实验一 生物组织中还原糖

实验一生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、实验原理：该实验中，对三类化合物的鉴定都是根据它们的特定颜色反应进行的。

当质量浓度为0.1 g／ml的氢氧化钠溶液(氢氧化钾溶液亦可)与质量浓度为0.05g／m1的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。

Cu(OH)2与葡萄糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。

因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。

苏丹Ⅲ是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹Ⅲ染色后，在显微镜下可看到细胞内橘黄色的颗粒。

蛋白质分子中含有很多肽键，因而能与双缩脲试剂发生反应生成紫色的络合物。

若在组织样液中加入双缩脲试剂后，有紫色反应，则证明其中含有蛋白质。

二、实验目的：初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

三、实验材料：1、做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织中有色素会影响实验结果及其观察的最重要因素。

因此要选用可溶性还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织，其中以苹果、梨最好。

也可用白色的甘蓝叶、白萝卜替代(不能选西瓜)。

2、做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。

将花生种子经过3～4小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。

3、做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆（豆浆）或鸡蛋清。

四、试剂配制：1、斐林试剂：甲液——质量浓度为0.1 g／ml的氢氧化钠溶液(10克的氢氧化钠加水至100ml即成)；乙液——质量浓度为0.05g／ml的CuSO4溶液(5g硫酸铜加水至100m1充分溶解即成)。

甲、乙试剂千万要分开放，不可混合。

在实验过程中，将4～5滴乙液滴入2ml甲液中现混现用。

2、苏丹Ⅲ溶液：将0.1g苏丹Ⅲ干粉溶于100ml体积分数为95％的酒精溶液中，待全部溶解后即成。

3、双缩脲试剂：A液——质量浓度为0.1 g／ml的氢氧化钠溶液(可使用斐林试剂甲液)。

B液——质量浓度为0．01g／mi的硫酸铜溶液(称取1 g硫酸铜加水至100ml充分溶解后即成)。

五、注意事项：1．选材必须是可溶性还原糖，蔗糖不是还原糖不能用；一般淀粉又是不溶性糖且无还原性也不能用。

因此，选择理想的生物材料是本实验成败的关键。

要充分理解教材中选用特定材料的意图。

2．本实验的三类有机物的鉴定，均依据特定的颜色反应。

所以在实验中应特别注意观察鉴定试剂加入前后的颜色变化，加深印象并做好记录。

3．在对可溶性还原糖鉴定的过程中，使用的斐林试剂要现配现用，混合均匀后一次加入。

在水浴加热时，试管底部不要触及烧杯底部，以防止试管受热不匀而爆裂；加热时，试管口也不要朝向自己或他人，防止沸腾的溶液冲出试管造成烫伤。

4．在对脂肪进行鉴定时，切出符合要求的薄切片是实验结果能否满意的关键。

要多按教材要求练习徒手切片技术(特别注意切片时的安全)。

5．在对蛋白质进行鉴定时，若使用蛋清，必须按要求稀释。

实验样液要留出一份作为对照，便于最后进行比较。

实验二用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动一、实验原理高等绿色植物的叶绿体存在于细胞质的基质中。

叶绿体一般是绿色的，扁平的椭圆形或球形，可以用高倍显微镜观察它的形态和分布。

活细胞中的细胞质处于不断流动的状态。

观察细胞质的流动，可用细胞质基质中的叶绿体的运动作为标志。

二、目的要求1.初步掌握高倍显微镜的使用方法。

2. 观察叶绿体的形态分布。

3. 通过在显微镜下的实际观察，理解细胞质的流动是一种生命现象。

三、材料用具菠菜叶（或藓类的叶）新鲜的黑藻。

四、仪器试剂显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，镊子，刀片，培养皿，台灯，铅笔。

五、方法步骤（一）制作菠菜叶片临时装片1 . 取材取菠菜叶稍带些叶肉的下表皮，放入盛有清水的培养皿中。

2. 制片往载玻片中央滴一滴清水，用镊子夹新取的叶，放入水滴中，盖上盖玻片。

（二）用显微镜观察叶绿体1. 用低倍镜观察。

2. 用高倍镜观察。

注意细胞内的叶绿体的形态和分布情况。

（三）制作黑藻叶片临时装片3. 供观察用的黑藻，事先应放在光照，室温条件下培养。

4. 将黑藻从水中取出，用镊子从新鲜枝上取一片幼嫩的小叶，将小叶放在载玻片的水滴中，盖上盖玻片。

（四）用显微镜观察细胞质流动5. 用低倍镜观察用高倍镜观察。

6. 用高倍镜观察用高倍镜观察，注意叶绿体随着细胞质流动，仔细看看每个细胞中细胞质流动的方向是否一致。

六、结论将观察到的现象和得出的结论，填写在实验报告册上。

七、讨论1. 细胞质基质中的叶绿体，是不是静止不动的？为什么？2. 叶绿体的形态和分布，与叶绿体的功能有什么关系？3. 植物细胞的细胞质处于不断流动的状态，这对于活细胞完成生命活动有什么意义？实验三观察植物细胞的有丝分裂一、实验目的1.观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。

2.初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技能。

3.初步掌握绘制生物图的方法。

二、实验原理在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞，高等植物细胞有丝分裂的过程，分为分裂间期和分裂期的前期、中期、后期、末期。

可以用高倍显微镜观察植物细胞的有丝分裂的过程，根据各个时期细胞内染色体（或染色质）的变化情况，识别该细胞处于有丝分裂的哪个时期，细胞核内的染色体容易被碱性染料着色。

三、材料用具洋葱根尖、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、培养皿、铅笔、质量分数为15%的盐酸、体积分数为95%的酒精、质量分数为0.01g/ml的龙胆紫（或紫药水）四、实验过程（见书Ｐ39）1．洋葱根尖的培养（提前3—4天）2．解离：5min3．漂洗: 10min4．染色: 5min5．制片6．镜检五、注意1．解离充分是实验成功的必备条件。

解离充分，组织才能分散，细胞也不会重叠。

2 ．漂洗时间一定要足够，否则细胞染不上色。

3 ．染色时，染液的浓度和染色时间必须掌握好。

特别是染色不能过深，否则镜下一片紫色，无法观察。

六、讨论1．制作好洋葱根尖有丝分裂装片的关键是什么？谈谈你自己的2．在观察清楚有丝分裂各个时期的细胞以后，绘出洋葱根尖细胞有丝分裂的简图，并标明时期。

实验四比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率一、实验原理新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶，Fe3+是一种无机催化剂，它们都可以催化过氧化氢分解成水和氧，可以比较酶的催化效率。

在实验中，分别用质量分数为3.5%的氯化铁溶液和质量分数为20%的肝脏研磨液做实验，在每一滴氯化铁溶液中Fe3+的数，大约是每滴研磨液中过氧化氢酶分子数的25万倍。

二、目的要求（一）初步学会探索酶的催化效率的方法。

（二）探索过氧化氢酶和Fe3+催化效率的高低。

三、材料用具（一）实验材料在做上述实验时，你所选择的实验材料为：如猪的新鲜肝脏。

请说明选择上述材料的理由：因新鲜肝脏内的酶的活性较高。

注意：在实验时，应先用钢剪将肝脏剪成黄豆大小再研磨，不能用整块的肝脏，因为整块肝脏中酶与H2O2的接触不够。

（二）实验用具和试剂1、实验用具请在下表中选择你要用的实验用具，并确认它们已经存在（在备注栏中打“√”）2、试剂体积分数为3%的过氧化氢溶液。

质量分数为3.5%的氯化铁溶液。

四、方法步骤（一）制备肝脏研磨液称取一定量的猪的新鲜肝脏，剪碎后放入研钵研磨，然后再过滤制成质量分数为20%的肝脏研磨液。

（二）实验操作与观察取试管①和②，各注入2ml过氧化氢溶液→①号试管内滴入2滴FeCl3溶液，②号试管内滴入2滴新鲜肝脏研磨液→用拇指堵住试管口轻轻振荡→将已点燃但无火焰的卫生香分别放①、②试管的液面上方面观察。

五、实验结果与分析六、注意事项（一）加入实验材料后，应立即观察实验现象。

（二）向试管中插入快要熄灭的卫生香时，动作要快，但不要插入到气泡中，以免使卫生香因潮湿而熄灭。

（三）试管最好使用20×200ml的，因为如果试管过小，整个试管就会因充满稠密的气泡而影响卫生香复燃。

（四）过氧化氢溶液有一定的腐蚀作用，若不小心皮肤溅上了过氧化氢溶液，一定要用大量清水实验五探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的水解作用1、实验目的（1）初步学会探索酶催化特定化学反应的方法。

（2）探索淀粉酶是否只能催化特定的化学反应。

2、实验原理淀粉和蔗糖都没有还原性,也就是都不能使斐林试剂还原,所以都不能与斐林试剂发生反应。

唾液淀粉酶将淀粉水解成的麦芽糖则具有还原性,能够使斐林试剂还原,生成砖红色的沉淀。

蔗糖水解产生的葡萄糖和果糖都具有还原性,但唾液淀粉酶不能将蔗糖水解。

试验中可以用菊糖代替蔗糖。

这是因为菊糖是由多个果糖分子缩合而成的，与淀同属于多糖，用菊糖与淀粉进行对比实验，更具有说服力。

3、实验材料质量分数分别为3%的可溶性淀粉溶液和蔗糖溶液；质量分数为2%的新鲜淀粉酶（化学试剂商店有售）溶液。

4、试剂与仪器斐林试剂（也可以用班氏试剂）试管、大烧杯、量筒、滴管、温度计、试管夹、三脚架、石棉网、酒精灯、火柴。

5、实验方法与步骤（1）取两支洁净的试管，编上号，然后向1号注入2mL可溶性淀粉溶液和2mL新鲜淀粉酶溶液。

向2号注入2mL蔗糖溶液和2mL新鲜淀粉酶溶液。

（2）轻轻振荡这两支试管，使试管内的液体混合均匀，然后将试管的下半部浸到60℃左右的热水中，保温5min。

（3）取出试管，各加入2mL斐林试剂（边加入斐林试剂，边轻轻振荡这两支试管，以便使试管内的物质混合均匀）。

（4）将两支试管的下半部放进盛有热水的大烧杯中,用酒精灯加热,煮沸并保持1min。

（5）观察并记录两支试管内的变化。

6、注意事项①做好本实验的关键是蔗糖的纯度和新鲜程度。

这是因为蔗糖是非还原性糖，如果其中混有少量的葡萄糖或果糖，或蔗糖放置久了受细菌作用部分分解成单糖，则与斐林试剂共热时能生成砖红色沉淀，使人产生错觉。

为了确保实验的成功，实验之前应检验一下纯度。

普通的细粒蔗糖往往是由于部分水解而具有一些还原糖。

可用市售大块冰糖，水洗去其表面葡萄糖得到纯净的蔗糖。

②实验中要将试管的下半部浸到37℃的温水中，因为淀粉酶在适宜的温度条件下催化能力最强。

③在实验中，质量分数为3%的蔗糖溶液要现配现用（以免被细菌污染变质），取唾液时一不定期要用清漱口，以免食物残渣进入唾液中。

④制备的可溶性淀粉溶液，一定要完全冷却后才能使用，因为温度过高会使酶活性降低，甚至失去催化能力。

⑤实验中如果2号试管也产生了砖红色沉淀，可能的原因是：蔗糖溶液放置的时间过长，蔗糖被溶液中的微生物分解成还原性的糖，从而影响实验效果。

这时应临时配制蔗糖溶液。

另一个可能的原因是试管不干净，所以实验之前应将试管用清水再清洗一次，试管编号要醒目。

⑥实验步骤一定要按要求的程序进行，不可随意改变。

⑦如果实验中，自己的实验结果与结论上的预期结果不一致，应再设计实验，进行进一步的验证或找出问题所在。