单克隆抗体的制备 演示文稿
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单克隆抗体的制备及应用ppt

免疫动物的选择:一般的杂交瘤生产都选用BALB/c小鼠或LOU/c大鼠作为免疫动物。但是,有时为了特殊目的而需进行种间杂交,则可免疫其他动物。就小鼠而言,初次免疫时以8-12周龄为宜,雌性鼠较便于操作。
免疫程序的确定:在设计免疫程序时,应考虑到抗原的性质和纯度、抗原量、免疫途径、免疫次数与间隔时间、佐剂的应用及动物对该抗原的应答能力等。没有一个免疫程序能适用于各种抗原。
病原微生物抗原、抗体的检测
作为检验医学实验室的诊断试剂,单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点,广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用,很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。
农兽药快速检测
农兽药属于小分子物质,半抗原,无免疫原性,不 能刺激动物产生抗体,必须先将其制备成人工抗原, 以人工抗原免疫动物,使动物的免疫系统发生应答反 应,从而制备出对该农药具特异性的多或单克隆抗体 国外已制备多种农兽药单克隆抗体并应用于农药和兽 药残留的免疫分析。
1
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作为免疫抑制剂
抗人T淋巴细胞单抗(McAb)作为一种新型免疫抑制剂,已广泛应用于临床治疗自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反应,其作用机理有赖于McAb的种类及其免疫学特性。
例子:对于同种骨髓移植的供体骨髓,在体外经抗T细胞单抗加补体处理,能够减轻移植物抗宿主病的发生。
作为研究工作中的探针
利用单克隆抗体的特性可把它作为研究工作中的探针。此时,可以从分子、细胞和器官的不同水平上,研究抗原物质的结构与功能关系,进而可以从理论上阐明其机理。
这种杂交瘤,通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系,即杂交瘤细胞系,它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体,即所谓单克隆抗体( mAbs ),简称单抗。
单克隆抗体制备的技术演示课件

1 抗原提纯与动物免疫 2 骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备 3 细胞融合 4 抗体检测 5 杂交瘤的克隆化和冻存 6 McAB的制备 7 单克隆抗体的纯化
免疫成功的标志是在融合时脾脏能够提 供处于增殖状态的特异性B细胞,此时血 清中抗体效价不一定最高。
可溶性抗原10-15ug/100ul+等量弗氏完 全佐剂注射小鼠腹腔2-4周后加强免疫 (量减半,改用不完全佐剂,可反复多 次)冲击免疫(融合前3天进行)
选用6-12周龄Balb/c小鼠
颗粒性抗原免疫性较强,不加佐剂就可获得很 好的免疫效果
可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂
目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的 免疫方案也不断有所更新,如①将可溶性抗原 颗粒化或固相化,一方面增强了抗原的免疫原 性,另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗 原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。 ③使用细胞因子作为佐剂,提高机体的免疫应 答水平,促进免疫细胞对抗原反应性。
脾
抗原免疫的脾细胞(B细胞) 小鼠骨髓瘤细胞(B细胞恶性肿瘤)
1.抗体分秘(IgG+)
1.具永生性
2.HGPRT+在HAT生长
2. 8AG筛选出HGPTP-株
PEG 融合 HAT筛选
脾-骨髓瘤细胞(杂交瘤细胞)
(HGPRT+、Ig+)
融合的结果及命运
未融合的骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
克隆化方法:有限稀释法、软琼脂平板法、显 微克隆法
阳性杂交瘤细胞应及时冻存,防染色体丢失、 变异及污染
单抗生产的方法:
动物体内诱生法:小鼠腹腔注射降植丸 或液体石蜡,1周后腹腔注射杂交瘤细胞, 7-10天后出现腹水,无菌采集。
免疫成功的标志是在融合时脾脏能够提 供处于增殖状态的特异性B细胞,此时血 清中抗体效价不一定最高。
可溶性抗原10-15ug/100ul+等量弗氏完 全佐剂注射小鼠腹腔2-4周后加强免疫 (量减半,改用不完全佐剂,可反复多 次)冲击免疫(融合前3天进行)
选用6-12周龄Balb/c小鼠
颗粒性抗原免疫性较强,不加佐剂就可获得很 好的免疫效果
可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂
目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的 免疫方案也不断有所更新,如①将可溶性抗原 颗粒化或固相化,一方面增强了抗原的免疫原 性,另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗 原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。 ③使用细胞因子作为佐剂,提高机体的免疫应 答水平,促进免疫细胞对抗原反应性。
脾
抗原免疫的脾细胞(B细胞) 小鼠骨髓瘤细胞(B细胞恶性肿瘤)
1.抗体分秘(IgG+)
1.具永生性
2.HGPRT+在HAT生长
2. 8AG筛选出HGPTP-株
PEG 融合 HAT筛选
脾-骨髓瘤细胞(杂交瘤细胞)
(HGPRT+、Ig+)
融合的结果及命运
未融合的骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
克隆化方法:有限稀释法、软琼脂平板法、显 微克隆法
阳性杂交瘤细胞应及时冻存,防染色体丢失、 变异及污染
单抗生产的方法:
动物体内诱生法:小鼠腹腔注射降植丸 或液体石蜡,1周后腹腔注射杂交瘤细胞, 7-10天后出现腹水,无菌采集。
单克隆抗体制备 ppt课件

实验研究的目的性 — 功能、形态、数量 实验设计的科学性 — 全面、动态、鲜明、对应、对照 实验方法的合理性 — 确切、先进 实验原理的内涵性 — 意义、要点 实验操作的规范性 — 准备、严格、准确、重复
单克隆抗体制备
1
免疫血清和单克隆抗体的制备
单克隆抗体制备
2
一、免疫血清的制备
1. 原理: 机体具有多种B细胞克隆,将适当的抗原物质注入人
单克隆抗体制备
4
4. 抗原的处理
1)颗粒性抗原:红细胞、菌体等制成悬液,不需佐 剂,直接免疫。菌体数1×1010个/ml 为宜。
2)可溶性蛋白质抗原(如人IgG)、病毒抗原、细菌 可溶性抗原组分等,可以直接与弗氏完全佐剂
(1:1 V/V)混合、乳化。 3)半抗原(多糖、多肽、激素、化学药品)需与载
2. 种类
1)卡介苗(BCG)、短小棒状杆菌(CP)、脂
多糖(LPS)、细胞因子;
2)氢氧化铝、明矾;
3)双链多聚肌苷酸:胞苷酸(poly I:C)和双
链多聚腺苷酸:鸟苷酸(poly A:U);
4)矿物油、脂质体、免疫刺激复合物
(ISCOMs)、CPG单克寡隆抗核体制备苷酸。
6
3. 弗氏完全佐剂
1)成分:羊毛脂、液体石蜡和灭活卡介苗。 2)配方:羊毛脂:液体石蜡 为1:2,也可1:1。
体偶联。常用载体有牛血清白蛋白(BSA)、钥 孔嘁血蓝素(KLH)、鸡血清蛋白(OA);偶联剂 有过碘酸钠、戊二醛和碳化二亚胺等。KLH是最 常用的载体蛋白,碳化二亚胺是最常用的偶联
剂。
单克隆抗体制备
5
佐剂
1. 概念
佐剂属非特异性免疫增强剂,与抗原一起注射或
预先注入机体时,可增强机体免疫应答或改变免疫应 答的类型。
单克隆抗体制备
1
免疫血清和单克隆抗体的制备
单克隆抗体制备
2
一、免疫血清的制备
1. 原理: 机体具有多种B细胞克隆,将适当的抗原物质注入人
单克隆抗体制备
4
4. 抗原的处理
1)颗粒性抗原:红细胞、菌体等制成悬液,不需佐 剂,直接免疫。菌体数1×1010个/ml 为宜。
2)可溶性蛋白质抗原(如人IgG)、病毒抗原、细菌 可溶性抗原组分等,可以直接与弗氏完全佐剂
(1:1 V/V)混合、乳化。 3)半抗原(多糖、多肽、激素、化学药品)需与载
2. 种类
1)卡介苗(BCG)、短小棒状杆菌(CP)、脂
多糖(LPS)、细胞因子;
2)氢氧化铝、明矾;
3)双链多聚肌苷酸:胞苷酸(poly I:C)和双
链多聚腺苷酸:鸟苷酸(poly A:U);
4)矿物油、脂质体、免疫刺激复合物
(ISCOMs)、CPG单克寡隆抗核体制备苷酸。
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3. 弗氏完全佐剂
1)成分:羊毛脂、液体石蜡和灭活卡介苗。 2)配方:羊毛脂:液体石蜡 为1:2,也可1:1。
体偶联。常用载体有牛血清白蛋白(BSA)、钥 孔嘁血蓝素(KLH)、鸡血清蛋白(OA);偶联剂 有过碘酸钠、戊二醛和碳化二亚胺等。KLH是最 常用的载体蛋白,碳化二亚胺是最常用的偶联
剂。
单克隆抗体制备
5
佐剂
1. 概念
佐剂属非特异性免疫增强剂,与抗原一起注射或
预先注入机体时,可增强机体免疫应答或改变免疫应 答的类型。
高中生物单克隆抗体制备(共38张PPT)

2、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步? 3、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同?
1.1动物细胞融合的概念
鼠B淋巴细胞 鼠骨髓瘤细胞
人工诱导
动物细胞融合(细胞杂交)
是指(在一定的条件下)两
个或多个细胞结合形成一个
细胞(该单核细胞称为杂交
细胞)的过程。
杂交瘤细胞
问题:1、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步? 2、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同?
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
3.若细胞两两融合后, 有几种融合情况?
选择性培养基 筛选1 克隆化
多种杂 交细胞
抗原-抗体 杂交法
筛选2(有限稀释)
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
4.第一次筛选出的杂交瘤
细胞为何需进行克隆化培
选择性培养基 筛选1
养和专一抗体检测?
多种杂
( 特异性强、灵敏度高,可大量制备)
(4)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 迅速( 大量增殖 )特点,又具备淋巴细胞 的( 分泌专一抗体)特点,经过选择性培养 的杂交瘤细胞,还需进行( 克隆化培养 ) 和( 抗体检测 ),经多次筛选,就可获得足
够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂 交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或小 鼠腹腔内增殖,从( 细胞培养液 )或 ( 小鼠的腹水 )中,就可以提取出大量 的单克隆抗体了。
一个效应bb细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞动物细胞培养技术44单克隆抗体的制备方案动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体又能大量繁殖的细胞一个骨髓瘤细胞能无限增殖制备单克隆抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验5单克隆抗体制备过程步骤注射抗原效应bb细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基筛选11抗原抗体杂交法克隆化单克隆抗体筛选22有限稀释1
1.1动物细胞融合的概念
鼠B淋巴细胞 鼠骨髓瘤细胞
人工诱导
动物细胞融合(细胞杂交)
是指(在一定的条件下)两
个或多个细胞结合形成一个
细胞(该单核细胞称为杂交
细胞)的过程。
杂交瘤细胞
问题:1、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步? 2、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同?
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
3.若细胞两两融合后, 有几种融合情况?
选择性培养基 筛选1 克隆化
多种杂 交细胞
抗原-抗体 杂交法
筛选2(有限稀释)
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
4.第一次筛选出的杂交瘤
细胞为何需进行克隆化培
选择性培养基 筛选1
养和专一抗体检测?
多种杂
( 特异性强、灵敏度高,可大量制备)
(4)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 迅速( 大量增殖 )特点,又具备淋巴细胞 的( 分泌专一抗体)特点,经过选择性培养 的杂交瘤细胞,还需进行( 克隆化培养 ) 和( 抗体检测 ),经多次筛选,就可获得足
够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂 交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或小 鼠腹腔内增殖,从( 细胞培养液 )或 ( 小鼠的腹水 )中,就可以提取出大量 的单克隆抗体了。
一个效应bb细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞动物细胞培养技术44单克隆抗体的制备方案动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体又能大量繁殖的细胞一个骨髓瘤细胞能无限增殖制备单克隆抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验5单克隆抗体制备过程步骤注射抗原效应bb细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基筛选11抗原抗体杂交法克隆化单克隆抗体筛选22有限稀释1
单克隆抗体的制备演示文稿课件

疾病诊断
用于检测疾病标志物,协助医生对疾病进行 早期诊断和预后评估。
药物开发
作为药物载体或治疗性抗体,用于疾病的诊 断和治疗。
免疫治疗
作为免疫治疗药物,用于治疗癌症、自身免 疫性疾病等。
02
单克隆抗体的制备过程
免疫原的制备
免疫原的纯度
确保免疫原的纯度高,无杂质和其他蛋白质的污染, 以提高免疫反应的特异性。
阳性细胞的筛选
筛选出能产生所需抗体的 阳性细胞株。
克隆化筛选
对阳性细胞株进行克隆化 筛选,确保其具有稳定的 遗传特性。
抗体的大量制备
细胞培养扩增
将筛选得到的杂交瘤细胞进行扩 增培养,以获得大量的抗体。
抗体纯化
采用适当的纯化方法,如凝胶过 滤、离子交换或亲和层析,去除 细胞培养上清中的杂质,获得高 纯度的抗体。
单克隆抗体的制 备演示文稿课件
目录
• 单克隆抗体的基本概念 • 单克隆抗体的制备过程 • 单克隆抗体的质量控制 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的未来发展
01
单克隆抗体的基本概念
单克隆抗体的定义
单克隆抗体(Monoclonal Antibody, mAb):是由单一B细胞克隆产生的高度均 一、具有特异性的抗体。
抗体纯度的检测
蛋白含量
通过电泳、质谱等技术,检测单克隆抗体中的杂质成分,确保产品的纯度和安全性。
04
单克隆抗体的应用实例
在医学诊断中的应用
肿瘤诊断与治疗监测
单克隆抗体可以特异结合肿瘤相关抗原,用于肿瘤的早期诊断、分型、病情监测和预后评估。例如, 针对癌胚抗原(CEA)的单克隆抗体在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤的诊断和治疗中广泛应用。
05
单克隆抗体的未来发展
用于检测疾病标志物,协助医生对疾病进行 早期诊断和预后评估。
药物开发
作为药物载体或治疗性抗体,用于疾病的诊 断和治疗。
免疫治疗
作为免疫治疗药物,用于治疗癌症、自身免 疫性疾病等。
02
单克隆抗体的制备过程
免疫原的制备
免疫原的纯度
确保免疫原的纯度高,无杂质和其他蛋白质的污染, 以提高免疫反应的特异性。
阳性细胞的筛选
筛选出能产生所需抗体的 阳性细胞株。
克隆化筛选
对阳性细胞株进行克隆化 筛选,确保其具有稳定的 遗传特性。
抗体的大量制备
细胞培养扩增
将筛选得到的杂交瘤细胞进行扩 增培养,以获得大量的抗体。
抗体纯化
采用适当的纯化方法,如凝胶过 滤、离子交换或亲和层析,去除 细胞培养上清中的杂质,获得高 纯度的抗体。
单克隆抗体的制 备演示文稿课件
目录
• 单克隆抗体的基本概念 • 单克隆抗体的制备过程 • 单克隆抗体的质量控制 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的未来发展
01
单克隆抗体的基本概念
单克隆抗体的定义
单克隆抗体(Monoclonal Antibody, mAb):是由单一B细胞克隆产生的高度均 一、具有特异性的抗体。
抗体纯度的检测
蛋白含量
通过电泳、质谱等技术,检测单克隆抗体中的杂质成分,确保产品的纯度和安全性。
04
单克隆抗体的应用实例
在医学诊断中的应用
肿瘤诊断与治疗监测
单克隆抗体可以特异结合肿瘤相关抗原,用于肿瘤的早期诊断、分型、病情监测和预后评估。例如, 针对癌胚抗原(CEA)的单克隆抗体在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤的诊断和治疗中广泛应用。
05
单克隆抗体的未来发展
单克隆抗体的制备.ppt

单克隆抗体的鉴定
单克隆抗体纯度的鉴定:用SDS一PAGE电泳鉴定纯度 单克隆抗体敏感性(IC50)值的测定:间接竞争ELISA实验中,一般是通过IC50值来判断抗体对CAP的 敏感性,故用7个不同偶联比的HAP一OVA进行ELISA实验,测定不同偶联比的包被抗原对应的IC50 值。 单克隆抗体特异性的测定(交叉反应) 做间接竞争ELIsA,计算各自的ICS。值,计算交叉反应率。
单克隆抗体的制备
Monocolonal antibody
丁乔棋 2015年8月9号
什么是单克隆抗体?
1、单克隆抗体(monoclonal antibodies, mAb): 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细 胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体 称为单 克隆抗体。 与多抗相比,单抗纯度高,专一性强、重复性好、且能持续地无限量 供应。
体外培养法: a、悬浮培养法 b、微载体培养法 Microcarrier c、中空纤维细胞培养系统 d、微囊化细胞培养系统
收集细胞培养瓶中的杂交瘤细胞以备注入小鼠腹腔诱生腹水时,一定要用 无血清培养液多离心几次,将细胞培养液含有的牛血清洗净,防止牛血清进入 了小鼠腹腔使小鼠死亡。小鼠的选择上一定要选择活力好、腹腔大的小鼠。当 小鼠腹腔开始发胀后,每天密切关注小鼠状态,
单克隆抗体的制备步骤
七:杂交瘤细胞的冻存与复苏
细胞冷冻的意义 防止污染 、 避免 1:在建立杂交瘤细胞的过程中,有时一次融合产生很多“阳性”孔 染色体丢失、防止 ,来不及对所有的杂交瘤细胞作进一步的工作,需要把其中一部分细 非分泌细胞的过度 胞冻存起来;另一方面,为了防止实验室可能发生的意外事故。 生长、防止细胞密 度过高而死亡
单克隆抗体的制备和应用演示文稿

七、单克隆抗体的鉴定
免疫球蛋白类别及亚类的鉴定
小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合形 成的杂交瘤细胞,其分泌的特异性McAb的本 质仍是小鼠的不同类型及其亚类的免疫球蛋白 (Ig),其中以IgG(IgG1、 IgG2a、IgG2b和IgG3 等亚类)最常見,其次为IgM。
第36页,共58页。
特异性 是否与其他抗原有交叉反应
第25页,共58页。
第26页,共58页。
用于杂交瘤融合的骨髓细胞缺乏HGPRT和TK, 在HAT培养液中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏 HGPRT和TK ,不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的B淋巴细胞虽具有HGPRT和TK ,但其本 身不能在体外长期存活也逐渐死亡。
只有骨髓瘤细胞与免疫B细胞融合的杂交瘤既 有骨髓瘤细胞无限增殖的能力,又从免疫B细胞得到 HGPRT和TK 的基因产物,因此,能够克服氨基碟 呤的阻断作用,通过次黄嘌呤的补偿途径合成DNA, 而在HAT选择培养液中生长繁殖。
若用一种肿瘤细胞与另一种体细胞(如淋巴细 胞)融合,所形成的杂交细胞称为杂交瘤细胞,简 称杂交瘤。其既具有肿瘤细胞无限增殖的能力,也 具有淋巴细胞的一些特性
• B淋巴细胞杂交瘤
骨髓瘤细胞与免疫B细胞融合所产生的杂 交瘤
细胞
第10页,共58页。
B淋巴细胞杂交瘤技术的基本原理
骨髓瘤细胞
B细胞
杂交瘤细胞
• 肿瘤 多种肿瘤的标志物
直肠结肠癌:CEA 前列腺癌:PSA 原发性肝癌:AFP 淋巴瘤和白血病:CD分子 • 自身免疫性和过敏性疾病
自身抗体(抗核抗体、类风湿因子)
放射免疫测定法(RIA)检测特异性IgE 甲状腺素、胰岛素、生长激素
• 其他
血型检测:凝集反应(直接和间接) 早孕: 人绒毛膜促性腺激素(hCG) 男性不育: 抗精子抗体
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•解析: 解析: 解析 (1)试管中有人的淋巴细胞和小鼠骨髓 ) 瘤细胞,在促溶剂的作用下,可能出现以下3 瘤细胞,在促溶剂的作用下,可能出现以下 种细胞的融合情况, 种细胞的融合情况,人的淋巴细胞和淋巴细胞 融合,小鼠的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合, 融合,小鼠的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合, 人的淋巴细胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合, 人的淋巴细胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合,实验 需要的是第3种细胞 即杂交瘤细胞; 种细胞, 需要的是第 种细胞,即杂交瘤细胞; (2)要将杂交瘤细胞分离出来,可以在 )要将杂交瘤细胞分离出来, 培养液中加入氨基嘌呤,收集增殖的细胞; 培养液中加入氨基嘌呤,收集增殖的细胞;加 入氨基嘌呤后, 合成途径阻断, 入氨基嘌呤后,使D合成途径阻断,仅有 合成 合成途径阻断 仅有D合成 途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能 增殖, 增殖,但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂 种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成 种细胞中可以利用淋巴细胞中的 途径合成 DNA而增殖。 而增殖。 而增殖
3、整个制备过程为何要经过两次筛选? 整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选得到杂交瘤细胞(多种), 第一次筛选得到杂交瘤细胞(多种), 杂交瘤细胞 第二次需先在多孔培养板上,在每孔只 第二次需先在多孔培养板上,在每孔只 有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养 杂交瘤细胞的情况下开始培养, 有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养,然后 再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得 单个杂交瘤细胞 来的, 来的,所以产生的抗体必然是化学性质单一 特异性强的单克隆抗体。 的,特异性强的单克隆抗体。 这里的单克隆的确有单个细胞克隆的含 这里的单克隆的确有单个细胞克隆的含 单克隆的确有单个细胞 只不过克隆的不是B淋巴细胞,而是杂 义,只不过克隆的不是B淋巴细胞,而是杂 交瘤细胞。 交瘤细胞。
植物、 植物、动物细胞融合的比较
比较项目 原理 融合前处理方法 植物体细胞杂交 动物细胞融合
诱导方法 用 途
植物、 植物、动物细胞融合的比较
比较项目 原理 融合前的处理方法 诱导方法 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 物理法(离心、 物理法(离心、振 电刺激) 荡、电刺激) 化学法(聚乙二醇) 化学法(聚乙二醇) 用 途 获得杂种植株 动物细胞融合 细胞膜的流动性 使细胞分散后诱 导细胞融合 物理、 物理、化学方法 同左) (同左) 灭活的病毒 主要用于制备 单克隆抗体
4、细胞融合后培养液中有几种细胞 、 B BB B瘤 瘤瘤 瘤 瘤
单克隆抗体的 应用
小结
动物细胞融合的原理和诱导方法 单克隆抗体制备过程 一个诱导细胞融合的新方法--灭活的病毒 一个诱导细胞融合的新方法-- 三个“ 三个“一”
一个新细胞-- 一个新细胞--
杂交瘤细胞
特异性强、 单克隆抗体 :特异性强、灵敏度高的优势 一个优势-- 一个优势--
单克隆抗体
视频\单克隆抗体的制备 视频 单克隆抗体的制备.flv 单克隆抗体的制备
思考: 思考:
1、本过程利用了哪些技术? 、本过程利用了哪些技术?
细胞融合技术和动物细胞培养技术
2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合? 细胞融合?
这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传 这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传 双亲细胞 物质,不仅具有B细胞分泌抗体的能力 细胞分泌抗体的能力, 物质,不仅具有 细胞分泌抗体的能力,而且还有 无限增殖的本领 的本领, 无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体
2、特点: 特异性强、灵敏度高 、特点: 特异性强、
遗憾的是… … 单克隆抗体制备过程? 单克隆抗体制备过程?
单克隆抗体制备 过程
单克隆抗体制备过程
注射抗原 B淋巴细胞 淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选, 筛选,继续培养 足够数量的、 足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群 体外培养、举例说出动物细胞融合的原理和 、 应用 2、单克隆抗体的制备和应用 、
一、动物细胞融合
1、概念: 、概念:
2、过程: 细胞 、过程: 细胞A
物理法 化学法
细胞B 细胞
仙台病毒
灭活的病毒
杂种细胞
病毒颗粒 细胞核 细胞核
用
灭活的病毒
诱导动物细胞融合过程
思考讨论: 思考讨论: 1、灭活的病毒诱导细胞融合的原理是: 灭活的病毒诱导细胞融合的原理是: 2、为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活? 为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活?
•已知细胞合成 已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中 两条途径, 已知细胞合成 有 和 两条途径 其中D 途径能被氨基嘌呤阻断, 途径能被氨基嘌呤阻断,人淋巴细胞中有这两 的合成途径, 种DNA的合成途径,但一般不分裂增殖。鼠 的合成途径 但一般不分裂增殖。 骨髓瘤细胞尽管没有S途径 途径, 骨髓瘤细胞尽管没有 途径,但能不断分裂增 将这两种细胞在试管中混合, 殖,将这两种细胞在试管中混合,加聚乙二醇 促融,获得杂交瘤细胞,请回答: 促融,获得杂交瘤细胞,请回答: (1)试管中除融合的杂交瘤细胞外,还 )试管中除融合的杂交瘤细胞外, 种融合细胞。 有_____________种融合细胞。 种融合细胞 (2)设计一方法(不考虑机械方法), )设计一方法(不考虑机械方法), 从培养液中分离出杂交瘤细胞,并说明原理。 从培养液中分离出杂交瘤细胞,并说明原理。 方法: 方法: 原理: 原理:
3、B淋巴细胞有什么特点? 、 淋巴细胞有什么特点 淋巴细胞有什么特点? ).B淋巴细胞受抗原刺激 抗原刺激后 (1).B淋巴细胞受抗原刺激后,可 以产生抗体 抗体。 以产生抗体。 ).动物体内的 动物体内的B (2).动物体内的B淋巴细胞可以产 百万种以上的抗体 的抗体, 生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的 抗原具有特异性免疫作用。 抗原具有特异性免疫作用。 ).每一个淋巴细胞只能产生一 每一个淋巴细胞只能 (3).每一个淋巴细胞只能产生一 种抗体。 种抗体。
教学目标巩固
1.动物细胞工程技术的基础是:( C 动物细胞工程技术的基础是:( 动物细胞工程技术的基础是 A.动物细胞融合 . B.胚胎移植 . C.动物细胞培养 . D.核移植 . )
教学目标巩固
2.在动物细胞融合和植物体细胞杂交的 比较中, 比较中,正确的是 ( B ) A.结果是相同的 . B.杂种细胞的形成过程基本相同 . C.操作过程中酶的作用相同 . D.诱导融合的手段相同 .
•变式训练 变式训练 •生产单克隆抗体时,要在培养液中加入某种试 生产单克隆抗体时, 生产单克隆抗体时 剂才能筛选出杂交瘤细胞, 剂才能筛选出杂交瘤细胞,因为该试剂 •A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制 .能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的 复制 •B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 . •C.选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 .选择性抑制骨髓瘤细胞的 复制 •D. 能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的 . 合成
单克隆抗体
二、单克隆抗体
1、什么是抗体?其本质是什么? 、什么是抗体?其本质是什么?
抗体是机体受抗原刺激后产生的、 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生 特异性结合的具有免疫功能的球蛋白 球蛋白。 特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么? 、传统的抗体生产方法及缺陷是什么? 抗体是从何来的? 淋巴细胞产生抗体。 抗体是从何来的?B淋巴细胞产生抗体。 3、B淋巴细胞有什么特点? 、 淋巴细胞有什么特点 淋巴细胞有什么特点?
单克隆抗体及特点: 单克隆抗体及特点:
单克隆抗体及特点: 单克隆抗体及特点: 特点
1、单克隆抗体: 、单克隆抗体:
由单个B淋巴细胞经过无性繁殖( 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克 无性繁殖 ),形成基因型相同的细胞群 形成基因型相同的细胞群, 隆),形成基因型相同的细胞群,这一 细胞群所产生的化学性质单一 性质单一、 细胞群所产生的化学性质单一、特异性 的抗体称为单克隆抗体。 强的抗体称为单克隆抗体。
教学目标巩固
单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 3. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和 淋巴细胞 诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞, 诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞, 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( C ) ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A. ②④ . C. ①②③④ . B.①③⑤ . D.②③ .