微生物革兰氏染色法和芽孢染色法

实验二
革兰氏染色法和芽孢Βιβλιοθήκη Baidu色法
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革兰氏染色法
实验目的
学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染 色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
实验原理
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由 丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年 创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
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革兰氏染色原理
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细菌芽孢染色法
实验步骤
1）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴，涂片，固定 水洗 番红染液复染23min，倾去染液，水洗 镜检 2）Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检
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实验结果
营养细胞（红色） 芽孢（绿色）
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第一步：初染:结晶紫使菌体着上蓝紫色； 第二步：媒染:碘和结晶紫形成大分子复 合物，能被细胞壁阻留在细胞内；第三 步：酒精脱色:细胞壁成分和构造不同， 出现不同的反应——G+菌：细胞不能被 酒精脱色，仍呈紫蓝色；G-菌：酒精将 细胞脱色，细胞无色；第四步:番红复染， G-菌呈红色， G+菌呈紫蓝色。
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芽孢染色法原理
用弱碱性染料孔雀绿在加热条件下染色，使染料 不仅进入菌体，也可进入芽孢内。进入菌体的染 料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色后难以被水 洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保 留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色， 使芽孢和菌体易于区分。
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细菌芽孢染色法
实验器材 1）菌种：枯草芽孢杆菌 2）染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番 红水溶液 3）器材：显微镜、滴管、酒精灯、载玻 片、接种环等
注：乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色 不足，阴性菌被染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被 染成阴性菌
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实验结果
阳性菌（蓝紫色） 阴性菌（红色）
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细菌芽孢染色法
实验目的
学习并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢杆 菌的形态特征。
实验原理
芽孢：某些细菌在一定的环境条件下，能在 菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的 休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。
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革兰氏染色法
实验器材
1）菌种： 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌 2）染色剂：结晶紫，番红 3）器材：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、
双层瓶、擦镜纸等
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革兰氏染色法
实验步骤
混合涂片法涂片、干燥、固定 结晶紫初染1min， 水洗 碘液媒染1min，水洗 用滤纸吸去残水后， 将玻片倾斜，在白色背景下，用95%乙醇脱色，直至 流出的乙醇无色时，立即水洗 番红复染2min，水 洗 干燥后，镜检