甘油含量测定

嗯。你都问到这个问题了，具体仪器、操作什么的我就不说了。就说一下思路。

强碱条件下甘油和二价铜的络合物显绛蓝色，所以利用甘油的这个特性就可以轻松搞定。

主要试剂是AR级的甘油、氢氧化钠、硫酸铜。

向氢氧化钠碱化的甘油溶液里加硫酸铜，一定要保证甘油被完全络合，并且保证多余的二价铜都以氢氧化铜沉淀形式存在，但是氢氧化钠也不要加太多。

甘油铜可见区最大吸收波长是在630nm。

先作个标准系列，绘出吸光度-浓度曲线，然后把待测试样吸光度测出来在标准曲线上一算，浓度就得到了。

氢氧化铜解离出来的铜离子在630nm处也有吸收，好在它是一个定值，测出来后从每个甘油的A里面扣掉就行了。

甘油含量化学方法有很多，比色法，滴定法．甘油在强碱性条件下，与Cu2+定量形成绛蓝色的甘油铜溶液。根据朗伯-比尔定律，溶液吸光度A与吸光物质浓度C成正比：A=kC。甘油配制浓度C1与衍生的分析甘油铜浓度C有如下关系：C=k1C1，k1为稀释系数，则吸光度值与甘油配制浓度有如下正比关系：

A=kk1C1+ε，k、k1为常数，ε为系统误差。

先根据吸光度与甘油配制浓度C1做出关系曲线:，然后确定最佳线性拟合范围，最终得出拟合线性方程，程序化后，用于甘油含量的快速测定。

[供应] 拜发甘油检测试剂盒

发布日期：2010-9-21

截止日期：2009-5-9

拜发甘油检测试剂盒

（酶学试剂盒）

订货号： 10148270035

产品名称：甘油（Glycerol ）

产品英文名称： Glycerol

包装： Ca.3 x 11 tests

产品介绍：如下

产品说明： Glycerol （用于检测食品中的甘油）

酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）

RIDASCREEN（产品编号：0 414 433）30次检测

1. 简介

酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）此法适用于检测食品（啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒）、化妆品、药品（溶液、栓剂）、纸板、烟草及生物制品中的甘油。

2. 原理

甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化为3-磷酸甘油酯，ATP转化为ADP；反应式为

GK

Glycerol﹢ATP L-glycerol-3-phosphate﹢ADP

上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可与PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯；反应式为

PK

ADP﹢PEP ATP﹢Pyruvate

丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯，NADH被氧化为NAD；反应式为

L-LDH

Pyruvate﹢NADH﹢H﹢L-lactate﹢NAD﹢

被氧化的NADH的量取决于甘油的量，NADH的吸光度值可在334，340及365nm下测量。

3. 试剂盒内容物

－－－－瓶1共有3瓶，每瓶约有2g辅酶及缓冲液的混和物，包括：甘氨酰甘氨酸缓冲液，PH约7. 4；NADH约7mg；ATP约22mg；PEP-CHA约11mg；硫酸镁

－－－－瓶2约0.4ml悬浮物，包括：

丙酮酸激酶，约240U；L-乳酸酯脱氢酶，约220U

－－－－瓶3约0.4ml甘油激酶悬浮物，约34U

－－－－瓶4为甘油检测对照溶液（甘油检测对照溶液可不需要计算结果），此溶液使用时不需稀释。（效期见标签）

4. 检测溶液的制备（10次）

－－－－取出1瓶瓶1，用11ml重蒸水溶解，使用时此溶液需在20-25℃持续回温约10分钟

－－－－瓶2不需稀释

－－－－瓶3不需稀释

5. 操作者应该注意之事项

使用前请仔细阅读，中文翻译件仅供参考

－－－－瓶1约含500mg碳酸钠，应避免接触皮肤和呼吸器官，其他用于甘油检测的试剂不具有危险性－－－－实验之后，用过的试剂可作为实验室废料处理，但必须在当地法规允许的前提下

6. 储存条件

－－－－瓶1在2-8℃下保存（见标签），溶液1在2-8℃下可保存4天，溶液1使用前需回温至20-25℃

－－－－瓶2及3在2-8℃下保存（见标签）

7. 样品处理

－－－－直接取用无色，透明，中性的溶液或按稀释表格稀释后进行检测，体积为2.000ml

－－－－过滤混浊溶液

－－－－除去样品溶液中的二氧化碳气体

－－－－加入氢氧化钠或氢氧化钾来调节酸溶液的PH值约为8

－－－－对于深颜色的样品溶液可不需稀释或者用PVPP或酰胺配成较高浓度的溶液如：1g/100ml

－－－－粉碎或均质固体和半固体样品，用水抽提或溶解，而后过滤，通过Carrez澄清液可脱去其中的混浊物或色素

－－－－用Carrez试剂可脱去样品中的蛋白质

－－－－用热水抽提样品中的脂肪（抽提温度需在脂肪的溶解度之上），冷却后可分离出脂肪，将余下物质转移至容量瓶中并加水至刻度，冰浴15分钟而后过滤，热水抽提后用Carrez溶液澄清

8. 过程

1. 波长：340nm，Hg365nm或Hg334nm

2. 比色杯：光径1.0cm

3. 温度：20-25℃

4. 最终体积：3.020ml

5. 对照空气（光路上无比色杯）或对照水读取读数

6. 样品溶液：1-40ug甘油/检测（体积为0.100-2.000ml样品体积）

7. 具体操作见如下表格

移液空白（ml）样品（ml）

溶液1

样品溶液

重蒸水

悬浮物2 1.000

-

2.000

0.010 1.000

0.100

1.900

0.010

混和，直至前反应完全反应后，约5-7分钟，读取吸光度值A1，而后加入下列物质：

悬浮物3 0.010 0.010

混和，等反应进行完全后（约5-10分钟），立即读取样品和空白的吸光度值A2

如果在15分钟后反应尚未停止，则在2分钟的间隔内继续读取读数，直至此值不再变化。

分别测样品与空白的吸光度值差，而后用样品吸光度值差减去空白吸光度值差可以得到如下公式

△A=（A1 ―A2）Sample―（A1 ―A2）blank

若想得到一个足够精确的结果，则测得的吸光度的单位至少为0.100单位。

如果吸光度值差△A在334及340nm下测得的值高于1.000或在365nm下测得的值高于0.500，如此则表