食用菌中粗多糖的测定
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
野生及人工培养香菇和黑木耳中粗多糖含量测定
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＤＡＬＩ ＵＮＩＶＥＲＳ ＩＴＹ
第７ 卷 第８ 期 ２００８ 年 ８ 月 Ｖｏｌ．７ Ｎｏ．８ Ａｕｇ． ２００８
野生及人工培养香菇和黑木耳中粗多糖含量测定
周 玲， 唐 静， 李 娇， 丁 洁， 刘 波 （ 大理学院药学院， 云南大理 ６７１０００）
［ 摘要］ 目的： 测定野生及人工培养的香菇、黑木耳中多糖含量。方法： 采用苯酚－ 硫酸法测定其多糖含量。结 果： 在１０～６０μｇ／ｍｌ线性范围内， 相关系数ｒ＝０．９９９ ４， 平均回收率为９９．４５％， ＲＳＤ为０．４７％（ ｎ＝６） 。野生香菇和黑 木耳中多糖含量分别为９．５２％和８．５４％， 人工培养的香菇和黑木耳中多糖含量分别为８．３６％和７．７７％。结论： 此 方法操作方便， 结果准确， 为香菇和黑木耳的进一步研究提供了可靠的依据。 ［ 关键词］ 多糖； 苯酚－ 硫酸法； 香菇； 黑木耳 ［ 中图分类号］ Ｒ１５１．３ ［ 文献标识码］ Ａ ［ 文章编号］ １６７２－ ２３４５（ ２００８） ０８－ ００５８－ ０３
表２ 野生及人工培养香菇、黑木耳中 粗多糖含量测定
样品 野生香菇 人工培养香菇 野生黑木耳 人工培养黑木耳
样品质量／ｇ １．００５ ６ １．００１ ２ １．０１０ ３ １．００３ ４ １．００２ ６ １．００１ ７ １．００４ ９ １．００３ １ １．００１ ９ １．００５ ７ １．００３ ８ １．００６ ３
表１ 葡萄糖加样回收试验结果
样品含 加入葡萄糖 实际测得 回收率／％ 平均回收 ＲＳＤ／％
量／μｇ 量／μｇ
量／μｇ
率／％
６３．４５
５
６８．９８ ９９．３１
６３．４５
１０
７３．０９ ９９．５１
猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定
猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定1.河北省食品药品检验院，河北石家庄050011；2.河北医科大学第三医院，河北石家庄050051目的分别测定猴头菇菌丝体、猴头菇发酵液提取的粗多糖中的多糖含量。
方法采用蒽酮-硫酸比色法，利用紫外分光光度计测定多糖含量，样品与对照品分别在450～750 nm波长范围内扫描。
结果最大吸收波长为（625±1）nm，猴头菇多糖检测浓度在20～100?g/mL（r2=0.999）范围内与吸光度线性关系良好；加样回收率为96.0%。
结论猴头菇菌丝体与发酵液提取的粗多糖中多糖含量均能达到30%以上。
标签：猴头菇菌丝体；猴头菇发酵液；多糖；含量测定猴头菌（Hericium erinaceus，Bull.Ex Fr.）又名猬菌、刺猬菌、小刺猴头、猴菇、猴头菇，隶属于担子菌门，齿菌科[1]，是著名的药食两用菌。
猴头菇味甘，性平，归脾、胃经。
猴头菇多糖是猴头菌的主要活性成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗突变、防辐射等作用[2]。
猴头菇多糖制成的药物和保健品深受人们喜爱，开发前景广阔。
目前，通过猴头菇子实体提取猴头菇多糖的方法研究较多，但猴头菇子实体的生长周期相对较长，本文研究的是发酵的方法获得的多糖，具有生长周期短，提取多糖速度快的特点。
因此，液体深层发酵是开发猴头菇活性成分的有效手段。
但是在发酵获得多糖的方法中，采用菌丝体提取多糖的研究较多，而积极利用发酵液提取多糖的方法较少报道，本实验通过对猴头菇菌丝体和发酵液提取的多糖含量进行比较，把发酵液也积极的利用起来，为猴头菇多糖更好的开发利用打下基础。
1 材料与方法1.1 材料与仪器紫外可见分光光度仪GBC Cintra10（澳大利亚GBC公司），高效液相（美国Waters公司），旋涡混合振荡器（江苏海门其林医用仪器厂），恒温水浴锅（北京靖卫科学仪器厂）。
D-无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所），蒽酮（北京金龙化学试剂有限公司），浓硫酸、95%乙醇、氯仿均为分析纯，猴头菇菌种为本实验室保存。
香菇中粗多糖含量测定的方法比较
香菇中粗多糖含量测定的方法比较
何东慧;郭晓燕
【期刊名称】《粮食流通技术》
【年(卷),期】2015(007)013
【摘要】香菇中粗多糖的测定,没有国标规定的方法,只有农业部推荐的《食用菌中粗多糖的测定》方法.粗多糖的测定还有白鸿主编的《保健食品功效成分检测方法》的测定方法.这两个方法都是采用苯酚-硫酸显色,在490nm下于紫外可见分光光度计上测定吸光度,查标准曲线得到样品的测定结果.只是在样品前处理和显色温度、
时间上存在差别.依据这两个方法对香菇中的粗多糖进行测定,根据测定结果,讨论用这两种方法测定香菇中粗多糖含量的优劣.
【总页数】4页(P29-32)
【作者】何东慧;郭晓燕
【作者单位】谱尼测试集团股份有限公司,北京 100000;谱尼测试集团股份有限公司,北京 100000
【正文语种】中文
【中图分类】R151.3
【相关文献】
1.香菇中粗多糖含量的测定的方法比较 [J], 宋三妹
2.香菇中多糖含量测定方法的比较研究 [J], 周勇;易延逵;杨晓敏;李亚平
3.野生及人工培养香菇和黑木耳中粗多糖含量测定 [J], 周玲;唐静;李娇;丁洁;刘波
4.香菇中粗多糖含量测定的方法比较 [J], 何东慧;郭晓燕;
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香菇 香菇多糖 提取 纯化 检测 含量测定及表征
09级应用化学
1
目录流程图
香菇简介 香菇多糖含量测定 香菇多糖组成的测 定 结束
营养成分及药用价 值
香菇多糖提取方法 及比较
香菇多糖结构的鉴 定
营养成分及药用价 值
香菇多糖的应用
香菇多糖的纯化
主要参考文献
地理分布
香菇多糖的生物活 性
香菇多糖纯度鉴定
市场分布
香菇多糖简介
香菇多糖的脱色
19
5.7.2主要的仪器分析方法主要有
高分辨率的核磁共振技术[7] 快速原子轰击质谱技术 电喷雾质谱 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 串联质谱技术及各种色质联用技术[8] 紫外分光光度法 红外光谱法[9] 气相色谱法[10] 液相色谱法[11] 电泳法[12] 比旋光度法等
11
4. 微波法提取香菇多糖
微波提取法是一种新型提取法，由于溶剂及细胞液吸收微波能， 微波射线辐射于溶剂并透过细胞壁内部时，细胞内部温度升高压力 增大，当压力超过细胞的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部 的多糖就从细胞中释放出来； 5. 超声波提取法 香菇多糖的超声波(20KHz一50MHz)提取一利用超声波的空化作 用分散破坏植物组织，加速植物多糖成分的浸出提取；另外超声波 产生的机械振动、乳化和击碎效应 等也能加速多糖成分的扩散释放 并充分与溶剂混合，提高香菇多糖的得率； 6.深层发酵培养提取法 目前，香菇多糖主要从香菇子实体中提取。人工培养香菇子实体， 生产周期长达半年以上，而深层培养发酵法获得香菇菌丝体和香菇 多糖，生产周期将缩短至一周左右；一般从鲜香菇中提取多糖，得 率为6.9％左右，从干香菇中提取多糖，得率是6.72％左右，差异不 大；而香菇菌丝体的多糖得率却明显高于香菇子实体，达7.3％左右。 因此在工业生产中，此法很具竞争优势；
三种长白山野生食用菌多糖和微量元素含量测定
三种长白山野生食用菌多糖和微量元素含量测定徐晶;曹越【摘要】目的测定三种长白山野生食用菌--牛肝菌、密环菌、香菇的中多糖和微圣元素的含量.方法采用水提醇沉法提取多糖,苯阶--硫酸法测定多糖含量,火焰原子吸收光谱法测定Ca、Fe、Zn、Mg四种微量元素的含量.结果牛肝菌、密环菌、香菇中多糖含量依次为7.67%、14.45%、6.92%.微量元素含贵依次为(μg·g-1):Fe:910.9,769.4,473.0,Ca:176.1,68.8,141.7;Mg:34.3,25.3,30.1;Zn:128.7,83.9, 124.9.结论三种长白山野生食用菌均含有丰富的多糖和微量元素,其中密环菌多糖含量最高,牛肚菌微量元素含量最高.【期刊名称】《通化师范学院学报》【年(卷),期】2011(032)004【总页数】3页(P34-36)【关键词】食用菌;多糖;微量元素;苯酚-硫酸法;原子吸收光谱法【作者】徐晶;曹越【作者单位】通化师范学院制药与食品科学系,吉林,通化,134002;通化师范学院制药与食品科学系,吉林,通化,134002【正文语种】中文【中图分类】S567.3食用菌是一大类有大型子实体的高等真菌，俗称蘑菇或蕈，含有蛋白质、多糖、纤维素、维生素、矿物质等多种营养成分，是一种绿色保健食品.食用菌中含有的多糖具有增强人体免疫功能、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、降低胆固醇等作用［1－2］，近年来得到国内外学者的广泛研究［3］.食用菌多糖的提取方法主要有水提醇沉法、酸碱提取法、酶解法、超声波法、微波法、超临界流体萃取法等方法［4－5］，其中水提醇沉法是最经典方法，应用最为广泛.关于食用菌中微量元素的研究报道较少，测定方法主要有吸光光度法、原子吸收光谱法和原子发射光谱法等.最近，于颖［6］报道了采用电感耦合等离子体质谱(ICP－MS)法测定牛肚菌中微量元素的方法.本文对三种长白山野生食用菌——牛肝菌、密环菌、香菇中多糖和微量元素(Fe、Ca、Mg、Zn)的含量进行了测定，以期为合理开发和利用长白山野生食用资源提供理论依据.1.1 仪器80－2离心机(江苏省金壇市荣华仪器制造有限公司);HWS26型电热恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司);DHG—9101—3S型电热恒温鼓风干燥箱(上海三发科学仪器有限公司);FZ102微型植物试样粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司);722型可见分光光度计(上海元析仪器有限公司); FA1604A电子天平(上海精天电子仪器有限公司); WFX－1F2B2原子吸收分光光度计(北京第二光学仪器厂);铁空心阴极灯、钙空心阴极灯、镁空心阴极灯、锌空心阴极灯(河北衡水空心阴极灯厂).1.2 材料牛肝菌和密环菌采自吉林省通化市佐安，香菇购自通化市新华市场(人工栽培的鲜品)，经通化师范学院制药与食品科学系于俊林教授鉴定，分别为厚环粘盖牛肝菌Suillus grevillei(Kl.)Sing.、蜜环菌Armillariellamellea(Vahl.:Fr.)Karst，香菇Lentinus edodes(Berk.)Sing..将三种食用菌用蒸馏水清洗干净，放于铁盘上自然风干7天，用植物微型粉碎机进行粉碎，过80目筛备用.1.3 试剂及药品三氧化二铁(光谱纯);氧化钙(高纯);金属锌(99.99%);硫酸镁(光谱纯);葡萄糖(分析纯)、苯酚(分析纯);盐酸、硝酸、高氯酸、硫酸均为优级纯;蒸馏水.1000mg·mL－1铁储备液:准确称取经灼烧的光谱纯三氧化二铁0.1429 g，置于250 mL烧杯中，加入盐酸(1+1)20 mL，加热至完全溶解，蒸至小体积，冷却后，加入盐酸5 mL，加热使盐类溶解，用去离子水定容到100 mL容量瓶中，摇匀.系列铁标准溶液:取10 mL铁储备液用蒸馏水定容至100 mL容量瓶中，成为100mg·mL－1铁标准溶液，从100 mg·mL－1铁标准溶液中分别取1、2、3、4、5 mL定容至50 mL，配制成浓度为2、4、6、8、10mg·mL－1系列铁标准溶液. 1000mg·mL－1钙储备液:准确称取经灼烧的高纯氧化钙0.1400 g，置于250 mL 烧杯中，加入盐酸2mL，低温加热使其溶解，冷却后移入100 mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀.系列钙标准溶液:取10 mL钙储备液用蒸馏水定容至100 mL容量瓶中，成为100mg·mL－1钙标准溶液，从100 mg·mL－1钙标准溶液中分别取2、4、6、8、10mL定容至50mL，配制成浓度为4、8、12、16、20 mg·mL－1系列钙标准溶液.1000 mg·mL－1锌储备液:准确称取高纯金属锌0.1000 g，置于250 mL烧杯中，加盐酸(1+1)20 mL，加热至完全溶解，蒸至小体积冷却，加入盐酸5 mL，加热煮沸溶解盐类，冷却后用去离子水移入100 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀.锌系列标准溶液:取10 mL锌储备液用蒸馏水定容到100 mL容量瓶中，成为100mg·mL－1钙标准溶液，从100 mg·mL－1锌标准溶液中分别取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL定容至50 mL，配制成浓度为0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg·mL－1系列锌标准溶液.1000 mg·mL－1镁储备液:准确称取光谱纯硫酸镁0.5261 g，加入2 mL水，慢慢加入2 mL盐酸(1+1)，待完全溶解后，加热煮沸，冷却后移入100 mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀.镁系列标准溶液:取10 mL镁储备液用蒸馏水定容到100 mL容量瓶中，成为100mg·mL－1镁标准溶液，从100 mg·mL－1镁标准溶液取10 mL用蒸馏水定容到100 mL容量瓶中，成为10 mg·mL－1镁标准溶液，从10 mg·mL－1镁标准溶液中分别取1、2、3、4、5 mL定容至50mL，配制成浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg·mL－1系列镁标准溶液.0.1 %的葡萄糖标准溶液:精密称取干燥恒重的葡萄糖0.5 g，加蒸馏水溶解，定容到500mL的容量瓶中，混匀备用.2.1 多糖含量的测定食用菌多糖测定采用苯酚—硫酸法.(1)葡萄糖标准曲线的绘制.准确吸取葡萄糖标准使用溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分别置于比色管中，各补水到2 mL，然后加入1 mL5%的苯酚溶液，振荡混匀.再小心加入5 mL浓硫酸，摇匀，用分光光度计于490 nm处以试剂空白为参比，分别测定各溶液的吸光度，绘制标准曲线.(2)食用菌多糖样品待测液的制备.准确称取已风干的牛肝菌、密环菌、香菇各约10 g，置于500mL烧瓶中，加水300 mL置沸水浴中加热1 h，过滤，将滤液浓缩至25 mL.滤液加入质量分数为95%的乙醇145 mL，使溶液质量浓度达到85%，静置过夜.将静置过夜的溶液离心沉淀，用乙醇反复洗涤，60℃烘干成粉末，备用. 因为粗提取的多糖中含有单糖、双糖、低聚糖等成分，必须进一步的精制、纯化.取经粗提取的三种菌粉各0.2 g，分别置于500mL容量瓶中，加水100 mL左右，放置沸水浴上加热1 h，冷却至室温后用85%乙醇150 mL，于60℃浸提30 min，重复2次，合并提取液，以3000 r·min－1的转数离心分离5 min，用乙醇溶液洗涤沉淀，离心后弃去上清液，重复操作3～4次，然后将沉淀加入蒸馏水溶解并定容至100 mL，摇匀，即得多糖样品待测液.(3)食用菌多糖含量的测定.准确吸取三种样品测定液各1mL，分别置于比色皿中，按照标准曲线制备方法进行测定，于490nm处测吸光度，以试剂空白为对照，分别测得牛肝菌多糖、香菇多糖和密环菌多糖的吸光度，按下式计算多糖含量.多糖计算公式:式中:C－根据线性方程计算出的样品测定液中葡萄糖质量，mg;V1－样品提取时定容体积，mL;V2－样品比色管中取样体积，mL;m－样品称量质量，g.2.2 微量元素的测定食用菌中微量元素的测定采用原子吸收光谱法.(1)仪器工作条件.火焰原子吸收分光光度法测定各微量元素的仪器最佳工作条件如表1.(2)微量元素待测液的制备.准确称取已风干的牛肝菌、密环菌、香菇各0.5g于三个100mL小烧杯中，加入5mL硝酸，盖上表面皿，静置24h，用电热套在110°C条件下加热，待溶液近干时取下，冷却，加入3mL高氯酸，加热(加热后冒白烟)至近干，取下，冷却后移入50mL容量瓶中，用3%的硝酸溶液定容，制得微量元素测定液，每样平行制备三份.3.1 食用菌多糖含量按2.1(1)方法绘制葡萄糖标准曲线，线性方程为:A=0.0073C+0.0034，相关系数:r=0.9990;按2.1(3)方法测定三种食用菌中多糖含量，测定结果见表2.结果显示，三种食用菌中均含有多糖，以密环菌中多糖含量为最多，牛肝菌次之、香菇最少. 3.2 食用菌微量元素含量(1)各元素标准曲线.按表1的仪器条件测定钙、铁、镁、锌四种元素系列标准溶液的吸光度，绘制标准曲线，标准曲线的线性方程和相关系数如表3所示.(2)微量元素含量.在表1仪器工作条件下，测定牛肝菌、密环菌、香菇中Fe、Ca、Mg、Zn的含量，结果如表4.可见，这三种食用菌中Fe、Ca、Mg、Zn含量丰富，其中Fe含量普遍较高，牛肝菌中Fe、Ca、Mg、Zn的含量均高于密环菌和香菇.牛肝菌中锌的含量远高于其它文献值［6］.食用菌中多糖含量测定可采用苯酚—硫酸法，微量元素测定可采用原子吸收光谱法.三种食用菌中均含有多糖，其中，密环菌多糖含量最高、牛肝菌次之、香菇最少;三种食用菌中均含有Fe、Ca、Mg、Zn四种微量元素，牛肝菌中各微量元素含量最高，密环菌次之，香菇最少.三种食用菌均具有较高的产品开发价值.【相关文献】［1］顾红，于丽薇.食用菌多糖的保健作用探讨与提取工艺研究［J］.哈尔滨师范大学:自然科学学报，2008，24(5):87－89.［2］史琦云，郭玉蓉，陈德蓉.食用菌多糖提取工艺研究［J］.食品工业科技，2004，25(2):98－100.［3］宁慧青.不同食用菌多糖含量的比较研究［J］.山西化工，2007，27(3):44－45.［4］尹艳，高文宏，于淑娟.多糖提取技术的研究进展［J］.食品工业科技，2007，17(2):248－250.［5］王雪冰，赵天瑞，樊建.食用菌多糖提取技术研究概况［J］.中国食用菌，2010，29(2):3－6. ［6］于颖.ICP－MS法测定野生美味牛肝菌中多种微量元素［J］.西北农业学报，2009，18(2):269－272.。
香菇、金针菇、黑木耳多糖的提取与测定
香菇、金针菇、黑木耳多糖的提取与测定作者：杜娟时文静来源：《江苏农业科学》2016年第08期摘要：以香菇、金针菇及黑木耳3种常见食用菌为主要原料，研究了食用菌多糖的提取条件和测定方法。
采用热水浸提、乙醇沉淀的方法提取多糖，然后运用苯酚-硫酸法测多糖含量。
分别从液料比、浸提温度、浸提时间、乙醇浓度进行了单因素试验，在此基础上，设计L9（34）的正交试验，得出3种食用菌多糖提取的最优组合。
结果表明，影响香菇和金针菇多糖提取的主次因素是一致的，依次为浸提温度、乙醇浓度、液料比；而对于黑木耳，液料比是最显著的影响因素，其次为乙醇浓度、浸提温度。
最终测定的多糖含量香菇最高，为3.51%；其次为黑木耳，为3.50%；最低是金针菇，为2.94%。
关键词：香菇；金针菇；黑木耳；多糖；提取；苯酚-硫酸法中图分类号： R284.2文献标志码：文章编号：1002-1302（2016）08-0347-03食用菌中的多糖类物质是增强免疫活性和抗衰老的有效成分之一，具有抗肿瘤、抗病毒、抗突变、抗辐射和降血压等功能[1]。
从食用菌中提取的多糖可作为配料添加到食药保健品中，不仅没有毒副作用，而且还能提供功效高、质量好的产品。
现代医学研究发现，食用菌中显著增强癌症患者抵抗力的生理活性物质即为食用菌多糖[2]。
香菇、金针菇、黑木耳都是日常生活中常见的食用菌，均含有十分丰富的多糖物质。
香菇多糖是一种天然人体免疫调节剂，具有调节人体免疫系统、抗病毒、抗感染以及延缓衰老等作用；金针菇多糖不仅能有效提高人体免疫力，而且还有抗感染、抗氧化、保肝保湿、辅助改善记忆和缓解体力疲劳等保健作用[3]；木耳多糖同样是一类重要的活性物质，在抗肿瘤、抗凝血、抗病毒等方面均有一定的生物活性。
本研究主要以香菇、金针菇、黑木耳为原料，利用水提醇沉法提取多糖，并对提取条件进行优化，分别从液料比、浸提温度、浸提时间、乙醇浓度进行单因素试验，在此基础上设计正交试验，以确定最佳提取条件。
香菇多糖的检测
一采用梯度稀释的葡萄糖溶香菇多糖含量测定液作标样硫酸o苯酚处理uv测定各溶液的a490和纯化多糖溶液的a490值代入线性方程计算多糖含logo香菇多糖分析检测
香菇多糖的检测
紫元公司：俞柯娜
沈圳珍 盛青青 俞亚丹 赵桑霞 莫高星 王素白 林佩佩 陈苗苗 丁露露
香菇多糖分析检测： 香菇多糖分析检测：
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• 成0. 1g/ L 多糖水溶液,用紫外可见光度计在波长200 • ～800nm 范围内扫描,检测有无核酸、蛋白质等杂峰出 • 现。
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香菇多糖分析检测： 香菇多糖分析检测：
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三、凝胶柱层析检测:纯化香菇多糖用sephadex G
• O100 葡聚糖凝胶柱(1cm ×15cm) 进行柱层析,洗脱液为 重蒸水,5ml/ h ,每管1ml 连续收集30 管,硫酸O苯酚 • 法逐管检测A490值,以吸收峰值为纵坐标、试管号为横 • 坐标绘制曲线图。
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香菇多糖分析检测： 香菇多糖分析检测：
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取过200 目筛并经105 ℃ 干燥至恒重的KBr 粉末300 mg、干燥纯化多糖2mg 在玛瑙钵中混合研细, 取 100mg 进行压片, 压片用 • 4000cm- 1～650cm- 1红 外光谱扫描。
四、红外光谱分析:称
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香菇多糖含量测定： 香菇多糖含量测定：
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一、采用梯度稀释的葡萄糖溶（ 量测定）
香菇多糖含
液作标样,硫酸O苯酚处理,UV 测定各溶液的A490 值, 绘制标准曲线并得到线性回归方程;同时测定粗多糖 和纯化多糖溶液的A490 值,代入线性方程计算香菇多糖分析检测：
• 二、紫外可见光谱分析:称取0. 0100g 纯化多糖配
香菇中粗多糖含量的测定的方法比较
香菇中粗多糖含量的测定的方法比较作者：宋三妹来源：《现代食品》 2018年第11期摘要：本文以香菇中粗多糖含量的测定的方法为重点进行阐述，从苯酚+ 硫酸法测定香菇中多糖含量、蒽酮，硫酸法测定香菇中多糖含量两方面进行深入探索与研究，其目的在于加强香菇中粗多糖含量测定的准确性。
关键词：香菇；多糖；苯酚硫酸法；蒽酮硫酸法中图分类号：TS219香菇具有化痰理气、治风破血的功效，经常食用能够有效预防人体各种皮肤炎症、毛细血管破裂以及佝偻病等。
香菇主要含有抗坏血酸、核黄素等，最主要的活性成分为香菇多糖，近些年，相关人员研究发现多糖能够有效加强细胞免疫力，抑制癌细胞生产，对抗肝炎以及病毒皆具有积极作用。
为此，加大对香菇中粗多糖含量的测定力度势在必行。
当下测定香菇中粗多糖含量的常见方法有苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法，具体操作如下。
1 材料1.1 原料和试剂香菇来自药材公司，通过中药教研室鉴定为伞菌科香蕈。
葡萄糖、水是重蒸水；其他试剂皆是分析纯。
1.2 设备可见紫外分光光度仪、电子天平、多功能粉碎机、数控超声仪、数控超声波清洗器、离心机。
2 方法和结果2.1 苯酚+ 硫酸法2.1.1 曲线制备（1）配制葡萄糖对照溶液。
称取10 mg 无水葡萄糖加入100 mL 容量瓶中，添加适量的水溶解后定容，将其摇匀，即制得葡萄糖浓度的浓度为0.1 mg/mL。
（2）绘制标准曲线。
量取对照溶液0.0、0.1、0.3、0.6、1.1 mL 和1.7 mL 分别加入试管之中，加水补充到2.0 mL，分别添加5% 苯酚溶液1 mL，混合完全，迅速添加5 mL 浓硫酸混合均匀，在恒温水中恒温反应15 min，再将其放置到冷水中进行冷却，阻断其继续反应；基于第一份为标准，依照分光光度法，在485 nm 处测定吸光度，以葡萄糖的浓度为纵坐标，以吸光度为横坐标绘制回归曲线，结果得出回归方程为Y=6.371X+0.012，R2=0.998。
2.1.2 供试品溶液的配制与样品测定取0.3 g 的香菇粉，添加5 mL 的水湿润样品，再添加20 mL 95% 乙醇，混合均匀，超声提取30 min，过滤，利用少量的乙醇洗涤滤器，将滤纸与滤渣皆放到烧瓶之中，加入50 mL 的水，加热回流2 h，趁热滤过，利用少量热水清洗滤器，合并洗液和滤液，放到冷却，移到100 mL 的量瓶中，利用水稀释到刻度处，混合均匀，进而得到供试品溶液。
西藏地区几种野生食用菌粗多糖的提取与测定
白西 藏林芝
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， 实 体 清 洗 干 净 ， 成 薄 片 ，０ 子 切 ４
６ 烘 干 至恒重 ， 碎过 ６ ０ 粉 ０目筛 ， 备用 。
１ ２ 粗 多 糖 的 提 取 方 法 ．
Ｋｏ ｒ）Ｋｏ ｒ］ 松 口蘑 ［ ｒ ｏｏ ｔｕａ ｅ ｎ． ｎ． 、 Ｔ ｈ ｌｍａｍａｓ ｔｋ （ ． ｔ ｔＩ ｉ Ｓｎ ． 、 味 牛 肝 菌 （ ｏｅｕ Ｓ Ｉｏ ｅ ｍａ） ｉｇ ］ 美 Ｂ ｌｔｓ
ｅ ｕ ｉ Ｂ ｌ ｅ ｒ ） 褐 疣 柄 牛 肝 菌 ［ （ｎ ｒ ｄ ｌ ｕ１ ｘ Ｆ ． 、 ｓ ． Ｌ ｕ ｉ ｅ ￣ ｌ ｌ （ ｕ１ ｘ ｒ ） Ｇｒｙ 、红 菇 蜡 伞 ｂｌｌ Ｂ ｌ ＊ｔ Ｊ ．ｅ Ｆ ． ａ］
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基 金 项 目： 西藏 Ｐ治 区科 技厅 重点 资助 项 目“ ｌ 西藏 野 蕈菌 多糖 筛选 利用 技术 研究 ” 编号 ：０ ５ ８ 的部 分研 究 内容 ｛ ｉ （ ２０６） 作 者 简 介 ： 清 平 （ ５ ） 男 ， ９ ６ 毕 业 于 西 藏 农 牧 学 院农 学 系 ， 教 授 ， 要 从 事 昆虫 学 、 蛛 学 与 食 用 菌 的 教 张 １６一 ， １ ８ 年 ９ 副 主 蜘 学 与 科 研 丁 作 ， 持 省 级 项 目 １ ， 西 藏 自治 区科 技 进 步 奖 １ ， 表 论 义 ２ 主 项 获 项 发 Ｏ多 篇 。
食用菌总糖含量测定方法的研究
食用菌总糖含量测定方法的研究摘要：比较香菇（Lentinula edodes）和黑木耳（Auricularia auricula）在不同水解条件下的单位质量吸光值，筛选适宜水解条件，并通过测定姬松茸（Agaricus blazei）、鸡腿菇（Coprinus comatus）和茶树菇(Agrocybe aegerita)3种食用菌的总糖含量，对筛选的水解条件进行验证；采用正交试验优化苯酚-硫酸法的反应条件；最后选用苯酚硫酸法和费林氏滴定法分别测定4种供试食用菌的总糖含量，并进行比较。
试验研究表明，食用菌适宜水解条件为：30 mL盐酸，100 ℃水浴水解3 h；优化的苯酚-硫酸法反应条件为：5%苯酚1.5 mL，浓硫酸5.5 mL，反应时间15 min；苯酚硫酸法和费林氏滴定法两种方法测得的食用菌总糖含量无显著差异，因苯酚-硫酸法操作简单，且简化了前处理过程，故是国标法费林氏滴定法较理想的替代方法之一。
关键词：食用菌；总糖；苯酚-硫酸法食用菌是我国的一大产业，如何充分利用其资源，提高食用菌的附加值，是目前研究的重要课题之一。
现已发现不少食用菌多糖具有药理活性［1~4］，且部分作为抗肿瘤药物用于临床，疗效明显［5］，因此对食用菌多糖进行深入研究具有十分重要的意义。
选择适宜的总糖测定方法及测定方法的优化是食用菌多糖化学和药理研究的前提。
现行国家标准《食用菌总糖含量测定方法》中，食用菌水解操作过程是加100 mL水和10 mL浓盐酸，置于100 ℃水浴中水解3 h，冷却后过滤，滤渣用100 mL水无损地洗回到圆底烧瓶中，再加浓盐酸10 mL，重复上述操作；总糖测定方法是费林氏滴定法［6］。
其中水解和滴定测定过程操作繁琐，工作量大，费时费力。
本试验对食用菌的适宜水解条件进行了摸索，随后对两种还原糖测定方法苯酚-硫酸法和费林氏滴定法进行了比较，在为食用菌多糖的进一步开发和利用提供了理论依据的同时，也为食用菌原料和食用菌产品质量标准的制定提供理论依据和技术储备。
灵芝粗多糖测定试验方案-2015-09-23
灵芝粗多糖的测定－蒽酮法1 试验原理多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度呈正比，在620nm波长下比色定量。
2 样品、仪器与试剂2.1 样品破壁灵芝孢子粉（袋装）2.2 仪器（1）离心机：4000r/min（2）离心管50mL或具盖10mL离心管（3）分光光度计（TU1901）（4）水浴锅（TW20）2.3 试剂实验用水为二级水；所用试剂为分析纯级。
1）葡萄糖标准液：准确称取0.1000g经98~100℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后定容至100mL，浓度是1.0mg/mL，以水稀释10倍（0.1mg/mL）制作标准曲线，现配现用。
2）蒽酮硫酸溶液：称取0.2g蒽酮置于烧杯中，缓慢加入100mL硫酸溶液（80%），溶解后呈黄色透明溶液，摇匀（棕色瓶保存）。
（等硫酸溶液温度降下来再加入蒽酮中）(80%硫酸配置：100mL 98%硫酸+30.29mL水)3）无水乙醇（A.R）4）3%草酸溶液：称取3.0克草酸，加水溶解后定容至100mL。
3 多糖溶液制备称取2.0000g破壁灵芝孢子粉加入50mL草酸溶液（3%）沸水浴加热回流提取2h，提取液冷却、过滤后定容至100mL，取5mL加入25mL无水乙醇4℃放置过夜沉淀多糖，离心，弃去上清，沉淀加少量热水溶解，重复沉淀一次；沉淀加少量水溶解并定容至50mL，得到样品溶液。
4 标准曲线的绘制分别精密吸取对照品溶液（0.1mg/mL）0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置25mL 具塞试管中，加水至1.0mL，精密加入硫酸蒽酮溶液5mL，置沸水浴中加热15min，取出，放入冰水浴中冷却15min，以相应的试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法，测定620m波长处吸光度。
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
5 样品含量的测定取一定体积的样品溶液（1.0mL）4份，分别置10mL具塞试管中，精密加入硫酸蒽酮溶液5mL，置沸水浴中加热15min，取出，放入冰水浴中冷却15min，测定吸光值。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：1、方法提要食品中相对分子质量1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖含量。
2、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器3、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4•5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g 并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。
4、测定步骤（1）样品处理a、样品提取：取胶囊内容物2.0g混匀，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。
3种食用菌中多糖的提取与测定
【测定方法】3种食用菌中多糖的提取与测定马 玲(塔里木大学中心测试室,新疆阿拉尔 843300)[中图分类号] R15515 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2005)02-0174-02 食用菌不仅营养丰富、风味独特,而且部分种类可药食两用,对提高机体的免疫功能、衰老起着重要作用。
食用菌中的多糖类物质是食用菌免疫活性和抗衰老的有效成分之一。
将食用菌中的多糖物质提取出来,作为食品、医药保健品行业的添加剂,不仅可以提高产品档次而且无毒副作用,符合当今世界回归自然的心态。
本项目提取、测定了马盖裂鞍菌、柳树菇、猴头菌3种食用菌中的多糖,现报告如下:1 材料与方法111 仪器721型光光度计,单联水浴锅。
112 试剂浓硫酸,葡萄糖,蒽酮,无水乙醇,石油醚,丙酮、氯仿、乙醚,脂肪抽滤器,所用试剂均为分析纯。
2 结果与讨论211 食用菌多糖的提取与精制称取已风干粉碎过60目筛的样品10g,置于脂肪抽滤器中,加入石油醚(60℃～90℃)100m l,95℃回流提取1h脱脂。
残渣挥干溶媒后,加80%乙醇90℃回流提取2次每次115h,离心,挥干溶媒。
将残渣加水,水浴温浸提取两次每次115h离心合并上清液用氯仿萃取多次,静置,弃去氯仿层,水溶液加入乙醇,使溶液浓度为80%,放置过夜,滤出沉淀。
依次用无水乙醇、丙酮、乙醚反复冲洗多次,60℃烘干至恒重,置于干燥器中备用。
计算3种食用菌产率,结果见表1。
表1 3种食用菌多糖产率项 目马盖裂鞍菌柳树菇猴头菌样品重(g)101000101000101000101000101000101000101000101000101000多糖干粉重(g)013116013183013159012812012866012881012523012489012546产率(%)311163118331159218122186621881215232148921546平均产率(n=3)311532186021519212 标准曲线的制备21211 标准溶液配制 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品011g置于100m l容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀即可。
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究一、研究背景香菇是一种常见的食用菌，具有丰富的营养价值和药用价值。
其中，香菇多糖是一种重要的生物活性物质，具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等多种生物学活性。
因此，提取香菇多糖并测定其含量具有重要的意义。
二、香菇多糖提取工艺1. 原料准备：选择新鲜的香菇作为原料，洗净后切碎备用。
2. 提取方法：采用水提法进行多糖提取。
将切好的香菇放入适量的水中，加热至沸腾后继续加热2小时左右，然后过滤得到提取液。
3. 沉淀分离：将提取液加入3倍体积的绝对乙醇中搅拌均匀后静置12小时以上，使得多糖沉淀。
然后将沉淀分离出来并用纯水洗净。
4. 浓缩干燥：将分离出来的多糖溶液进行浓缩至一定浓度后干燥得到香菇多糖粉末。
三、香菇多糖含量测定方法1. 蒽醌法：将香菇多糖与蒽醌反应生成有色化合物，通过比色法测定其吸光度从而计算出含量。
具体操作步骤为：取适量的香菇多糖溶液加入适量的蒽醌溶液，加入硫酸后混匀，放置15分钟后用紫外分光光度计测定吸光度。
2. 酚-硫酸法：将香菇多糖与酚反应生成有色化合物，通过比色法测定其吸光度从而计算出含量。
具体操作步骤为：取适量的香菇多糖溶液加入适量的稀硫酸和5%的酚溶液，混匀后放置15分钟后用紫外分光光度计测定吸光度。
3. 高温高压消解法：将香菇多糖样品进行高温高压消解后使用紫外分光光度计进行测定。
具体操作步骤为：取适量的香菇多糖样品加入稀酸后进行高温高压消解，然后用紫外分光光度计测定吸光度。
四、总结提取香菇多糖的工艺主要是采用水提法，然后进行沉淀分离和浓缩干燥。
含量测定方法主要有蒽醌法、酚-硫酸法和高温高压消解法。
这些方法都可以有效地提取香菇多糖并测定其含量，为香菇的开发利用提供了重要的技术支持。
食用菌多糖的提取检测及应用研究进展
食用菌多糖的提取检测及应用研究进展食用菌是一种富含营养价值且被广泛食用的菌类食品。
近年来，食用菌多糖的研究引起了人们的广泛关注。
食用菌多糖指的是从食用菌中提取得到的多糖类化合物，具有丰富的生物活性和药用价值。
本文将就食用菌多糖的提取、检测及应用进行综述。
一、食用菌多糖的提取1.物理法：物理法主要是通过水浸提、热水浸提、酸碱浸提等方式提取食用菌多糖。
物理法提取的多糖含量较低，但是对菌体损伤小，适用于大规模生产。
2.化学法：化学法主要是通过酸碱法、酶解法、醇沉法等方式提取食用菌多糖。
化学法提取的多糖含量较高，但是有可能破坏多糖的生物活性。
3.生物法：生物法主要是通过微生物法和酵素法提取食用菌多糖。
生物法提取的多糖含量较高，并且对多糖的生物活性影响较小。
二、食用菌多糖的检测1.物理检测：物理检测主要是通过红外光谱、核磁共振、质谱等技术对食用菌多糖进行分析。
2.化学检测：化学检测主要是通过酸碱滴定、硫酸热解等方法对食用菌多糖进行分析。
3.生物检测：生物检测主要是通过生物传感技术对食用菌多糖进行检测，如免疫检测、酶反应等。
三、食用菌多糖的应用1.医药应用：食用菌多糖具有抗肿瘤、抗氧化、降血脂、调节免疫功能等多种生物活性，被广泛应用于药物研发、肿瘤治疗、心血管疾病防治等领域。
2.食品应用：食用菌多糖具有增加食品的营养价值、改善食品口感的作用，可用于制备功能性保健食品、调味料等。
3.化妆品应用：食用菌多糖具有保湿、美白、抗衰老等功能，可应用于化妆品的研制及生产。
总之，食用菌多糖的提取、检测及应用研究进展已经取得了一定的成果。
随着人们对食用菌多糖的认识不断深入，食用菌多糖的研究将会得到更加广泛的关注，并有望在医药、食品、化妆品等领域得到更多的应用。
食用菌多糖的提取工艺研究
食用菌多糖的提取工艺研究以平菇子实体为对象，探讨了食用菌子实体多糖的提取工艺，考察了料水比、浸提时间、浸提温度、醇析浓度等因素对提取结果的影响。
实验结果表明，水法提取的最佳工艺条件为：1：40料水比，100℃，提取3.0h，80%乙醇醇析；碱法提取的最佳工艺为：0.7mol/L氢氧化钠，1：60料液比，100℃，提取5h，80%乙醇醇析。
标签：食用菌多糖；提取工艺；平菇0 前言食用菌多糖被称为“生物应答效应物”(Biological Response Modifier，简称BRM)。
是一种能够增强人体免疫功能的生物活性物质，对于遗传性的疾病具有一定的治疗效果。
本文以平菇子实体为研究对象，以水和碱为提取介质，探讨了多糖的提取工艺，考察了主要影响因素对提取结果的影响，在单因子实验的基础上进行了正交试验，确定了最佳的提取工艺，以期能给食用菌子实体多糖的提取研究提供一些基础性的参考。
1 材料和方法1.1 材料2.1.1 原料鲜灰平菇(唐平1号)子实体，从当地菇农处选购。
2.2.2 仪器及设备2XZ-0.5真空泵、HH.S21-4数显水浴锅、101-0BS干燥箱、752型分光光度计、托盘扭力天平、美的多功能食物搅拌器、FC104电子天平、海尔冰柜等。
1.2 方法2.2.1 实验方案本实验采用溶剂浸提法，首先干燥平菇子实体，粉碎过筛，选择合适的提取溶剂，考察提取时间、提取温度、料液比、溶剂浓度、乙醇加量等因素对提取结果的影响，在单因子实验的基础上进行正交实验，并确定最佳提取工艺。
2.2.2 实验流程(1)热水浸提法：原料→烘干(80℃，干燥4h以上)→粉碎→过筛(80目)→水浴浸提→真空抽滤→浓缩→除蛋白→醇沉多糖→脱色→干燥→称重测含量(2)氢氧化钠提取法：原料→烘干(80℃，干燥4h以上)→粉碎→过筛(80目)→浸提(NaOH溶液，96℃水浴种浸提2h)→真空抽滤→浓缩→除蛋白→醇沉多糖→脱色→干燥→称重测含量2.2.3 多糖的测定：粗多糖：采用称重法，取洁净平皿干燥至恒重，其重量记为M1，将粗多糖置于平皿中干燥至恒重，重量为M2，原料重为M ，则：粗多糖含量(%)=[(M2-M1)/M]╳100%多糖：采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖为标准物质，绘制标准曲线。
春生田头菇粗多糖超声辅助提取及抗氧化性测定
基金项目：湖南省农业科技创新资金项目（编号：２０２２ＣＸ９３）；湖南创新型省份建设专项—科技特派员服务乡村振兴项目（编号：２０２２ＮＫ４２８０）作者简介：韩晓磊，男，湖南省农业科学院农产品加工研究所助理研究员，西南林业大学在读硕士研究生。
通信作者：熊智（１９６５—），男，西南林业大学教授，博士。
Ｅ ｍａｉｌ：８２１１０３３５＠ｑｑ．ｃｏｍ吕慧英（１９８１—），女，湖南省农业科学院农产品加工研究所副研究员，博士。
Ｅ ｍａｉｌ：ｌｈｙ１１０３００＠１６３．ｃｏｍ收稿日期：２０２２ １０ ０２ 改回日期：２０２３ ０７ ０５犇犗犐：１０．１３６５２／犼．狊狆犼狓．１００３．５７８８．２０２２．８０８６９［文章编号］１００３ ５７８８（２０２３）０９ ０１６９ ０８春生田头菇粗多糖超声辅助提取及抗氧化性测定Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｔｕｄｙｏｆｃｒｕｄｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍ犃犵狉狅犮狔犫犲狆狉犪犲犮狅狓韩晓磊１，２犎犃犖犡犻犪狅犾犲犻１，２ 吕慧英２犔犝犎狌犻狔犻狀犵２ 梁珏钦２犔犐犃犖犌犑狌犲狇犻狀２ 范 伟３犉犃犖犠犲犻３刘 韬４犔犐犝犜犪狅４ 黄志群５犎犝犃犖犌犣犺犻狇狌狀５ 杨国舜６犢犃犖犌犌狌狅狊犺狌狀６ 熊 智１犡犐犗犖犌犣犺犻１（１．西南林业大学生物多样性保护学院，云南昆明 ６５０２２４；２．湖南省农业科学院农产品加工研究所，湖南长沙 ４１０１２５；３．湖南农业大学食品科学技术学院，湖南长沙 ４１０１２８；４．沅江市农业农村局，湖南益阳 ４１３１００；５．湖南芦菇生物科技有限公司，湖南益阳 ４１３１００；６．湖南博大天能实业股份有限公司，湖南益阳 ４１３１００）（１．犆狅犾犾犲犵犲狅犳犅犻狅犱犻狏犲狉狊犻狋狔犆狅狀狊犲狉狏犪狋犻狅狀，犛狅狌狋犺狑犲狊狋犉狅狉犲狊狋狉狔犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犓狌狀犿犻狀犵，犢狌狀狀犪狀６５０２２４，犆犺犻狀犪；２．犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犘狉狅犱狌犮狋犘狉狅犮犲狊狊犻狀犵，犎狌狀犪狀犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊，犆犺犪狀犵狊犺犪，犎狌狀犪狀４１０１２５，犆犺犻狀犪；３．犆狅犾犾犲犵犲狅犳犉狅狅犱犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔，犎狌狀犪狀犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犆犺犪狀犵狊犺犪，犎狌狀犪狀４１０１２８，犆犺犻狀犪；４．犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲犪狀犱犚狌狉犪犾犅狌狉犲犪狌狅犳犢狌犪狀犼犻犪狀犵犆犻狋狔，犢犻狔犪狀犵，犎狌狀犪狀４１３１００，犆犺犻狀犪；５．犎狌狀犪狀犔狌犵狌犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔犆狅．，犔狋犱．，犢犻狔犪狀犵，犎狌狀犪狀４１３１００，犆犺犻狀犪；６．犎狌狀犪狀犅狅犱犪犜犻犪狀犲狀犵犐狀犱狌狊狋狉狔犆狅．，犔狋犱．，犢犻狔犪狀犵，犎狌狀犪狀４１３１００，犆犺犻狀犪）摘要：目的：为高效利用洞庭湖特色芦苇食用菌资源，开发食用菌多糖功能性食品。
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食用菌中粗多糖的测定苯酚硫酸法
作业指导书
本作业指导书主要依据NY/T 1676-2008 《食用菌中粗多糖含量的测定》标准而制定作业指导书。
1 范围
本标准规定了食用菌粗多糖的比色测定法。
本标准适用于各种干、鲜食用菌产品中粗多糖及食用菌制品中粗多糖含量的测定，不适用于添加淀粉、糊精组分的食用菌产品，以及食用菌液体发酵或固体发酵产品。
2 原理
多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收，与标准系列比较定量。
3 试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682的蒸馏水。
3.1 试剂
3.1.1 浓硫酸(H2SO4)。
3.1.2 无水乙醇(C2H6O)。
3.1.3 苯酚（C6H6O），重蒸馏。
3.1.4 80%乙醇。
3.1.5 葡萄糖（C6H12O6），使用前应于105℃恒温烘干至恒重。
3.1.6 80%苯酚溶液：称取80g苯酚（3.1.3）于100ml烧杯中，加水溶解，定容至100ml后转至棕色瓶中，至4℃冰箱中保存。
3.1.7 5%苯酚：吸取5ml苯酚溶液（3.1.6），溶于75ml水中，混匀，现配现用。
3.1.8 100mg/L标准葡萄糖溶液:称取0.1000g葡萄糖于100ml烧杯中，加水溶解，定容至1000ml，至4℃冰箱中保存。
4 仪器和设备
4.1 可见分光光度计
4.2 分析天平：感量0.001g。
4.3 超声提取器。
4.4 离心机
5 分析步骤
5.1 样品称取
称取样品0.5g，精确到0.001g，置于50ml具塞离心管中。
5.2 单糖去除
缓慢加入80%乙醇，同时用涡旋仪振摇，使混合均匀，置超声提取器中超声提取30min。
4000r/min离心10min，弃去上清液，保留沉淀。
5.3 样品中有无淀粉、糊精
弃去上清液转移10ml至试管中，加入1滴碘溶液，振荡混合，观察是否有淀
粉或糊精与碘溶液反应后呈蓝色或红色。
若未出现呈色反应，继续5.4步骤，若出现呈色反应，则判断样品中有淀粉或糊精，不适用于方法。
5.4 多糖提取
用蒸馏水将沉淀转移至圆底烧瓶，加入50ml蒸馏水，于沸水浴中提取2h。
冷却至室温，过滤，将上清液转移至250ml容量瓶中，残渣洗涤2-3次，洗涤液转移至容量瓶中，加水定容。
此溶液为待测溶液。
5.5 标准曲线
精确吸取葡萄糖标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、10mL，分别置于20mL具塞试管中，以蒸馏水补至1.0mL，摇匀，加入苯酚液1.0mL和浓硫酸5.0mL，混匀，静置10min。
充分混合后，将试管放入30℃水浴20min，于波长490nm处测定吸光度值。
以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
5.6 测定
吸取0.4ml样品溶液于20mL具塞试管中，按5.5步骤，测定吸光度。
6 分析结果的表述
试样中多糖含量以质量分数w计，单位以克每一百克（g/100g），按式(1)计算：
式中：
m1———从标准曲线下查得的待测液含糖量，单位为微克(μg)；
m2 ———样品质量，单位为克(g)；
V1 ———样品定容体积，单位为毫升(mL)；
V 2———比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升(mL)；
0.9———葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数；
计算结果保留至小数点后2位。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于10%，以大于10%的情况不超过5%为前提。