茚三酮比色法测定谷氨酸含量的研究
氨基酸含量测定和标准曲线制作(茚三酮法)
茚三酮比色法测定游离氨基酸含量原理：茚三酮与氨基酸的反应分两步进行，首先是氨基酸被氧化，产生二氧化碳､氨和醛，而水合茚三酮被还原成还原性茚三酮；第二步是所生成的还原性茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成成为蓝紫色化合物，该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比｡磷酸缓冲液（pH.8.04）：称磷酸二氢钾4.5350 g，定容500 ml。
称NAH2PO4·12H2O11.9380 g分别溶解定容500 ml。
取磷酸二氢钾10 ml与磷酸氢二钠190ml混合即为pH8.04的缓冲液2％茚三酮溶液：称取水合茚三酮 2 g，加水溶解后定容至 100 mL。
储成于棕色瓶中，避光保存。
0.25%抗坏血酸溶液：称取抗坏血酸 0.1 g，加水溶解后定容至 100 mL，现配现用，或者密封，冻存于-20 o C。
茚三酮反应液：取50 ml 2% 茚三酮，加入5 ml 0.25%的Vc，使用蒸馏水稀释到100 ml，密封储存在棕色瓶中。
亮氨酸标准液:称取 100 mg 亮氨酸（纯度不低于 99%）溶于 100 mL 水中，作为母液，此时亮氨酸的浓度为1 mg/mL。
茚三酮标准曲线制作溶液中氨基酸的浓度如果低于20 μg/ml，茚三酮显色反应将不能发生，故先配制不同浓度的氨基酸标准液，取十支试管，标号为1，2，3……10，按照下表配制1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1000 μg/ml亮氨酸超纯水 ml 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9 8.9 8.8 8.7 8.6 8.5 亮氨酸 终浓度μg/ml 405060708090100110120130140150使用螺旋盖（内垫）试管分别取上述浓度的氨基酸标准液1ml，空白对照使用1ml 超纯水替代氨基酸标准液，然后向各个试管中加入0.5 ml 的茚三酮反应液和0.5 ml 的磷酸缓冲液，盖好盖子悬紧，置于沸水浴中煮沸15 min，分别加入3 ml 的超纯水，斡旋混匀，测定吸光度，绘制标准曲线取一支中等程度显色的试管进行紫外和可见波段的全波长扫描，结果如下图所示3004005006007008000.00.10.20.30.40.50.60.7吸光度波长（nm ）403 nm565 nm选择565 nm 作为其最大吸收波长，测定各管的吸光度，弃去吸光度大于1的值 茚三酮终浓度（μg/mL） 565 nm 的吸光度 20 0.037 25 0.114 30 0.226 35 0.347 40 0.412 45 0.538 500.62155 0.692 60 0.754 65 0.834 700.968使用origin 8.5 绘制散点图并进行线性拟合，结果如下图所示0.00.20.40.60.81.0O D 565氨基酸浓度（μg/mL ）注意事项：1. 茚三酮比色受测定环境中的pH 影响很大，故每次测定前需要将样品溶液的pH 值调整到中性（pH7左右），2. 茚三酮不光可以与氨基酸反应，与蛋白质同样可以反应，因此需要在测定前去除溶液中的蛋白质，因此正确做法是：向样品溶液中加入等体积等0.6 mol/L 三氯乙酸，斡旋震荡，静置10 min 后，3000 rpm 离心10 min，取上清调整pH 值至中性pH7左右，再进行测定，3. 稀释倍数的确定：因为标准曲线的测定范围为20-70 μg/mL，即20-70 mg/L，所以在不清楚你所要检测样品中氨基酸的浓度时，最好取部分样品稀释10倍和100倍，分别检测原液、十倍稀释液和100倍稀释液的OD565，发现哪个水平下OD565落在标准曲线的范围内，从而判断需要对样品稀释多少倍4. 标准曲线测定时最好选择密封性较好的试管（螺旋盖硅胶内垫），同时需要检查气密性，防止水浴蒸发导致计量误差或者使用10 mL 具塞比色管，以方便在水浴之后可以准确补水。
茚三酮比色测定氨基酸含量
茚三酮比色测定氨基酸含量1）原理氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用，生成蓝紫色化合物（除脯氨酸外均有此反应），可用吸光光度法测定。
该蓝紫色化合物的颜色深浅与氨基酸含量成正比，其最大吸收波长为570nm，故据此可以测定样品中氨基酸含量。
2）试剂①1.2%茚三酮溶液：称取茚三酮1g于盛有35mL热水的烧杯中使其溶解，加入40mg氯化亚锡（SnCl2▪H2O），搅拌过滤（作防腐剂）。
滤液置冷暗处过夜，加水至50mL，摇匀备用。
②pH8.04磷酸缓冲液：Ⅰ、准确称取磷酸二氢钾（KH2PO4）4.5350g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀备用。
Ⅱ、准确称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.9380g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500mL容量瓶中，用水稀释到标线，摇匀备用。
Ⅲ、取上述配好的磷酸二氢钾溶液10.0mL与190mL磷酸氢二钠溶液混合均匀即为pH8.04的磷酸缓冲溶液。
③氨基酸标准溶液：准确称取干燥的氨基酸（如异亮氨酸）0.2000g于烧杯中，先用少量水溶解后，定量转入100mL常量瓶中，用水稀释到标线，摇匀，准确吸取此液10.0mL于100mL容量瓶中，加水到标线，摇匀，此为200μg/mL 氨基酸标准溶液。
3）操作方法①标准曲线绘制准确吸取200μg/mL的氨基酸标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL （相当于0、100、200、300、400、500、600μg 氨基酸），分别置于25mL 容量瓶或比色管中，各加水补充至容积为4.0mL，然后加入茚三酮溶液（20g/L）和磷酸盐缓冲溶液（pH为8.04）各1mL，混合均匀，于水浴上加热15min，取出迅速冷至室温，加水至标线，摇匀。
静置15min后，在570nm波长下，以试剂空白为参比液测定其余各溶液的吸光度A。
以氨基酸的微克数为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。
谷氨酸发酵 实验报告(1)
兰州大学生命科学学院发酵工程实验谷氨酸发酵实验摘要：谷氨酸棒杆菌在合适的培养基中经摇瓶培养能快速生长，为发酵实验准备菌种。
还原糖的消耗和谷氨酸的生成是衡量谷氨酸发酵是否正常的重要标志，所以在发酵过程中，要求每两个小时测定一次还原糖的含量，并据此作出发酵的糖耗曲线。
关键字：种子的制备、发酵罐、谷氨酸棒杆菌、PH的调节引言：了解发酵工业菌种制备工艺和质量控制，为发酵实验准备菌种。
了解发酵罐罐体构造和管道系统，掌握对发酵罐及其管道系统的灭菌方法。
了解发酵罐的操作，完成谷氨酸发酵的全过程。
还原糖的消耗和谷氨酸的生成是衡量谷氨酸发酵是否正常的重要标志，在发酵后期当还原糖降至1％以下时，表明谷氨酸发酵已经完成。
所以在发酵过程中，要定时测定还原糖的含量，要求每两个小时测定一次，并据此作出发酵的糖耗曲线。
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
学习使用茚三酮比色法检测发酵液中谷氨酸浓度的方法。
谷氨酸棒杆菌通常在0-12小时为生长期，12小时后为产酸期，所以应该从12小时以后开始检测谷氨酸的含量，每两个小时取一次样。
原理:谷氨酸棒杆菌在合适的培养基中经摇瓶培养能快速生长，得到大量健壮的种子。
谷氨酸棒杆菌生长速度较快，接种量一般在1-2%。
谷氨酸发酵是有氧发酵，发酵罐由蒸汽管道、空气管道、加料出料管道等组成，在实验之前必须先对发酵罐进行空消。
谷氨酸产生菌是代谢异常化的菌种，对环境因素的变化很敏感，在适宜的培养条件下，谷氨酸产生菌能够将50％以上的糖转化成谷氨酸，而只有极少量的副产物。
如果培养条件不适宜，则几乎不产生谷氨酸，仅得到大量的菌体或者由发酵产生的乳酸、琥珀酸、а－酮戊二酸、丙氨酸、谷氨酰胺、乙酰谷氨酰胺等产物。
生产上的中间分析只测定一些主要数据，只能显示微生物代谢的一般概况而不能反映细微的生化变化。
因此，进一步完善生化分析项目，从生化角度对发酵进行控制，从而确定最适宜的工艺条件是提高发酵水平的重要课题之一。
茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸含量的方法探讨
ｗａ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｕ ｍ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｐ Ｈ ５ ． ５ ，ｉ ｎ ａ ｂ ｏ ｉ ｌ ｉ ｎ ｇ ｗ ａ ｔ ｅ ｒ ｂ ａ ｔ ｈ ｈ ｅ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ
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１ 材料 与方法
茚三酮法测氨基酸
茚三酮法测氨基酸 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT茚三酮显色法测定氨基酸的含量一．原理：凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
二．仪器：721型分光光度计台天平减压蒸馏器干燥容量瓶移液枪烧杯试管架试管水浴锅。
三．药品：（1）标准氨基酸溶液：配制成L 溶液（2），2mol/L 醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L 醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L 乙酸混合而成。
用pH 检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取170mg 茚三酮和30mg 还原茚三酮，用20mL 乙二醇甲醚溶解（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含～50μg 氨基酸。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g 茚三酮溶于15～25mL 热蒸馏水中，加入活性炭，轻轻搅拌。
加热30min 后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL 冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取茚三酮，用沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将维生素C 用25mL 温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3 次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL 乙二醇甲醚中加入5g 硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取L 的标准氨基酸溶液0，，，，，于试管中，用水补足至1mL。
KJ 茚三酮法测定氨基酸总量(“氨基酸”相关文档)共8张
试剂配制：讲义P32 （1）2%茚三酮溶液 （2）pH8.04的磷酸缓冲液 （3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮
氨酸标准溶液。
（2）标准曲线的绘制及样品测定
单位：mL
1 2 3 4 5 6 7、8、9
水 1.6 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 1.0 （3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮氨酸标准溶液。
实验七：茚三酮法测定氨基酸总量
1．实验原理 凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨
基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚三酮共热 时，产生紫色化合物，最大吸收波长在570nm处，在 一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可 用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤：
2. 实验材料、仪器与试剂
氨基酸含量为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
氨基酸与加茚三水酮的至反1应0分m两L个刻步骤度： 线，静置15min后，在570nm处测定吸光值，以氨基酸含量
为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
Hale Waihona Puke 570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可用比色法进行测定。 氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤： 实验材料、仪器与试剂
管，具塞刻度试管。 实验材料、仪器与试剂
仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，移液管，具塞刻度试管。 凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚三酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在
试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢 570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可用比色法进行测定。
（3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮氨酸标准溶液。 实验七：茚三酮法测定氨基酸总量 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、标准氨基酸（异亮氨酸）。
氨基酸含量测定和标准曲线制作(茚三酮法)
茚三酮比色法测定游离氨基酸含量原理：茚三酮与氨基酸的反应分两步进行，首先是氨基酸被氧化，产生二氧化碳､氨和醛，而水合茚三酮被还原成还原性茚三酮；第二步是所生成的还原性茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成成为蓝紫色化合物，该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比｡磷酸缓冲液（pH.8.04）：称磷酸二氢钾4.5350 g，定容500 ml。
称NAH2PO4·12H2O11.9380 g分别溶解定容500 ml。
取磷酸二氢钾10 ml与磷酸氢二钠190ml混合即为pH8.04的缓冲液2％茚三酮溶液：称取水合茚三酮 2 g，加水溶解后定容至 100 mL。
储成于棕色瓶中，避光保存。
0.25%抗坏血酸溶液：称取抗坏血酸 0.1 g，加水溶解后定容至 100 mL，现配现用，或者密封，冻存于-20 o C。
茚三酮反应液：取50 ml 2% 茚三酮，加入5 ml 0.25%的Vc，使用蒸馏水稀释到100 ml，密封储存在棕色瓶中。
亮氨酸标准液:称取 100 mg 亮氨酸（纯度不低于 99%）溶于 100 mL 水中，作为母液，此时亮氨酸的浓度为1 mg/mL。
茚三酮标准曲线制作溶液中氨基酸的浓度如果低于20 μg/ml，茚三酮显色反应将不能发生，故先配制不同浓度的氨基酸标准液，取十支试管，标号为1，2，3……10，按照下表配制1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1000 μg/ml亮氨酸超纯水 ml 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9 8.9 8.8 8.7 8.6 8.5 亮氨酸 终浓度μg/ml 405060708090100110120130140150使用螺旋盖（内垫）试管分别取上述浓度的氨基酸标准液1ml，空白对照使用1ml 超纯水替代氨基酸标准液，然后向各个试管中加入0.5 ml 的茚三酮反应液和0.5 ml 的磷酸缓冲液，盖好盖子悬紧，置于沸水浴中煮沸15 min，分别加入3 ml 的超纯水，斡旋混匀，测定吸光度，绘制标准曲线取一支中等程度显色的试管进行紫外和可见波段的全波长扫描，结果如下图所示3004005006007008000.00.10.20.30.40.50.60.7吸光度波长（nm ）403 nm565 nm选择565 nm 作为其最大吸收波长，测定各管的吸光度，弃去吸光度大于1的值 茚三酮终浓度（μg/mL） 565 nm 的吸光度 20 0.037 25 0.114 30 0.226 35 0.347 40 0.412 45 0.538 500.62155 0.692 60 0.754 65 0.834 700.968使用origin 8.5 绘制散点图并进行线性拟合，结果如下图所示0.00.20.40.60.81.0O D 565氨基酸浓度（μg/mL ）注意事项：1. 茚三酮比色受测定环境中的pH 影响很大，故每次测定前需要将样品溶液的pH 值调整到中性（pH7左右），2. 茚三酮不光可以与氨基酸反应，与蛋白质同样可以反应，因此需要在测定前去除溶液中的蛋白质，因此正确做法是：向样品溶液中加入等体积等0.6 mol/L 三氯乙酸，斡旋震荡，静置10 min 后，3000 rpm 离心10 min，取上清调整pH 值至中性pH7左右，再进行测定，3. 稀释倍数的确定：因为标准曲线的测定范围为20-70 μg/mL，即20-70 mg/L，所以在不清楚你所要检测样品中氨基酸的浓度时，最好取部分样品稀释10倍和100倍，分别检测原液、十倍稀释液和100倍稀释液的OD565，发现哪个水平下OD565落在标准曲线的范围内，从而判断需要对样品稀释多少倍4. 标准曲线测定时最好选择密封性较好的试管（螺旋盖硅胶内垫），同时需要检查气密性，防止水浴蒸发导致计量误差或者使用10 mL 具塞比色管，以方便在水浴之后可以准确补水。
茚三酮比色法测定冻干药膳鸡汤中氨基酸含量
茚三酮比色法测定冻干药膳鸡汤中氨基酸含量◎侯旭南杨妍林川犇刘徐青霞本文利用茚三酮反应产生特征颜色，改变溶液的吸光度，采用可见光分光光度法对药膳鸡汤及其冻干粉中的氨基酸含量进行分析，建立快速评价冻干药膳鸡汤的新方法。
测定结果表明，茚三酮法测定冻干粉中氨基酸含量具有良好的线性（R2=0.9996），准确性（回收率98.51%～101.61%）。
12种冻干药膳鸡汤中氨基酸含量介于540～2510μg/ml之间；冻干药膳鸡汤中氨基酸含量随其煎煮时长和食盐的增加而提高。
中医药膳学是在中医理论指导下研究食药两用食材的理论及应用的学科，是中医学的一个重要组成部分，是在长期实践中积累逐渐形成的经验学科。
由于食疗药膳的传统烹饪方式商品化程度过低，无法满足快节奏时代的需要，导致其在现代社会的推广受限。
随着真空冷冻干燥技术成本的降低，冻干药膳产品有望实现产业化。
药膳鸡汤作为受众人群最为广泛的食疗药膳，是以药食两用的中药与鸡肉及天然调料熬煮而成。
《内经》记载，药膳鸡汤有益气温中、填精补虚、健脾胃、益五脏、强筋壮骨的功效，适用于营养不良、畏寒肢冷、易疲劳、月经不调等症状。
鸡肉营养丰富，蛋白质含量高，含有多种人体必须氨基酸。
以鸡肉为基础开发药膳鸡汤，并以现代冻干技术制备方便快捷的药膳鸡汤冻干粉可以实现营养、功能和便捷性的高度融合。
药膳冻干鸡汤的开发有利于药膳的推广和工业化生产，是药膳鸡汤未来研究和发展的趋势。
谷氨酸是酸性氨基酸，分子内含两个羧基增加了其在极性溶剂中的溶解能力，因此微溶于水。
谷氨酸几乎不溶于乙醚等非极性溶剂，也不溶于甲醇和乙醇。
谷氨酸作为食品行业常见的呈鲜物质之一，对鸡汤鲜味具有重要的贡献。
L-谷氨酸可作为药品参与大脑的蛋白质代谢，促进氧化，是人脑中重要的兴奋性神经递质。
本实验以谷氨酸为研究目标，利用谷氨酸与茚三酮反应生成特征颜色的原理，采用可见光分光光度法测定570nm 波长下溶液的吸光度，根据朗伯-比尔定律计算其中的游离氨基酸的含量。
氨基酸测定
茚三酮显色法测定氨基酸的含量一．原理：凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
二．仪器：721型分光光度计台天平减压蒸馏器干燥容量瓶移液枪烧杯试管架试管水浴锅。
三．药品：（1）标准氨基酸溶液：配制成0.3 mmol/L 溶液（2）pH5.4，2mol/L 醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L 醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L 乙酸混合而成。
用pH 检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取170mg 茚三酮和30mg 还原茚三酮，用20mL 乙二醇甲醚溶解（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含0.5～50μg 氨基酸。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g 茚三酮溶于15～25mL 热蒸馏水中，加入0.25g 活性炭，轻轻搅拌。
加热30min 后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL 冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取0.5g 茚三酮，用12.5mL 沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将0.5g 维生素C 用25mL 温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3 次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL 乙二醇甲醚中加入5g 硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取0.3mmol/L 的标准氨基酸溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL 于试管中，用水补足至1mL。
测氨基酸含量的方法
测氨基酸含量的方法测氨基酸含量可不是一件简单的事儿呢。
有一种方法是茚三酮显色法。
这就像是一场神奇的化学反应魔法。
茚三酮这种东西就像一个侦探，专门和氨基酸打交道。
当它遇到氨基酸的时候，就会发生反应，然后变色。
我们可以把含有氨基酸的样品和茚三酮放在一起，在一定的条件下，比如说合适的温度、酸碱度这些，让它们充分反应。
反应完了之后，就会出现颜色变化。
然后我们可以用一个仪器，就像一个专门看颜色深浅的眼睛，去测量颜色的深浅程度。
颜色越深，就说明氨基酸的含量越高。
这就好像颜色是氨基酸含量的信号，我们通过解读这个信号来知道氨基酸有多少。
还有高效液相色谱法。
想象一下高效液相色谱仪就像一个超级复杂的赛道。
氨基酸们就像一个个小小的运动员，在这个赛道上奔跑。
我们把样品注射到这个仪器里，然后通过各种设置，比如流动相的选择、流速的控制等等，让氨基酸在赛道上按照不同的速度前进。
最后它们会一个一个地到达终点，被检测出来。
不同的氨基酸在这个过程中会有不同的表现，我们可以根据这些表现来计算出每种氨基酸的含量。
这就像一场精确的赛跑比赛，我们通过观察运动员的成绩来统计数据。
再说说氨基酸自动分析仪法。
这个仪器就像一个专门处理氨基酸的小工厂。
我们把样品送进去，它就会自动地进行一系列的操作。
它里面有各种复杂的部件，就像工厂里的机器一样。
这些部件会把氨基酸分离出来，然后进行检测。
它能非常精确地测量出氨基酸的含量，就像一个经验丰富的工人，能够把工作做得又快又好。
我记得在一个实验室里，他们要检测一种植物里的氨基酸含量。
他们先用茚三酮显色法做了一个初步的检测。
把植物样品处理好之后，和茚三酮混合在一起，然后在特定的温度下反应了一段时间。
等反应结束后，他们用分光光度计去测量颜色的变化。
通过颜色的深浅，他们大概知道了氨基酸的含量范围。
然后他们又用高效液相色谱法进行了更精确的测量。
他们仔细地准备样品，调整仪器的各种参数，让氨基酸在色谱柱里好好地“跑”一趟。
氨基酸含量的测定
氨基酸含量的测定一、氨基酸含量测定的重要性氨基酸可是非常重要的家伙呢！它们就像是构建我们身体这个超级大厦的小砖块一样。
不管是我们的肌肉、毛发还是各种酶类，都离不开氨基酸的参与。
所以呀，知道一个东西里氨基酸的含量就特别有意义啦。
比如说在食品领域，测定食物中的氨基酸含量就能知道它的营养价值有多高。
在制药方面呢，也能帮助确定药物的成分是否准确。
二、氨基酸含量测定的常见方法1. 茚三酮显色法这个方法可有趣啦。
茚三酮就像是一个专门寻找氨基酸的小侦探。
当茚三酮和氨基酸相遇的时候，就会发生显色反应。
一般来说，不同的氨基酸会显示出不同深浅的颜色呢。
我们可以通过比色的方法，就是对比颜色的深浅，来大致判断氨基酸的含量。
不过这个方法也有它的小缺点，就是容易受到一些杂质的干扰，就像一群捣乱的小怪兽，可能会让结果不太准确。
2. 高效液相色谱法（HPLC）这可是个很厉害的高科技方法哦。
它就像是给氨基酸们安排了一场超级精确的赛跑。
把样品注入到高效液相色谱仪里，不同的氨基酸在柱子里跑的速度不一样，就像运动员的速度有快有慢。
最后根据它们跑出来的时间和峰面积，就能很精确地计算出氨基酸的含量啦。
这个方法的好处就是超级精确，不过仪器比较昂贵，操作也有点复杂，就像开一架高级飞机，需要专业的训练才能做好。
3. 氨基酸分析仪法这种方法是专门为测定氨基酸而生的呢。
它能够自动地把氨基酸一个一个地分析出来，就像一个超级智能的分拣员。
它的优点是准确性也很高，而且可以同时测定多种氨基酸。
但是呢，仪器也不便宜，而且需要经常维护，就像照顾一个娇贵的小宠物一样。
三、实际操作中的注意事项1. 样品的预处理这一步可不能马虎哦。
如果样品里面有杂质，就像是在一锅好汤里混进了沙子，那测定结果肯定就不对啦。
对于固体样品，可能需要研磨得很细，就像把一块大石头磨成小沙子一样。
对于液体样品呢，可能需要过滤，把那些不该存在的小颗粒都去掉。
2. 试剂的选择和保存试剂就像是我们打仗的武器一样。
食品中氨基酸含量的测定
实验九食品中氨基酸含量的测定――茚三酮比色法1、目的通过实验，掌握茚三酮比色法测定氨基酸的方法。
2、原理凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
3、实验材料与仪器3.1材料大豆、奶粉、火腿肠等(1) 0.2mol/L柠檬酸缓冲液，pH5.0(2) 80%乙醇(3) 10mmol/L KCN：称取0.1638gKCN溶于蒸馏水中，稀释至250ml备用（注意：KCN剧毒！）(4) KCN－乙二醇甲醚－茚三酮溶液：称取1.25g重结晶茚三酮溶于25ml经重蒸馏的乙二醇甲醚中使成5%溶液。
将2.5ml10mmol/L KCN溶液用乙二醇甲醚溶液稀释至125ml充分混合。
然后将125mlKCN—乙二醇甲醚溶与25ml茚三酮－乙二醇甲醚溶液相混合，置试剂瓶待用，正常情况下应为浅黄色。
(5 )标准氨基酸溶液：称取亮氨酸20mg溶于10ml蒸馏水中，则得浓度为200μg/ml的母液。
上述所有试剂必须放在草酸保护的干燥器中，以免被空气中的NH3所污染。
(6) 乙二醇甲醚(CH3OCH2CH2OH, methyl cellusolve)的处理：将5g硫酸亚铁加在500g乙二醇甲醚中，振摇1─2小时。
过滤除去硫酸亚铁（若滤液混浊没有关系），再在蒸馏瓶中蒸馏，收集沸点121─125℃部分，此时应为透明无色液体。
KCN－乙二醇甲醚－茚三酮溶液配制后必须隔夜才能应用。
配制后1星期内稳定，若超过1星期则灵敏度降低，不宜作定量。
(7) 茚三酮重结晶：即使AR级的茚三酮，由于保管不当，常带微红色，配成溶液后也带红色，影响比色测定，故需重结晶一次方可应用。
5g茚三酮溶于15ml热蒸馏水中，加入0.25g活性炭，轻轻摇动，若溶液太稠不易操作，可酌量加水5─10ml，30分钟后用滤纸过滤，滤液放冰箱中过液，次晨即见微黄色结晶出现，过滤，再以1ml冷水洗涤结晶，置于干燥器中干燥，最后装入棕色试剂瓶中保存。
茚三酮比色法测定聚谷氨酸含量的研究
茚三酮比色法测定聚谷氨酸含量的研究近年来，聚谷氨酸在药物研发以及生物化学领域都有着重要的应用，在聚谷氨酸的回收利用中，确定聚谷氨酸的含量是最重要的环节。
随着科技的发展，越来越多的检测方法不仅能够更加准确的检测聚谷氨酸的含量，而且只需要很少的时间。
因此，本研究中采用了“茚三酮比色法”css测定聚谷氨酸含量，并研究了其有效性和可靠性。
本研究在一个恒温恒湿室中测定了九个部分的聚谷氨酸样本，每个样本都是0.25克的聚谷氨酸溶液，用0.1M的柠檬酸缓冲液进行混合。
然后，将混合液分装到10毫升分离比色管中，在文献参考的茚三酮浓度范围内，分别添加适量的茚三酮，把偶氮亮蓝G比色剂添加到分离比色管中，用孔板室把九个分离比色管依次安装在室内，用专用仪器进行光度测量，检测结果显示，当茚三酮浓度范围从0.01mg/ml变为0.04mg/ml时，聚谷氨酸含量也从81.3mg/ml变为68.1mg/ml。
结果表明，当茚三酮较低的浓度时，聚谷氨酸含量较低，而当茚三酮浓度较高时，聚谷氨酸含量较高。
本研究用茚三酮比色法测定了聚谷氨酸的含量，结果表明，该方法是准确、快速、简便的，省时省力。
由于茚三酮具有显色定量分析的优势，因此，这种技术可以实现聚谷氨酸含量范围内快速、准确测定聚谷氨酸含量，是一种可靠精准的检测技术。
同时，该技术可以用于实验室和工厂考察，用于特定行业产业化生产。
随着生物技术手段、药物研发技术和其他技术的发展，检测技术也在不断提高。
此次研究中，使用“茚三酮比色法”测定聚谷氨酸的含量，取得了可靠的科学结果，数据显示，茚三酮浓度增大时，聚谷氨酸的浓度也随之改变。
而且，根据实验结果，该方法检测结果相当精准，与其他技术相比，在聚谷氨酸测定方面具有很强的优势，可以快速测定聚谷氨酸含量，且结果准确可靠。
谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定
谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定一、实验目的掌握茚三酮比色法测定氨基酸含量的原理和方法,测定谷物种子蛋白质中赖氨酸含量。
二、实验原理蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。
因此，用已知浓度的游离氨基酸制作标准曲线，通过比色分析（530nm）即可测定出样品中的赖氨酸含量。
亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅有—个游离氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制标准液。
但由于这两种氨基酸分子质量不同，以亮氨酸为标准计算赖氨酸含量时，应乘以校正系数1.1515，最后再减去样品中游离氨基酸含量。
三、实验仪器1．电子分析天平（1/1000）、可见分光光度计、恒温水浴箱、干燥器、移液器。
2．试管架（塑及铝）、具塞试管、具塞三角瓶、细口瓶、漏斗（或0.45um滤膜）、吸管等。
四、实验试剂1．0.4mol/L柠檬酸缓冲液：称取4.202g柠檬酸和5.88g柠檬酸三钠，溶于100ml蒸馏水中。
2．茚三酮试剂：称40mg二氯化锡(防腐)溶于25ml柠檬酸缓冲液中；称lg 茚三酮溶于25ml 95％乙醇中；将上述两液混合摇匀，滤去沉淀，上清液置冰箱中保存备用。
3．0.02mol/L盐酸：取12mol/L盐酸0.17ml，用蒸馏水稀释定容至100ml。
4．亮氨酸标准液：准确称取20mg亮氨酸，加数滴0.02mol/L盐酸使之溶解，然后用蒸馏水稀释定容到100ml，则得浓度为200μg／ml的标准液。
5．60％乙醇。
6．4％碳酸钠：称取4g无水碳酸钠，溶于100 ml蒸馏水。
7．2％碳酸钠。
蛋白质中赖氨酸（lysine，Lys）的含量是谷物品质的主要指标之一。
由于动物及人类不能合成，须从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价值有重要意义。
本实验分别用茚三酮溶液显色法和染料结合法（Dye Binding Lysine，DBL）测玉米种子中赖氨酸含量。
氨基酸含量的测定茚三酮比色法
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤：
2. 实验材料、仪器与试剂 材料：酱油 仪器：可见分光光度计，分析天平，容量 瓶，移液管，具塞刻度试管。 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、 磷酸氢二钠、标准氨基酸（异亮氨酸）。
3. 实验步骤
（1）样品的处理：准确吸取0.5mL酱油于100mL 烧杯中，加入5g活性炭和50mL蒸馏水，置于80℃ 水浴锅中，保持半小时后过滤，用蒸馏水将滤渣 清洗数遍，收集滤液于100mL容量瓶中，定容至 刻线，摇匀备用。
5. 说明及注意事项
（1）该法是微量法，对氨基酸的最低检出量可 达0.5μg，其其灵敏度高，重现性好。 （2）脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色， 最大吸收波长在440nm处。
（3）通常采用的样品处理方法为：准确称取粉碎 后的样品5g～10g或吸取液体样品5mL～10mL， 置于烧杯中，加入50mL蒸馏水和5g左右的活性炭， 加热煮沸，过滤。用30mL～40mL热水洗涤活性 炭，收集滤液于100mL容量瓶中，加水至刻度线， 摇匀备用。
6. 思考题 （1）茚三酮法测定氨基酸的原理是什么？ （2）试比较三种方法测定氨基酸含量的优缺点
各是什么？
（2）标准曲线的绘制
管号
12 3 4 56 7
氨基酸标准溶液 /mL
0 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
水/mL
1.6 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6
磷酸盐缓冲液/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
茚三酮/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
样品溶液/mL 0 0.5 0.5 0.5
水/mL
1.6 1.1 1.1 1.1
磷酸盐缓冲液/mL 0.4 0.4 0 0.4 0.4 0.4
茚三酮溶液检验氨基酸实验的实证与优化
茚三酮溶液检验氨基酸实验的实证与优化1 困惑茚三酮与氨基酸的反应在药品检验、临床分析和食品工业等领域被广泛应用。
在高中有机化学内容的教学时，若能适时开展氨基酸检验的实验探究活动，对帮助学生认识氨基酸的化学性质及检验方法是大有裨益的。
本地区所用的人教版教材有机部分未编排该实验内容，翻阅其他版本的教材，唯独苏教版提供了操作步骤：取1mL 0.1%的茚三酮溶液，加入1%的甘氨酸溶液，将试管放入热水浴中，观察现象。
用色氨酸溶液替代甘氨酸溶液，重复上述实验。
在仔细研读以上方案后，发现存有诸多困惑，主要有以下几点：（1）方案中向1mL 0.1%的茚三酮溶液加入的1%甘氨酸或色氨酸溶液的用量未具体指明，是数滴（少量）、几毫升，还是其他可能的用量？（2）实验时所用的热水浴控制多少温度合适？能否采用酒精灯直接加热？（3）同一课时“问题解决”栏目在帮助学生了解肽键形成时，选择甘氨酸和丙氨酸为例探讨，本方案又为什么选择甘氨酸和色氨酸作为研究对象？对此，我们专门做了一些实证探索，得出了一些结果，供各位同仁参考。
2 探索在分析茚三酮显色原理与20种L型氨基酸市场售价基础上，我们重点实证探索了氨基酸种类、pH、温度及试剂相对用量等因素对显色效果的影响，进而优化选择了茚三酮检验氨基酸实验的条件。
2.1 茚三酮反应的基本原理茚三酮在溶液中会形成水合茚三酮，两者的结构如图1所示。
氨基酸中的氨基和羧基共同参与和茚三酮的反应。
水合茚三酮引起氨基酸氧化脱氨、脱羧反应，形成的还原产物可以与氨基酸分解产生的氨结合，再与另一分子还原茚三酮缩合，互变异构成蓝紫色化合物（该化合物最大吸收峰在570nm处）。
具体过程见图2。
2.2 常见氨基酸的市场价格调查迄今人类已发现的数百种氨基酸中，从蛋白质水解得到的最常见的有20种。
为方便购买化学试剂及降低实验开设成本的考虑，我们在阿里巴巴化工品销售平台上查阅相关商品的市场价格，以教材出现的20种L型氨基酸为例（甘氨酸不存在L型），2015年8月食品级试剂的平均售价见表1。
茚三酮测谷氨酸
茚三酮法测定谷氨酸含量
1.操作条件
（1）pH5.4，2mol/L醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。
（2）0.5％茚三酮显色液：用pH5.4，2mol/L醋酸缓冲液进行配制。
（2）样品液适宜测定浓度范围：每毫升含0.05mg～0.150mg谷氨酸（0.005～0.015％），即吸光度A值在0.1~1.0范围之内。
2.操作步骤
取经过缓冲溶液（pH5.4，2mol/L的醋酸缓冲液）适当稀释的样品液1mL，加入1.5ml的0.5％茚三酮显色液，混匀后于100℃沸水浴中加热15min，自来水冷却。
放置5min，加3mL 蒸馏水稀释，摇匀后测定570 nm波长下的吸光度A。
（注意：若测定样品加热后有沉淀，说明样品液浓度太高，需要适当稀释）。
将样品测定的A570nm代入标准曲线方程中，可计算出样品中谷氨酸含量。
标准曲线方程：A570=10.268C-0.498，C为稀释后料液浓度。
则原实际料液中的谷氨酸浓度为：C' =NC=N (A570+0.498)/10.268
式中N为稀释倍数。
分光光度计的使用注意事项：
1.使用前，先合盖预热15-20min。
2.用空白液调100%和调0%。
空白液为：1mL水，加入1.5ml的0.5％茚三酮
显色液，混匀后于100℃沸水浴中加热15min，自来水冷却。
放置5min后，加3mL 蒸馏水稀释，摇匀。
3.不用时将分光光度计盖打开。
SBA-40C 生物传感反应仪山东省科学院生物研究所。
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茚三酮比色法测定谷氨酸含量的研究
王昂;王丽丽;仪宏;赵紫华
【期刊名称】《中国调味品》
【年(卷),期】2005(000)008
【摘要】依据α-氨基酸与茚三酮显色反应的原理,研究了比色法定量检测谷氨酸的方法,着重探讨了此显色反应的影响因素、反应条件及注意事项.作为定量检测谷氨酸的方法,它与常规的谷氨酸检测方法相比,具有简便实用的特点.适用于一般实验室的样品分析及谷氨酸生产过程中的产品检测.
【总页数】4页(P50-52,35)
【作者】王昂;王丽丽;仪宏;赵紫华
【作者单位】河北科技大学,生物科学与工程学院,河北,石家庄,050018;河北科技大学,生物科学与工程学院,河北,石家庄,050018;河北科技大学,生物科学与工程学院,河北,石家庄,050018;河北科技大学,生物科学与工程学院,河北,石家庄,050018【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
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