无菌检查操作指导书
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程标题：无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物实验和细胞培养的重要场所，为保证实验结果的准确性和可靠性，操作规程十分关键。
本文将详细介绍无菌实验室的操作规程，包括实验室准备、操作流程、设备消毒、个人防护和废物处理等方面。
一、实验室准备1.1 清洁实验室环境：无菌实验室应保持干净整洁，定期清洁地面、台面和设备，避免灰尘和细菌污染。
1.2 检查实验室设备：在进行实验前，要检查实验室设备是否正常运转，确保无菌实验室的各项设备都处于良好状态。
1.3 准备所需材料：提前准备好所需的培养基、试剂和实验用具，确保实验进行顺利。
二、操作流程2.1 洗手消毒：进入无菌实验室前，必须先进行手部消毒，避免将细菌带入实验室。
2.2 穿戴个人防护用具：穿戴实验服、手套、口罩和护目镜等个人防护用具，避免污染实验样品。
2.3 严格按照实验操作规程进行：在进行实验时，要按照操作规程的要求进行，避免操作失误导致实验失败。
三、设备消毒3.1 消毒实验台面：在进行实验前，要将实验台面用75%乙醇或其他消毒液擦拭消毒，避免细菌污染。
3.2 消毒实验用具：使用完实验用具后，要及时用高温或消毒液进行消毒，确保下次使用时无菌。
3.3 定期消毒实验室设备：定期对实验室设备进行消毒，保持实验室的无菌状态。
四、个人防护4.1 穿戴个人防护用具：在进行实验时，必须穿戴好实验服、手套、口罩和护目镜，避免接触细菌。
4.2 避免交叉污染：在实验过程中，要避免将实验用具和试剂带到其他实验室，避免交叉污染。
4.3 定期进行健康检查：实验人员要定期进行健康检查，确保身体健康，避免将疾病传播到实验室。
五、废物处理5.1 分装废物：在进行实验后，要将废物分类分装，避免混合造成交叉感染。
5.2 定期清理实验室废物：实验室废物要定期清理，避免细菌滋生和传播。
5.3 合理处理废物：将实验室废物交由专业机构处理，避免对环境和人体造成危害。
结论：无菌实验室操作规程十分重要，只有严格遵守规程，才能确保实验结果的准确性和可靠性。
无菌检验室操作流程
无菌检验室操作流程
无菌检验室操作流程如下：
１．试验前将被检样品及试验用品放入传递窗，关闭外门，打开紫外灯，照射30分钟。
２．打开高效过滤风机、紫外灯和电源开关，紫外灯照射30分钟。
３．工作人员进入工作室前洗手，在缓冲间内穿戴无菌衣、帽、口罩、更换拖鞋后，进入工作室。
４．用消毒剂消毒手和腕部，将所需物品经传递窗传进。
５．工作期间不得进出工作室。
６．试验结束后，及时清洁台面和地面，室内留用物品摆放整齐，其他物品经传递窗传出。
工作人员关好内门，进入缓冲间，更换拖鞋和无菌衣，离开工作室，打开紫外灯照射30分钟。
７．打开传递窗，取出接种好的培养物送去培养，剩余样品根据实验室有关规定妥善处理。
８．关闭风机和紫外灯电源。
无菌医疗器械检查指南(试行)
附件5：
医疗器械生产质量管理规范
无菌医疗器械检查指南（试行）
(试点修改稿)
按照《医疗器械生产质量管理规范》和《医疗器械生产质量管理规范无菌医疗器械实施细则》的要求，为了规范对无菌医疗器械生产企业的质量管理体系现场检查工作，统一检查标准，制定本检查指南。
一、检查评定方法
1．无菌医疗器械生产质量管理规范检查，须根据申请检查的范围，按照无菌医疗器械实施细则，确定相应的检查范围和内容。
2．无菌医疗器械检查项目共253项，其中重点检查项目（条款前加“*”）32项，一般检查项目221项。
3．现场检查时，应对所列项目及其涵盖的内容进行全面检查，并对不符合事实做出描述，如实记录。
其中：
严重缺陷项：是指重点检查项目不符合要求。
一般缺陷项：是指一般检查项目不符合要求。
不适用项：是指由于产品生产的要求和特点而出现的不适用检查的项目。
（该项目企业应当说明理由，检查组予以确认）一般缺陷比例=一般缺陷项目数/（一般检查项目总数—一
般检查项目中不适用项目数）Ⅹ100% 4．结果评定：
二、检查项目。
无菌技术操作流程简写
无菌技术操作流程简写一、介绍无菌技术是一种控制和预防微生物污染的方法。
在医疗、食品、制药等领域广泛应用。
本文将简要介绍无菌技术的操作流程。
二、准备工作在进行任何无菌实验前，必须确保工作区域及工具均处于无菌状态。
准备工作如下：1.清洁工作区：彻底清洁工作台，并用消毒剂擦拭。
2.穿戴无菌操作衣：穿戴无菌手套、衣服、帽子和口罩。
3.消毒操作工具：用高温高压灭菌器对操作工具进行灭菌处理。
三、操作流程1.打开无菌工作台：先进行手消毒，戴上无菌手套，然后打开无菌工作台的超净台面。
2.取出试验物品：将需要的无菌试验物品从包装中取出。
3.开启燃烧盖：打开无菌工作台的燃烧盖，并点燃蜡烛。
4.操作物品处理：将试验物品经过消毒的工具夹子夹取，置于燃烧盖上方进行燃烧处理。
5.灭菌试剂处理：将需要使用的灭菌试剂按照要求使用。
6.移液操作：使用无菌的移液器对液体进行移液操作。
7.杀菌操作：将操作好的液体或物品放入高温高压灭菌器进行杀菌。
8.清理工作区：实验结束后，对工作区进行彻底清洁。
四、注意事项1.不要触摸无菌操作区域以外的物品。
2.所有操作都必须在无菌条件下进行。
3.移液器在使用前需进行严格的清洁和消毒。
4.使用灭菌器时，遵守使用说明。
5.工作完成后，正确处理无菌试验物品及废弃物。
五、总结无菌技术框架下的操作流程可以帮助我们有效控制和预防微生物污染。
在操作过程中，我们需要按照一定的步骤和要求进行，严格遵守消毒和无菌处理的相关操作规范。
这样可以确保实验结果的准确性与可靠性，保护实验人员和被试物品的安全和健康。
希望本文对于理解无菌技术操作流程有所帮助！。
无菌技术操作手册
无菌技术操作手册
前言
无菌技术是微生物学和生物制药学中的基础技术之一。
本操作
手册旨在向初学者介绍无菌技术的基本概念和操作方法，确保实验
室操作过程中的无菌环境，保证实验室实验的准确性和可靠性。
实验室准备
在进行无菌实验前，必须将实验室清洁卫生。
实验室清理包括
擦拭工作台面，清洗培养皿和培养管等实验器具。
在实验开始前，
必须进行消毒操作，包括工作台面、培养皿和培养管。
无菌技术操作步骤
第一步：穿戴实验室衣物
在进行任何实验工作之前，穿着适当的实验室衣服（包括实验服、实验鞋、手套等）。
务必将实验室衣物彻底清洗、烘干、消毒。
第二步：准备工作台
使用70%乙醇或1%双氧水进行消毒，擦拭实验台面时，应先从边缘开始，由外向内反复擦拭，这样可以保证台面的整体清洁。
第三步：准备培养皿和培养管
用消毒棉球沾取75%酒精，擦拭培养皿和培养管表面，在灯火下进行操作。
第四步：接种
将消毒过的工具取出，接种细菌。
第五步：封闭培养皿和培养管
将培养皿和培养管紧密地密封，防止细菌外来污染，放入培养箱或恒温培养箱中培养。
实验室注意事项
1. 实验器材必须在灯下进行操作，防止外界细菌的干扰。
2. 实验室内必须保持高度清洁，切勿将实验物品随意放置。
3. 实验过程中尽可能不将手伸入操作台内，若必须进行操作则需要在已清洗并消毒过的条件下操作。
以上为无菌技术操作手册的简要介绍，仅供参考。
在无菌实验的操作过程中，操作规范和操作规程必须严格遵守，以保证实验结果的准确性和可靠性。
20220422无菌检验作业指导书
无菌检验作业指导书1目的通过无菌检验，确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。
合用范围2合用于灭菌后医疗器械产品电凝镊的无菌检验。
检验依据33.1、产品注册标准年版）3.2、《中国药典》（2022、GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二部份：生物试3.3验方法一次性使用医疗用品卫生标准、GB15980-19953.44 仪器、设备百级层流超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、PH计、冰箱、酒精灯、三角烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管若干等。
5无菌检验室的环境要求级下的局部百级的单向流空气区域内进无菌检验应在环境洁净度100005.1行。
缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照5.2室与缓冲区之间空气应保持负压。
无菌检验室与室外大气之间静压差应大于。
10Pa～65%℃，相对湿度：45。
无菌检验室的室温应保持18～26无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室5.3（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。
每年至少检测一次。
每次操作5.4无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：℃～35，于30时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min平板。
培养48小时，菌落数平均应不超过1cfu/无菌检验前的准备66.1器具灭菌、消毒灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。
6.1.1℃蒸汽灭菌℃以上干烤2小时，或者置压力蒸汽灭菌器内121可经电热干燥箱16030分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。
所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。
消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。
6.1.2如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。
可采用消毒剂浸泡或者擦拭。
初始污染菌检验操作规程
初始污染菌检验操作规程1.目的测定样品细菌总数可用来判明样品细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对样品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，为下一步灭菌提供参考依据。
2.适用范围适用于所有需要消毒灭菌前的产品、洁净车间3．作业条件：3.1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。
3.2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。
4．作业方法与步骤4．1制作营养琼脂培养基（参见《培养基制作作业指导书》），培养基需按要求培养16-18H 后，检查无菌生长方可使用。
4．2无菌室洁净度验证4．2．1取3只培养皿在超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好置30～35℃培养48h后检查，3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个4．3产品采集与样品处理（制备供试液）4.3.1用无菌手续称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。
作为1：10供试液。
4.3.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。
保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。
作为1：10的供试液。
4.3.3采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。
4.3.4供试液10倍递减稀释4.3.5待上述供试液自然沉降后取上清液1ml，加入9ml生理盐水，制备1：100的供试液。
制备过程中尽量避免碎片等杂物的混入。
4.4接种检验4.4.1取上述供试液上清液作初始污染菌数检测，取4个培养皿，每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注2个平皿。
4.4.2经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。
以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。
微生物检测作业指导书
1目的规范微生物检测操作，确保检测结果有效。
2适用范围适用于公司产品微生物的测定。
3定义：3.1菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度、培养时间等）培养后，所得每g（ml）检样中形成的微生物菌落总数。
3.2大肠菌群：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌4职责化验员负责按本作业指导书方法检测。
5内容5.1检测环境：无菌室在无人条件下应打开紫外消毒灯作用≥30min，检验员在紫外灯关闭≥30min后方可入内。
紫外灯消毒情况每月不少于2次检验，检验不合格不得使用无菌室检测。
5.2检测设备：电子天平、电热炉、高压灭菌器、电热恒温干燥箱；检测工具：锥形瓶、试管、移液管、酒精灯、脱脂棉；试剂：75%酒精、氯化钠、平板计数琼脂（检测菌落总数）、结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)（检测大肠菌群）、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)（检测大肠菌群）、孟加拉红琼脂（检测霉菌）、蒸馏水。
5.3准备：5.3.1培养基：以培养基包装标识用法为准，按比例取检测需要量制备。
用锥形瓶煮培养基时，注意搅拌，防止琼脂糊底，接近沸腾时注意及时取下，防止溢出。
5.3.2无菌生理盐水（0.85﹪）：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，每300ml的锥形瓶内分装225mL的生理盐水。
每管9ml分装适量试管。
121℃高压灭菌15min。
备用。
5.3.3消毒酒精：取适量撕碎的脱脂棉，用75%酒精浸泡。
5.3.4培养皿、移液管和试管可选用干热灭菌（采用电热恒温干燥箱灭菌，160℃灭菌2h或180℃灭菌1h）或湿热灭菌（使用高压灭菌器，121℃高压灭菌15min），冷却后备用。
5.4检测：5.4.1用消毒酒精擦拭手部和样品外包装袋。
点燃酒精灯，后续检测操作在酒精灯附近进行。
5.4.2称取25g样品置于盛有225mL无菌生理盐水的锥形瓶内，经充分振摇制成1：10的样品匀液。
取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入含有9mL无菌生理盐水的试管内，振摇试管使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。
无菌检查操作规程
BI无菌检查操作规程编号：版本：编制：日期：审定：日期：批准：日期：生效日期：管理部门：发放部门：生产部 质管部 工程部 研发部 PMC 采购部 仓库 营销中心 人事行政中心 财务部1、目的本作业指导书规定了BI无菌试验的标准操作规程，以指导检验员按规定的作业标准进行操作。
2、范围适用于用BI无菌试验,包括片状和自含式的BI。
3、职责检验相关人员对该规程负责。
4、仪器设备及试剂4.1恒温培养箱4.2高压蒸汽灭菌器4.3超净工作台4.4酒精灯4.5 营养肉汤/TSB、酒精4.6夹子,镊子,剪刀,记号笔,试管架。
5、操作步骤5.1自含式BI的无菌试验5.1.1灭菌循环结束后,2小时之内将PCDS（BI）取出并进行无菌试验(若不能马上进行无菌试验,需将BI 放入冰箱中冷藏,但必须在48小时之内进行无菌试验).5.1.2打开PCDS(BI)包装袋,取出里面的BI,保持BI竖直且塑料盖朝上,然后用夹子住塑料管,轻轻用力,使塑料管内的安瓿破裂,使安瓿内的培养基与塑料管内的载体接触,接着用手指轻轻弹塑料管,使培养基与载体充分浸润。
5.1.3将上述BI竖直放到35±2℃(或根据产品说明书的培养条件)的培养箱中培养48小时,每24小时观察并记录培养结果。
5.2片状BI的无菌试验5.2.1灭菌循环结束后,2小时之内将PCDS（BI）取出并进行无菌试验(若不能马上进行无菌试验,需将BI 放入冰箱中冷藏,但必须在48小时之内进行无菌试验)。
5.2.2将PCDS（BI）取出后，将外包装纸塑袋和培养基放到传递窗中,用消毒液喷在袋子上进行紫外灯消毒30分钟。
5.2.3消毒30分钟后将BI和培养基转入超净工作台，培养基试管用记号笔编号,所编的号与BI外包装带上的编号需一致。
5.2.4打开外包装袋,取出里面的BI,撕开BI内层包装,将菌片直接投放入装有10mL无菌的TSB的试管中,将试管盖及口子在酒精火焰上消毒后盖上。
药品无菌检查(薄膜过滤法)能力验证结果与分析
备供试品溶液，进样测定，测得样品中芍药苷的平均含量为１ ９８ｍｇ·ｇ－１，计算其ＲＳＤ为０ ５６％。
２ ５ 加样回收率２ ５ １ 对照品溶液配制：取芍药苷对照品１５ ２６ｍｇ，精密称定，置２５ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为芍药苷加样母液（Ａ）。
２ ５ ２ 样品溶液的制备：取９个１００ｍＬ具塞锥形瓶，标记瓶号１～９，分别准确移取１ ０ｍＬ（Ａ）加入到１～３号瓶，准确移取２ ０ｍＬ（Ａ）加入到４～６号瓶，准确移取３ｍＬ（Ａ）加入到７～９号瓶，将１～９号瓶吹干，分别取约０ ６ｇ的样品加入１～９号瓶，按１ ２ ３精密称定之后操作。
表２ 加样回收试验结果 （ｎ＝９）项目芍药苷回收量（ｍｇ）芍药苷实际加入量（ｍｇ）回收率（％）平均回收率（％）ＲＳＤ（％）加样回收０ ５倍 １０ ５７５０ ５８０９９ ０８加样回收０ ５倍 ２０ ５８４０ ５８０１００ ５４加样回收０ ５倍 ３０ ５７５０ ５８０９８ ９８加样回收１倍 １１ １５４１ １６１９９ ３８加样回收１倍 ２１ １６２１ １６１１００ ０６９９ ３８０ ７１加样回收１倍 ３１ １４９１ １６１９８ ９４加样回收１ ５倍 １１ ７４１１ ７４１９９ ９６加样回收１ ５倍 ２１ ７２９１ ７４１９９ ２８加样回收１ ５倍 ３１ ７１０１ ７４１９８ １９２ ６ 稳定性试验 在“１ ２ １”项色谱条件下，精密吸取供试品溶液５μＬ，注入液相色谱仪，分别于０、２、４、６、８、１２、１６ｈ测定，求得芍药苷峰面积的ＲＳＤ值为０ ２４％。
结果表明，供试品溶液在１６ｈ内稳定。
２ ８ 耐用性实验 考察不同色谱柱、柱温、流速对测定方法的影响，芍药苷平均含量为２ ００ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ为０ ８２％。
２ ９ 十批次疏风愈痛丸含量测定结果 测定十个批次疏风愈痛丸中芍药苷含量，测得平均含量为２ ００ｍｇ·ｇ－１，下浮２０％，将芍药苷的限度定为每１ｇ不少于１ ６０ｍｇ，列入含量测定项正文。
手术无菌术作业指导书
手术无菌术包括：外科手消毒，穿、脱手术衣法，戴、脱无菌手套法，铺无菌桌法等；
手术无菌术目的：1、避免污染手术无菌区域和物品。
2、预防手术感染。
1、外科手消毒
操作流程、质量标准及分值
标准分
姓名
准备
人员：着手术专用衣裤（1），必要的防护装备（1），
戴口罩（1），手术帽且头发不可外露（1），去掉
8
用物：有效期内的无菌手术衣（4），无污染（3）
7
操作流程
1、穿手术衣：
（1）穿衣动作符合流程（16）
（2）面向无菌区，保持一定距离（﹥20cm）（6）
（3）手术衣不触及地面、周围的人或物（6）
（4）未戴无菌手套时，手不可触及手术衣外面（6）
（5）穿好手术衣，双手握拳放于胸前（6）
40
2、脱手术衣
（1）方法正确（15）
（2）器械桌无菌面的形成需要无菌单下垂桌缘至少30cm以上
（3）。
（3）撕下的标签只能贴于双层车下层（3）。
（4）器械包的标签不能丢（3）
（5）洗手护士与巡回护士交接一次性物品时，禁止跨越
无菌区（3）
（6）无菌桌原则上为现用现备，如果特殊情况准备后，不能立
即使用，必须覆盖，4h之内必须使用（3）。
（7）向无菌包内放置无菌物品时，使用干罐无菌持物钳，有效
5
2、操作有序，动作熟练
5
理论提问
5
总分
100
签名
4、铺无菌桌法
操作流程、质量标准及分值
标准分
姓名
准备
人员：操作者衣、帽、口罩整洁（3），着装规范（3）。
6
用物：根据手术需要准备的无菌包（6）
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程标题：无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物实验和培养的重要场所，严格的操作规程能够确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍无菌实验室操作规程，帮助实验人员正确操作，避免污染和误操作。
一、实验室准备1.1 确保实验室环境无菌：实验室内应经常进行消毒，保持空气清洁，避免微生物污染。
1.2 准备实验材料：提前准备好所需的培养基、试剂和器具，确保其无菌。
1.3 检查设备状态：检查培养箱、平台振荡器等设备是否正常运转，确保实验顺利进行。
二、个人操作规范2.1 穿戴实验服和手套：进入实验室前需穿戴干净的实验服和手套，避免外部微生物污染。
2.2 洗手消毒：进入实验室后，及时洗手并进行消毒，避免手部细菌污染实验物品。
2.3 避免交叉污染：每次操作前应更换手套，避免不同实验之间的交叉污染。
三、培养基制备3.1 精确称量：按照配方准确称量培养基成分，确保培养基质量准确。
3.2 消毒处理：将配制好的培养基装入试管或培养皿中，进行高温高压消毒处理，杀灭其中的微生物。
3.3 冷却保存：待培养基冷却后，放置在无菌条件下保存，避免污染。
四、微生物接种4.1 操作迅速：在无菌条件下，迅速将微生物接种到培养基上，避免空气中的细菌污染。
4.2 合理布局：将接种好的培养皿放置在培养箱中，合理布局，避免交叉污染。
4.3 注意观察：定期观察培养皿内微生物的生长情况，及时调整培养条件。
五、实验室清洁5.1 定期消毒：实验室设备和台面等应定期进行消毒，避免细菌滋生。
5.2 清洁整理：实验结束后，及时清洁实验台面和设备，保持整洁。
5.3 废弃物处理：实验后的培养皿、试管等废弃物应按规定进行处理，避免细菌外泄。
结论：无菌实验室操作规程对实验结果的准确性和可靠性起着至关重要的作用，实验人员应严格按照规程操作，确保实验过程的无菌性和准确性。
无菌技术操作流程样本
无菌技术操作流程样本1.准备工作在开始进行无菌技术操作之前，需要保持整个操作区域的洁净。
必须彻底清洗并消毒所有的工作台面、试管架和工具，并准备所需的材料和试剂。
2.穿戴个人防护装备在进行无菌技术操作时，必须戴上适当的个人防护装备，包括实验服、手套、眼镜和口罩。
这可以防止个人细菌和其他微生物的传播。
3.消毒试管将要使用的试管放入无菌培养皿中，使用70%乙醇或其他合适的消毒剂将试管完全浸泡。
然后取出试管并在火焰中加热到红热状态，直到酒精完全燃烧殆尽。
让试管冷却后即可使用。
4.制备无菌培养基根据需要，准备适当的无菌培养基。
将培养基倒入试管中，并放入高压蒸汽锅或高温高压灭菌器中进行灭菌。
确保培养基完全无菌。
5.点火燃烧灯具将点火器点燃，并将焰火焰放在工作台或试验室内所需的位置。
确保火焰的稳定性和安全性。
6.消毒工作区域将试验台面擦洗干净，并用70%乙醇或其他消毒剂轻轻擦拭。
确保没有任何细菌存在。
7.穿戴手套在进行无菌技术操作之前，务必戴上无菌手套，以保持操作区域的洁净。
8.点火灼烧被灭菌工具将需要使用的工具，如镊子、培养皿和吸管，在火焰中进行灼烧，以杀灭上面的细菌。
9.开启试管盖使用无菌镊子或其他工具，轻轻开启试管盖。
注意不要接触到试管盖内部。
10.装填培养基用无菌吸管取出培养基，并轻轻滴入试管中。
确保培养基不触碰到外部地面或其他非无菌物质。
11.关闭试管盖将试管盖重新放回试管上，并确保盖子完全关闭。
确保试管内外环境的隔离。
12.出口火焰将试管盖和试管的出口部分经过火焰烘烤，以确保没有任何微生物存在。
13.清洁无菌区域在完成无菌技术操作后，必须清洁并消毒整个操作区域，以避免任何污染和细菌传播的风险。
无菌线产品 CIP、SIP作业指导书
无菌线产品CIP、SIP作业指导书1.目的规定CIP、SIP操作程序，确保设备的清洗消毒达到理想效果。
2.适用范围适用于公司无菌线的UHT、无菌罐、无菌水供应系统、灌注系统和液氮供应系统在酸性饮料、中性饮料生产时的CIP、SIP清洗消毒要求。
3.职责3.1 生产部灌注操作员负责CIP 清洗液的配制和CIP、SIP的操作。
3.2 糖房操作员负责对无菌罐清洗液浓度的检测、无菌罐CIP过程监控及CIP清洗效果检查。
3.3 在线品控员负责对生产线清洗液浓度的检测、生产线CIP过程监控、CIP 清洗效果检查和SIP过程的监控。
3.4 QA经理对此文件的有效性负责。
4.定义无5.CIP 清洗步骤5.1 三步热碱清洗消毒程序5.1.1处理水冲净缸和管道残余饮料；5.1.2用浓度为 1.5%-3.0%、75℃以上的碱液循环至少 20 分钟；（GEA UHT2.0-3.0%≥75℃30分钟；water UHT、Filler、无菌罐 1.5-2.5% ≥75℃ 30 分钟）；5.1.3处理水冲洗至无碱液残留。
备注：连续生产时间超过 84 小时，GEA UHT 需增加 30 分钟的 85℃热水洗。
5.2 五步碱酸清洗消毒程序5.2.1处理水冲净缸和管道残余饮料；5.2.2用浓度为 1.5%-3.0%、75℃以上的碱液循环至少 20 分钟；（GEA UHT2.0-3.0%≥80℃ 30 分钟；water UHT、Filler、无菌罐 1.5-2.5% ≥75℃ 30 分钟）；5.2.3处理水冲洗至无碱液残留；5.2.4用浓度为 0.5%-3.0%、35℃以上的酸液循环至少 10 分钟；（GEA UHT1.0-3.0% ≥65℃30 分钟，water UHT、Filler 0.5-1.0% ≥65℃ 10 分钟，无菌罐 1.0-2.0% ≥65℃ 30分钟）；5.2.5处理水冲洗至无酸液残留。
备注：连续生产时间超过 84 小时，GEA UHT 需增加 30 分钟的 85℃热水洗。
产品初始污染菌检测作业指导书
作业指导书编号No.版本页次第 1 页共4 页文件名称产品初始污染菌检测编制/修订日期审核日期批准日期生效日期文件履历表时间版本编写/修订人员内容页次第 2 页共4 页文件名称产品初始污染菌检测生效日期：检测依据:ISO11737-1:2018医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定Normative Reference: ISO11737-1 2018 Sterilization of medical devices —Microbiological methods —Part 1: Determination of a population of microorganisms on products1仪器设备微生物限度检查仪、无菌滤杯（容积125ml，已安装0.45um无菌微孔滤膜）、500ml或1000ml三角瓶，无菌胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板、无菌沙氏琼脂（SAB）平板、恒温培养箱2采样方法2.1抽取灭菌前包装封口后的样品，按照随机抽样的原则，随机抽取要求的数量，抽样后标识样品的抽取时间。
2.2正常生产的产品，每个产品族每周抽样一次（可在净化区环境检测的同时抽样），抽取3 PCS样品作为平行样。
具体产品族的划分及抽样规则见下表。
产品族名称族产品清单生产区间代表产品测试样品备注硅胶产品硅胶导尿管一次性硅胶导尿管18FR整个样品按照产品的生产环境、生产工艺将产品划分为不同的产品族。
抽取族内生产量比较大，代表性强的产品，测试其初始污染菌。
硅胶喉罩一次性硅胶喉罩4#插管产品普通气管插管普通气管插管ID7.5 整个样品带吸痰腔气管插管加强型气管插管双腔支气管插管带导丝气管插管带导丝加强型气管插管气管切开插管2.3新产品在首次生产时，抽取10 PCS（若有多个规格，按照最大规格3 PCS，最小规格3PCS，中间规格4 PCS 的原则抽取）按照5测试初始污染菌和校正因子。
2.4其它的测试需要，按照预订的测试方案抽取样品。
医疗器械产品无菌检验操作规程
医疗器械产品无菌检验操作规程一、目的：为了保证医疗器械产品的无菌性，减少感染的风险，确保器械在使用前不会对患者产生任何不良影响。
二、适用范围：适用于医疗器械产品的无菌检验操作。
三、设备与工具：1.灭菌器：包括高压蒸汽灭菌器和乙烯氧化物灭菌器。
2.无菌室：应具备无菌室必备的设备，如无菌工作台、超净台和灭菌器等。
3.操作工具：包括手套、无菌棉签、无菌剪刀、无菌镊子等。
四、检验步骤：1.准备工作：(2)检查设备与工具的正常工作状态，如灭菌器是否正常运行，无菌室的洁净程度等。
(3)检查器械包装是否完好无损，无破损、打开或湿润的情况。
2.环境准备：(1)打开无菌室，确保无菌室内外的卫生环境。
(2)将要检验的医疗器械产品放置在无菌工作台上，避免与非无菌物品接触。
3.无菌检验操作：(1)佩戴手套并将其消毒，确保双手干净。
(2)打开器械包装，注意保持包装内物品的无菌性。
(3)使用无菌棉签、无菌剪刀或无菌镊子等工具检查器械的外观，如有任何异常，应及时记录并报告。
(4)若器械需要使用前进行灭菌处理，则将其放入灭菌器中进行灭菌，按照灭菌器的操作规程进行处理。
(5)灭菌完成后，将器械取出并放置在无菌工作台上，等待其冷却。
(6)冷却后，使用无菌棉签或其他无菌工具进行取样，采样点应包括器械的各个部位。
(7)采样完成后，将无菌棉签放置在含有营养物质的培养基中，进行菌落培养。
(8)培养基培养一定时间后，观察培养基上是否有菌落生长，如有则说明器械不符合无菌要求。
5.清洁与记录：(1)清洁无菌工作台和使用的工具，保持无菌室的清洁。
(2)进行记录，包括器械的名称、批号、灭菌方式、采样结果等。
六、注意事项：1.操作者应注意个人的清洁和卫生，保证双手清洁且戴好手套。
3.在操作过程中，应尽量避免对器械进行过多的接触，以免造成污染。
4.检查无菌室的洁净程度并及时清理，保持其无菌环境。
七、附录：无菌检验操作记录表器械名称：批号：灭菌方式：采样结果：日期：时间：。
无菌检查作业指导书
无菌检查作业指导书1、目的：通过无菌检验建立起产品无菌的直接数据，以评估灭菌效果是否符合要求。
2、适用范围：适用于所有经过灭菌后的产品的检查。
3、作业条件：3．1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。
3．2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。
4、作业方法与步骤4．1制作或选择培养基（参见《培养基制作作业指导书》）4．1．1好氧——厌氧菌检测时用硫乙醇酸盐按一定比例制作；4．1．2真菌检测时用改良马丁培养基按一定比例制作。
4．1．3培养基需按要求培养16-18H后，检查无菌生长方可使用。
4．2制作阳性对照4．2．1好氧——厌氧菌检测时用枯草芽孢杆菌制作；4．2．2真菌检测时用自然界分离的霉菌制作。
4．2．3取对照用菌一环用0.9%无菌生理盐水按1:1000 稀释，制成对照供试液。
4．2．4取1ml对照供试液加入到一个装有15ml培养基试管中，作成阳性对照管，进行培养。
4．3制作产品供试液4．3．1取待测试产品1~2PCS，根据产品物性的大小，分别采用直接浸入法或棉拭子擦洗法或冲洗法收集洗脱液，装在相应的容器中。
4．4制作培养用试管4．4．1取1ml产品供试液，加入到装好10~15ml培养基的试管中，按同样的方法共制作十个试管进行培养；4．5培养与判定4．5．1将上述两种制备完成的试管放在恒温箱中进行培养。
4．5．2需气菌、厌气菌培养温度30～35℃、真菌培养温度20～25℃，培养14日。
4．5．3在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
阳性对照管在24小时内应有菌生长，否则为本检测无效；4．5．4经过培养后，若出现浑浊，可以外观判断有明显长菌的可以判定有菌，若不能明显判定的，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液涂片，染色，用显微镜观察是否有菌。
4．6将整个过程进行记录并形成报表。
无菌作业指导书(新)
作业指导书无菌试验操作细则编号- -2006版本号第一版生效日期起草审核批准一范围：适用于本规程规定的医疗用品的无菌试验方法。
无菌检查法系用于检查要求无菌的医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。
二依据：GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法。
第二部份：生物试验方法。
中华人民共和国药典2005年版二部三器具及试剂3.1.器材3.1.1 仪器超净工作台光学显微镜恒温培养箱生化培养箱压力蒸汽灭菌器3.1.2 用具试管注射器量筒三角烧瓶锥形瓶移液管灭菌刻度吸管（1ml）灭菌平皿（9cm）酒精灯75℅乙醇棉灭菌的剪刀和镊子精密PH试纸灭菌袋或牛皮纸3.2培养基及制备方法硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养; 改良马丁培养基置20～25℃培养。
培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境。
培养基若保存于非密闭容器中，应在三周内使用；若保存于密闭容器中，可在一年内使用。
A).硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养需气菌、厌气菌）酪胨(胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g 葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸0.5g 新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml 硫乙醇酸钠0.5g 琼脂0.5～0.7g (或硫乙醇酸0.3ml) 蒸馏水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入蒸馏水中混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
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无菌检查操作指导书1.0目的建立无菌检查标准操作规程，规范无菌检查操作过程，确保检查结果的准确性。
2.0适用范围适用于公司无菌检查操作过程。
3.0职责相关操作人员负责本规程的具体实施，质检部负责对本规程的实施过程进行监督。
4.0 作业内容4.1培养基的制备及培养条件培养基可按以下给出的处方制备，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光环境下，三周内使用。
4.1.1硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养。
配方如下：除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH,使灭菌后在25℃的pH值为7.1土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不释过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜35℃培养。
4.1.2胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
配方如下：除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基置20〜25℃培养。
4.1.3胰酪大豆胨琼脂培养基配制方法如下：除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2，加人琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。
4.1.4沙氏葡萄糖琼脂培养基用于黑曲霉的培养。
培养如下：除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6士0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。
4.2培养基的无菌性检查每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。
4.3培养基的灵敏度检查4.3.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ) 〔CMCC(B)10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)〔CMCC(B)63 501〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger)〔CMCC(F)98 003〕4.3.2菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养24〜48小时，上述培养物用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，加入3〜5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0. 05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8°C可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2〜8°C，在验证过的贮存期内使用。
4.3.2培养基的接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于1 00cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。
逐日观察结果。
4.3.3 结果判定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
4.4方法适应性试验4.4.1菌种及菌液制备除大肠埃希菌（Escherichia coli) （CMCC(B)44 102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌株及菌液制备同培养基灵敏度检查。
大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。
4.4.2膜过滤法取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。
加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。
另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。
置规定温度培养，培养时间不得超过5天，各试验菌同法操作。
4.4.3直接接种法取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙酵酸盐流体培养基6管，分别接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体培养基6管，分别接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。
其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1管作为对照，置规定的温度培养，培养时间不得超过5天。
4.4.4结果判断与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检査方法和检查条件进行供试品的无菌检查。
如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。
方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行。
4.5供试品的无菌检查无菌检査法包括薄膜过滤法和直接接种法。
只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。
供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。
无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
4.5.1阳性对照应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。
阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于1 00cfu，供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。
阳性对照管培养72小时内应生长良好。
4.5.2阴性对照供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照。
阴性对照不得有菌生长。
供试品处理及接种培养基操作时，用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒，如果供试品容器内有一定的真空度，可用适宜的无菌器材(如带有除菌过滤器的针头）向容器内导人无菌空气，再按无菌操作启开容器取出内容物。
4.5.3薄膜过滤法薄膜过滤法一般应采用封闭式薄膜过滤器。
无菌检査用的滤膜孔径应不大于0. 45μm，直径约为50mm。
根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。
使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。
水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤，以润湿滤膜。
油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。
为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。
供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，且总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。
4.5.3.1水溶性供试品的制备取规定量，直接过滤，或混合至含不少于100ml适宜稀释液的无菌容器中，混匀，立即过滤。
如供试品具有抑菌作用，须用冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数一般不少于三次，所用的冲洗量、冲洗方法同方法适用性试验。
除生物制品外，一般样品冲洗后，1份滤器中加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，1份滤器中加入100ml胰酪大豆胨液体培养基。
生物制品样品冲洗后，2 份滤器中加入100 ml硫乙醇酸盐流体培养基，1份滤器中加人100ml胰酪大豆胨液体培养基。
4.5.3.2水溶性固体供试品的制备取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签说明复溶，然后照水溶液供试品项下的方法操作。
4.5.4直接接种法直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检査的供试品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。
除生物制品外，一般样品无菌检查时两种培养基接种的瓶或支数相等；生物制品无菌检査时硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基接种的瓶或支数为2：1。
除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，胰酪大豆胨液体培养基每管装量不少于10ml。
供试品检査时，培养基的用量和髙度同方法适用性试验。
4.5.4.1固体供试品的制备取规定量，直接等量接种至各管培养基中。
或加入适宜的溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取规定童等量接种至各管培养基中。
4.5.5培养及观察将上述接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天；接种生物制品供试品的硫乙醇酸盐流体培养基的容器应分成两等份，一份置30〜35℃培养，一份置20〜25℃培养。
培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。
4.5.6结果判断阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。
否则，试验无效。
若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。
当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效：(1)无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。
(2)回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。
(3)供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或)无菌操作技术不当引起的。