DEAE 纤维素使用说明

DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。

由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。

它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。

本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。

2 填料特征：3 应用的注意事项：3.1 色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。

（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。

20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。

也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。

（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。

使用的流速要小于装柱子的流速。

（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。

3.2 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。

3.3 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。

deae纤维素柱层析多糖原理

DEAE纤维素柱层析是一种常用的离子交换色谱技术，用于多糖的分离和纯化。

其原理基于离子交换体对溶液中带电离子的吸附和解吸作用。

具体原理如下：
1. DEAE纤维素柱：DEAE纤维素是一种带有正电荷的离子交换介质，具有许多二级胺基团。

这种柱材与带负电荷的多糖分子发生静电相互作用。

2. 样品加载：将混合溶液中含有多糖的样品加载到DEAE纤维素柱上。

多糖与柱子表面的二级胺基团之间发生静电作用，带负电荷的多糖被柱子捕获。

3. 洗脱梯度：通过改变洗脱缓冲液的离子强度或pH值，使得多糖以不同的速率从柱子上洗脱。

一般采用梯度洗脱，即逐渐增加洗脱缓冲液中的盐浓度或调节pH值，以逐步将多糖从柱子上解吸下来。

4. 分离和纯化：根据多糖在DEAE纤维素柱上的亲和性差异，它们在洗脱梯度中以不同的速率逐渐分离。

带有较低亲和性的多糖会被较早洗脱，而带有较高亲和性的多糖则会在较高盐浓度或pH值条件下才从柱子上洗脱。

通过DEAE纤维素柱层析，可以实现多糖的粗分离和初步纯化。

这种方法可用于生物医药、食品工业等领域中对多糖的分离、纯化和研究。

DEAE-52预处理

2.1 DEAE-52纤维素离子交换柱填料处理[8]2.1.1 预溶胀取DEAE-52纤维素5 g于小烧杯中，加入25 mL蒸馏水，溶胀48小时，待纤维素沉到烧杯底部且纤维素面高度不变时，倾去上层水，将下层的纤维素倒入量筒中测量其溶胀后的体积，5 g的DEAE-52溶胀后的体积约为8 mL，根据该比例确定DEAE-52所需称取的量。

2.1.2 膨胀活化称取50 gDEAE-52纤维素，置于500 mL烧杯中，加入300 mL蒸馏水浸泡至其体积不再改变。

将蒸馏水浸泡后的纤维素用双层滤纸抽滤，把水抽干后加入到0.5 mol/L NaOH溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时。

用双层滤纸抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。

将近中性纤维素加入到0.5 mol/L HCl溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时。

用双层滤纸抽滤掉HCl，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。

再次将纤维素加入到0.5 mol/L NaOH溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时，用双层滤纸抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。

用蒸馏水浸泡中性的纤维素，不断搅拌，静置，待纤维素下沉后倾去上层清水，反复多次。

2.2 装柱用起始缓冲液反复冲洗已经准备好的层析柱，取一小块脱脂棉润湿后放入层析柱的底部，柱底部连接胶皮管，装上螺旋夹，关闭夹子后将柱子固定在铁架台上，像其中倒入蒸馏水排出棉花与管道中的气泡。

把蒸馏水浸泡的纤维素搅拌均匀呈糊状，像层析柱中倒入一部分纤维素，要缓慢倒入避免产生气泡，拧开下端的螺旋夹，调整流速，待到液面降至距纤维素面2 cm处关闭螺旋夹，继续倒入纤维素，同时用玻璃棒搅拌纤维素防止两次加入产生纤维素分层，重复上述步骤，将所有纤维素都填入层析柱中，最后剪一圆形滤纸片，大小与层析柱内径一致，将其放入层析柱纤维素表面上，防止上样时打乱纤维素。

查看装好的柱子上表面是否平整，柱内不能有气泡、不能分层，待一切正常加入蒸馏水平衡，流速调低，使流出溶液的pH值与加入溶液的pH值一致。

DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体

DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体该法提取IgG简便，既可小量提取，•也可大量制备。

1．批量提取法称取DEAE-纤维素（DE32或DE52）50g，置于1000ml烧杯中，•先以蒸馏水漂浮除去细颗粒，再经酸碱处理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0•左右的磷酸盐缓冲液（PB）平衡。

将水分抽干，或用布氏滤斗（内放两层滤纸）过滤，收集湿纤维素，•以降低其离子强度。

按1ml血清加湿重5g DEAE纤维素，经过充分搅拌，置4℃吸附1h。

•上清液可再如此处理一次，即获得较纯的IgG。

该法提取IgG简便，既可小量提取，•也可大量制备。

2．Tris-Cl离子交换层析法（Ion-exchange chromatography）【材料和试剂】（1）DE32或DE52纤维素。

（2）HCl；NaOH；0.01～0.05mol/L，pH8.0 PB；0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5mol/L NaCl。

（3）待纯化标本：杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。

（4）1.550cm 层析柱；透析袋；紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。

【操作步骤】（1）DE52纤维素的处理：DE52经酸、碱处理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。

（2）装柱：将层析柱固定于滴定架上，柱底垫一圆形尼龙纱，出口接一细塑料管并关闭出水。

将浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5cm高时，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松开出水口螺旋夹•，控制流速1～2ml/min，同时连续加入DE52至所需高度。

待DE52完全沉降后，柱面放一圆形滤纸片。

（3）平衡：松开出水口螺旋夹，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速为15•滴/min，待流出液与洗脱液之pH值达到一致时，停止平衡。

DEAE-纤维素DE-52使用说明

DEAE-纤维素DE-52使用说明DEAE-纤维素(52)使用说明书一简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。

由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。

它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。

本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。

三、应用的注意事项：1) 色谱柱装填1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可.2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。

20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。

也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。

3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。

使用的流速要小于装柱子的流速。

4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。

2) 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。

3) 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。

DEAE纤维素使用说明

D E A E纤维素使用说明集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。

由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。

它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。

本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。

2 填料特征：3 应用的注意事项：3.1 色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。

（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。

20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。

也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。

（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。

使用的流速要小于装柱子的流速。

（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。

3.2 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。

DEAE纤维素

DEAE-纤维素DEAE-纤维素DEAE celluloseDEAE-纤维素DEAE cellulose 为二乙氨乙基纤维素。

是阴离子交换纤维素之一。

DEAE—纤维素的活化：称取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸馏水浸泡过夜，观察溶胀后DEAE的体积。

根据所需层析柱的柱床体积计算所需DEAE的用量，称取所需DEAE用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。

抽干，用过的离子交换剂可以反复使用，使其恢复原状的方法俗称“再生”。

再生并非每次用酸、碱反复处理，通常只要“转型”处理即可。

所谓转型就是使交换剂带上所希望的某种离子，如希望阳离子交换剂带上NH+4则可用NH4OH浸泡，如希望阴离子交换剂带上Cl—则用NaCl溶液处理。

本实验中DEAE—纤维素在酸碱处理后，用0.0175mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲溶液浸泡即可转型，以HPO4取代DEAE中的OH—。

一般由于DEAE—纤维素使用后因带有大量杂蛋白，所以再生时，先用0.5ml/L NaOH 浸洗，用无离子洗至pH8左右，再转型，即可再使用。

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Deae纤维素是一种阴离子交换剂，呈纤维状或颗粒状，为柱层析分离材料，交换基团为-O-CH2-CH2-N(C2H5)2是离子交换纤维素中使用最为广泛的一种，主要用于分离中性和酸性蛋白、多糖、核酸等物质。

使用参考指标：水分<15% 、交换容量 1mmol 床体积约为8ml/g（视溶液的PH值填充的压力不同而不同）PK值为9.1-9.5 适用PH值<8.6 。

DEAE-纤维素

/html/201109/3567688.html1.DE23（纤维状DEAE-纤维素）在去除细末后流速加快，适合用于负极生物聚合物DE32（干燥细颗粒DEAE-纤维素）功能如同DE52，但需预处理DE51（预溶胀细颗粒DEAE-纤维素）世上用是最广泛的DEAE纤维素填料，用于带低到高负极电荷生物聚合物，呈现优异的分辨率和良好的流速。

DE53（预溶胀细颗粒DEAE-纤维素）部分季铵化DEAE阴离子交换剂，具有比DE52更高取代和载量，能与DE51和DE52同时使用。

2.等电点7.2算是中性的，对于阴离子交换层析来说，你选用TRIS-HCL就行了，可以用8.5或者9.0的pH体系。

你最好别用7.8，这与你的等电点只差0.6，不一定能吸附得好，最好是差别有1个单位，就是8.2以上的。

蛋白质带的表面比净电荷越多，吸附得越强，要使用氯化钠的浓度越高才能洗脱，你如果选用7.8，那么不单只吸附不好，还比较容易洗脱下来，可能有点难与其它蛋白质分开。

缓冲系统所用的盐也是有离子强度的，所以不能选用浓度太大。

20mM TRIS-HCL 的电导率大概为1.5%，你别用太高了。

样品里的盐也最好去除得比较干净，因为如果盐浓度太高，会使得离子强度高，蛋白质没有被吸附就已经被洗脱了，吸附不上的。

3. 离子交换层析吸附蛋白质是依靠配基与蛋白质结合的，如果填料装填紧密，那么蛋白质会立即与空位的配基结合而被吸附，如果上柱洗脱得不集中，可能是填料装填得不紧密，蛋白质在填料的空隙走空，未能与配基接触。

层析柱能吸附的蛋白质量与蛋白质样品的体积无关，只与蛋白质含量有关，理论上只要蛋白质不超过配基量即可，所以蛋白质样品体积与层析柱体积没有必然关系。

我用柱床体积为20毫升的预装柱吸附过体积为350毫升的蛋白质样品，而淀粉酶不在穿透液中，全部在洗脱液中，原因就是层析柱的配基能全部吸附淀粉酶，无视样品体积。

PEG是线性分子，会在层析柱中残留，引起堵塞。

deae纤维素柱分离多糖流程

deae纤维素柱分离多糖流程1.首先将纤维素柱装入制备好的色谱柱层析系统。

First, install the cellulose column into the prepared chromatographic column system.2.使用缓冲液平衡纤维素柱，以确保色谱分离过程的稳定性。

Use buffer solution to equilibrate the cellulose column to ensure the stability of the chromatographic separation process.3.将待分离的多糖样品溶解在适当的溶剂中，并通过注射器加载到纤维素柱上。

Dissolve the polysaccharide sample to be separated in an appropriate solvent and load it onto the cellulose column through an injector.4.使用适当的流动相条件，让多糖样品在纤维素柱中发生吸附和解吸过程。

Use appropriate mobile phase conditions to allow the polysaccharide sample to undergo adsorption and desorption processes in the cellulose column.5.调整柱温和流速，以优化多糖的分离效果。

Adjust the column temperature and flow rate to optimizethe separation of polysaccharides.6.收集不同组分的洗脱液，并进行检测或进一步分离。

Collect the elution of different components and test or further separate them.7.若需要，可以反复进行洗脱和收集，直到得到纯净的多糖组分。

DEAE纤维素使用说明

DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。

由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。

它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。

本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。

2 填料特征：3 应用的注意事项：色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。

（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。

20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。

也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。

（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。

使用的流速要小于装柱子的流速。

（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。

蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。

蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。

deae纤维素离子交换柱规格

deae纤维素离子交换柱规格离子交换柱是一种常用的色谱柱，在分离和纯化生物大分子时具有重要作用。

其中，DEAE纤维素离子交换柱是一种常见的离子交换柱，可用于富集和纯化带有正电荷的生物大分子。

本文将对DEAE纤维素离子交换柱的规格进行详细介绍。

一、DEAE纤维素离子交换柱的原理DEAE纤维素离子交换柱是以正电离子交换作用为原理的柱层。

当样品通过柱层时，带正电荷的生物大分子会与带负电荷的DEAE纤维素发生静电吸附，从而实现分离和纯化。

二、DEAE纤维素离子交换柱的规格DEAE纤维素离子交换柱的规格主要包括柱层大小、填料类型和固定相载体。

下面将分别进行介绍。

1. 柱层大小柱层大小是指离子交换柱的长度和直径。

一般来说，DEAE纤维素离子交换柱的长度为10-30厘米，直径为1.0-2.5厘米。

柱层的尺寸决定了样品通过柱层的时间和分离效果。

较长的柱层可提供更长的分离路径，从而提高分离效果；而较大的直径则可增加样品的容量，使柱层能够承载更多的样品。

2. 填料类型填料类型是指DEAE纤维素离子交换柱所采用的具体填料种类。

常见的填料种类有手性亲水性的纤维素和水合凝胶。

这些填料种类具有良好的机械强度和吸附性能，适用于正电离子交换柱。

3. 固定相载体固定相载体是指填料表面的功能基团。

DEAE纤维素离子交换柱的固定相载体是一种强碱离子交换基团。

它能够有效地与带有正电荷的生物大分子发生静电作用，实现分离和纯化的目的。

三、DEAE纤维素离子交换柱的应用DEAE纤维素离子交换柱具有分离效果好、纯化能力强的特点，在生物大分子研究和工业生产中得到广泛应用。

它可以被用于蛋白质纯化、寡核苷酸富集和多肽分离等生物大分子的分离和纯化过程中。

四、DEAE纤维素离子交换柱的操作注意事项在使用DEAE纤维素离子交换柱时，需要注意以下几个方面：1. 预浸液的选择为了保证DEAE纤维素离子交换柱的性能，需要使用与样品相容的预浸液进行预浸。

预浸液的选择应根据样品的性质和离子交换柱的特点来确定。

DEAE纤维素DE使用说明

D E A E纤维素D E使用说明集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）DEAE-纤维素DE-52使用说明DEAE-纤维素(52)使用说明书一简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。

由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。

它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。

本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。

三、应用的注意事项：1) 色谱柱装填1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可.2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。

20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。

也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。

3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。

使用的流速要小于装柱子的流速。

4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。

2) 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。

二乙氨乙基(Dicthylaminoethyl,DEAE)纤维素层析简介

英文名称：DEAE cellulose DE-23CAS号：9000-11-7功能团：二乙氨乙基正常PH范围：2～9.5小离子电量：0.88～1.08meg/dg(dg=dry gram，千克重)蛋白容积：425mg/dg（蛋白体积是指0.01M ph8.5磷酸缓冲液—牛血清白蛋白）蛋白容积/柱体积：60mg/ml每升所需的离子交换剂㎏柱床体积：0.19（离子交换剂重量的数字考虑到溶胀，容易去除及使用过程中离子离子交换剩余颗粒）填料密度：0.15dg/ml（填料密度的状态为0.05M PH7.5磷酸缓冲液）性状：干燥纤维状层析技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相，以蛋白质等样品为移动相，分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素、多糖等的一项技术。

在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团，当结合阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。

如二乙氨乙基(Dicthylaminoethyl，DEAE)纤维素。

在纤维素上结合了DEAE，含有带正电荷的阳离子纤维素—O—C6 H14N+H，它的反离子为阴离子(如Cl-等)，可与带负电荷的蛋白质阴离子进行交换。

当结合阴离子基团时，可置换阳离子，称为阳离子交换剂，如羧甲基(Carboxymethy，CM)纤维素。

纤维素分子上带有负电荷的阴离子(纤维素－O－CH2－COO一)，其反离子为阳离子(如Na+等),可与带正电荷蛋白质阳离子进行交换。

溶液的pH值与蛋白质等电点相同时，静电荷为0，当溶液pH值大于蛋白质等电点时，则羧基游离，蛋白质带负电荷。

反之，溶液的pH值小于蛋白质等电点时，则氨基电离，蛋白质带正电荷。

溶液的pH值距蛋白质等电点越远，蛋白质的电荷越多。

反之则越少。

血清蛋白质均带负电荷，但各种蛋白质带负电荷的程度有所差异，以白蛋白为最多，依次为球蛋白，球蛋白和球蛋白。

在适当的盐浓度下，溶液的pH值高于等电点时，蛋白质被阴离子交换剂所吸附；当溶液的pH值低于等电点时，蛋白质被阳离子交换剂所吸附。

生物化学实验-DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白

然后用梯度洗脱法，即逐步改变洗脱液的pH值与离子强度使 DEAE纤维素与蛋白质的亲和力降低，可使不同蛋白质按其亲和力的大小不同而分步洗脱下来，从而达到分离提纯的目的。
实验器材
762分光光度计、梯度发生器、磁力搅拌器、量筒、漏斗、烧杯、试管、乳头吸管、移液管、玻璃棒、尼龙布、螺旋夹。
实验试剂
拌速度不宜过快，以免空气卷入液内）。将连接梯度发生器出口的细胶管连接管上，使液体流入层析管内。
拧松层析柱下端胶管的螺旋夹，控制流速约15滴/分，使洗脱液滴入收集管内。每管收集到约3ml，换管。收集完为止（15~20个管）。
6、检测用分光光度计测280nm光密度值（以0.01 ml/L Na2HPO4液作
实验八
DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白
实验目的
1. 掌握DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白的原理与方法。 2. 熟悉762紫外分光光度计的使用。
思考题
1. DEAE离子交换层析根据什么原理分离蛋白质？ 2. 为什么要预处理DEAE？ 3. 什么叫阳离子交换剂？阴离子交换剂？ 4. 通过DEAE纤维素32离子交换层析法分离血清蛋白所得收
• 将纤维素放到250ml的烧杯中，加40ml 0.5N NaOH浸泡30 分钟，弃上清。加蒸馏水100ml，搅拌后倾入有尼龙滤布的漏斗中。用蒸馏水充分洗涤，直到流出液pH≤8，滤去水分。
• 将上述纤维素放入250ml烧杯中，加入100ml 0.01mol/L Na2HPO4浸泡并搅动。必要时再重复此操作到溶液pH=离子，它能与溶液中其它的离子基团发生可逆的交换反应。平衡离子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用，称为阳离子交换剂；平衡离子带负电的离子交换剂与带负电的离子基团发生交换作用，称为阴离子交换剂。

deae纤维素柱层析洗脱蛋白质顺序

deae纤维素柱层析洗脱蛋白质顺序纤维素柱层析是一种常用的蛋白质纯化方法，它通过利用纤维素柱的亲水性特点来实现蛋白质的分离和纯化。

在纤维素柱层析中，洗脱蛋白质的顺序通常是根据蛋白质的特性和亲水性进行调整的。

下面将按照一种常见的顺序介绍纤维素柱层析洗脱蛋白质的步骤。

一、以分子量大小为基础的洗脱顺序在纤维素柱层析中，一种常见的洗脱顺序是根据蛋白质的分子量大小来进行的。

大分子量的蛋白质通常具有较强的亲水性，因此会在纤维素柱上停留时间较长。

而小分子量的蛋白质则相对亲水性较弱，会在纤维素柱上停留时间较短。

因此，可以通过调整洗脱缓冲液的浓度和成分来实现蛋白质的分离和纯化。

二、以等电点为基础的洗脱顺序等电点是指蛋白质在特定条件下具有净电荷为零的pH值。

在纤维素柱层析中，也可以根据蛋白质的等电点来进行洗脱。

具有不同等电点的蛋白质在不同pH值下会具有不同的净电荷，从而在纤维素柱上停留时间不同。

因此，可以通过调整洗脱缓冲液的pH值来实现蛋白质的分离和纯化。

三、以亲水性为基础的洗脱顺序在纤维素柱层析中，蛋白质的亲水性也是影响其洗脱顺序的重要因素。

亲水性较强的蛋白质会在纤维素柱上停留时间较长，亲水性较弱的蛋白质则相对停留时间较短。

因此，可以通过调整洗脱缓冲液的成分和浓度来实现蛋白质的分离和纯化。

四、其他因素的影响除了分子量、等电点和亲水性外，还有一些其他因素也会影响蛋白质在纤维素柱上的洗脱顺序。

例如，蛋白质的溶解度、电荷性质、结构特点等都可能会对洗脱顺序产生影响。

在实际操作中，需要根据具体的蛋白质特性来选择最适合的洗脱条件，以实现高效的纯化。

纤维素柱层析洗脱蛋白质的顺序可以根据蛋白质的特性和亲水性来调整。

常见的洗脱顺序包括以分子量大小、等电点和亲水性为基础的洗脱顺序。

此外，还需要考虑蛋白质的溶解度、电荷性质和结构特点等因素。

通过合理调整洗脱缓冲液的浓度、成分和pH值等参数，可以实现蛋白质的高效分离和纯化。

纤维素柱层析是一种简便有效的蛋白质纯化方法，广泛应用于生物学和生物化学领域。

deae纤维素柱分离多糖流程

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材料：DEAE纤维素柱。

DEAE纤维素膜法凝胶回收DNA

方法：1、消化一定量DNA以收获至少loong目的片段DNA.用含有0.5ug/ml EB的适当浓,度的琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段.用手提式长波紫外灯对目的条带进行定位.EB-DNA复合物的激发会导致染料的光猝灭以及单链DNA的破坏.用302nm擅长光源取代254nm光源将会降低这两种危害.2、用锋利的刀片或剃刀在紧靠目的条带前的凝胶上切一切口,其两边比条带宽约2mm.如果需从整个琼脂糖泳道上洗脱DNA(如哺乳动物细胞基因组DNA的限制酶消化物),在凝胶上与目的泳道平行的位置做一切口,在切口处插入一长条DEAE 纤维素膜(同步骤3) ．调整凝胶的方向使DNA可以从凝胶中电泳转移至膜上.电泳结束后,取出膜,切成小片.从适当的膜段上洗脱所需大小的DNA(步骤7-11)3、戴上手套,切一块与切口等宽而比凝胶稍深(1mm)的DEAE-纤维素膜.在10mmol/LEDTA(pH8.0) 室温浸泡5min后,用0.5mol/L NaOH取代EDTA浸泡以活化DEAE-纤维素膜.再次室温5min后,用无菌水冲洗6次4、用平头慑子将切口壁撑开,将膜插入裂缝中.取出镊子,使切口闭合,小心勿留气泡.降低非目的DNA污染的概率,可以采取以下措施之一：将含有目的条带的凝胶切下,转移到凝胶另一个区域切成适当大小的小洞中.DNA条带.在目的条带的后面插入第二张膜来截留不需要的DNA.5、继续电泳(5V/cm)直至DNA条带迁移到膜上.电泳过程中,可以用手提式长波紫外灯(302nm)进行跟踪检测.继续电泳的时间尽可能短,只要DNA从凝腔中转移到膜上即可.过长时间的电泳会导致其他DNA 的交叉污染(见上文)和琼脂糖中污染物不必要的累积.6、当所有目的DNA离开凝胶被收集到膜上时,切断电流.用平头镊子从凝胶中取出膜,室温下,用5-10ml DEAE低盐缓冲液将膜漂洗一下,以除去膜上的琼脂糖.不要让膜完全干燥,否则导致DNA发生不可逆的结合.7、将膜转移到另一个微量离心管中,加足量的DEAE高盐洗脱缓冲液使膜完全被浸没.轻轻的将膜弄皱或对折,但不要压紧.盖上离心管盖,于65℃温育30min.不时地检查,不要让膜伸展到缓冲面上.8、从膜上洗脱DNA的过程中,如方案2描述的那样对凝胶成像,记录被分离出的条带.9、步骤7的液体转移到另一微量离心管,再加入足量的DEAE高盐洗脱缓冲液65℃温育15min.合并两份DEAE高盐溶液.在紫外灯下检查,确证膜上不再有可见的被EB染色的DNA痕迹.然后弃去用过的膜.10、高盐洗脱液用酚：氯仿抽提一次.水相转移到另一离心管.加入0.2倍体积的10mol/L乙酸铵,2倍体积的4℃乙醇.室温放置10min.用微量离心机室温以最大转速离心10min.用70％乙醇小心洗沉淀.打开离心管几分钟,使乙醇完全挥发.再将DNA重溶到3-5ulTE(pH8.0).在沉淀以前加入10ug转移RNA.可以改善少量DNA回收的效果．但是在加入载体RNA 之前必须确定RNA不会影响DNA以后作为底物或模板的酶促反应.11、如果需要极纯的DNA(如用于小鼠受精卵的显微注射或培养细胞电穿孔照下述方法用乙醇再沉淀DNA.a．用200 ulTE(pH8.0)悬浮DNA,加入25ul 3mol／L体积的乙醇重新沉淀DNA.b．4 ℃微量离心机最大速度离心5-15min,回收DNA.c．70 ％乙醇小心漂洗沉淀.打开离心管几分钟,使乙醇完全挥发.将DNA溶于3-5 ulTE(pH8.0).12、通过凝胶电泳对DNA进行定性和定量.将少量(10-50ng) 最终制备的DNA片段与10ul TE(pH8.0)混合,加入2ul所需的凝胶载样缓冲液.加样并在适当浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳,以已知量的经用适当限制酶消化的原DNA 作为参照物标准和分子质量标准.分离的片段应该与限制酶消化产物中的相应片段同步迁移.仔细检查凝胶,看是否有弱荧光带存在.弱荧光带存在表明有DNA污染。