分光光度法-生化实验
生化实验
实验一：分光光度法一：定义：分光光度法是根据物质对不同波长的光波具有选择性吸收的特性---即可以产生吸收光谱，而建立起来的一种定量，定性分析的方法。
分类：根据波长范围可分为紫外，可见和红外分光光度法。
特点：1，与其它光谱分析方法相比，起仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快，2，灵敏度高3，选择性好4，精密度和准确度较高5，用途广泛。
二：分光光度法基本原理：物质对光的选择性吸收1：光的基本性质：波动性，微粒性2：物质对光的选择性吸收：一种物质呈现何种颜色，是与入射光的组成和物质本身的结构有关。
溶液呈现不同的颜色是由溶液中的质点（离子或分子）对不同波长的光具有选择性吸收而引起的。
能复合成白光的两种颜色的光也称为互补色光。
3：吸收曲线（光谱）物质的分子内部存在状态：电子能级，振动能级，转动能级组成：紫外--可见吸收光谱，红外吸收光谱，远红外吸收光谱4、透光率和吸光度当一束单色光通过均匀的溶液时，入射光强度为I0，吸收光强度为Ia，透射光强度为It，反射光强度为Ir，则I0 = Ia + It + Ir 透光率(transmittance)T：透射光的强度It与入射光强度I0之比。
透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；透光率愈小，溶液对光的吸收愈多。
吸光度A:透光率的负对数。
A愈大，溶液对光的吸收愈多。
5、Lambert-Beer定律Lambert定律：当一适当波长的单色光通过一固定浓度的溶液时，其吸光度与光通过的液层厚度成正比。
式中b为液层厚度，k1为比例系数，它与被测物质性质、入射光波长、溶剂、溶液浓度及温度有关，Lambert定律对所有的均匀介质都是适用的。
三：分光光度计的基本组成(1)光源光源的作用：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度，稳定。
可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500 nm)紫外区：氢灯，氘灯(180～375 nm)(2) 单色器单色器的作用：从光源的连续光谱中，分出某一波长范围的光，作为吸光光度分析的光源。
生化实验报告
生化实验报告
实验原理，实验结果，实验分析。
分光光度技术及蛋白含量的测定
实验一双缩脲法测定蛋白质含量
实验原理：蛋白质分子在碱性溶液中能与铜离子结合成紫色的化合物，即为双缩脲反应。
在一定浓度内，颜色与浓度成正比。
实验结果:由于第五组数据误差较大，图像绘制时予以舍去。
实验分析：根据标准曲线及其公式，并血清吸光度为0.089，得出每100ml血清样品中蛋白质的克数为0.548g。
实验二考马结合法测定蛋白质含量
实验原理：考马与蛋白质结合后最大吸收峰从465nm变成595nm，即其595nm处光吸收增加量可知蛋白质的量。
实验结果:标准溶液的吸光度为0.407，标本溶液的吸光度为0.088。
实验分析：根据公式，可得样品中蛋白质的含量为10.811g/ml。
实验三紫外分光光度法测定蛋白质含量
实验原理:蛋白质具有吸收紫外线的性质，其高峰在280nm波长处。
在此波长范围内，吸收峰的光密度值与其浓度成正比。
实验结果：
实验分析：。
常用紫外分光光度法测定蛋白质含量
6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏（kjeldahl ）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so---- 2co2+3so2+4h2o+nh3 ⑴2nh3+h2so4 --- （n h4）2so4 （2）（nh4）2so4+2nao- 2h2o+na2so4+2 nh3 ⑶反应（1）、（2）在凯氏瓶完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6.25 即得。
二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180°C左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材1•试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。
生化实验五大技术
生化实验五大技术一.分光光度技术1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。
而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。
2.基本原理:（图1-1光吸收示意）透光度T=It/lo吸光度A=lg(lo/ I1)朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLcK 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度(mol/L)]摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为I.cm 的吸光度。
c=A/ε3. 定量分析:(1)标准曲线(工作曲线)法(2) 对比法元-KCLCxS SX X S X S X S X C A A C C C L KC L KC A A *,===即(3)计算法: e=A/ε(4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀)(5) 多组分湖合物测定4.技术分类分子吸收法&原子吸收法:可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法；5.应用方向有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法二电脉技术1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行脉动。
使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。
2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。
v=Q/6xrη3.影响电泳迁移率的因素:电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗4:技术分类:自由电泳(无支持体)区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等5. 电泳分析常用方法及其特点:小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳⑴醋酸纤维素薄膜电泳①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象②分离理应快，电泳时间短③样品用最少:④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球蛋白)⑵玻脂糖凝胶电泳①琼脂糖凝胶孔径较大，对般蛋白质不起分子筛作用②琼脂糖凝胶弹性差，不适含管状电泳------用于等电液鱼、免疫电话、血清脂蛋白等蛋白质电脉，以及DNA、RNA、核苷酸的分析(3)聚丙烯肤胶凝胶电泳①可调节孔径大小②机械强度好，有弹性③分辨率高，用途广④无电涉----------用于不同分子量蛋白质的电泳分离⑶ SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳该种电泳使蛋白分子相对迁移率R的大小完全取决于分子量的高低，因此可从已知分子a的标准蛋白的对数和相对迁移所作的标准曲线中求出供试品的分子量----------最常用定性分析蛋白质的电脉方法，特别用于蛋白质纯度检测&分子量制定⑷等电聚焦电泳技术利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质---------由于其分辨率可达 0.01pH单位，因此特别适合于分离分子相近而等电点不同的蛋白质组分。
生化分析实验课紫外分光光度法测定蛋白质吸收光谱曲线
友情复叙
（1）、需要强调的是：紫外、可见分光光度法测定样品时都需要用一个“空白管”， 它主要是用于仪器校“零点”用。空白管一般又习惯称“零管”和“对照
管”。
（2）、能作为“零管”溶液的条件？一般要求是：被测定的溶质的溶剂作为零管溶 液，但是如果实验本身要求不高或所用溶剂与蒸馏水在某一特定的波长吸 光度差异很小（比较过），也可以直接用蒸馏水甚至自来水代替。
紫外分光光度法
测定蛋白质吸收光谱曲线
一 实验原理
蛋白质所含有的一些芳香族氨基酸（主要是苯丙氨酸，酪氨 酸）具有共轭双键结构能够产生π→π﹡及n→π﹡类型的电子跃迁， 因此能够在近紫外光区产生光吸收，并且在280 nm波长处有一特征吸收 峰。利用这一特性，通过对蛋白质紫外吸收光谱曲线的测定，可以进行 定性分析。
0 240 250 260 270 280 290 300 310
波长（nm）
吸光度(A)
吸光度(A)
图1、牛血清白蛋白在250—300 nm波长吸收光谱曲线图
牛血清白蛋白紫外吸收光谱曲线
0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0 240 250 260 270 280 290 300 310 波长（nm）
5-2、蛋白质的紫外吸收光谱曲线的制作
化验室分光光度法测定水质氰化物操作规程
化验室分光光度法测定水质氰化物操作规程一、实验目的：测定水样中氰化物的浓度。
二、实验原理：水质中的氰化物经加热与硫酸反应生成氰酸，再经肼与N-(1-萘基)乙二胺反应生成淡黄色蓝色络合物。
根据络合物在520nm处的吸光度与氰化物浓度成正比关系，利用分光光度法测定吸光度，从而得到氰化物浓度。
三、实验仪器与材料：1.分光光度计2.容量瓶3.恒温水槽4.称量瓶5. 试剂：氰酸钠标准溶液（0.01mol/L）、硫酸（1:1 H₂SO₄）、肼、N-(1-萘基)乙二胺四、实验步骤：1.准备标准曲线：取0.01mol/L氰酸钠溶液0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.0mL分别加入容量瓶中，用酒精稀释至刻度，得到含氰酸钠分别为0.00mg/L、0.20mg/L、0.40mg/L、0.80mg/L、1.00mg/L的标准溶液。
将标准溶液分别转移至5个比色皿中，其中一个作为空白对照。
使用分光光度计在520nm处测定各个标准溶液的吸光度，并制作标准曲线。
2.实验操作：取待测水样10.0mL加入容量瓶中，加入1mL1:1H₂SO₄溶液，恒温水槽中加热至沸腾，保持沸腾2-3分钟。
冷却至室温后，加入0.5mL肼溶液和1mLN-(1-萘基)乙二胺溶液，用酒精稀释至刻度，充分摇匀。
将溶液转移至比色皿中，使用分光光度计在520nm处测定吸光度。
3.结果计算：根据标准曲线的吸光度测定值和浓度值，可以得到水样中氰化物的浓度。
五、注意事项：1.注意实验操作的精密度和准确度，避免误差。
2.比色皿要干净干燥，避免对实验结果的影响。
3.校准分光光度计，确保测量结果的准确性。
4.正确使用实验仪器和试剂，注意实验安全。
六、实验记录：1.记录标准曲线各浓度下的吸光度值。
2.记录待测水样的吸光度值。
3.按照计算公式计算出待测水样中氰化物的浓度，并记录下来。
七、讨论与结论：根据实验结果，讨论水质的污染情况，并得出结论。
生化试验
实验一 分光光度计线性分辨范围测定一. 目的1.学习分光光度计的工作原理，掌握比色测定的基本操作方法。
2.掌握标准曲线的制作及分光光度计最佳测试浓度范围的确定。
二. 原理比色法是常用的生化分析方法。
利用分光光度计可以很方便地完成多种生物物质的定量分析。
比色法的理论基础是朗伯-比尔定律，其测定浓度范围要求在分光光度计线性分辨范围内。
光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。
肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm ；小于400nm 的光线称为紫外光；大于750nm 的光线称为红外光。
当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过，因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。
图1 Lambert-Beer 定律示意图分光光度法依据Lambert-Beer 定律：II 0lg = KCL令A = II 0lg，T =0I I，则A = KCL ，A = -lgT其中：T ：透光率A ：吸光度（有时用光密度OD 表示）I ： 透射光强度 I 0：入射光强度 K ：吸收系数 L ：溶液的光径长度 C ：溶液的浓度从上式可以看出，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比，当入射光、吸收系数K 和溶液的光径长度L 不变时，吸光度A 与溶液的浓度C 成正比。
用标准曲线法，即可对未知样品做定量分析。
三. 实验材料及设备1. 仪器UV5200型分光光度计。
2．器材I 0IC L刻度试管：25mL×21；移液器：1mL×1；吸头几支；烧杯：250mL×2，50mL×1；洗耳球：2；滴管：2；移液管（白线）：1 mL×1，2 mL×1，5 mL×1；洗瓶、试管架、移液管架：各1。
四. 试剂的配制0.01mol/L硫氰化铁（Fe (SCN)3）溶液：称取30.000g （过量）KSCN和27.05g FeCl3·6H2O，加入2.5mol/L HCl 100mL,用蒸馏水溶解后定容至10000mL（经验提示：保质期1星期）。
生化实验考试
1.简述分光光度法的原理和分光光度计的操作步骤⑴当一束强度为I。
的单色光垂直照射某物质的溶液后,由于一部分光被体系吸收,因此透射光的强度降至I,则溶液的透光率T为: I/ I。
根据朗伯-比尔定律:A=εbc式中A为吸光度，b为溶液层厚度，c为溶液的浓度.ε为吸光系数，与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。
溶液中其他组分（如溶剂等）对光的吸收可用空白液扣除。
由上式可知，当固定溶液层厚度L和吸光系数时，吸光度A与溶液的浓度成线性关系。
⑵预热，取比色杯，装样，调零，测量2.简述刻度吸量管的选取原则，操作步骤及注意事项⑴①选用与取液量最近的吸量管②根据加入液体的量酌情选用吸量管③当取液量不足吸量管的满刻度时，应选用刻度吸量管中上端刻度⑵①执管：将中指和拇指拿住吸量管上口以食指控制流速;刻度数字应朝向操作者。
②取液：把吸量管插入液体内(切忌悬空，以免液体吸入洗耳球内)，用洗耳球吸取液体至所取液量的刻度上端1—2cm处，然后迅速用食指按紧吸量管上口，使管内液体不再流出。
③调准刻度：将已吸足液体的吸量管提出液面，然后垂直提起吸量管于供器内口(管尖悬离供器内液面)。
用食指控制液流至所需刻度，此时液体凹面、视线和刻度应在同一水平面上，并立即按紧吸量管上口。
④放液：放松食指，让液体自然流入受器内，(如移液管标有“吹”字，则应将管口残余液滴吹入受器内)此时，管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管及试剂。
⑤洗涤：吸取血液、尿、组织样品及粘稠试剂的吸量管，用后应及时用自来水冲洗干净。
如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水冲洗干净。
晾干水分，再浸泡于铬酸洗液中，数小时后，再用流水冲净，最后用蒸馏水冲洗。
晾干备用。
⑶①选择适当规格的吸量管：吸量管的最大容积应等于或略大于所需容积（ml 数）。
②仔细看清吸量管的刻度情况：刻度是否包括吸量管尖端的液体？读数方向是从上而下，还是从下而上？③拿吸量管时，刻度一定要面向自己，以便读数。
生化实验知识点汇总整理
百分吸光系数：指在一定波长下，吸光物质的溶液浓度为1g/100ml，光程为1cm 时的吸光度，单位是ml/(g·cm)。
标准曲线：指通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质，而得到的性质的数值曲线。
层析：指利用各组分物理性质的不同，随流动相通过固定相时分离速度不同将多组分混合物进行分离及测定的方法。
层析法：混合物中各种色素以不同的速率通过柱子，从而彼此分开。
分离开的色素形成不同的色带而易于区分，由此得名为色谱法（Chromatography），又称层析法。
重组子：两个突变位点之间可发生交换产生野生型的最小单位，即不能由重组分开的基本单位。
重组子另一定义是指，含有重组DNA分子的转化细胞电泳：带电粒子在直流电场中向着所带电性相反的电极移动的现象。
电渗：电动现象之一，指在电场作用下液体(通常是水)相对于和它接触的固定的固体相作相对运动的现象。
等电点：当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。
（pH大于等电点时蛋白质带正电，小于带负电）分配系数(Kd)：物质在两种不相混的溶剂中平衡时的浓度比。
反映了溶质在两相中的迁移能力及分离效能是衡量溶质分子被阻滞程度的一个特征性常数分光光度法：根据物质对光的吸收特性和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法。
是利用物质对某种波长的光具有选择性吸收的建立起来的鉴别物质或测定其含量的一项技术。
分子筛：狭义上讲分子筛是结晶太的硅酸盐或硅铝酸盐，由硅氧四面体通过氧桥键相连而成，广义上讲，结构中有规整而均匀的孔道，孔径为分子大小的数量级，它只允许直径比孔径小的分子进入，因此能将混合物中的分子按大小加以筛分GOD法测定血糖：葡萄糖氧化酶（GOD）利用空气和水催化葡萄糖分子中的醛基氧化，生成葡萄糖糖酸和过氧化氢；过氧化氢经过氧化物氧化酶（POD）氧化成水和氧；氧将4-氨基安替吡啉和酚氧化成红色的醌化合物，醌和葡萄糖成正比。
生化实验
1.凝胶层析：是指混合物随流动相流经作为固定相的凝胶层析柱时,混合物中各物质因分子大小不同而被分离的技术2.层析：指利用各组分物理性质的不同，随流动相通过固定相时分离速度不同将多组分混合物进行分离及测定的方法。
3.分光光度法：是指根据物质对光的吸收特性和吸收强度,对物质进行定性和定量的分析方法。
4.电泳：带点颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极方向移动，称为电泳。
5.电渗：是指在电场的影响下，带电荷的液体对携带相反电荷的固定介质进行相对运动的现象。
6.聚丙烯酰胺凝胶交联度：用C％表示，即Bis占Acr和Bis总克数的百分数。
7.聚丙烯酰胺凝胶浓度：用T％表示，即100ml凝胶溶液中所含Acr和Bis的总克数。
8.Km值：即米氏常数。
根据米氏方程，Km值等于酶促反应速度达到最大反应速度一半时所对应的底物浓度，是酶的特征常数。
9.百分吸光系数是指在一定波长下，吸光物质的溶液浓度为1g/100ml，光程为1cm时的吸光度，单位是ml/(g·cm)。
10.摩尔吸光系数指一定波长时，溶液的浓度为1 mol/L，光程为1cm时的吸光度值，用ε表示，单位是L/(mol·cm)。
11.内水体积指层析柱中溶胀凝胶颗粒内部所含水相的总体积12.外水体积指层析柱床中溶胀凝胶颗粒间隙中液体所占体积,即空隙总容积13.洗脱体积指被分离物质通过层析柱完全洗脱出来所允许的洗脱液体积14.分配系数：反映了溶质在两相中的迁移能力及分离效能是衡量溶质分子被阻滞程度的一个特征性常数15.血糖指血液中葡萄糖。
16.空白管即管内溶液用与样本相同的一切试剂而不含被测定的物质的试管,用以抵消或减少实验误差17.迁移率即带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度18.标准曲线是指通过测定一系列已知组分的标准物质的理化性质，而得到的性质的数值曲线。
问答：1.如何用双倒数作图求Km双倒数方程为1/V=Km/Vmax × 1/[S]+1/Vmax根据此方程,以1/V为纵坐标,1/[S]为横坐标,作图可得一直线.途中直线在1/V轴上的截距为1/Vmax,斜率为Km/Vmax.在1/[S]轴上的截距为-1/Km.因此根据直线在纵轴和横轴上的截距可求出Km2.为什么要用空白管，如何选择空白管由于单色光透过溶液时,不仅被待测物质所吸收,而且还被比色容器与溶剂以及其他试剂吸收一部分,这部分需要用空白管消除以减小误差,空白管内应该装有与样本相同的一切试剂,而不含被测定的物质.【空白溶液在T％模式中应显示100.0,在ABS档中为0】3.双缩脲测蛋白质含量的原理以及优缺点双缩脲在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物,蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物.在一定范围内,其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,因此,可以利用比色法测定蛋白质浓度.优点：操作简便、迅速，受蛋白质种类影响小。
生化实验分光度实验报告
1. 理解分光光度法的基本原理及其在生化实验中的应用。
2. 掌握分光光度法测定蛋白质浓度的操作步骤。
3. 学习如何绘制标准曲线并计算蛋白质浓度。
二、实验原理分光光度法是一种基于物质对特定波长光的吸收程度来定量分析物质的方法。
蛋白质分子中含有多种氨基酸，这些氨基酸具有不同的化学结构，使得蛋白质对不同波长的光具有不同的吸收特性。
通过测定蛋白质溶液在特定波长下的吸光度，可以计算出蛋白质的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 牛血清白蛋白（BSA）标准品- 0.1M的NaOH溶液- 0.05M的Tris-HCl缓冲液（pH 6.8）- 0.9%的NaCl溶液- 0.1M的CuSO4溶液- 0.01M的Folin-Ciocalteu试剂- 0.1M的Na2CO3溶液- 试管、移液管、容量瓶、分光光度计、比色皿等。
2. 实验仪器：- 电子天平- 移液器- 磁力搅拌器- 紫外可见分光光度计1. 准备标准溶液：称取一定量的BSA标准品，用0.1M的NaOH溶液溶解，配制成一系列不同浓度的标准溶液。
2. 配制样品溶液：取一定量的蛋白质样品，用0.05M的Tris-HCl缓冲液（pH 6.8）稀释，使其浓度在标准曲线范围内。
3. 测定吸光度：将标准溶液和样品溶液分别加入比色皿中，用紫外可见分光光度计在540nm波长下测定吸光度。
4. 绘制标准曲线：以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
5. 计算蛋白质浓度：根据样品溶液的吸光度，在标准曲线上找到对应的浓度值，即为样品溶液的蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：根据实验数据绘制标准曲线，发现吸光度与蛋白质浓度呈线性关系。
2. 样品溶液的蛋白质浓度：根据样品溶液的吸光度，在标准曲线上找到对应的浓度值，计算得到样品溶液的蛋白质浓度为X mg/mL。
六、实验讨论1. 分光光度法是一种快速、简便、灵敏的定量分析方法，广泛应用于生化实验中。
2. 实验过程中，应注意以下几点：- 准确配制标准溶液和样品溶液。
生化实验教案(36学时)
1 Kat=6X107IU
教学方法
1、讲授：讲述实验的目的，原理，主要使用的仪器试剂、操作，结果记录，结论，讨论
2、学生动手操作
3、实验中评讲
4、实验小结
5、先完成实验的同学可自行写实验报告。
使用的教材及参考资料
教材:《生物化学与分子生物学实验指导》本教研室自编教材
教学方法
1、讲授：讲述实验的目的，原理，主要使用的仪器试剂、操作，结果记录，结论，讨论。
2、学生动手操作：
注意观察学生点样、显色、烘干等操作。
3、实验小结。
4、先完成实验的同学可自行写实验报告。
使用的教材及参考资料
教材:《生物化学与分子生物学实验指导》本教研室自编教材
参考书目：生物化学、分子生物学实验技术
教学方式（请打√）：讲授√□ 讨论□ 示教√□ 指导√□ 其它□
教学资源（请打√）：多媒体□ 模型□ 标本□ 实物√□ 挂图□ 音像□ 其它□
教师姓名：职称：年月日
福建中医药大学教案
编号：
题目（教学章、节或主题）
实验项目凝胶层析
课时安排
3学时
班级人数
教学目的要求（分掌握、熟悉、了解三个层次）
1、掌握凝胶层析的基本原理以及方法
教材:《生物化学与分子生物学实验指导》本教研室自编教材
参考书目：生物化学、分子生物学实验技术
讨论、思考题、作业：
1、准备和点样、电泳、染色、定量各自应注意哪些？
2、临床上应用电泳技术检测血清蛋白其临床意义有哪些？
3、血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳优点、特点有哪些？
教学课型（请打√）：理论课□实验课√□见习□ 其它□
分光光度法-生化实验
常用生化实验技术：分光光度法有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此每种物质都具有其特异的吸收光谱。
有些无色溶液，虽对可见光无吸收作用，但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。
分光光度法主要是指利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质性质及含量的技术，其理论依据是Lambert和Beer定律。
分光光度法是比色法的发展。
比色法只限于在可见光区，分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。
比色法用的单色光通过滤光片产生，谱带宽度为40-120nm,精度不高, 而分光光度法则要求近于真正单色光，其光谱带宽最人不超过3~5nm,在紫外光区可到I nm以下。
单色光通过棱镜或光栅产生，具有较高的精度。
一、光的基本知识光是由光量子组成的，具有二重性，即不连续的微粒性和连续的波动性。
波长和频率是光的波动性的特征，可用下式表示：A=C/u式中入为波长，具有相同的振动相位的相邻两点间的距离叫波长。
u为频率，即每秒钟振动次数。
c为光速，等于299 770±4km/s。
光属于电磁波。
自然界中存在各种不同波长的电磁波，列成表I」所示的波谱图。
分光光度法所使用的光谱范围在200nm~10Mm(lMm=1 OOOnm)之间。
其中200~400nm 为紫外光区，400~760nm 为可见光区，760-10 000 nm为红外光区。
二、朗伯一比尔(lambert—Beer)定律朗伯一比尔定律是比色分析的基本原理，这个定律是讨论有色溶液对单色光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度间的定量关系。
此定律是由朗伯定律和比尔定律归纳而得。
1. 朗伯定律一束单色光通过溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的强度就要减弱：若溶液浓度不变，则溶液的厚度愈大(即光在溶液中所经过的途径愈长)，光的强度减低也愈显著。
设光线通过溶液前的强度为lo(入射光的强度)，通过液层厚为L溶液后.光的强度为It (透过光的强度),则仏表示透过光的强度是入射光强度的几分之几，称为透光度(transmitt ance)，用T表示。
生化实验方法
实验一 准备实验（一）分光光度计的使用一. 目的通过电化教学方式学习分光光度计的工作原理 掌握比色测定的基本操作方法二. 原理光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。
肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm ：小于400nm 的光线称为紫外光；大于750nm 的光线称为红外光。
当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。
分光光度法依据Lambert-Beer 定律：II 0lg = KCL令A = II 0lg，T =0I I，则A = KCL ，A = -lgT其中：T ：透光率A ：吸光度（有时用光密度OD 表示） I ： 透射光强度 I 0：入射光强度 K ：吸收系数 L ：溶液的光径长度C ：溶液的浓度从上式可以看出，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比，当入射光、吸收系数K 和溶液的光径长度L 不变时，吸光度A 与溶液的浓度C 成正比。
I 0IC L三. 实验材料及设备1. 仪器分光光度计放相机电视机2. 器材普通试管：20mL×3移液管：5mL×2烧杯：250mL×1洗耳球： 2洗瓶、试管架、移液管架：各1四. 试剂的配制重铬酸钾（K2Cr2O7）溶液（0.2mg/mL）称取0.2g K2Cr2O7，蒸馏水溶解后定容至1000mL。
五. 操作步骤1. 在电教室中看录像了解721型分光光度计的工作原理。
2. 在分光光度室中练习操作详细步骤见附录六。
3. 在实验室中应用练习取3支试管，按下表所示顺序操作。
六. 结果处理1. 求两个样品管A450的平均值—A450；2. 计算重铬酸钾的摩尔消光系数。
七. 思考题1. 到分光光度室中进行比色测定应携带哪些器材？它们分别起什么作用？2. 比色时，设一个“0”号管的意义是什么？实验二 3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量一. 目的了解3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原理 掌握总糖定量测定的操作方法二. 原理还原糖是指含自由醛基或酮基的单糖（如葡萄糖）和某些具有还原性的双糖（如麦芽糖）。
分光光度法测定谷氨酸脱氢酶所用的试剂
分光光度法测定谷氨酸脱氢酶所用的试剂分光光度法是一种常用的化学分析方法，它通过测定溶液或物质对特定波长的光的吸收或透过能力来分析样品的成分。
在生化实验中，分光光度法被广泛应用于测定各种酶的活性，其中包括谷氨酸脱氢酶。
谷氨酸脱氢酶是一种重要的生物催化剂，参与谷氨酸代谢途径中的关键步骤。
它主要负责将谷氨酸氧化为α-酮戊二酸和氨气，产生能量和氨基酸转化。
测定谷氨酸脱氢酶的活性对于研究细胞代谢和酶功能非常重要。
在进行分光光度法测定谷氨酸脱氢酶活性时，一个关键的方面是选择合适的试剂。
试剂的选择必须考虑到其对酶活性的敏感性，并且能够提供特定的检测信号。
常见的用于测定谷氨酸脱氢酶活性的试剂包括谷氨酸和辅酶NAD+。
谷氨酸是由谷氨酸酶合成的，它是一种白色晶体粉末。
当谷氨酸与谷氨酸脱氢酶反应时，产生的α-酮戊二酸会与辅酶NAD+反应生成NADH。
NADH可以吸收特定波长的光，它的浓度与谷氨酸脱氢酶的活性成正比。
通过测定NADH的吸光度，我们可以间接测定谷氨酸脱氢酶的活性。
当进行分光光度法测定谷氨酸脱氢酶活性时，需要注意一些实验细节。
试剂的配制要准确，并且需要在合适的温度下进行反应。
吸收光的波长应该选择在NADH的吸收峰位，一般在340 nm左右。
空白对照也是必需的，以排除其他物质对吸光度的影响。
在分光光度法测定谷氨酸脱氢酶活性时，我们可以通过测量样品的吸光度变化来得到谷氨酸脱氢酶的活性值。
这不仅可以帮助我们了解酶的功能和代谢途径，还可以用来评估细胞的生理状态和健康状况。
总结起来，分光光度法是一种常用的化学分析方法，可以用于测定谷氨酸脱氢酶的活性。
在测定过程中，选择合适的试剂对于获得准确的结果非常重要。
通过测量样品的吸光度变化，我们可以得到谷氨酸脱氢酶的活性值，从而了解酶的功能和细胞的代谢途径。
个人观点和理解方面，我认为分光光度法是一种非常有用的分析方法，可以帮助我们深入研究生物体内的各种酶和代谢途径。
谷氨酸脱氢酶作为一种重要的酶，在细胞代谢和健康状况中扮演着重要角色。
生化-4DNA的紫外分光光度法定量测定-HZJ-PPT精选文档
（一） 标准曲线法
配置浓度递增的标准溶液（C），在最大吸收 波长（ max）处测得各个吸光度（A），绘制标 准曲线（A-C曲线）。
在测定被测样品时，以相同条件在 max处测定 A值，从标准曲线上查得该样品相应的浓度。
朗伯-比尔定律的分析应用
溶液浓度的测定
A
A＝ kbc
0.8
工作曲线法
0.6 0.4 0.2 0
*
(校准曲线)
0
1
2
3
4mgLeabharlann mlA0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
1 2 3 4 5 6
A1
待测液浓度
C
紫外吸收法定量分析核酸的原理
原理：核酸或核苷酸中的碱基共轭双键对260 nm紫外光有特异性吸收，
吸收强度与核酸浓度成正比。 ① 用于定量分析：1OD双链DNA浓度约为50g/ml，单链DNA为33g/ml， RNA为40g/ml。 ② 用于纯度分析：OD260/OD280，DNA为1.8，RNA为2.0， DNA大于 1.8说明其中的RNA未除尽，比值降低说明有蛋白质或酚。
生物化学与分子生物学技术
实验四
质粒DNA的琼脂凝胶电泳
DNA的紫外分光光度法定量测定
何振健 讲师
Zhenjian He, Ph.D, Lecturer
一、重组质粒的酶切鉴定（琼脂糖凝胶电泳） 二、紫外分光光度法检测DNA含量
实 验 安 排
质粒DNA提取原理与方法
谢谢！
2019.9
3030
5、将凝胶置于紫外透射检测仪上，盖上防护观察罩，打开紫外灯，可见
到发出荧光的DNA条带。
DNA琼脂糖凝胶电泳
【生化实验】分光光度法
如何求被测物质的含量
A kcl
1.利用标准管计算测定物的含量 2.利用标准曲线计算测定物含量 3.利用标准系数法求出待测溶液的浓度 4.利用消光系数法求出待测溶液的浓度
1.利用标准管计算测定物的含量
在相同条件下பைடு நூலகம்定已知浓度（CS）标准液的吸光度（AS）， 同时也测定末知浓度（CU）的吸光度（AU），
● ●
0.2
C
标准曲线(浓度-吸光度曲线）
722分光光度计的使用
1. 接通电源，调整波长。
2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中 ，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。
3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖） 和调“100”（闭盖）。
4. 调模式为“吸光度”，即空白对照吸光度为“0”，测定 待测样品的吸光度值。
若被测物质对光的吸收符合光的吸收定律，则必然得 到一条通过原点的直线，即标准曲线，亦称工作曲线。以 后对末知浓度物质测定时，无需再作标准管，据测定管吸 光度从标准曲线上即可求得测定物的浓度。
对末知浓度 物质测定时 ，无需再作 标准管，据 测定管吸光 度从标准曲 线上即可求 得测定物的
浓度。
A
0.8 0.6 0.4
722分光光度计使用的注意事项
• 比色杯应持其侧壁的毛玻璃面。 • 盛液时达到比色杯的2/3即可，不能太满，外
壁如有液体，只能用滤纸沾去水份，再用擦镜 纸擦干净。 • 测毕，比色液一般应倒回原试管中，直至计算 无误后方可倒掉。
根据定律得： Au KuCuLu As KsCsLs 因为： Ku Ks Lu Ls
所以As与Au之比值也等于两浓度之比值
即 Au Cu As Cs
实验四 紫外分光光度法测定水中磺基水杨酸的含量
实验四紫外分光光度法测定水中磺基水杨酸的含量一、实验目的1．了解紫外分光光度计的基本结构。
2．学会正确使用和维护紫外分光光度计。
3．掌握紫外分光光度计的比色皿配套方法4.学会磺基水杨酸吸收曲线的绘制和用标准曲线法测定其含量.二、实验原理磺基水杨酸为白色结晶或结晶性粉末，对光敏感，高温时分解成酚和水杨酸，遇微量铁时即变粉红色，易溶于水和乙醇，溶于乙醚。
磺基水杨酸用途广泛：用于医药中间体，如生产强力霉素；染料工业，用于制造表面活性剂的中间体；有机合成工业，用于制造表面活性剂；润滑酯工业，用于添加剂；用作生化试剂、分析试剂及络合指示剂，如比色分析测定高铁离子等。
磺基水杨酸对紫外光有特征吸收因此可根据朗伯-比尔定律，采用标准曲线法测定其含量。
本实验首先通过绘制磺基水杨酸的吸收曲线，确定其最大吸收波长 max，进而采用标准曲线法测定待测组分的含量。
磺基水杨酸的分子结构三、仪器紫外分光光度计、1cm石英比色皿、50ml具塞比色管、吸量管、移液管四、试剂1、磺基水杨酸贮备液（2.000g/L）：在分析天平上准确称取维生素2g，用蒸馏水定容至1000mL，混匀，即为2.000g/L的贮备液。
（实验室已准备好）2、磺基水杨酸标准使用液（200mg/L）：准确移取贮备液10.00ml于100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
此溶液中磺基水杨酸的质量浓度为200mg/L。
（学生配制）五、测定步骤：1、磺基水杨酸吸收曲线的测定：取适量使用液，以水为参比，用1cm比色皿，在220-400nm，每隔5-10nm测定吸光度，绘制吸光度—波长曲线，选择测量波长(λmax)。
2、磺基水杨酸标准曲线的绘制：（1）分别移取磺基水杨酸的标准使用液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml于7支50ml比色管中，定容至刻度，摇匀。
（2）以纯水为参比，在λmax处测定标准系列磺基水杨酸溶液的吸光度。
（3）以磺基水杨酸的质量（µg）为横坐标、以校正后的吸光度A为纵坐标绘制标准曲线。
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常用生化实验技术：分光光度法有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。
有些无色溶液，虽对可见光无吸收作用，但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。
分光光度法主要是指利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质性质及含量的技术，其理论依据是Lambert和Beer定律。
分光光度法是比色法的发展。
比色法只限于在可见光区，分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。
比色法用的单色光通过滤光片产生，谱带宽度为40~120nm，精度不高，而分光光度法则要求近于真正单色光，其光谱带宽最大不超过3~5nm，在紫外光区可到l nm以下。
单色光通过棱镜或光栅产生，具有较高的精度。
一、光的基本知识
光是由光量子组成的，具有二重性，即不连续的微粒性和连续的波动性。
波长和频率是光的波动性的特征，可用下式表示：
λ＝C／υ
式中λ为波长，具有相同的振动相位的相邻两点间的距离叫波长。
υ为频率，即每秒钟振动次数。
c为光速，等于299 770±4km／s。
光属于电磁波。
自然界中存在各种不同波长的电磁波，列成表l-l所示的波谱图。
分光光度法所使用的光谱范围在200nm~10μm (1μm＝1 000nm)之间。
其中200~400nm为紫外光区，400~760nm为可见光区，760~10 000 nm为红外光区。
二、朗伯一比尔(1ambert—Beer)定律
朗伯—比尔定律是比色分析的基本原理，这个定律是讨论有色溶液对单色光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度间的定量关系。
此定律是由朗伯定律和比尔定律归纳而得。
1．朗伯定律一束单色光通过溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的强度就要减弱：若溶液浓度不变，则溶液的厚度愈大(即光在溶液中所经过的途径愈长)，光的强度减低也愈显著。
设光线通过溶液前的强度为Io(入射光的强度)，通过液层厚为L溶液后．光的强度为I t（透过光的强度），则
表示透过光的强度是入射光强度的几分之几，称为透光度（transmittance）,用T表示。
透光度随溶液厚度的增
加而减少，但实践证明，透光度和溶液层厚度间并不存在简单的定量关系，只有透光度的负对数(-lgT)才随着溶液厚度的增加而成正比例增加，即
将上述比例写成等式，得到
式中称为吸光度(A)(absorbance)，又称为消光度(E)(degree of extinction)或光密度（D）(optical density)。
所以
A＝K1L
式中K1为比例系数，其值取决于入射光的波长，溶液的性质和浓度以及溶液的温度等。
上式表明，当溶液的浓度不变时，吸光度与溶液液层的厚度成正比，这就是朗伯定律。
表1-1 电磁波谱
2．比尔定律当一束单色光通过有色溶液后，溶液液层的厚度不变而浓度不同时，溶液度愈大，则透射光的强度愈弱，其定量关系如下：
A＝K2C
式中C为有色物质溶液的浓度；K2为比例系数，其值取决于入射光的波长，溶液的性质和液层的厚度，以及溶液的温度等。
上式表明，当溶液液层的厚度不变时，吸光度与溶液的浓度成正比，这就是比尔定律。
3．朗伯—比尔定律如果同时考虑吸收层的厚度和溶液浓度对光吸收的影响，则必须将朗伯定律和比尔定律合并起来，得
＝KLC
A＝KLC
即吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比，这就是朗伯—比尔定律。
在上式中，若L用厘米表示，C用克／升表示，则比例常数K称为吸光系数，其值取决于入射的波长，溶液的性质和温度等，而与光的强度、溶液的浓度及液层的厚度无关。
若L用厘米表示，C用摩尔／升表示，则上式中的比例常数用ε表示，得到
A=εLC
式中ε称为物质的摩尔吸光率(molar absorptivity)或摩尔吸光系数(molar absorption，coefficient)，其值相当于L=1cm时，C=1mol/L时，在一定波长下的吸光度，它是物质的特性常数。
A=εLC=ε×1×1=ε
不同的物质可能会有相同的最大吸收波长，但其摩尔吸光系数不一定相同。
ε值愈大，说明该物质溶液对光吸收愈强烈，则比色测定的灵敏度愈高。
三、分光光度计结构简介
分光光度技术的应用
1、测定溶液中物质的含量
可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。
这需要测定标准溶液(浓度已知的溶液)和未知液(浓度持测定的溶液)的吸光度，将两者进行比较。
由于所用吸收池的厚度是一样的，可用下式进行计算。
式中Cx代表未知液的浓度，Cs代表标准液的浓度，Ax和As分别代表未知液和标准液所测得的吸光度值，式中只有Cx是未知的，可由上式计算得之。
也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。
含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处：①灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异；②可以避免其他物质的干扰。
还可利用摩尔吸光率(ε)求得测定物质的浓度，由于物质的ε是已知的，读取光径(液层厚度)为l cm时溶液的吸光度(A)，则可以用下式计算溶液中物质的浓度(C)：
此式常在紫外光吸收法时应用，无需显色反应，操作方便。
2、用紫外光谱鉴定化合物
使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。
方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制吸光度一波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。
各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。
当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线形状一样时，则很可能它们是同一物质。
一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低谷的波长是一定不变的。
紫外光吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物能表现出吸收峰。
紫外光吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外光吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。
除了特殊情况外，单独依靠紫外光吸收光谱不能决定一个未知物的结构，必须与其他方法配合。
紫外光吸收光谱分析主要用于己知物质的定量分析和纯度分析。
3、分光光度法的误差
在分光光度法中，即使将各种因素都控制好，对于浓度过大或过小的样品，误差仍然很大。
因为浓度过大的样品，其吸光度过高，影响检测器的灵敏度，且读数标尺刻度的精度差，误差亦大，故难于准确。
浓度过低的样品，其吸光度小，则因与仪器本身因素有关，也容易引起检测器标尺上的读数误差。
例如光源波动的影响：当光源强度改变1％、吸光度为1.0时，只有0.4％的误差，但在吸光度为0.045时，则可产生9.6％的误差。
实际上，在整个透光度(或吸光度)范围的不同部分均有不同的误差。
从理论上推算，相对误差的最小的部分在透光度为3
6．8％处(或吸光度为0.4343处)，故通常认为测定值在吸光度0.20~0.80范围内(透光度为20％~65％)误差较小，超出此范围，相对误差均会增大。
影响分光光度法精确度的主要原因还有光谱纯度。
分光光度计应能正确选出光源光谱中所需部分波长作为入射光，一般应保持光谱带宽度在l0 nm以下，如果测定样品有很狭窄的吸收峰，就必须有更小的光谱宽度，所以分光光度计大多均有可调的狭缝。
在实际使用中，用较大狭缝虽可提高重现性，但由于加大光谱宽度反而降低了准确度。
散射光也是引起误差的重要因素；这里所说的散射光是指一切未经过测定溶液吸收，而又落到检测器上引起干扰的光，如室内自然光，经过某些漏洞进入仪器而明显增大了透光度，故高灵敏度的分光光度计宜安装的光线较暗的室内。
散射光也包括能透过比色皿的非测定需要的其他波长的光，实际上是光谱不纯，但因效果与散射光一样，故也称为散射光干扰。
散射光干扰对高浓度测定特别有害，能使吸光度降低，标准曲线的高浓度部分向下弯曲。
4、使用分光光度计的注意事项
1．分光光度计必须放置在不受振动的仪器台上，严防振动，潮湿和强光直射。
2．比色杯盛液量以达到杯容积2/3左右为宜。
若不慎将溶液流到比色杯的外表面，则必须先用滤纸吸干，再用擦镜纸擦净。
移动比色杯槽要轻，以防溶液溅出，腐蚀机件。
3．不可用手拿比色杯的光学面，禁止用毛刷等物摩擦比色杯的光滑面。
4．用完比色杯后应立即用自来水冲洗，再用蒸馏水洗净；若用上法洗不净时，可用5％的中性皂溶液浸泡，也可用新配制的洗液短时间浸泡，之后立即用水冲洗干净。
5．一般应把溶液浓度尽量控制在吸光度值0.1~0.7的范围内进行测定。
这样所测得的读数误差较小。
如吸光度不在此范围内，可适当调节比色液浓度。
6．分光光度计内放有硅胶干燥袋，需定期更换。