聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理,步骤和结果分析
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理，步骤
和结果分析
一、实验原理
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和纯化技术，其原理基于蛋白质在凝胶电泳过程中受到凝胶孔隙大小及电场力的影响而发生迁移分离。
在非变性条件下，蛋白质保持其原有的构象，通过电泳进行分离。
二、实验步骤
1. 制备凝胶：首先准备非变性聚丙烯酰胺凝胶，通常是通过聚丙烯酰胺单体聚合成凝胶板。
2. 样品加载：将待分离的蛋白样品混合添加载体缓冲液，并加热变性处理，然后加载到凝胶槽中。
3. 电泳分离：将已加载样品的凝胶槽浸入电泳缓冲液中，施加电场进行电泳分离，蛋白质根据其分子大小及电荷迁移至不同的位置，最终形成条带。
4. 凝胶染色：分离完成后，应用染色方法将蛋白质条带可视化。
5. 结果分析：根据蛋白质条带的迁移位置以及染色效果，分析样品中含有的蛋白种类及相对含量。
三、实验结果分析
通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验，我们可以获得样品中蛋白质的分子量信息，并进一步分析样品中可能存在的杂质及纯度。
在电泳过程中，蛋白质根据其分子大小在凝胶中迁移的速度不同，从而实现了蛋白质的分离。
根据蛋白质在凝胶上的位置，我们可以对样品进行定性和定量分析，从而获得关于样品组成和含量的重要信息。
综上所述，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种简单有效的蛋白质分离技术，广泛应用于生物学和生物化学研究中。
通过实验结果的分析和解读，可以更好地了解样品中蛋白质的组成及结构，为进一步的实验研究提供重要参考。
双向聚丙烯酰胺凝胶电泳中的问题及其解决方法
双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种在两个方向上进行电泳分离的技术，通常用于核酸和蛋白质的分析。
在进行这种电泳过程中，可能会遇到一些问题。
以下是一些常见问题及其可能的解决方法：
1.电泳带模糊或不清晰：
-可能原因：
-样品质量不纯。
-缓冲液配制有问题。
-电场均匀性差。
-解决方法：
-使用纯净的、高质量的核酸或蛋白质样品。
-重新配置新鲜的缓冲液。
-检查电场均匀性，确保电场平均分布。
2.电泳速度过快或过慢：
-可能原因：
-电流设置不当。
-缓冲液浓度不正确。
-解决方法：
-调整电流，确保在设备规定的范围内。
-检查并重新配置适当浓度的缓冲液。
3.电泳带变形或扭曲：
-可能原因：
-样品加载不均匀。
-凝胶浓度选择不当。
-解决方法：
-确保样品加载均匀，使用适当的体积和加载方法。
-重新制备适当浓度的凝胶。
4.电泳凝胶干燥或开裂：
-可能原因：
-凝胶聚合物浓度太高。
-电泳室湿度不足。
-解决方法：
-降低凝胶聚合物的浓度。
-提高电泳室的湿度，可以考虑使用湿度控制设备。
5.样品负载量过多或过少：
-可能原因：
-样品量测量错误。
-样品浓度过低。
-解决方法：
-确保准确测量样品量。
-调整样品的浓度，确保在电泳中可以产生明显的带。
在实验过程中，及时记录实验条件和参数，有助于更容易地识别和解决问题。
如果问题持续存在，建议向实验室同事、导师或相关领域的专家寻求帮助。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
三、具体实验操作
9.凝胶板剥离与染色：电泳结束后，撬开玻 璃板，将凝胶板做好标记后放在大培养皿内， 加入染色液，染色1小时左右。 10.脱色：染色后的凝胶板用蒸馏水漂洗数 次，再用脱色液脱色，直到蛋白质区带清晰。 ※剥胶时要小心,保持胶完好无损,染色要 充分.
四、实验结果分析
绘制标准曲线：
按下式计算相对迁移率：
三、具体实验操作
3. 实验步骤
1.将玻璃板用蒸馏水洗净晾干, 准备2个干净的锥形 瓶. 2.把玻璃板在灌胶支架上固定好. ※固定玻璃板时，两边用力一定要均匀，防止夹 坏玻璃板. 3.按比例配好分离胶,用移液管快速加入,大约5厘米 左右,之后加少许蒸馏水,静置40分钟. ※凝胶配制过程要迅速, 催化剂TEMED要在注胶 前再加入,否则凝结无法注胶.注胶过程最好一次性 完成,避免产生气泡.
三、具体实验操作
※水封的目的是为了使分离胶上延平直，并排除气泡 ※凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面. 4.倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干,按比例配好浓缩胶, 连续平稳加入浓缩胶至离边缘5mm处,迅速插入样梳,静置 40分钟. ※样梳需一次平稳插入,梳口处不得有气泡,梳底需水平. 5.拔出样梳后,在上槽内加入缓冲液,没过锯齿时可拆去 底端的琼脂糖. ※要使锯齿孔内的气泡全部排出,否则会影响加样效果. 6、加样三个。 （1）取10µ l标准蛋白溶解液于EP管内， 再加入10µ 2倍样品缓冲液，上样量为20µl。 l
相对迁移率 =
蛋白样品距加样端迁移距离（cm） 溴酚蓝区带中心距加样端距离（cm）
以每个蛋白标准的分子量对数对它的相对迁移 率作图得标准曲线，量出未知蛋白的迁移率即 可测出其分于量，这样的标难曲线只对同一块 凝胶上的样品的分子量测定才具有可靠性。
简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和应用
简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和应用1. 原理SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称SDS-PAGE）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
它基于蛋白质的分子量和电荷差异，通过电场作用将蛋白质分离成不同的带。
SDS-PAGE的原理基于以下几个方面：1.SDS的作用：SDS是一种阴离子表面活性剂，可以使蛋白质分子迅速与其结合，并赋予蛋白质大量的负电荷，使得蛋白质在电场中按照大小和形状进行分离。
2.聚丙烯酰胺凝胶：聚丙烯酰胺凝胶是一种聚合物，可以形成一种网状结构，这种结构具有孔隙，可以通过孔隙大小筛选不同大小和形状的蛋白质分子。
3.电场作用：在电泳槽中施加电场后，带负电荷的蛋白质会向阳极迁移，迁移速度取决于蛋白质分子的质量和形状。
通过以上原理，可以将蛋白质样品加载在聚丙烯酰胺凝胶的孔隙中，然后施加电场，蛋白质按照其分子量的大小和形状进行分离，最终形成不同的蛋白质带。
2. 应用SDS-PAGE广泛应用于生物医学和生命科学的各个领域，以下是SDS-PAGE的几个主要应用：2.1 蛋白质分离与纯化SDS-PAGE是一种常用的蛋白质分离和纯化技术。
通过SDS-PAGE，可以将混合蛋白质样品根据其分子量进行分离，得到纯化的蛋白质。
这对于研究蛋白质的结构、功能以及相互作用具有重要意义。
2.2 亚细胞结构研究通过SDS-PAGE，可以将细胞或亚细胞结构中的蛋白质分离出来，进一步研究其在细胞内的定位、功能以及与其他分子的相互作用。
这有助于揭示细胞和亚细胞结构的功能机制。
2.3 蛋白质质量测定通过SDS-PAGE，可以通过与已知分子量的蛋白质标准品进行比较，估计未知蛋白质的分子量。
这对于研究蛋白质的结构、功能以及其在生物过程中的变化具有重要意义。
2.4 蛋白质组学研究SDS-PAGE结合质谱技术可以进行蛋白质组学研究。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理是一种常用的生物分子分离技术，它基于生物分子在电场中的迁移速度不同而实现分离。
该技术广泛应用于生物医学、生物化学、分子生物学等领域，是研究生物分子结构和功能的重要手段。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理的基本原理是利用聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质，将待分离的生物分子样品加入凝胶孔中，然后在电场作用下，生物分子在凝胶中迁移，根据分子大小和电荷的不同，分离出不同的带状图谱。
聚丙烯酰胺凝胶是一种高分子聚合物，具有良好的化学稳定性和物理性质，可以制备成各种形状和孔径大小的凝胶。
在凝胶电泳中，聚丙烯酰胺凝胶的作用是形成一种三维网络结构，使待分离的生物分子在凝胶中迁移时受到阻碍，从而实现分离。
在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，生物分子的迁移速度受到多种因素的影响，包括分子大小、电荷、形状、结构等。
一般来说，分子越小、电荷越大、形状越球形，迁移速度越快。
因此，通过调节电场强度、凝胶浓度、pH值等条件，可以实现对不同生物分子的选择性分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术具有分离效率高、分离范围广、操作简便等优点，已成为生物分子分离和分析的重要手段。
在生物医学领域，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术被广泛应用于蛋白质、核酸、
多肽等生物分子的分离和鉴定。
在分子生物学领域，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术被用于DNA测序、PCR产物分析、基因型鉴定等方面。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理是一种重要的生物分子分离技术，具有广泛的应用前景和研究价值。
随着生物技术的不断发展，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术将在更多领域得到应用和推广。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE)是利用聚丙烯酰胺(Polyacrylamide, PAA)凝胶为基质的电泳分离技术。
该技术主要应用于生物化学和分子生物学领域中蛋白质和核酸的分离和纯化，是一种常用的分析和检测方法。
PAGE电泳原理基于电泳和凝胶过滤的结合。
电泳过程中，由于蛋白质或核酸分子的带电性，它们在外加电场下会向电极方向移动，移动速度与带电量的大小成正比。
在聚丙烯酰胺凝胶的孔道中，分子的移动速度受到凝胶的孔径大小、电场强度、带电情况和分子大小等多种因素的影响。
因此，不同大小、带电量、形态的分子在凝胶中的移动速度也不同，在电泳过程中可以被分离并形成带。
另外，PAGE电泳过程中，聚丙烯酰胺凝胶的孔道作为分子筛的功能，可以分离出分子量相近但电荷性质不同的蛋白质分子。
PAGE电泳过程包括制备凝胶、样品制备和电泳操作三个步骤。
制备凝胶的过程中，通过将不同比例的丙烯酰胺和交联剂Acr-Bis混合，加入共聚反应引发剂，形成一定浓度PAA凝胶混合液。
这样的混合液待剂量调节后均匀地滴入样品槽并形成凝胶。
不同比例的丙烯酰胺和交联剂可以控制凝胶的孔径大小和电泳范围，通常使用10%或15%的凝胶。
样品制备是将待检测的蛋白质经过热处理或添加离子性或非离子性试剂，变性后的蛋白质会在PAGE电泳中呈现一个快速和清晰带。
电泳过程中，往往使用荧光缀合物将带染色，电泳后清洗并照射，利用荧光信号检测结果，也可以通过银染法将分离带处理后显色，以更加清晰地观察分离结果。
总之，PAGE电泳是一种快速、高分辨率、准确的生物分子分离技术，是生命科学领域的不可或缺的工具之一。
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理是一种常用的蛋白质分离和分析方法。
该方法利用聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质，通过电场作用将带电的蛋白质分子在凝胶中移动分离。
其原理可以分为三个步骤：样品加载、电泳分离和染色/检测。
首先，将待测样品经过加热变性处理，使蛋白质变性并带有负电荷，然后将其加载到聚丙烯酰胺凝胶的凝胶孔中。
加载完成后，施加电场使带负电荷的蛋白质沿着凝胶孔向正极移动。
由于蛋白质分子的大小和形状不同，它们在凝胶中的移动速度也不同，从而实现了蛋白质的分离。
接下来，电泳分离的时间和电场强度可以根据需要进行调节，以实现较好的分离效果。
一般情况下，较小的蛋白质分子会更快地向阳极移动，而较大的蛋白质分子移动较慢。
根据蛋白质在凝胶中的迁移距离，可以用来判断蛋白质的相对分子质量。
最后，对分离完成的蛋白质进行染色或检测。
常用的染色方法包括银染法和脱氧核糖核酸( DNA )染料染色法，这些方法可
以使蛋白质在凝胶上形成可见的条带。
另外，还可以使用荧光标记的蛋白质或特定的抗体进行免疫检测，以获得更具体的信息。
综上所述，聚丙烯酰胺凝胶电泳利用聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质，通过电场作用将带电的蛋白质在凝胶中移动分离，并通过染色或检测方法来获取蛋白质的分离结果。
这种方法具有简
单、快速和可重复性好的特点，被广泛应用于生物化学和分子生物学领域的蛋白质研究中。
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理及方法
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理及方法发布时间：11-06-01 来源：点击量：10032 字段选择：大中小聚丙烯酰胺凝胶电泳原理及方法聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。
在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。
聚丙烯酰胺凝胶有以下优点：①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。
凝胶有格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。
②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。
一般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。
③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。
凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。
④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。
合成聚丙的总克数称凝胶浓度，常用T%表达；凝胶溶液中交联剂占单体和交联体总量的百分数称为交联度，常用C%表示，可用下式计算：公式a：丙烯酰胺克数；b：甲撑双丙烯酰胺克数；m：缓冲液体积（毫升）凝胶浓度过高时，凝胶硬而脆，容易破碎；凝胶浓度太低时，凝胶稀软，不易操作。
交联度过高，胶不透明并缺乏弹性；交联度过低，凝胶呈糊状。
聚丙烯酰胺凝胶具有较高的粘度，它不防止对流减低扩散的能力，而且因为它具有三度空间网状结构，某分子通过这种网孔的能力将取决于凝胶孔隙和分离物质颗粒的大小和形状，这是凝胶的分子筛作用。
由于这种分子筛作用，这里的凝胶并不仅是单纯的支持物，因此，在电泳过程中除了注意电泳的基本原理以外，还必须注意与凝胶本身有关的各种性质（网孔的大小和形状等）。
SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法
SDS－PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS－PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论：Q：SDS－PAGE电泳的基本原理？A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS 会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响？A：在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。
在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。
由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。
当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。
聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分离和检测生物大分子的方法。
它的原理是利用聚丙烯酰胺凝胶的孔隙大小和电荷特性，将不同大小和电荷的生物大分子分离开来。
将待分离的生物大分子样品加入到聚丙烯酰胺凝胶中，然后通过电泳的方式将样品分离开来。
电泳是利用电场作用力将带电粒子分离的方法，它的原理是根据带电粒子的电荷大小和电场强度的不同，使它们在电场中运动速度不同，从而实现分离。
在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，电泳槽中的聚丙烯酰胺凝胶是一个三维网状结构，具有一定的孔隙大小和电荷特性。
当电场通过凝胶时，带电的生物大分子会在凝胶中移动，根据其大小和电荷特性，不同的生物大分子会在凝胶中停留在不同的位置上，从而实现分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离效果受到凝胶浓度、电场强度、电泳时间等因素的影响。
通常情况下，凝胶浓度越高，孔隙大小越小，分离效果越好；电场强度越大，分离速度越快，但也容易出现样品热失活和凝胶破裂等问题；电泳时间越长，分离效果越好，但也容易出现样品扩散和凝胶老化等问题。
聚丙烯酰胺凝胶电泳广泛应用于生物学、生物化学、医学等领域，可以用于分离和检测DNA、RNA、蛋白质等生物大分子，是一种非常重要的实验技术。
聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理一、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）基本原理聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel elecrtrophoresis，PAGE）是一种分析两性物质结构的有效方法。
它是以聚丙烯酰胺凝胶为载体，应用交流或直流电场，乙二醇或乙二醇水溶液作为移动介质，使分子在电场中经由凝胶移动的方法。
具体而言，在PAGE中，分子在电场的作用下，从凝胶上的电极处向凝胶内部移动（例如正电极向凝胶内部移动），同时，分子根据其在凝胶网络中的活动和受到通过电场施加的力的影响，以不同的速率穿过凝胶，从而获得他们特定的构型，最终从凝胶边缘离开，在凝胶面连续移动，并最终到达电极处。
PAGE试验，最初的凝胶电泳试剂和反应体系主要是：在聚丙烯酰胺(PAGE)网络中混合有多种构型的分子，如水溶性酶、酸性蛋白质、核酸、抗体、复合蛋白质等，然后在此反应系统中加入电场，使其穿过凝胶网络，最终降解产物可以通过激光共聚焦成像系统被识别。
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的优势1、PAGE技术能够极大地提高蛋白质分析的灵敏度和精确度。
由于它的分辨率高，可以检测到任何大小的分子，因此，可以对蛋白质的组成、构型、结构及其功能特性有更深入的了解。
2、PAGE技术的速度快，可以在几分钟内完成蛋白质分析，非常适合在大量的样本分析中使用，且它的成本也较低，可以大大提高蛋白质的检测速度和效率。
3、PAGE技术可进行准确有效的分析，这种测定方法也可提供浓度的分析。
4、PAGE技术有较高的灵敏度，能够检测到微量的蛋白质，可以检测到蛋白质的微弱变化，从而发现蛋白质在特定状态下是否有差异。
5、PAGE技术还有制备样品的优势，例如，不需要预处理，可以直接使用凝胶，并可以更有效地增加高技术水平的研究；此外，也有其他的细胞或分子的制备方法，从而可以获得更高的准确性和细节化的信息。
聚丙烯酰胺凝胶电泳异常问题及解决
凝胶聚合太快
1 TEMED 或 AP 用量大 2 环境温度太高
1 减少 TEMED 或 AP 用量 2 适当恒温（25~30℃）
样品混浊
1 样品在冰箱放置时间太长或 长菌 2 样品溶解不佳或样品浓度过 高
1 重新配制样品 2 调整样品缓冲液 pH，加入助 溶 剂 或降 低样 品浓 度， 离心 去 除不溶物
1 加样量太少 2 加样时样品未下沉，随缓冲 液上浮漂走 3 分离胶浓度太高或样品相对 分 子 质量 太大 未能 进入 凝胶 ， 仍留在加样处 4 电泳时间过长，电流过大或 分 离 胶浓 度太 低， 被分 离物 走 出凝胶 5 样品被酶降解 6 电极缓冲液及样品溶解 pH 选 择不当
1 处凝胶完全聚合
1 增加加样量 2 增加样品溶解液中甘油或蔗 糖浓度 3 适当降低凝胶浓度 4 选择合适的电压（电流）或 减少电泳时间，增加胶浓度 5 纯化样品除去水解酶 6 重新选择缓冲液 pH。
染色后蛋白质区带宽或拖尾
1 样品溶解液离子强度高 2 电极缓冲液组成与 pH 均不 当 3 加样量过多，过浓或从加样 孔泄露，影响邻近带 4 样品溶解不佳，或盐分太高 5 凝胶浓度太低
1 降低溶液离子强度 2 换缓冲液，选择合适 pH 3 减少加样量或降低样品浓 度，防止样品槽破裂 4 加样品前需先离心或脱盐处 理 5 适当增加凝胶浓度
电泳时指示剂前沿两边呈向上 电 泳 过 程 中 凝 胶 板 冷 却不 均 在电泳中增加冷却水的流动或
弯的曲线（微笑）
匀，尤其是中部冷却不好，造 在冰箱中操作
成凝胶中分子迁移率不同
电 泳 时指 示剂 前沿 两边 呈向 下 弯的曲线（皱眉）
电泳染色后无显色条带
1 电泳槽内的两层玻璃板与夹 在中间的凝胶底部有气泡 2 靠近橡胶框处凝胶聚合不完 全
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验分析
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验分析聚丙烯酰胺凝胶电泳实验是一种分离和分析生物分子的方法，它可以通过电场使不同分子质量的DNA、RNA和蛋白质在物理性质相近的聚丙烯酰胺凝胶中移动，从而实现它们的分离和检测。
本文将就聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的理论、实验步骤、结果分析以及实验存在的问题进行详细的讲述。
一、实验原理聚丙烯酰胺凝胶电泳实验主要是通过电场作用，将DNA、RNA和蛋白质分子在聚丙烯酰胺凝胶中分离并判断分子的大小。
其中聚丙烯酰胺凝胶是一种网状物质，它有很强的吸水性和渗透性，因此可以将生物分子填充其中。
当聚丙烯酰胺凝胶通过电场作用列成微观孔隙时，各种生物分子会在微孔内移动，根据分子的质量和大小，会在不同位置形成不同的电泳带。
在实验中，首先需要制备聚丙烯酰胺凝胶，然后将待测试的样品加入凝胶溶液中均匀混合，再将其注入电泳槽中，加入电解液并通电，通过电泳将被检测的生物分子分离后，用染色剂在凝胶上染色并观察其带型。
二、实验步骤1. 制备聚丙烯酰胺凝胶a. 测量所需聚丙烯酰胺的质量，按照重量比例混合罗丹明B缓冲液和甲醛b. 加入半加固剂后，在模板两边运用吸管将混合液吸入模板内，并加入宽度相等的橡皮垫c. 在上方加入半加固剂，使其混合，并等待其凝固，最后取下橡皮垫，去除凝胶。
2. 样品荧光标记a. 将测试样品制备好b. 将样品添加荧光染料，进行反应后用同样的染料标记分子质量标准。
3. 准备电泳槽a. 连接电源和电极，注入电解液b. 将制备好的聚丙烯酰胺凝胶放入槽中。
4. 进行电泳操作a. 分别添加样品和分子质量标准至凝胶中b. 通过电泳，将生物分子在凝胶中分离和定位c. 取下凝胶并对凝胶染色d. 进行显带，将电泳带进行图像捕捉5. 结果分析a. 在凝胶上观察带型b. 分离它们以确定大小及数量c. 分别进行其电泳常数的测定三、结果分析根据上述的实验步骤，在实验中我们可以通过聚丙烯酰胺凝胶电泳实验，将DNA、RNA 和蛋白质分子分离，并判断分子的大小及数量。
聚丙烯酰胺凝胶电泳易出现的问题与对策
・
种子科 技 ・
・适 用 技 术 ・
聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 易 出 现 的 问 题 与 对 策
王 丽 张 守 华 张 守 峰 ， ， （ ． 县 种子 公 司 ， 南 浚 县 ４ ６ ５ ；． 县 种 子 管 理 站 ） １浚 河 ５２０ ２浚
地 拔 出样 品 梳 。
１ １ 磨 样 ： 样 品 时 不 能 有 样 品 散 失 ， 要 是 胚 部 不 ． 磨 主 能 丢 失 。 因胚 部 含 油 分较 高 ， 样 品 含水 量 高 时 ， 碎 在 粉
后 的 样 品 易 粘 在 磨 子 上 ， 注 意 用 小 刷 子 刷 下 。 水 分 要 如
用 微 量 进 样 器 吸取 １ ～２ Ｌ玉 米 蛋 白质 提 取 液 ５ Ｏ 上 清 液 ， 次 在 样 品 槽 中 按 粒 点 样 ， 点 一 次 样 后 要 吸 依 每
取去离子水清洗进样器二三 次。
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再 摇 一 次 。 样 品提 取 方 法 在 冰 箱 中进 行 更 好 ， 样 后 该 进 可将样 品放入 冰箱 ， 能保 存 ２ｄ 再 电 泳 时 ， 需 将 样 品 。 只
面 消 失 ， 界 面 再 出 现 时 表 明 凝 胶 已 成 。 时 用 注 射 器 当 这
蠕 、 蠕 ＝ ； ； ０； ： ｛ ． 晴 蛤
方 法 为 ： 染 色 液 倒 出 ， 少 许 乙 醇 ， 刷 子 刷 盘 底 染 将 加 用 料 呈 溶 液 状 态 ， 将 倒 出 的染 色 液 倒 回盘 中 ， 入 凝 胶 再 放 就能重新染色 。 如染 料浓 度 不 够 ， 将 染 料 乙 醇 溶 液 倒 再
缝 渗 漏 或 水 封 不 小 心 造成 的 。 封 时 应 注 意 ， 入 分 离 水 灌 胶 后 用 手 振 荡 一 下 电 泳槽 ， 平 胶 面 ， 速 用 预 先 准 备 振 迅 好 的 注 射 器 注 入 正 丁 醇封 住 胶 面 。 封 动 作 要 轻 ， 要 水 不
聚丙烯酰胺凝胶电泳 常遇到的问题
聚丙烯酰胺凝胶电泳常遇到的问题
在使用聚丙烯酰胺凝胶电泳时，常遇到的问题可能包括:
1. 凝胶聚合不完全或凝胶反应失败：这可能是由于聚合物配制或反应条件不正确引起的。
解决方法可以是重新制备凝胶或调整反应条件。
2. 凝胶致密度不一致：这可能是由于凝胶配制不均匀或注射不均匀引起的。
解决方法可以是确保凝胶配制均匀，并使用均匀的注射装置。
3. 凝胶断裂或脱离支架：这可能是由于凝胶制备过程中操作不当或支架等部件损坏引起的。
解决方法可以是重新制备凝胶，注意操作细节，并确保使用良好的支架。
4. 电流过大或过小：这可能是由于电流设置不正确或电泳条件不合适引起的。
解决方法可以是调整电流设置或优化电泳条件。
5. 样品加载和分离不理想：这可能是由于样品加载量不恰当或主动力和分辨率不合适引起的。
解决方法可以是调整样品加载量，优化主动力和分辨率条件。
6. 染色结果不清晰或不均匀：这可能是由于染色时间不足或染色剂使用不当引起的。
解决方法可以是延长染色时间或重新选择染色剂。
7. 结果重复性差：这可能是由于实验过程中存在误差或操作不
一致引起的。
解决方法可以是标准化实验流程，注意操作细节，并进行必要的质量控制。
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验分析
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验分析在很多地方看到大家都在讨论关于聚丙烯酰胺凝胶电泳的知识。
看了好多观点以后，不如自己做一个实验来分析。
更何况对于聚丙烯酰胺凝胶电泳分析必须要通过实验来验证观点。
下面就是关于聚丙烯酰胺凝胶电泳实验分析：明确实验目的：1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。
2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程。
3.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点和应用范围。
了解实验原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（简称Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂的作用下，聚合交联而成的含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。
聚丙烯酰胺凝胶具有三维网状结构，能起分子筛作用。
用它作电泳支持物，对样品的分离取决于各组分所带电荷的多少及分子大小。
此外，聚丙烯酰胺凝胶电泳还具有浓缩效应，即在电泳开始阶段，由于不连续pH梯度作用，将样品压缩成一条狭窄区带，从而提高了分离效果。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分为垂直平板电泳和圆盘电泳，两者的原理完全相同。
由于垂直板形凝胶具有板薄、易冷却，分辨率高、操作简单、便于比较与扫描等优点，因而为大多数实验室采用。
聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨率比纸电泳高得多，能检出10-9～10-12g样品，特别适合于分离和测定蛋白质、核酸等生物大分子化合物。
它除了能对生物大分子物质进行定性、定量分析外，还可用以测定分子量，且是一种较先进的测定分子量的方法。
不连续变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是使用最广泛的凝胶电泳。
不连续是指电泳的pH值不连续（样品浓缩胶缓冲液pH 6.8, 电极缓冲液pH 8.3, 分离胶pH 8.8）、凝胶不连续（一般分成样品浓缩胶和样品分离胶两层）。
变性是指样品蛋白经SDS和巯基乙醇作用后，所有蛋白质都解聚成为其构成亚基，并且都带上负电荷，形状都近似于长椭园棒状。
这种SDS-蛋白质复合物，在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与园棒的长度也就是蛋白质的分子量有关。
SDS聚丙烯酰胺凝胶的有效分离笵围取决于灌制凝胶时聚丙烯酰胺的浓度和交联度，二者决定凝胶分子筛的孔径大小，而孔径又是灌胶时所用丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺绝对浓度的函数。
(免费共享)SDS-PEGA聚丙烯酰胺凝胶电泳常见问题及分析
常见问题及分析1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。
在浓缩胶中，其pH 环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。
由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压梯度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。
当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。
2. 样品如何处理？根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。
1) 还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或Beta巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。
一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。
2) 带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。
100ul样品缓冲液中10ul 20%的碘乙酸胺，并在室温保温30min。
3) 非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1%SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。
3. SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用？聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；制胶缓冲液：浓缩胶选择pH6.7，分离胶选择pH8.9，选择tris－HCL系统，TEMED 与AP：AP提供自由基，TEMED是催化剂，催化自由基引起的聚合反应进行；十二烷基磺酸钠（SDS）：阴离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳原理
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳原理sds聚丙烯酰胺凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳都是生物化学中常用的蛋白质分离和分析技术。
这两种技术的基本原理不同，下面我们将分别介绍它们的原理。
1. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离技术，使用SDS(dodecyl sulfate)这种表面活性剂将蛋白质完全去除其天然构象，使得所有蛋白质变成一种负电荷。
具体步骤如下：(1) 样品制备：需要将样品先进行热变性，然后进一步加入SDS和还原剂（如β-巯基乙醇）。
(2) 凝胶制备：需要制备一个连续的聚丙烯酰胺凝胶，这个凝胶有着不同大小的孔洞，可以用来分离蛋白质。
(3) 电泳过程：将样品放在凝胶的顶部，然后进行电泳。
在电场作用下，蛋白质将按照大小和电荷密度被排列。
(4) 染色：完成电泳后，可以使用染色剂如银染来可视化蛋白质的位置。
这种技术能够将蛋白质按照大小、形状和电荷分离出来。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳还可用于测定蛋白质的分子量，因为分子量和蛋白出现的位置呈线性关系。
聚丙烯酰胺凝胶电泳也是一种基于凝胶色谱的生物分离技术，主要是根据多肽分子量的分布来进行分离。
具体步骤如下：(2) 样品制备：将样品加入到凝胶孔中，用电泳进行分离。
(3) 电泳过程：在电场的作用下，蛋白质将向着阳极进行移动。
在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，一般将蛋白质或多肽样品电泳分离，而不使用SDS。
因此，聚丙烯酰胺凝胶电泳能够检测到带电的多肽，而且可以检测到未被完全转化的蛋白质保留其完整分子量的多肽。
总之，两种凝胶电泳技术的原理各有不同，根据实验需求可以选择不同的技术。
聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析
聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。
催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。
化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。
在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。
不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。
不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。
浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。
电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。
如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。
1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。
当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇，SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。
由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为18A，这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小由于蛋白质－SDS复合物在单位长度上带有相等的电荷，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶，进入分离胶后，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗体的原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗体的原理下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。
催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。
化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。
在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。
不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。
不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。
浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。
电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。
如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。
1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。
当向蛋白质溶液中加入足够量SDS 和巯基乙醇，SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。
由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为18A，这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小由于蛋白质－SDS复合物在单位长度上带有相等的电荷，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶，进入分离胶后，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。
因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高的灵敏度，一般只需要不到微克量级的蛋白质，而且通过电泳还可以同时得到关于分子量的情况，这些信息对于了解未知蛋白及设计提纯过程都是非常重要的。
SDS-PAGE常见问题分析1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。
在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。
由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。
当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。
2. 样品如何处理？根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。
1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或Beta巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。
一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。
2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。
100ul样品缓冲液中10ul 20％的碘乙酸胺，并在室温保温30min。
3）非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1％SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。
3. SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用？聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；制胶缓冲液：浓缩胶选择pH6.7，分离胶选择pH8.9，选择tris －HCL系统，TEMED与AP：AP提供自由基，TEMED是催化剂，催化自由基引起的聚合反应进行；十二烷基硫酸钠（SDS）：阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
4. 提高SDS-PAGE电泳分辨率的途径？聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。
建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。
忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。
一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。
一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料，不同染料又各自不同的染色方法，具体可参照郭尧君编著的《蛋白质电泳技术手册》P82-103。
5.“ 微笑”（两边翘起中间凹下）形带原因？主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。
处理办法：待其充分凝固再作后续实验。
6. “皱眉”（两边向下中间鼓起）形带原因？主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。
7. 为什么带出现拖尾现象？主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。
8. 为什么带出现纹理现象？主要是样品不溶性颗粒引起的。
处理办法：加样前离心；加适量样品促溶剂。
9. 什么是“鬼带”，如何处理？“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。
但它却于目标条带有相同的免疫学活性，在WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。
处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。
10. 为什么溴酚蓝不能起到指示作用？我们在实验中常会遇到溴酚蓝已跑出板底，但蛋白质却还未跑下来的现象。
主要与缓冲液和分离胶的浓度有关。
处理办法：更换正确pH值的Buffer；降低分离胶的浓度。
11. 为什么电泳的条带很粗？电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩好的原因。
处理办法：适当增加浓缩胶的长度；保证浓缩胶贮液的pH正确（6.7）；适当降低电压；12. 为什么电泳电压很高而电流却很低呢？这种现象一般初学者易出现。
比如电压50v以上，可电流却在5mA以下。
主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。
包括：a.内外槽装反；b.外槽液过少；c.电泳槽底部的绝缘体未去掉（比如倒胶用的橡胶皮）。
处理办法：电泳槽正确装配即可。
13. 浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳有影响吗？这主要出现在初学者中，一般对电泳不会有太大的影响。
前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致；后者是由于在解除制胶的夹子后，板未压紧而致空气进入引起的。
14. 凝胶时间不对，或慢或快，怎么回事？通常胶在30MIN-1H内凝。
如果凝的太慢，可能是TEMED，APS剂量不够或者失效。
APS应该现配现用，TEMED不稳定，易被氧化成黄色。
如果凝的太快，可能是APS和TEMED用量过多，此时胶太硬易裂，电泳时易烧胶。
15. 电泳时间比正常要长？可能由于凝胶缓冲系统和电级缓冲系统地PH选择错误，即缓冲系统地PH和被分离物质的等电点差别太小，或缓冲系统的离子强度太高。
/zhuimeng9696/blog/item/04c346452e63c034869473dc.html。