动物实验概论

（2）治疗实验 实验分组: 不同药物作用实验组和对照组 B 人参皂苷实验组: 20mg/kg(200ul/10g)，（腹腔注射，不足0.5ml 以生理盐水补足），隔天一次;(人参皂苷 1 mg/ml) A 多柔比星实验组: 1mg/kg(100ul/10g) ，（腹腔注射，不足0.5ml以 生理盐水补足），隔天一次;(多柔比星0.1 mg/ml) C 联合用药组:人参皂苷 20mg/kg + 多柔比星 1mg/kg(使用0.1 mg/ml浓度的多柔比星配制) 对照组: 生理盐水 0.5 ML
（2）皮下接种 1 断颈处死小鼠，浸泡于75％酒精，臵于无菌台并固定，于上腹部 剪一小口，将无菌吸管插入尽快吸出腹水，臵于离心管中，加满 生理盐水离心，1000rpm，10min。 2 弃上清，将细胞打散后，加入5-8ml红细胞裂解液，混匀，室温 静臵5min。 3 加满生理盐水, 同时1000rpm，10min离心（2-3次）。 4 将新鲜肿瘤细胞用无菌生理盐水调整成浓度为1×107细胞/ml。 5 取10只昆明小鼠，每只小鼠大腿外侧皮下接种0.2ml（2×106细 胞）细胞悬液 6 整个过程需在无菌操作下完成。标记后回笼饲养。 7 7d后可扪及皮下结节，待肿瘤长径长至5～10 mm时进行治疗实 验
•动物实验
是指在实验室内,进行动物实验研究,解决科学实 验中的问题,获得新的认识.
实验动物的特点:具有较强的敏感性 ，较好的重复性和一致的反应性。 和实验用动物的区别(野生动物\观赏动物\经济动物) 遗传背景明确 携带微生物受 人工严格控制
• 一级普通 • 二级清洁 • SPF级 • 无菌动物
目的是用于 科学研究
医学研究与动物实验的关系
避免了在人身上进行实验所带来的风险
临床上平时不易见到的疾病可用动物随时复制出来
利用动物实验进行 医学研究的wenku.baidu.com意义与优越性
可以克服人类某些疾病潜伏期长，病程长和发病率低的缺点
可以严格控制实验条件，增强实验材料的可比性 可以简化实验操作和样品收集 有助于更全面地认识疾病的本质
人类疾病模型
如用各种化学致癌剂 诱发各种肿瘤；用各 种化学毒物或毒气诱 发各种中毒性疾病； 用强碱、强酸可致皮 肤烧伤等。
动物实验的基本操作
动物实验方法是多种多样的，在生物医学的各
个领域内都有其不同的应用，其中一些基本方法
都是共同性的 （如动物的选择、抓取、固定、麻醉、脱毛、给药、 采血、采尿、急救、处死、尸检等） 不管是从事何种课题的生物医学研究都要用这 套基本方法。
一、实验动物的抓取固定方法
正确的抓取固定动物，是为了不损害动物健康，不 影响观察指标，并防止被动物咬伤，保证实验顺利进行。 抓取固定动物的方法依实验内容和动物种类而定。抓取 固定动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解，抓 取固定时既要小心仔细，不能粗暴，又要大胆敏捷，确 实达到正确抓取固定动物的目的。
顶部计为4号，腰背部为5号， 尾基部为6号，右前腿为7号， 右侧腰部为8号，右后腿计 为9号。
若动物编号超过10或更大数字时， 可使用上述两种不同颜色的溶液， 即把一种颜色作为个倍数，另一种 颜色作为十位数，这种交互使用可 编到99号，假使把红的记为十位数， 黄色记为个位数，那么右后腿黄斑， 头顶红斑，则表示是49号鼠，其余 类推。
• 医学 • 制药 • 化工 • 畜牧农业 • 环保 • 军工 • 宇航
• 近交系 • 突变系 • 杂交一代 • 封闭群
世界上首匹“自体克隆马”
无父双母小鼠
“连连”、“田田”和“云云”
由于受动物保护运动的影响，在动物实验行业内，正 在兴起替代研究，包括： 减少（Reduction）：选用高质量的实验动物进行实验， 提高实验动物的利用率，从而减少实验动物的使用数量。 替代（Replacement）：以低等生物、微生物、或组织 细胞、器官甚至计算机模拟，替代活动物实验。 优化（Refinement）：精细设计和选择技术路线和手段， 使动物实验有更好的结果，保证动物实验的可重复性。 又称“三R ”运动。
每组2只，于造模后第10天给药，连续给药14天，第14天处 死小鼠，称瘤重（天平），测量体积大小（游标卡尺），计 算抑瘤率
肿瘤体积抑制率（%） =（1－实验组肿瘤体积/对照组肿瘤体积）×100%，计算肿瘤体积抑制率
肿瘤的质量抑制率（%）
=(1－实验组肿瘤质量/对照组肿瘤质量) ×100%，计算肿瘤质量抑制率
通过各种手段来研究人类 疾病的发生、发展规律， 为研究人类疾病的预防、 治疗（包括新药物试用） 提供理论依据。
造成动物组织、器官或全身一 定损害，出现某些类似人类疾 病的功能、代谢、形态结构方 面的变化或各种疾病
疾病动物模型的复制
是用人为的方法，使动物处于 一定的致病因素（物理的、化 学的、生物的）作用下
近期实验安排：
1 抽取腹水、净化处理、获得肿瘤细胞（当堂完成） 2 计数细胞，皮下接种（当堂完成） 3 观察肿瘤生成情况（课外完成，7天，11月26日—12月2日，） 4 治疗实验（课外完成，14天，12月2日—12月16日）
注意事项：
1 抽取腹水 2 灌胃（示教） 3 及时记录重量、体积指标 4 标记
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实验动物 与动物实验
提纲
1 2 3 4
实验动物和动物实验的概念
医学研究与动物实验的关系
人类疾病模型
动物实验的基本操作
实验动物和动物实验的概念
•实验动物
是指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫 进行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研 究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。
（三）经口给药
在急性试验中，经口给药多用灌胃法，此法剂量准确， 适用于小白鼠、大白鼠、家兔等动物。 小鼠、大鼠（或豚鼠）用输血针头或小号腰穿针头， 将其尖端斜面磨平，用焊锡在针尖周围焊一圆头，注意 勿堵塞针孔，即成灌胃针；亦可用烧成圆头的硬质玻璃 毛细管或特制的塑料毛细管，作为导管。
灌胃时将针按在注射器上，吸入药液。左手抓住鼠背部及 颈部皮肤将动物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口 中，沿咽后壁徐徐插入食道。动物应固定成垂直体位，针插 入时应无阻力。若感到阻力或动物挣扎时，应立即停止进针 或将针拔出，以免损伤或穿破食道以及误入气管。 一般当灌胃针插入小鼠3－4cm，大鼠或豚鼠4-6cm后可将 药物注入。常用的灌胃量小鼠为0.2-1ml，大鼠1-4ml，豚鼠 为1-5ml。
常用的标记法有染色、耳缘剪孔、烙印、号牌等方法。
颜料涂染
这种标记方法在实验室最常使用，也很方便。使用的 颜料一般有3-5%苦味酸溶液（黄），2%硝酸银（咖啡 色）溶液和0.5%中性品红（红色）等。标记时用毛笔或 棉签蘸取上述溶液，在动物体的不同部位涂上斑点，以 示不同号码。
编号的原则是：先左后右， 从上到下。一般把涂在左前 腿上的计为1号，左侧腹部 计为2号，左后腿为3号，头
三、实验动物给药途径和方法
在动物实验中，为了观察药物对机能功能、代谢及形态 引起的变化，常需将药物注入动物体内。给药的途径和方法 是多种多样的，可根据实验目的、实验动物种类和药物剂型 等情况确定。
（一）皮下注射 注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有5 （1/2）号针头的注射器刺入皮下。皮下注射部位 一般狗、猫多在大腿外侧，豚鼠在后大腿的内侧 或小腹部；大白鼠可在侧下腹部。兔在背部或耳 根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。
生物学因素
物理因素
化学因素
包括细菌、病毒、寄 生虫、细胞、生物毒 素、激素等各种致病 原，通过接种而使正 常动物发生疾病。如 接种细菌、病毒于敏 感动物使其产生各种 传染病。
例如在机械力作用下 产生各种外伤性脑损 伤、骨折等模型，气 压变动复制高空病、 潜水病；温度改变产 生各种烧伤和冻伤； 放射线照射可复制各 型放射病等等
实验生物学
疾病的复制仅是它 研究的开始，它着 重于阐明在该病的 发生发展过程中， 某些治疗措施或药 物的疗效如何。
疾病动物模型 主要用于三个方面：
实验病理学
它着重于研究用某种 特定方法复制出某些 疾病。整个疾病复制 过程，就是它的研究 内容，目的是通过疾 病的复制去探讨疾病 的病因学和发病原。
实验治疗学（新 药筛选亦属于实 验治疗学范畴）
小鼠抓取固定方法 小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取 鼠尾提起，臵于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬 行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮 肤，将鼠体臵于左手心中，把后肢拉直，以无名指 按住鼠尾，小指按住后腿即可
二、实验动物编号标记方法
动物在实验前常常需要作适当的分组，那么就要将 其标记使各组加以区别。标记的方法很多，良好的标记 方法应满足标号清晰、耐久、简便、适用的要求。
（二）腹腔注射 用大、小白鼠做实验时，以 左手抓住动物，使腹部向上， 右手将注射针头于左（或右） 下腹部刺入皮下，使针头向前 推 0.5～1.0cm，再以45度角 穿过腹肌，固定针头，缓缓注 入药液，为避免伤及内脏，可 使动物处于头低位，使内脏移 向上腹。若实验动物为家兔， 进针部位为下腹部的腹白线离 开1cm处。
每组实验器材：
1 浸泡用饭盒 及弯盘各1个 2 剪刀、镍子各一把 3 1ML 枪头一盒 4 1ML移液器 一把 5 75％酒精 1瓶 6 离心管一盒 7 手套一包 8 天平一台 9 标记笔 一支 10 灌胃针 一只
公用试剂及器材：
1 生理盐水 2 红细胞裂解液 3 标记液
4 游标卡尺
5 福尔马林 6 注射器
四、实验动物的处死方法
脊椎脱臼法: 右手抓住鼠用力向后拉，同时左手拇指与食 指用力向下按住鼠头，将脊髓与脑髓拉断，鼠便立即死 亡。
1
H22细胞培养
治疗机制初探
6
2
H22腹水瘤模型
实验流程
治疗效果观察
5
3 H22皮下瘤模型
药物干预治疗
4
小鼠异位移植性肝癌模型的建立：
（1）小鼠肝癌细胞常规传代培养，收集对数生长期的细胞， 以无菌生理盐水配成浓度为1.0×107细胞/ml，取0.2ml（ 2.0×106细胞）注入昆明小鼠腹腔，7天形成腹水 观察腹水生成情况，腹腔接种后8－10天左右可以取用 (腹水应为乳白色浓稠液体，若为黄色或有大量红细胞的血性 腹水则弃之不用)。
人类疾病动物模型的概念
是生物医学科学研究中 所建立的具有人类疾病 模似性表现的动物实验 对象和材料。
实验研究假说
人类疾病的 动物模型
临床假说
是现代生物医学研究中的一个 极为重要的实验方法和手段， 有助于更方便、更有效地认识 人类疾病的发生、发展规律和 研究防治措施。
它着重于研究实验动物 生物学性状的改变