特殊染色法

2、抗酸染色方法
• 染液组成： 石碳酸复红、3％盐酸酒精、碱性美兰染液 • 染色方法：
石碳酸 复 红 初染
加温染5分钟 冷却后水洗
3％盐酸酒精 脱 色
1-2min
水洗
碱性美兰 复 染
1~3min
水洗
影响抗酸染色的关键步骤是脱色
干燥
注意事项
• 1、加温染色时：在火焰上方保持一定高度， 加热至出现蒸气（注意不能使染液沸腾）， 如此反复2~3次（约5min）。在加热过程 中要防止将染液烘干，应及时添加染液。 • 2、脱色时：用3%盐酸酒精脱色，直到流 下的液体无色为止，进行水洗。
用于观察芽胞的形态特征以及鉴定细菌。
注意事项
• 1、加温染色时应及时添加染液，防止染液 干涸。 • 2、进行水洗时，用细水流冲洗菌膜上方， 让水流淌过菌膜，避免将菌膜冲掉。
实验四 特殊染色法
实验目的要求
• 了解抗酸染色法、芽胞染色法的原理
• 熟悉抗酸染色法、芽胞染色法的方法以及 意义
实验材料与方法
• 材料: 菌种：卡介苗、枯草杆菌培养物 染液：抗酸染色液、芽胞染色液 其他：玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐水、显微镜等 • 方法： 细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定 染色：抗酸染色法、芽胞染色法 油镜使用：观察染色结果并记录
3、抗酸染色结果及意义
• 结果：
红色－－抗酸染色阳性菌 兰色－－抗酸染色阴性菌
• 意义：
用于鉴定分枝杆菌属细菌以及某些放线菌
结核分枝杆菌（抗酸染色）
（二）芽胞染色法
1、原理
★芽胞是细菌在不良的环境条件下形成的休眠体。细菌能否 形成芽胞以及芽胞的形状、芽胞的位置、是否膨大等特征 是鉴定细菌的重要依据之一。 由于芽胞壁厚，通透性差，不易着色。为了能使芽胞着色便 于观察，特用芽胞染色法。 其基本原理是：用着色性强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红， 在加热条件下染色，使染料不仅可以进入菌体也可进入芽 胞内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽胞一经着色 难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽胞仍保 留初染剂的颜色，而菌体和芽胞囊被染成复染剂的颜色， 使芽胞和菌体更易区别。
2、芽胞染色方法
染液组成： 5％孔雀绿水溶液、 0.5％番红染液复染 染色方法：
加数滴 微火加热至染 孔雀绿 料冒蒸汽 染液于 维持5分钟Biblioteka Baidu涂片上 待玻片冷却后 水 洗
用缓流自流水冲洗
至流出水无色
番红染 液复染
2min
水洗
干燥
3、芽胞染色结果及意义
• 结果：
芽胞－－绿色 菌体及芽胞囊－－红色
• 意义：
（一）抗酸染色法
1、原理
★抗酸性细菌如结核杆菌等分枝杆菌属细菌， 细菌细胞壁有很多脂类物质，石碳酸复红加 温染色后，其中的分枝菌酸与石碳酸复红结 合成牢固的复合物，能够抵抗盐酸酒精的脱 色，使菌体保留红色，故称抗酸染色法。
★其他非抗酸菌和组织细胞因不能抵抗盐酸酒 精的脱色，被脱成无色，后经碱性美兰染色 后染成兰。