检验检疫方案。

2、审核报检单证。

3、根据国家植物检验检疫规定及美国疫情发生情况，制定检验检疫方案。

4、确定现场检验检疫时间、地点、人员。

5、在各个玉米区随机选点20－30个，每点至少取1000g玉米，用1.7mm×20mm长孔筛或2.5mm 圆孔规格筛进行筛检，仔细检查筛下物中有无虫、杂草籽、菌瘿等，并同时检查筛上物，根据需要将筛上挑出物及筛下物装人样品袋，虫、杂草籽、菌瘿等装入指形管并标识。带回实验室作进一步检查。

5、抽样工具。机械自动取样器或金属双套管取样器、取样铲等，要求取样工具清洁卫生、完好、无异味以避免对样品的污染。

（4）抽样

1、机械自动取样：根据取样量调整取样比例。

2、人工抽样：每处按棋盘式随机选点30－50个扦取原始样品并制成复合样品5kg，必要时取样点可增加至90个。取样量：至少5kg复合样品／1000t。

（5）卸货

经表层现场及实验室检验检疫，未发现重大疫情和霉变、水湿、熏蒸剂残渣的，通知货主或港务部门准予卸货。否则，经除害处理合格或清除霉变、水湿、熏蒸剂残渣后方可准予卸货。

（6）填写现场检验检疫记录

现场检验检疫记录应包括报检号、取样时间、取样依据、取样量、标记及现场检验检疫情况描述，如发现异常应做详细记录、拍照或录

像取证。填写送样单，将样品送交实验室检验检疫。

(7)实验室检验检疫

(8)复验

报检人对检验检疫机构的检验结果有异议，可向原检验检疫机构或其上级检验检疫机构申请复验

19、设计一个分子生物学方法检测棉铃象虫的方案

方法一：

1 准备材料和试剂

2 提取待检物DNA

3 引物设计与合成

4 RT—PCR扩增反应

4.1 一步法RT—PCR扩增体系

4.2 PCR扩增反应参数

5 PCR特异性检测

6 PCR灵敏度检测

方法二：

1、提取待检物DNA进行解螺旋进行扩增；

2、利用32P标记的cDNA探针与待检DNA进行杂交；

3、通过对杂交双链DNA分子进行荧光放射性检测判断待检物的有无。若有杂合双链分子存在荧光放射性，则有待检物；若无杂合双链分子存在荧光放射性，则待检物。

20、设计一个分子生物学的方法检测番茄环斑病毒的方案。

方法一：

1.序列查找

Tomato ringspot virus isolate ToRSV5 coat protein mRNA, partial cds

>gi|110618336|gb|DQ676504.1| Tomato ringspot virus isolate ToRSV5 coat protein mRNA, partial cds

TGGAGGTTTGAGTGGCCAGCTCGCCTTCCTGACA TTA TTG A TGA TAAGTCAGAGGTA TTGTTAAAGCAAC

A TCCTTTGTCTCTACTTA TCTCA TCTACTGGCTTTTTTACGG GAAGAGCTACCTTTGTTTTCCAA TGGGG

TTTGAA TACCACCGCTGGAAA TA TGAAGGGTTCTTTTTCTG CTCGTCTTGCCTTCGGCAAAGGAGTGGAA

GAAA TTGAGCAAACAGCAACAGTGCAGCCACTGCTTGGT GTTTGTGAAGCCCGTA TACCTGTGGAGTTCA

AGACTTACACAGGTTTTACTACTTCGGGTCCTCCTGGA TCT

A TGGAACCA TACA TTTACGTG

2.引物设计

3.RNA的提取

4.将RNA反转录为cDNA

5.PCR扩增片段与已知片段比较（大小）

方法二：

实施荧光RT-PCR一步法检测番茄环斑病毒

根据番茄环斑病毒(ToRSV)各株系RNA1聚合酶基因的保守序列，设计并合成1对引物和1条TaqMan荧光探针，建立对ToRSV 的实时荧光RT-PCR检测。利用TaqMan荧光探针实时监测目的基因的扩增，实现RT-PCR扩增与探针检测同时进行，以达到确定待检物的有无。

该方法不需PCR后处理，消除了PCR产物的污染，不需电泳和EB染色，减少了检测步骤，节省了时间。具有“灵敏、准确、简便、快速”的特点适。