微生物的计数与活性污泥中生物相的观察

微生物的计数与活性污泥中生物相的观察

一、实验原理

利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计方法。此法的优点是直观、快速。此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。由于计数室的容积是一定的（0.1mm3），当含有细菌的溶液滴在槽里时，通过水的表面张力扩散到计数室里，细菌也被分散到不同的格里，通过计算不同的格里的细菌数，最后就可以计算出，溶液里所含的细菌数量。

活性污泥中的生物相比较好照样，以细菌和原生动物为主，还有真菌、后生动物等。在正常的成熟污泥中，细菌大多集中于菌胶团絮绒体中，游离细菌较少，此时，污泥絮绒体可具有一定状、稠密、扩光率强、沉强性能好。

原生动物常作为污水净化指标；当固着型纤毛虫占优势时，一般认为污水处理池运转失常；当后生动物轮虫等大量出现时，意味着污泥极度衰老。所以可以通过观察原生动物，来评价活性污泥的状况，而且原生动物也较微生物要大，容易观察。

二、实验器材

活性污泥样品、菌种：浓缩酵母菌液

仪器：显微镜、血球计数板、盖玻片

三、实验步骤

1.检查与清洗血球计数板：在正式计数之前，如果沾有杂质或菌体要用95%

乙醇轻轻擦洗计数板的计数室，然后蒸馏水彻底清洗血球计数板，放在

显微镜下观察，调整好显微镜找到计数板刻度，检查有没有损坏。

2.加样：先将盖玻片放在计数室上，用吸管滴一滴已稀释好的菌液于盖玻

片边缘即是旁边的板槽里，让菌液自行渗入，多余的菌液用滤纸吸去；

稍等片刻，待酵母细胞全部沉降到计数室底部，再进行计数。

3.计数：先在低倍镜下找到计数板的大格位置，然后将其移到视野中间，

然后转到高倍镜，适当调节光亮度，不能太亮，也不能太暗，然后将计

数室要计数的格子移到视野中进行计数。可以先用手机拍下，在手机里

进行点数，另一个人就可以继续移动计数板到另一计数区域，这样就可

以更快、更轻松地完成计数。

4. 计数:本实验用的是25*16型的计数板，所以应该要选择左上，右上，左下，右下，中间五个中格计数，如果有菌体落在双线上时，只计算一边，对应的另一边不算，对每个样品重复计数3次，取其平均值，按下列公式计算每毫升菌液中所含酵母菌的细胞数。

稀释倍数1000040080

小格内酵母菌细胞数80酵母菌的细胞数⨯⨯⨯= 5. 活性污泥的观察：将载玻片与盖玻片清洗干净，然后擦干。直接用吸管吸取少量的活性污泥，滴一滴到载玻片中央，然后轻轻将盖玻片盖下，削除气泡，多余的水用纸吸干，要尽量将污泥散开，形成薄薄的一层，这样才有利用观察。转到40倍的物镜，调整好亮度后即可以观察。

四、 实验结果

酵母菌细胞数的测定

原生动物的形态特征

线虫

红头飘体虫 轮虫 水雄虫

五、 思考题

1.说明用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？

误差主要来自于：

原溶液误差：稀释倍数：稀释的大致范围是每个中格中的细菌数10~50个是比较理想的情况！如果太多，细菌可能会重叠，相互之间有影响；浓度太低，则容易受到其他因素的干扰。

仪器误差：计数板是否清洁干燥，计数板、盖玻片、微量吸管及刻度吸管的规格应符合要求或经过校正，计数法最后的计数都是按照原定的板数据，再加上菌数来计算的，如果仪器本身出现问题而不准确会造成很大的误差。

操作误差：在滴溶液时操作不规范，溶液量滴得过多或过少都会对渗透的菌数造成影响的，个人经验所得滴两滴是最适合的，如果滴一滴则溶液太少了，连槽都还没填满，不容易扩散到计数室里。一定不能多加，否则计数室内溶液量肯定会超过计数所限制的0.1mm 3，每个小格里都有可能出现上下层的细菌数，若出现部分细菌看不清，无论怎么调都总有一部分细菌看清，则证明所加的量已经超标了，出现了分层，此时应该清洗计数板，重新加液。

2.试述血球计数板的计数原理。为什么用两种不同规格的计数板计数同一样钟虫 聚缩虫 斜管虫 变形虫

独缩虫 累枝虫

品，结果是一样的？

血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3。在血球计数板上，一个大格分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。

16×25型：大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；

25×16型：大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。

但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。所以每个小格的面积都是1/400 mm2 16×25型的计数板：取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数，依下列公式计算：

酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数

25×16型的计数板：计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数，依下列公式计算：

酵母细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/80 ×400×10000×稀释倍数

由公式可以知，实质计的是平均到每个小格的细菌数，而两种型号的小格面积都是一样的，所以计算出来的结果，排除掉误差因素，理念上应该是一样的

3.根据实验观察结果，试对活性污泥的质量及运行情况作初步评介。

实验观察到，活性污泥中出现了大量的飘体虫，中量的轮虫、累枝虫、独缩虫和聚缩虫，还有少量钟虫、雄虫、线虫、变形虫和斜管虫。

出现轮虫代表污泥处理效果好，但如果大量出现则表明污泥已经极度衰老，出现污泥鼓胀。

大量的飘体虫，中量的轮虫、独缩虫和聚缩虫的出现都表明流动性污泥质量好，运行情况和出水效果好。

4.请说说平板菌落计数法和比浊法的实验原理和实验步骤。