食 用 菌 制 种 技 术 1

食用菌制种技术 1食用菌制种前言食用菌生产所用的菌种，是提供繁殖而分级制作的菌丝体培养物，相当于高等植物的种子。

在自然界中，食用菌繁衍后代依靠孢子，孢子在适宜的环境下，萌发成菌丝体。

菌丝体生长繁衍达到生理成熟后，在适宜的环境下，就可形成子实体。

在人工栽培食用菌时，孢子虽然是它的种子，但人们至今都不用孢子直接播种，而是用孢子或子实体组织萌发而成的纯菌丝体作为播种材料。

因此，通常所指的菌种，实际上是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。

制种是食用菌生产最重要的环节。

常言道：“有收无收在于种，收多收少在于管”，可见菌种在生产中的重要性。

在食用菌生产过程中，菌种好坏，直接影响食用菌的产量和质量。

因此，培育优良菌种，是提高食用菌生产水平的重要环节。

人工培养的菌种，根据菌种培养的不同阶段，可分为母种、原种和栽培种三类。

一般把从自然界中，首次通过孢子分离或组织分离而得到的纯菌丝体称为母种，或称一级种。

它是菌种类型的原始种。

原始母种通过移接(转管)成数支试管(斜面)种，这些移接的试管种，亦可称为母种。

把母种移接到木屑、谷粒、棉籽壳、粪草等瓶(袋)培养基上培养而成的菌种称为原种，或称二级种。

它是母种和栽培种之间的过渡种。

把原种扩接到相同或类似的材料上，进行培养直接用于生产的菌种称栽培种，或称三级种。

制作菌种的具体操作工艺流程见图4—1。

原种和栽培种，均能直接用于生产。

栽培种不能再扩大繁殖栽培种(银耳菌种例外)，否则会导致生活能力下降。

分离母种培养基制备→高压灭菌→接种→筛选提纯→原始种→中试后确定母种↓↓—————转管扩接←保贮↓原种培养基制备→高压或常压灭菌→接种→培养→原种∣↓栽培种培养基制备→常压或高压灭菌→接种→培养→栽培种图4-1 制种工艺流程图食用菌的菌种生产，基本上是按菌种分离→母种扩大培养→原种培养→栽培种培养的程序进行。

菌种通过三级扩大，菌种数量大为增加，同时菌丝也从初生菌丝发育到次生菌丝，使菌丝更加粗状，分解基质的能力也增强。

只有采用这样质量的菌种，才能获得优质高产的子实体。

制作菌种的基本设备一、配料室设备不同的生产规模，配料所需要的设备有所不同，但配料应在有水、有电的室内进行，其主要设备有以下几类：(一)衡量器具配料室一般应配备磅秤，手秤，粗天平，量杯，量筒等，以供称(量)取用量较大的培养料、药品和拌料用水等。

(二)拌料机具拌料必备的用具有铁铲，铝锅，电炉或煤炉，水桶，专用扫帚和簸箕等。

具有一定规模的菌种厂，还应具备一些机械设备，如枝丫切片机，木片粉碎机，桔杆粉碎机和拌料机等。

(三)装料机具采用手工装料，无需特殊设备，只要备一块垫瓶(袋)底的木板和一根丁字形捣木(供压料时用)。

但具有一定规模的菌种厂，为了提高装料效率，应购置装料机。

装料时，以玻璃瓶作容器的要压料和打接种穴，可用瓶料专用打穴器。

以塑料袋作容器，制银耳和香菇栽培种，一般装料后随即要在袋壁打接种穴，可用塑料袋专用打穴器。

二、灭菌设备灭菌设备，一般是指用于培养基和其他物品消毒灭菌的蒸汽灭菌锅。

灭菌锅是制种工序中必不可少的设备。

灭菌锅消毒的原理，是利用水吸收一定的热量之后而成为饱和蒸汽，当蒸汽冷凝时就会释放出一定的热量。

在消毒灭菌时，饱和蒸汽在一定的温度和压力下拥有大量的热量，遇到冷的消毒物体时，冷凝而改变状态随之就释放出大量的热量。

使被消毒物体受热、受潮，在热和湿的作用下，可在较短时间内能有效地将顽抗性的细菌芽孢以及其他杂菌杀死，达到消毒的目的。

(一)高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅是一个密闭的，能承受压力的金属锅，在锅底或夹层中盛水，锅内的水煮沸后产生蒸汽。

由于蒸汽不能向外扩散，迫使锅内的压力升高，即水的沸点也随之升高，因此可获得高于100℃的蒸汽温度，从而达到迅速彻底灭菌的目的。

高压蒸汽灭菌锅有以下几种类型：1.手提式高压灭菌锅此种灭菌锅的容量较小，主要用于母种斜面培养基、无菌水等灭菌用，可用煤气炉、木炭或电炉作热源。

较轻便、经济。

2.立式和卧式高压灭菌锅(柜) 这两类高压锅(柜)的容量都比较大，每次可容纳750ml的菌种瓶几十至几百瓶，主要适用于原种和栽培种培养基的灭菌，用电热作热源。

3.自制简易高压锅菌种生产量较大的菌种厂可自制简易高压锅。

采用10mm厚的钢板焊接成内径为110cmx230cm的筒状锅体，底和盖用15m厚的钢板冲成半圆形，否则平盖灭菌时棉塞易潮湿。

锅口用紧固的螺丝拧紧密封，锅上安装压力表、温度计、安全阀、放气阀、水位计、进出水管等设备。

以煤作燃料，用鼓风机助燃升温。

菌种袋(瓶)放入铁提篮内，吊入锅中，一般约放4～5层，每锅装800～1000袋(瓶)，适合于专业菌种厂制作栽培种培养基的灭菌。

(二)土法灭菌锅土法灭菌锅有多种多样的类型，一般分为土法蒸锅和蒸笼等形式。

1.土蒸锅用砖砌成灶，灶上用砖和水泥砌成桶状或方形蒸汽室，底部为大铁锅。

可从侧面开门，也可以从顶盖进出。

门上附有放温度计的小孔，铁锅上沿设有进出水管。

每锅可容装1200～1400袋(瓶)不等。

土蒸锅形式简单，制作简易，可以就地取材，造价低廉，但杀菌时间较高压锅长。

2.蒸笼锅蒸笼灭菌适宜于农村制种量小，条件差的单位。

采用蒸笼灭菌时，密闭条件较差，由于锅内温度最高是100℃，所以灭菌时间从温度达100℃开始计时，需保持6～9小时。

三、接种设备接种设备，是指分离和扩大转接各级菌种的专用设备，主要有接种室、接种箱、超净工作台以及各种接种工具。

(一)接种室接种室又称无菌室，是进行菌种分离和接种的专用房间。

此室的设置不宜与灭菌室和培养室距离过远，以免在搬运过程中造成杂菌污染。

生产量较大的菌种厂，应充分注意各个工作间的位置安排，总体布局参见下图。

接种室的面积一般5m２～6m２，高2m～3m即可，过大过小都难于保证无菌状态。

接种室外面设缓冲间，面积约2m２。

门不宜对开，最好安装移动门。

接种室内的地面和墙壁要求光滑洁净，便于洗清消毒。

室内和缓冲间装紫外线灯(波长265nm，功率30W)及日光灯各一支。

接种室具有操作方便，接种量大和速度快等优点，适宜于大规模生产。

(二)接种箱缓冲室接种箱是供菌种分离，移接的专用木制箱，实际上是缩小的接种室。

接种箱有多种形式和规格，医药器械部门出售的接种箱，结构严密，设备完善，但价格较高。

目前多数生产者采用木材和玻璃自己加工制作成一人或双人操作箱，其样式和大小大致。

接种箱内顶部装紫外线杀菌灯和日光灯各一盏。

箱前(或箱后)的两个圆孔装上40cm长的布袖套或橡皮手套，双手由此伸入操作。

圆孔外要设有推门，不操作时随即关门。

箱体安装玻璃，木板均要注意密封，箱的内外均用油漆涂刷。

接种箱结构简单，制造容易，造价较低，移动方便，易于消毒灭菌，由于人在箱外操作，气温较高时也能维持作业，适合于专业户制作母种、原种。

(三)超净工作台超净工作台是一种局部层流(平行流)装置，能够在局部造成洁净的工作环境。

室内的风经过滤器送入风机，由风机加压送入正压箱，再经高效过滤器除尘，洁净后通过均压层，以层流状态均匀垂直向下进入操作区(或以水平层流状态通过操作区)，以保证操作区有洁净的空气环境。

由于洁净的气流是匀速平行地向着一个方向。

空气设有涡流，故任何一点灰尘或附着在灰尘上的杂菌，很难向别处扩散转移，而只能就地排除掉。

因此，洁净气流不仅可以造成无尘环境，而且也是无菌环境。

使用超净工作台的好处是接种分离可靠，操作方便，尤其是炎热夏季，接种人员工作时感到舒畅。

(四)接种工具接种工具是指分离和移接菌种的专用工具，样式很多。

用于菌种分离＼母种制作和转接母种的工具，因大多在试管斜面和平板培养基上操作，一般是用细小的不锈钢丝制成。

用于原种和栽培种转接的工具，因培养基比较粗糙紧密，可用比较粗大的不锈钢制成。

四、培养菌种设备培养菌种设备，主要是指接种后用于培养菌丝体的设备，如恒温培养室、恒温培养箱、摇床机等。

(一)恒温培养室恒温培养室用于培育栽培种或培育较多的母种和原种。

恒温培养室的大小，视菌种的生产量而定。

室内放置菌种培养架。

加温可采用电加温器或安装红外线灯加温，最好在电加温的电源上安一个恒温调节器，使之能自动调节温度。

(二)恒温培养箱在制作母种和少量原种时，可采用恒温培养箱，根据需要使温度保持在一定范围内进行培养。

市售的恒温箱多为专业厂家生产的电热恒温培养箱，使用比较方便，但价格较贵，而且购买和运输多有不便。

因此可以用木板自己制造。

自制恒温箱用一只大木箱做成，箱的四壁及顶、底均装双层木板，中间填充木屑隔水保温，底层装上石棉板或其它绝缘防燃材料，箱内装上红外线灯泡或普通灯泡加温，箱内壁安装自动恒温器，箱顶板中央钻孔安装套有橡皮塞的温度计以测试箱内温度。

(三)摇瓶机(摇床)食用菌进行深层培养或制备液体菌种时，需设置摇瓶机。

摇瓶机有往复式或旋转式两种。

往复式摇瓶机的摇荡频率是每分钟80～120次，振幅(往复距)为8cm～12cm。

旋转式的摇荡频率为每分钟180～220次。

旋转式的耐用，效果较好。

五、实验室设备具有一定规模的专业菌种厂，为了便于对菌种、培养料及其代谢产物进行检查、观察、化验和分析，有必要设置个普通的实验室。

实验室常用的仪器设备有天平、干湿温度计、玻璃器皿和器具、孢子采集器、光学显微镜、电冰箱、冷藏箱及电热干燥箱等，可根据单位的具体条件设置。

(一)天平天平的类型有多种，常用的托盘天平，又称架式天平，称量为1000g，感量1.0g(即精确度为士1.0g)；扭力天平，称量100g，感量为0.01g；分析天平，称量100g，感量0.1mg～1.0mg。

(二)干湿温度计常用的是市售干湿球温度计，可同时观察环境的温度与湿度。

将干球温度计的读数减去湿球温度计的读数得差数。

旋转制动螺丝，对准其差数，差数与干球温度垂直交叉处的读数即为空气的相对湿度。

例如，干球温度计的读数为22℃，湿球温度计的读数为19.5℃，干湿温度差2.5。

在纵行22℃与横行2.5垂直交叉处的读数为73，即说明空气相对湿度73%。

自动记录温度计，能自动记录一天24小时内的温湿变化，因价格较贵，一般菌种厂很少购置。

购买2支普通温度表(用前最好进行校对)，找一个薄木板，将2支温度表并列固定在木板上。

2支温度表中间留出10cm左右的间隔，以便安放盛水的小瓶。

其中1支温度表的水银柱头，用易吸水的纱布条包裹扎牢，纱布的另一端放入装有清水的小瓶内作为湿球，即成为自制干湿球温度计。

观测时先看干、湿温度计的度数，计算出干湿球温度差，再查看温湿度换算表即可。

例如：干球温度计读数为18℃，湿球温度计读数为16℃，在温、湿度换算表纵行中查找18℃，再查横行干、湿温度差为2℃，其垂直交叉处的读数为76，即空气相对湿度为76%。

温湿度换算见附表。

无条件的单位自己可制造干湿球温度计。

(三)玻璃器皿和器具常用的玻璃器皿有烧杯、烧瓶、培养皿、漏斗、量筒、酒精灯、称量瓶、试管、接管研钵等；其它器具有剪刀、镊子、试管架等。