PCR技术在前列腺液细菌检测中的应用
免疫荧光与聚合酶链(PCR)法在淋球菌感染的临床应用价值比较
免疫荧光与聚合酶链(PCR)法在淋球菌感染的临床应用价值比较摘要】目的：研究比较免疫荧光与聚合酶链(PCR)法在淋球菌感染的临床应用价值。
方法：随机选取本院自2009年至2012年就诊的淋球菌感染的尿道炎患者126名，分为两组，观察组采用免疫荧光定量与PCR法，对照组则采用常规涂片染色法，进行比较两组的阳性检出率。
结果：126名患者中，免疫荧光PCR法62例的阳性检出率为85.5%；涂片法64阳性检出率为54.7%，免疫荧光PCR法的阳性检出率明显高于常规涂片法。
结论：免疫荧光PCR法优于图片染色法，并具有敏感性强，快速、特异性高等特点[1]，在临床诊断上有显著效果，对临床诊断与治疗有着重要的指导意义。
【关键词】免疫荧光聚合酶链（PCR）淋球菌尿道炎【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）11-0232-01淋病（gnorrhea）是由淋病奈瑟菌（Neisseria gonorrhoeae）所致的泌尿生殖系统化脓性炎性疾病。
主要通过性交传染。
感染子宫颈内膜、尿道、也可侵犯直肠、咽部和眼结膜。
女性可发生子宫内膜炎、前庭大腺炎、盆腔炎、输卵管炎；男性可发生附睾炎和前列腺炎；并造成不孕或不育。
并可经血行播散，引起菌血症、心内膜炎、脑膜炎、关节炎、肝炎等[2]。
本研究用免疫荧光与聚合酶链(PCR)法在淋球菌感染的临床检出率上效果显著，有利于淋病的诊断和治疗，现具体报告如下。
1.资料与方法1.1 一般资料随机选取本院自2009年至2012年就诊的淋球菌感染的尿道炎患者126名，其中男性69名，年龄在19-60岁，平均（39.5±20.5）岁；女性57名，年龄20-58岁，平均（39±19）岁。
患者均为首诊病例，检查前3周内未用过抗生素。
1.2 方法一般诊断：淋病患者绝大多数在1周内有不洁性交史。
极少数患者通过非性接触的途径而受染。
临床表现主要是尿道炎或宫颈炎。
实时荧光定量PCR技术在肿瘤诊断中的应用
实时荧光定量PCR技术在肿瘤诊断中的应用肿瘤是现代医学所面临的最大挑战之一，它是人类健康的重要难题。
传统的肿瘤诊断方法有很多种，包括体格检查、影像学检查、肿瘤标志物检测等。
然而，由于其特异性和灵敏度的限制，传统的肿瘤诊断方法已经难以满足现代医学的需求。
为了提高肿瘤诊断的准确性和精确性，实时荧光定量PCR技术被广泛应用于肿瘤诊断中。
一、实时荧光定量PCR技术简介实时荧光定量PCR技术是一种利用PCR技术在开放的反应混合物中实时检测PCR反应产物累积量的方法。
与传统的PCR技术相比，实时荧光定量PCR技术具有更高的特异性和灵敏度，并且可以快速、准确地检测PCR反应产物的浓度。
实时荧光定量PCR技术的基本原理是，在PCR反应中添加带有荧光标记的探针，这些探针与PCR产物结合后会发生荧光共振能量转移，从而产生荧光信号。
PCR反应产物量的计算是通过测量荧光信号的强度来实现的。
因此，实时荧光定量PCR技术可以实时检测PCR反应的产物量，方便快捷地得出PCR反应的结果。
二、实时荧光定量PCR技术在肿瘤诊断中的应用非常广泛。
它可以检测肿瘤标志物、基因突变、基因表达水平等多种生物分子的变化，从而为肿瘤的诊断、预后评估、治疗监测等提供精准的分子标记。
1. 用于检测肿瘤标志物肿瘤标志物是指在恶性肿瘤患者的体液、组织或细胞中检测到的一类特定生物分子。
实时荧光定量PCR技术可以检测肿瘤标志物的变化，从而实现早期诊断、预后评估和治疗监测等目的。
例如，在前列腺癌的诊断中，PSA（前列腺特异性抗原）是一种常用的肿瘤标志物。
实时荧光定量PCR技术可以检测PSA的变化，从而提高前列腺癌的诊断准确性。
2. 用于检测基因突变肿瘤的形成和发展与基因的突变密切相关。
实时荧光定量PCR技术可以检测肿瘤相关基因的突变，从而为肿瘤的诊断和治疗提供准确的分子标记。
例如，在乳腺癌的诊断中，HER2基因突变是乳腺癌发生和恶化的重要因素。
实时荧光定量PCR技术可以检测HER2基因的突变，从而为乳腺癌的诊断和治疗提供更加准确和有效的分子标记。
pcr技术原理实验步骤和应用过程
pcr技术原理实验步骤和应用过程引言聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是在分子生物学领域中广泛应用的一种技术。
它能够通过无限次地扩增目标DNA片段，从而获得大量的目标DNA。
PCR技术不仅在遗传病的筛查、基因克隆和DNA测序等方面具有重要应用，还广泛应用于法医学、农业科学和生物技术等领域。
PCR技术原理PCR技术是通过连续进行三个核酸酶切循环，将目标DNA片段扩增至大量数量。
具体步骤如下：1. 反应准备将待扩增的DNA样本和引物（用于导向扩增的寡核苷酸链）添加到一个反应管中，并混合均匀。
2. Denaturation（变性）将反应管加热至95°C，使DNA双链解开成两条单链。
3. Annealing（退火）将反应管从95°C的高温状态快速冷却至50-60°C，并使引物与DNA单链结合。
4. Extension（延伸）将反应管温度提高至72°C，此时Taq DNA聚合酶开始引导DNA合成，从引物的末端开始延伸，并合成一条新的DNA链。
5. 延伸循环重复第2-4步骤，使得DNA的复制呈指数增长，产生大量扩增的DNA。
PCR技术应用过程PCR技术在科学研究和实际应用中有着广泛的应用，以下是几个典型的应用过程：1. 分子诊断PCR技术可以检测疾病相关基因的突变，用于遗传性疾病的早期诊断。
通过提取患者的DNA样本，通过PCR扩增技术可以检测出目标基因的突变，从而帮助医生确定诊断并制定合适的治疗方案。
2. 基因克隆PCR技术可以用于基因克隆。
通过设计合适的引物和使用PCR反应，可以在短时间内扩增出目标基因的DNA片段。
这些扩增的DNA片段可以被插入到表达载体中，进而在大量体外表达中使用。
3. 物种鉴定PCR技术在物种鉴定中也有应用。
通过选择一些特定的基因序列作为分子标记，我们可以通过扩增和测序这些序列来确定物种的身份。
这对于动植物的保护和种群遗传学研究非常重要。
2021-2022年安徽省阜阳市全科医学(中级)专业知识模拟考试(含答案)
2021-2022年安徽省阜阳市全科医学（中级）专业知识模拟考试(含答案) 学校:________ 班级:________ 姓名:________ 考号:________一、单选题(20题)1.预防急性胰腺炎的措施中，哪项不正确A.积极治疗胆道疾病B.戒酒C.常用抑制胰酶活性的药物D.避免服用引起急性胰腺炎酌药物E.避免暴饮暴食2.最佳治疗措施是A.A.静注苯妥英钠B.静注利多卡因C.静点氯化钾D.静注西地兰E.静注心得安3.严重损伤后须及时处理的代谢变化是A.代谢性碱中毒B.呼吸性碱中毒C.早期混合性碱中毒D.代谢性酸中毒E.混合性酸中毒4.下列关于幽门梗阻的描述不正确的是A.振水音B.胃型蠕动波C.呕吐后腹胀可减轻D.呕吐物中有隔餐或隔日食物E.多并发上消化道出血5.脑水肿多发生在流行性出血热的哪一病期A.A.发热期B.低血压休克期C.少尿期D.多尿期E.恢复期6.下面哪一项不是高血压转诊的指标A.高血压危象B.高血压脑病C.一过性高血压D.高血压合并肾功能不全E.需要排除继发性高血压7.关于高血压急症下列说法错误的是()A.可危及生命,需及早进行药物治疗B.血压明显升高C.不伴靶器官损害D.伴靶器官损害8.肾综合征出血热的传染源不包括A.黑线姬鼠B.褐家鼠C.病毒携带者D.大林姬鼠E.鸡9.上述病例最可能的诊断是A.A.复合性溃疡B.胃窦癌伴幽门梗阻C.神经性呕吐D.胆汁反流性胃炎E.十二指肠溃疡伴幽门梗阻10.患者，女，20岁。
作静脉胆道造影检查时，出现意识淡漠，心悸、出冷汗，口唇发钳，面色苍白，HR110次/分，R 25次/分，即60/40mmHg，应首先选用A.多巴胺B.地塞米松C.异丙嗪D.肾上腺素E.钙剂11.在下列5种细胞中，对电离辐射敏感性最低的是A.淋巴细胞B.胃黏膜上皮细胞C.肠黏膜上皮细胞D.生殖上皮细胞E.神经细胞12.前壁心肌梗死并发短阵室速时宜选择的治疗药物为A.胺碘酮B.洋地黄C.阿托品D.利多卡因E.地尔硫革（硫氮革酮）13.胃破裂可出现A.膈下游离气体B.反常呼吸C.耳鼻流血D.血淀粉酶升高E.腹膜后积气14.关于癫痫治疗原则的叙述下列哪项错误A.在全面评价患者后才开始长时间的抗癫痫治疗B.依据发作类型选择用药C.尽量小剂量联合用药D.从小剂量开始，逐渐增加至能有效控制发作又不产生毒性反应为止E.如需换药，应递减旧药，递增新药15.流行性出血热早期休克的最主要原因是A.病毒血症B.血浆外渗C.心肌损害D.微血管痉挛E.电解质紊乱16.化妆品更衣室应设置A.流动水洗手B.衣柜C.鞋架D.空气净化消毒设施E.以上都是17.青年男性患者，发热，咳大量脓臭痰，临床考虑为肺脓肿，下列胸片改变哪项支持该诊断A.右肺野小淡片影B.右下肺一球形阴影C.右肋膈角消失D.右中叶肺不张阴影E.右下叶背段空洞伴液平18.通过上述积极治疗，效果仍不佳，可能导致严重并发症，下列哪项并发症可除外A.A.心肌梗死B.肺性脑病C.休克D.弥散性血管内凝血E.消化道出血19.患者，男，45岁，盛夏季节连续3天在炼钢炉旁工作，第3天下午工作2小时感头痛、头昏，随即出现嗜睡、面色潮红、脉速、气促、皮肤干燥无汗，被送往医务室，考虑为中暑。
四、前列腺液及分泌物检查
2．其他化学成分测定 ACP、LD5/LD1、转铁蛋白 （transferrin,Tf）、柠檬酸等。
（二）微生物学检查
1．涂片染色检查
2．微生物培养
四、检查新进展
1．表皮生长因子测定 2． PR92抗原测定 3． 免疫球蛋白和精浆蛋白测定 4． PCR检查
再 见
①维持精浆适当的pH
③抑制细菌生长
②参与精子能量代谢
④使精液液化
一、标本采集
采集方法：按摩前列腺 质量控制 1．临床医生 2．被检者 3. 采集及送检 4. 微生物培养 5. 禁忌征 一次按摩失败或检查结果阴性，而又有临 床指征者，隔3～5天后复查。
二、一般检查
（一）一般性状检查 1．量 正常成年男性 数滴至1ml ，前列腺炎时 减少 。 2．颜色和粘稠度
3. 激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）在阴道涂片
检查的应用 4. 计算机在阴道涂片筛选中的应用
五、质量控制
1.标本采集 2.涂片制备 3.显微镜检查 遵守操作规程，观察标准一致 4.统一报告方式 5.加强室内质控和室间质评
前列腺液检查
前列腺液（prostatic fluid)主要成分： ①电解质②酶类③酯类④免疫物质 ⑤有形成分⑥其他 功能主要有：
Ⅲ度
方法学评价 湿片法
涂片染色法
参考值
I～II度
临床意义 阴道分泌物清洁度是阴道炎症和生
育期妇女卵巢性腺分泌功能的判断指标。
分泌物病原虫学检查
（一）阴道毛滴虫（TV）
方法 湿片法 优点 简单易行、快速，为常用方法 缺点 受检验时间、温度、涂片 厚度影响 受涂片厚度和染色影响 可出现非特异性反应 操作复杂
方法原理 参考值 临床意义
湿片法、革兰染色法 、培养法 阴性 阳性见于真菌性阴道炎
国际最新前列腺炎指南
UDS异常 （尿道闭合压升高等）
排尿异常
脊髓
疼痛
大脑皮层
盆底痉挛
P
尿液返流
CPS-神经-肌肉环路的建立
⑦前列腺分泌功能的失调
正常男性前列腺液的PH值一般在6 .4~6 .7之间 ，也有可能是酸性或碱性，随年龄增长逐渐趋于碱性。 PH值呈碱性大大影响了前列腺内的抗生素浓度。使治疗效果受到影响。 前列腺炎时,前列腺功能失调的主要表现：a: 升高的因素和成份：PH 升高,LDH-5（乳酸脱氢酶同功酶Ⅴ） 和LDH-1 （乳酸脱氢酶同功酶Ⅰ ）的比例升高（正常比值小于2）,免疫球蛋白升高 ,b:降低因素和成份；比重,PAF, 阳离子,酶。 潜在的抗菌因子（ PAF）能杀伤引发泌尿系感染的致病菌。 RAF 活性受到抑制或缺乏。
表-1 前列腺炎各型临床特征
UTI， Urinary tract infection; DRE, Digital rectal examination ; E.P.S, Expressed prostatic secretion
(译自Campbell’s Urology, the 7th edition, 稍作修改 )
早在1893年Belfield就提出，前列腺炎是由于会阴部反复损伤，如骑马、生活放纵、性生活过度、手淫、暴饮暴食等所致。 以后发现与淋病、格兰氏阴性和阳性菌感染有关。 50年代注意到了非细菌性原因。
90年代证实了还有自身免疫因素，前列腺内导管反流、尿液及其代谢产物的化学因素等原因。 盆底和会阴复合性神经肌肉疾病是引起前列腺痛的病因。
前列腺炎的发病机制复杂，确切病因尚待确定，很可能不是一个因素引起，许多病因尚未能被证实。
①造成前列腺长期充血的原因：
频繁性交、手淫、性兴奋 饮酒、食用刺激性食物 长距离骑车、骑马、久坐 前列腺按摩过重或过频
液体活检技术及其在前列腺癌诊疗中的应用
㊀㊀作者单位:４３００３０武汉,华中科技大学同济医学院计划生育研究所(肖先金㊁张绪哲㊁熊承良);华中科技大学附属同济医院泌尿外科(陈忠)通信作者:熊承良,EＧm a i l:c l x i o n g９５１＠s i n a．c o m 专家论坛液体活检技术及其在前列腺癌诊疗中的应用肖先金㊀张绪哲㊀陈忠㊀熊承良d o i:１０．３８７０/j．i s s n．１６７４Ｇ４６２４．２０１８．０２．００１㊀㊀前列腺癌(p r o s t a t e c a n c e r,P C a)是男性生殖系统常见的恶性肿瘤,随着人们生活方式的改变以及环境污染的加剧,P C a的发病率正在逐年增加.欧美国家P C a的病例数已经超过肺癌和大肠癌,成为危害男性健康第一位的肿瘤[１].虽然我国P C a的发病率低于西方国家,但随着人均寿命㊁生活方式和诊断方式的变化,发病率和死亡率都呈明显上升趋势[２].研究表明,P C a的治疗效果与诊断密切相关,局限性P C a患者５年生存率接近１００％,而伴有远处转移的患者５年生存率为３３％[３].因此,开发P C a的早期诊断方法,降低转移及复发率,是当前临床亟待解决的问题.早期阶段P C a无明显临床症状,早期诊断公认的方法为血清前列腺特异性抗原(p r o s t a t eＧs p e c i f i c a n t i g e n,P S A)以及直肠B超检查.但P S A的特异性不高,常导致不必要的穿刺活检和过度治疗.目前,P S A检查的意义在广大临床医生中存在较大争议[４Ｇ５].因此,有必要发展新的肿瘤特异性标志物替代或者协助P S A检查,以达到更好的P C a诊断效果.一㊁液体活检技术近年来,以循环肿瘤D N A(c i r c u l a t i n g t u m o r D N A,c t D N A)㊁循环肿瘤细胞(c i r c u l a t i n g t u m o r c e l l,C T C)和外泌体为检测目标的液体活检技术取得了显著的进展[６].液体活检具有取样容易㊁创伤小等特点,可以实现多次㊁连续检测.c t D N A㊁C T C 和外泌体携带肿瘤相关的基因序列㊁R N A和蛋白等多维度的信息,可以为癌症的诊断提供丰富的数据,因而具有更高的准确性和特异性.１．c t D N A及其检测技术:c t D N A是肿瘤细胞脱落或者凋亡破碎后释放进入循环系统的碎片化D N A.作为特征性的肿瘤标志物,它携带肿瘤细胞的基因突变信息.检测这些特征性基因突变能够为肿瘤早筛㊁疗效评估和复发监测提供重要的信息[７].然而,正常细胞在程序性凋亡过程中会释放大量野生型D N A进入循环系统,因而血浆游离D N A(c e l l f r e eD N A,c f D N A)中,c t D N A所占比例(丰度)很低,相应地,特征性基因突变的丰度也非常低.据文献报道,血浆c f D N A中特征性基因突变的丰度一般在０．００１％~１０％之间[８Ｇ９],癌症早期丰度会更低.因此,待测样品中突变型D N A周围存在着大量野生型D N A,给突变的检测尤其是癌症早期阶段突变的检测提出了巨大的挑战.目前,检测c t D N A的常用方法有两大类:测序法和选择性P C R扩增法.测序法可以对未知突变进行检测,提供序列组成㊁突变类型㊁突变位置等丰富的信息.第一代测序法(S a n g e r测序和焦磷酸测序)检测限为５％~１０％[１０],远远无法满足c t D N A 的检测要求.第二代测序法(n e x tＧg e n e r a t i o ns eＧq u e n c i n g,N G S)通过增加测序的通量和深度提升了测序的覆盖范围,对获取的大量数据进行分析后,可以得到超长片段甚至整个基因组的序列信息[１１Ｇ１２].F o r s h e w等[１３]利用靶向标记引物选择性扩增目标基因,然后再进行深度测序,提升了NG S的灵敏度,检测限达到２％.为了进一步提升灵敏度, N e w m a n等[１４]开发了深度测序肿瘤个体化建档法(c a n c e r p e r s o n a l i z e d p r o f i l i n g b y d e e p s e q u e n c i n g, C A P PＧN G S),通过人群大样本分析,筛选出小范围(０．０４％)目标基因库,从而可以对目标基因库实现超高深度的测序.C A P PＧN G S的灵敏度较高,检测限可达０．０２％,并且能够同时检测数百个基因突变,在疾病的机制研究以及致病基因的大规模筛选中有着显著的优势.但是,测序技术的检测成本较高,数据分析复杂,周期冗长.开发更加简便的测序新技术用于微量c t D N A的检测是目前研究的热点之一.选择性P C R扩增法是在P C R过程中选择性地扩增突变链或者特异性地指示突变链信号的一类方法.用于检测c t D N A的选择性P C R扩增法主要包括:突变阻滞扩增系统(a m p l i f i c a t i o nr e f r a c t o r y５６现代泌尿生殖肿瘤杂志２０１８年４月第１０卷第２期㊀JC o n t e m p U r o lR e p r o dO n c o l,A p r i l２０１８,V o l１０,N o ２m u t a t i o n s y s t e m P C R,A R M SP C R)[１５]㊁定量P C R (q u a n t i t a t i v eP C R,q P C R)[１６Ｇ１７]㊁低温P C R(c oＧa mＧp l i f i c a t i o n a t l o w e r t e m p e r a t u r e P C R,C O L DＧP C R)[１８]以及将上述选择性P C R进行串联组合构建的A R M SＧq P C R[１９]和i c eＧC O L DＧP C R[２０]方法.相比测序法,选择性P C R操作简单,检测周期短,但灵敏度不如测序法.A R M SＧP C R㊁q P C R和C O L DＧP C R检测限为１％;A R M SＧq P C R㊁i c eＧC O L DＧP C R 等组合型P C R技术的灵敏度有所提升,检测限可达０．０５％左右.新一代的数字P C R技术是在微芯片平台上将血浆循环D N A分散成单分子微乳滴,然后在单拷贝D N A分子上进行P C R扩增,实现了 计数式 的绝对定量.数字P C R的灵敏度很高,检测限可达０．００５％~０．０５％[７,２１Ｇ２２],是c t D N A检测技术中灵敏度最高的方法,在热点突变的临床检测中有着广泛的应用.然而,目前c t D N A检测技术的灵敏度均无法完全满足癌症早期诊断的要求,基于测序和选择性P C R的方法,检测限均为０．０１％左右,癌症Ⅰ期的检出率不足５０％,对于更早期的肿瘤,检出率会更低,如要进一步提高上述方法的灵敏度,则将显著增加检测的成本并降低方法的鲁棒性.基于测序的检测技术为了达到０．０１％量级的灵敏度,测序深度高达１００００ˑ以上,检测成本很高,现阶段难以在临床上大规模应用;进一步提高选择性P C R的灵敏度则需要在体系中继续叠加突变识别单元,导致序列的设计㊁反应条件的优化更加繁琐,不适合推广应用.为了克服上述缺点,X i a o等[２３Ｇ２７]㊁W u等[２８]在待测D N A样品预处理以及P C R扩增后的探针检测方面开展了一系列研究.样品处理方面,开发了基于人工序列特异性核酸酶的c t D N A富集技术,可以大幅提升待测样品中突变链(c t D N A)的丰度,为后续检测提供巨大帮助[２３].P C R扩增后的检测方面,构建了一系列基于核酸探针的高灵敏检测体系,包括基于内切酶Ⅳ识别单碱基错配的空位探针循环放大体系[２４Ｇ２６],基于L a m b d a外切酶识别单碱基错配的常温探针体系[２７Ｇ２８]以及基于D N A链迁移探针的常温㊁无酶快速检测体系[２７].这些探针技术可以与开发的样品预处理方法结合起来,构建针对不同检测需求的c t D N A超灵敏分析平台.２．C T C及其检测技术:随着实体肿瘤的长大,部分肿瘤细胞会发生上皮间质转化,从原发肿瘤上脱落,并通过血液循环系统或者淋巴系统去往身体各处寻找落脚点.其中,经过血液循环的脱落肿瘤细胞称为C T C.外周血中C T C数量极少,平均每１０５~１０７个单核细胞中存在１个C T C[２９].因此, C T C的检测包含细胞富集和细胞分析两个步骤.C T C的富集方法可以分为化学特性富集法(免疫亲和)和物理特性富集法.建立在C T C生化特性的分离富集方法,主要是利用特异性抗体与细胞表面抗原进行特异性结合来富集C T C,或者去除血细胞留下肿瘤细胞.主要包括阳性富集法[３０]㊁阴性富集法[３１]和微流体法.①阳性富集法(免疫磁珠吸附C T C):以C e l l S e a r c h为代表,在磁珠上包被细胞表面粘附分子(E p C AM),以捕获C T C.②阴性富集法(免疫磁珠吸附其他细胞):也称为白细胞去除法,用特异性抗体C D４５㊁C D１４等与白细胞结合,从而去除全血中的白细胞.该方法较其他富集方法捕获效率更高,但特异性明显低于其他方法.③微流体法:将抗C T C表面特定蛋白标志物E p C AM抗体与磁珠或微流体进行偶联,利用这些固相载体上的抗体直接从血中捕获C T C.物理特性富集法是根据C T C的物理特性,如密度㊁尺寸以及可变形性等进行富集.包括密度梯度离心[３２]㊁过滤法[３３]以及微流控芯片法[３４].①密度梯度离心:根据C T C密度较白细胞㊁红细胞大的原理,通过离心将它们分开.是一种非常廉价㊁高效的C T C分离方法.临床实验证明,密度梯度离心富集C T C较C e l l S e a r c h系统效率更高.②过滤法:依据C T C体积大于血细胞的特性,对C T C进行捕获.C T C的直径约为１０~２０μm,而血细胞大小为７~１２μm,通过过滤,留下体积比较大的C T C.③微流控芯片法:针对C T C的体积和可变形性对C T C进行捕获,C T C的捕获率和特异性均可达到８０％以上.综合来看,物理特性富集法较生化特性法操作简单㊁成本低廉,但特异性低,也无法克服C T C在物理特性上的异质性.未来,将两者结合的新型富集技术将是发展的趋势.通过上述富集方法获得C T C后,需行有效的下游分析.一方面,由于现有富集方法无法保证获得的细胞百分之百都是C T C,因而需要通过下游分析检测技术进一步鉴定确认.另一方面,通过检测和分析C T C表面和内部的癌症标志分子,能够反映肿瘤发生发展的动态变化,为肿瘤的精准诊断和临床分期提供丰富多维的信息.常用的C T C检测技术包括:免疫荧光[３５]㊁P C R[３６]㊁荧光原位杂交(F I S H)[３５]和二代测序.①免疫荧光法:肿瘤细胞一般为上皮来源,细胞内会表达角蛋白(c y t o k e r aＧt i n,C K)或其他肿瘤标志物(如H E R２).通过免疫荧光染色,可对来自实体瘤C T C中的标志蛋白进行６６ 现代泌尿生殖肿瘤杂志２０１８年４月第１０卷第２期㊀JC o n t e m p U r o lR e p r o dO n c o l,A p r i l２０１８,V o l１０,N o ２识别,从而实现对C T C的检测.该方法检测灵敏度高㊁速度快,是目前最常用的检测手段.②F I S H:根据已知的胞内特异性D N A序列,设计探针与细胞内的基因组中D N A分子杂交,检测该特异基因序列的存在与丰度,从而指示C T C的存在.③P C R:提取C T C中的D N A或R N A,通过逆转录P C R (R TＧP C R)对基因的表达进行检测,还可以利用选择性P C R检测D N A突变.④二代测序:C T C数量少,直接进行二代测序难度大,需要将单细胞的D N A扩增后,再利用二代测序读取基因序列信息.虽然单细胞二代测序技术目前尚处于实验室阶段,但它能分析未知突变的序列信息和肿瘤细胞的异质性,不仅能更加准确地鉴定C T C,还能通过对比不同C T C的序列信息,分析肿瘤的发生发展过程,是未来C T C检测的发展趋势.３．外泌体及其检测技术:外泌体是源于细胞出芽或存储颗粒分泌的细胞外囊泡(c e l l u l a r v e s i c l e s, E V s)样结构家族的总称,其通常伴随细胞激活㊁坏死和凋亡等过程而产生.E V s由富含脂质的外膜包裹,携带源细胞的部分生物活性物质,如蛋白质㊁脂质和各类核酸片段等[３７].外泌体在数量上多于C T C,更易富集;在形式上分泌小泡能够有效保护核酸类物质,克服了c t D N A在血液中容易降解的问题,在临床应用上大有可为.与C T C类似,外泌体的检测也包括分离富集和后续检测两个步骤.外泌体的分离富集主要依据物理特性(密度㊁大小)和生化特性(表面蛋白)来实现,包括差速离心㊁密度梯度离心㊁过滤和免疫分离[３８]等手段.外泌体的分析根据不同目标物采用不同的分析技术,分析外泌体中的蛋白,可使用W e s t e r nb l o t㊁S D SＧP A G E和蛋白组学分析等方法;分析外泌体中的核酸,则可采用P C R㊁基因芯片和二代测序等.C T C㊁c tD N A和外泌体都是液体活检的检测对象,但各有特色.C T C能提高诊疗的精确性,而c t D N A侧重于靶向用药和耐药性指导,外泌体目前还没有成熟的产品,但是外泌体稳定性强,且适用范围广.单独检测C T C的临床意义越来越弱,与c t D N A联合检测,可以充分体现c t D N A的高灵敏度,以及C T C的高特异性和 全息化 的优势.未来,各种方式联合使用将是液体活检的大趋势.二㊁P C a液体活检新进展１．C T C检测与P C a:近年来,基于C T C的液体活检技术在结直肠癌㊁乳腺癌㊁P C a㊁胃癌等实体肿瘤的检测中得到了广泛的应用.２００８年,美国F D A批准了C e l l S e a r c h平台用于转移性P C a的评估.２０１６年,中国国家食品药品监督管理总局批准了C e l l S e a r c h检测系统在结直肠癌㊁P C a和乳腺癌中的临床应用,开启了液体活检技术在国内临床应用的新篇章.N a g r a t h等[３４]对来自上皮细胞肿瘤患者的１１６份血样进行了C T CＧC h i p检测,１１５份(９９％)血样中检测到C T C s,其中７例早期P C a患者血样中均检测到C T C s,具有较高的灵敏度和特异度.虽然C T C在早期P C a诊断中的应用还未得到学术界的广泛认可,但在进展和转移性P C a的临床应用中已经取得了巨大的成功.I MM CＧ３８招募了２７６例转移性P C a患者,对其中２３１例进行了有效评估.该研究利用C e l l S e a r c h平台在治疗前后按月对患者的外周血C T C进行持续动态的检测[３９].研究发现C T C５个/７．５μl外周血为C u t o f f值.该项研究最终使得F D A在２００８年批准了C e l l S e a r c h平台的临床应用.O k e g a w a等[４０]应用C e l l S e a r c h系统对７６例激素难治性P C a患者外周血C T C s进行了检测,探究C T C的数量与患者生存时间的关系.研究发现,C T C数量ȡ５的患者生存时间(１２．０个月)显著低于C T C数量＜５的患者(２６．０个月),并且前者的死亡风险明显高于后者.S c h w a r z e n b a c h等[４１]对８１例P C a患者外周血C T C进行了检测,发现外周血C T C与P C a的分期㊁G l e a s o n评分存在密切关系.可见C T C计数可以用来评估P C a患者的身体状况和病情进展.C T C除了可以用于P C a的诊断,还可实时监测P C a的治疗效果,并根据结果调整治疗方案,实现个体化精准医疗.S c h e r等[４２]对１６４例去势抵抗性P C a(C R P C)患者进行了类似研究,发现大部分患者治疗后C T C s计数明显下降,且C T C s计数的变化与生存时间关系密切.D a r s h a n等[４３]研究证实, C R P C患者外周血C T C中A R的亚细胞水平定位与患者对多西他赛化疗的反应密切相关.A n t o n a r a k i s等[４４]研究发现,在A RＧ雄激素受体剪接变异体７(V７)阳性的C R P C患者中,紫杉烷的疗效优于阿比特龙,而A RＧV７阴性的患者中两种药物的疗效相当,推测A RＧV７可用于指导C R P C患者化疗药物的选择.利用二代测序技术检测P C aC T C中的单核苷酸变化(S N V s)可以提供更丰富的诊断信息,甚至为分子生物学机制研究提供新视野.通过全外显子组测序发现C T C s与原发肿瘤组织具有较高的一致性,对１例P C a患者C T C s的检测发现,７３种突变类型有５１种出现在配对组织中,一致性达７０％.而７６现代泌尿生殖肿瘤杂志２０１８年４月第１０卷第２期㊀JC o n t e m p U r o lR e p r o dO n c o l,A p r i l２０１８,V o l１０,N o ２肿瘤组织中的５６种突变类型有４１种在C T C s中检出.２．c t D N A检测与P C a:目前P C a c t D N A检测的研究热点包括c t D N A的总量㊁相关基因(致病基因)的点突变和甲基化分析.大量研究表明c t D N A与肿瘤相关特征具一致性:正常人血浆循环D N A水平很低,而P C a患者循环D N A的浓度明显增高.G o e s s l等[４５]发现,P C a 患者中循环D N A的检出率高达１００％.T o m b a l 等[４６]也发现,P C a患者血液中循环D N A的总量在手术前后㊁复发前后的变化很大,因此可以作为肿瘤复发的监测手段.基因启动子区域的高甲基化致使相关基因表达沉默,并进一步影响下游的分子生物学通路,干扰P C a的病理进展和临床预后.与P C a相关的热点甲基化基因包括:癌甲基化蛋白Ⅰ基因㊁原钙黏附蛋白８基因以及生长阻滞和D N A损伤基因(g r o w t h a r r e s ta n d D N A d a m a g e g e n e,G A D D)等.R e i s 等[４７]通过检测３４例P C a患者和４８例前列腺良性肿瘤患者的血清G A D D４５a基因甲基化水平发现, P C a组织中的G A D D４５a甲基化的发生率明显高于前列腺良性肿瘤组织.调控m i c r o R N A表达基因的甲基化水平也与P C a的发生密切相关,L i n等[４８]研究发现,P C a中m i RＧ３１基因启动子区域D N A高甲基化导致其表达沉默,A R表达升高,有利于P C a 的恶性行为发生.大量研究证实m i RＧ１４３㊁m i RＧ２１８㊁m i RＧ３７５㊁m i RＧ２２㊁m i RＧ２９a等的高甲基化也参与了P C a形成[４９Ｇ５２].基因的甲基化异常在P C a早期阶段非常普遍,因此,检测c t D N A的甲基化水平对于P C a的早期诊断有着重要的临床价值.３．外泌体检测与P C a:E V s是近年来的研究热点,无论在肿瘤,如肺癌㊁卵巢癌㊁乳腺癌㊁直肠癌等,还是在非肿瘤性疾病,如心血管疾病㊁肾脏病和自身免疫性疾病等领域中均有大量研究报道.在P C a 中,对E V s的研究主要集中在前列腺小体㊁外泌体.①前列腺小体:当离心速度在~１０００００ˑg时,分离出的P C a相关的E V s称为外泌体或前列腺小体.实际上,前列腺小体就是外泌体[５３Ｇ５４],为避免混淆,本文对前列腺小体和外泌体分开阐述.P C a患者血浆中的前列腺小体数量通常显著增多,较正常组高３~７倍.因此,前列腺小体的数量可用于辅助诊断恶性肿瘤.前列腺小体中蛋白组学的变化也与P C a 密切相关,在P C aP CＧ３细胞株源性前列腺小体中,可见小窝蛋白C a v e o l i nＧ１表达[５３],而肿瘤相关蛋白C D C P l和C D l５１的表达高于正常人[５４].②外泌体:外泌体中含有的蛋白㊁m i R N A和基因组D N A (g D N A)均携带肿瘤细胞的信息.P C a外泌体的m i R N A谱与源细胞相似,但具有选择性.在分析P C a患者和健康个体血浆MV s(外泌体和微囊泡)的７４２种m i R N A s中发现,有１２种在数量上存在差异,其中１１种在转移性P C a患者MV s中的数量明显多于无转移者[５５].L a z a r oＧI b a n e z等[５６]在不同P C a细胞株来源的外泌体等E V s中检测肿瘤相关基因M L H l㊁P T E N和T P５３的片段后发现,不同来源E V s所携带的g D N A不同,可包含特异的突变基因.最新研究发现,P C a外泌体携带的N K G２D配体[５７]和F a s配体[５８]可抑制淋巴细胞毒性功能及增殖,表明调节外泌体的生成和释放,可能是肿瘤细胞免疫逃逸的生理机制之一.三㊁总结与展望液体活检技术通过非侵入式的取样方式获得肿瘤信息,辅助癌症治疗,可以实现连续㊁高频的监测,是 精准医疗 代表性的诊断技术.通过研究血浆中C T C㊁c t D N A和外泌体的数量㊁蛋白组学㊁突变情况以及甲基化水平等多个方面的特征,可以为包括P C a在内的多种恶性肿瘤的诊断和治疗提供 全息化 的信息.但目前液体活检技术仍面临一些亟待解决的问题:中晚期癌症检测技术相对成熟,但价格较高,推广难度大;早期癌症的筛查难度大,技术不成熟.此外,肿瘤异质性大,部分P C a患者很难检测到c t D N A或C T C.未来的发展趋势是发展强大的靶向富集方法,将富集的D N A进行超高深度的测序,在提高检测灵敏度和早期癌症的检出率的同时,大幅降低检测的成本.并且随着检测灵敏度和准确度的提高,部分活检标的含量很低的P C a也可能被检出.此外,对于c t D N A和C T C含量极低的P C a患者,数量更多㊁包含信息更丰富的外泌体可能是未来的研究热点和突破口.参㊀考㊀文㊀献[１]㊀J e m a lA,B r a y F,C e n t e rMM,e t a l．G l o b a l C a n c e r S t a t i s t i c s [J]．C aC a n c e r JC l i n,２０１１,６１(２):６９Ｇ９０．[２]㊀韩苏军,张思维,陈万青,等．中国前列腺癌发病现状和流行趋势分析[J]．临床肿瘤学杂志,２０１３,１８(４):３３０Ｇ３３４．[３]㊀肖序仁,史立新,洪宝发,等．前列腺癌治疗方法与生存预后的分析[J]．中华泌尿外科杂志,２００４,２５(２):９５Ｇ９９．[４]㊀A n d r i o l eG L,C r a w f o r dE D,G r u b bR L３r d,e t a l．P r o s t a t eC a n c e rS c r e e n i n g i n t h eR a n d o m i z e dP r o s t a t e,L u n g,C o l o rＧe c t a l,a 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n g t e c h n o l o g i e s[J]．N a tR e vG e n e t,２０１６,１７(６):３３３Ｇ３５１．[１２]㊀K o b o l d tD C,S t e i n b e r g KM,L a r s o n D E,e ta l．T h e N e x tＧG e n e r a t i o nS e q u e n c i n g R e v o l u t i o na n d I t s I m p a c t o nG e n o mＧi c s[J]．C e l l,２０１３,１５５(１):２７Ｇ３８．[１３]㊀F o r s h e w T,M u r t a z a M,P a r k i n s o nC,e t a l．N o n i n v a s i v e IＧd e n t i f i c a t i o n a n dM o n i t o r i n g o f C a n c e rM u t a t i o n s b y T a r g e t e dD e e p S e q u e n c i n g o f P l a s m aD N A[J]．S c i T r a n s lM e d,２０１２,４(１３６):１３６r a６８．[１４]㊀N e w m a n AM,B r a t m a nS V,T oJ,e ta l．A nu l t r a s e n s i t i v e m e t h o df o r q u a n t i t a t i n g c i r c u l a t i n g t u m o r D N A w i t h b r o a dp a t i e n t c o v e r a g e[J]．N a tM e d,２０１４,２０(５):５４８Ｇ５５４．[１５]㊀K i m u r aH,K a s a h a r aK,K a w a i s h iM,e t a l．D e t e c t i o n o f e p iＧd e r m a l g r o w t h f a c t o r r e c e p t o rm u t a t i o n s i n s e r u ma s a p r e d i cＧt o r o f t h e r e s p o n s e t o g e f i t i n i b i n p a t i e n t sw i t hn o nＧs m a l lＧc e l l l u n g c a n c e r[J]．C l i nC a n c e rR e s,２００６,１２(１３):３９１５Ｇ３９２１．[１６]㊀E n d oK,K o n i s h iA,S a s a k iH,e t a l．E p i d e r m a l g r o w t h f a cＧt o r r e c e p t o r g e n em u t a t i o n i nn o nＧs m a l l c e l l l u n g c a n c e r u s i n gh i g h l y s e n s i t i v e a n d f a s tT a q M a nP C Ra s s a y[J]．L u n g C a n cＧe r,２００５,５０(３):３７５Ｇ３８４．[１７]㊀T h i e r r y A R,M o u l i e r e F,E lM e s s a o u d i S,e t a l．C l i n i c a l v a l iＧd a t i o no f t h ede t e c t i o no fK R A Sa n dB R A F m u t a t i o n sf r o mc i r c u l a t i n g t u m o rD N A[J]．N a tM e d,２０１４,２０(４):４３０Ｇ４３５．[１８]㊀L i J,W a n g L,M a m o nH,e t a l．R e p l a c i n g P C Rw i t hC O L DＧP C Re n r i c h e s v a r i a n tD N As e q u e n c e s a nd re d ef i n e s t h e s e n s iＧt i v i t y o fg e n e t i c t e s t i n g[J]．N a tM e d,２００８,１４(５):５７９Ｇ５８４．[１９]㊀Y a n c o v i t zM,Y o o n J,M i 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b e i n g t r e a t e dw i t hB R A F i n h i b i t o r s[J]．C l i nC h e m,２０１５,６１(１):２９７Ｇ３０４．[２３]㊀X i a oX J,W uT B,G uF D,e t a l．G e n e r a t i o no f a r t i f i c i a l s eＧq u e n c eＧs p e c i f i cn u c l e a s e sv i aa p r e a s s e m b l e di n e r tＧt e m p l a t e[J]．C h e mS c i,２０１６,７(３):２０５１Ｇ２０５７．[２４]㊀X i a oX J,S o n g C,Z h a n g C,e t a l．U l t r aＧs e l e c t i v ea n ds e n s iＧt i v e D N A d e t e c t i o n b y a u n i v e r s a l a p u r i n i c/a p y r i m i d i n i cp r o b eＧb a s e d e n d o n u c l e a s e I Vs i g n a l a m p l i f i c a t i o ns y s t e m[J]．C h e m C o mm u n,２０１２,４８(１４):１９６４Ｇ１９６６．[２５]㊀X i a oX,L i uY,Z h a oM．E n d o n u c l e a s e I Vd i s c r i m i n a t e sm i sＧm a t c h e s n e x t t o t h e a p u r i n i c/a p y r i m i d i n i c s i t e i n D N As t r a n d s:c o n s t r u c t i n g D N As e n s i n gp l a t f o r m sw i t h e x t r e m e l yh i g h s e l e c t i v i t y[J]．C h e mC o mm u n,２０１３,４９(２７):２８１９Ｇ２８２１．[２６]㊀X i a oX J,X uA Q,Z h a i J Q,e t a l．C o m b i n a t i o no f am o d i f i e db l oc k P C R a n de nd o n u c le a s eI VＧb a s e ds i g n a la m p l if i c a t i o ns y s t e m f o ru l t r aＧs e n s i t i v ed e t e c t i o no fl o wＧa b u n d a n c e p o i n tm u t a t i o n s[J]．M e t h o d s,２０１３,６４(３):２５５Ｇ２５９．[２７]㊀X i a oX,Z h a n g C,S uX,e t a l．Au n i v e r s a lm i s m a t c hＧd i r e c t e d s i g n a l a m p l i f i c a t i o n p l a t f o r mf o ru l t r aＧs e l e c t i v ea n ds e n s i t i v eD N Ad e t e c t i o nu n d e r m i l di s o t h e r m a lc o n d i t i o n s[J]．C h e mS c i,２０１２,３(７):２２５７Ｇ２２６１．[２８]㊀W uT,X i a oX,Z h a n g Z,e t a l．E n z y m eＧm e d i a t e ds i n g l eＧn uＧc l e o t id ev a r i a t i o nde t e c t i o na tr o o m t e m p e r a t u r e w i t h h i g hd i s c r i m i n a t i o n f a c t o r[J]．C he mS c i,２０１５,６(２):１２０６Ｇ１２１１．[２９]㊀S l e i jf e r S,G r a t a m a J W,S i e u w e r t sA M,e t a l．C i r c u l a t i ng t u m o u rc e l lde t e c t i o n o n i t sw a y t o r o u t i n ed i a g n o s t i c i m p l e m e n t a t i o n?[J]．E u r JC a n c e r,２００７,４３(１８):２６４５Ｇ２６５０．[３０]㊀P a t e r l i n iＧB r e c h o t P,B e n a l i N L．C i r c u l a t i n g t u m o r c e l l s(C T C)d eＧt e c t i o n:C l i n i c a l i m p a c t a n d f u t u r ed i r e c t i o n s[J]．C a n c e rL e t t,２００７,２５３(２):１８０Ｇ２０４．[３１]㊀K i m S,H a nS I,P a r k M J,e ta l．C i r c u l a t i n g t u m o rc e l lm iＧc r o s e p a r a t o rb a s ed o nl a te r a l m a g n e t o p h o r e s i sa n di mm uＧn o m a g n e t i c n a n o b e a d s[J]．A n a lC h e m,２０１３,８５(５):２７７９Ｇ２７８６．[３２]㊀F e h m T,S o l o m a y e rE F,M e n g S,e t a l．M e t h o d s f o r i s o l aＧt i n g c i r c u l a t i n g e p i t h e l i a l c e l l s a n dc r i t e r i a f o r t h e i r c l a s s i f i c aＧt i o n a s c a r c i n o m a c e l l s[J]．C y t o t h e r a p y,２００５,７(２):１７１Ｇ１８５．[３３]H o s o k a w a M,Y o s h i k a w aT,N e g i s h iR,e ta l．M i c r o c a v i tＧy a r r a y s y s t e mf o r s i z eＧb a s e de n r i c h m e n t o f c i r c u l a t i n g t u m o rc e l l s f r o m t h eb l o o do f p a t i e n t s w i t hs m a l lＧc e l l l u n g c a n c e r[J]．A n a l C h e m,２０１３,８５(１２):５６９２Ｇ５６９８．[３４]㊀N a g r a t hS,S e q u i s tL V,M a h e s w a r a nS,e ta l．I s o l a t i o no f r a r e c i r c u l a t i n g t u m o u r c e l l s i nc a n c e r p a t i e n t sb y m i c r o c h i pt e c h n o l o g y[J]．N a t u r e,２００７,４５０(７１７３):１２３５Ｇ１２３９．[３５]㊀F uA Y,S p e n c eC,S c h e r e rA,e t a l．A m i c r o f a b r i c a t e d f l u oＧr e s c e n c eＧa c t i v a t e dc e l ls o r t e r[J]．N a tB i o t e c h n o l,１９９９,１７９６现代泌尿生殖肿瘤杂志２０１８年４月第１０卷第２期㊀JC o n t e m p U r o lR e p r o dO n c o l,A p r i l２０１８,V o l１０,N o ２(１１):１１０９Ｇ１１１１．[３６]㊀C h e nT F,J i a n g G L,F uX L,e t a l．C K１９m R N Ae x p r e s s i o n m e a s u r e db y r e v e r s eＧt r a n s c r i p t i o n p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n(R TＧP C R)i n t h e p e r i p h e r a l b l o o do f p a t i e n t sw i t hn o nＧs m a l lc e l l l u n g c a n c e r t r e a t e db y c h e m oＧr ad i a t i o n:A n i n de p e n d e n tp r o g n o s t i c f a c t o r[J]．L u n g C a n c e r,２００７,５６(１):１０５Ｇ１１４．[３７]㊀T h e r y C,Z i t v o g e l L,A m i g o r e n a S．E x o s o m e s:C o m p o s i t i o n,b i oＧg e n e s i s a n d f u n c t i o n[J]．N a tR e vI mm u n o l,２００２,２(８):５６９Ｇ５７９．[３８]㊀X i a n g X,P o l i a k o vA,L i uC,e t a l．I n d u c t i o no fm y e l o i dＧd eＧr i v e d s u p p r e s s o r c e l l s b y t u m o r e x o s o m e s[J]．I n t JC a n c e r,２００９,１２４(１１):２６２１Ｇ２６３３．[３９]㊀d e B o n o J S,S c h e rH I,M o n t g o m e r y R B,e t a l．C i r c u l a t i n g t uＧm o r c e l l s p r e d i c t s u r v i v a l b e n e f i t f r o mt r e a t m e n t i nm e t a s t a t i cc a s t r a t i o nＧr e s i s t a n t p r o s t a t e c a n c e r[J]．C l i n C a n c e r R e s,２００８,１４(１９):６３０２Ｇ６３０９．[４０]O k e g a w aT,N u t a h a r aK,H i g a s h i h a r aE．I mm u n o m a g n e t i c q u a n t i f i c a t i o no f c i r c u l a t i n g t u m o r c e l l s a s a p r o g n o s t i c f a c t o ro f a n d r o g e nd e p r i v a t i o nr e s p o n s i v e n e s s i n p a t i e n t sw i t hh o rＧm o n en a i v em e t a s t a t i c p r o s t a t e c a n c e r[J]．JU r o l,２００８,１８０(４):１３４２Ｇ１３４７．[４１]㊀S c h w a r z e n b a c h H,A l i xＧP a n a b i e r e sC,M u l l e r I,e t a l．C e l lＧf r e e t u m o rD N Ai nb l o o d p l a s m aa sa m a r k e r f o rc i r c u l a t i n gt u m o r c e l l s i n p r o s t a t ec a n c e r[J]．C l i nC a n c e rR e s,２００９,１５(３):１０３２Ｇ１０３８．[４２]㊀S c h e rH I,J i aX,d eB o n oJ S,e t a l．C i r c u l a t i n g t u m o u r c e l l sa s p r o g n o s t i c m a r k e r si n p r o g r e s s i v e,c a s t r a t i o nＧr e s i s t a n tp r o s t a t e c a n c e r:a r e a n a l y s i s o f I MM C３８t r i a l d a t a[J]．L a n c e tO n c o l,２００９,１０(３):２３３Ｇ２３９．[４３]㊀D a r s h a nM S,L o f t u sM S,T h a d a n iＧM u l e r oM,e t a l．T a x a n eＧi n d u c e db l o c k a d e t on u c l e a r a c c u m u l a t i o no f t h e a n d r o g e n r eＧc e p t o r p r ed i c t s c l i n i c a l re s p o n s e s i nm e t a s t a t i c p r o s t a t e c a n c e r[J]．C a n c e rR e s,２０１１,７１(１８):６０１９Ｇ６０２９．[４４]㊀A n t o n a r a k i sE S,L uC,W a n g H,e t a l．A RＧV７a n d r e s i s t a n c e t o e n z a l u t a m i d e a n d a b i r a t e r o n e i n p r o s t a t e c a n c e r[J]．NE n g lJM e d,２０１４,３７１(１１):１０２８Ｇ１０３８．[４５]㊀G o e s s l C,M u l l e rM,S t r a u bB,e t a l．D N Aa l t e r a t i o n s i n b o d y f l uＧi d s a sm o l e c u l a r t u m o rm a r k e r s f o r u r o l o g i c a lm a l i g n a n c i e s[J]．E u rU r o l,２００２,４１(６):６６８Ｇ６７６．[４６]㊀T o m b a l B,V a nC a n g hP J,L o r i c S,e t a l．P r o g n o s t i c v a l u e o fc i r c u l a t i n gp r o s t a t ec e l l s i n p a t i e n t sw i t har i s i n g P S A a f t e rr a d i c a l p r o s t a t e c t o m y[J]．P r o s t a t e,２００３,５６(３):１６３Ｇ１７０．[４７]㊀R e i s I M,R a m a c h a n d r a nK,S p e e r C,e t a l．S e r u m G A D D４５a m e t h y l a t i o n i sau s e f u lb i o m a r k e rt od i s t i n g u i s h b e n i g nv sm a l i g n a n t p r o s t a t ed i s e a s e[J]．B rJC a n c e r,２０１５,１１３(３):４６０Ｇ４６８．[４８]㊀L i nP C,C h i uY L,B a n e r j e eS,e t a l．E p i g e n e t i c r e p r e s s i o no f m i RＧ３１d i s r u p t sa n d r o g e nr e c e p t o rh o m e o s t a s i sa n dc o n t r i bＧu t e s t o p r o s t a t e c a n c e r p r o g r e s s i o n[J]．C a n c e rR e s,２０１３,７３(３):１２３２Ｇ１２４４．[４９]㊀C h uH,Z h o n g D,T a n g J,e t a l．Af u n c t i o n a l v a r i a n t i nm i RＧ１４３p r o m o t e rc o n t r i b u t e st o p r o s t a t ec a n c e rr i s k[J]．A r c hT o x i c o l,２０１６,９０(２):４０３Ｇ４１４．[５０]㊀C o s t aＧP i n h e i r oP,R a m a l h oＧC a r v a l h o J,V i e i r a F Q,e t a l．M iＧc r o R N AＧ３７５p l a y s ad u a l r o le i n p r o s t a t ec a r c i n o g e n e s i s[J]．C l i nE p i g e n e t i c s,２０１５,７:４２[５１]㊀H a nG,F a n M,Z h a n g X．m i c r o R N AＧ２１８i n h i b i t s p r o s t a t e c a n c e rc e l l g r o w t ha nd p r o m o te sa p o p t o s i sb y r e p r e s s i n g T P D５２e xＧp r e s s i o n[J]．B i o c h e m B i o p h y sR e sC o mm u n,２０１５,４５６(３):８０４Ｇ８０９．[５２]㊀P a s q u a l i n i L,B uH,P u h rM,e t a l．m i RＧ２２a n dm i RＧ２９a a r e m e m b e r s o f t h e a n d r o g e n r e c e p t o r c i s t r o m e m o d u l a t i n gL AM C１a n d M c lＧ１i n p r o s t a t ec a n c e r[J]．M o lE n d o c r i n o l,２０１５,２９(７):１０３７Ｇ１０５４．[５３]㊀L l o r e n t eA,d eM a r c oM C,A l o n s oMA．C a v e o l i nＧ１a n dMA La r e l o c a t e do n p r o s t a s o r n e ss e c r e t e db y t h e p r o s t a t ec a n c e rP CＧ３c e l l l i n e[J]．JC e l l S c i,２００４,１１７(P t２２):５３４３Ｇ５３５１．[５４]㊀S a n d v i g K,L l o r e n t eA．P r o t e o m i ca n a l y s i so fm i c r o v e s i c l e s r e l e a s e db y t h eh u m a n p r o s t a t e c a n c e r c e l l l i n eP CＧ３[J]．M o lC e l l P r o t e o m i c s,２０１２,１１(７):M１１１．[５５]㊀B r y a n tR J,P a w l o w s k iT,C a t t o J W,e t a l．C h a n g e s i n c i r c uＧl a t i n g m i c r o R N Al e v e l sa s s o c i a t e d w i t h p r o s t a t ec a n c e r[J]．B r JC a n c e r,２０１２,１０６(４):７６８Ｇ７７４．[５６]㊀L a z a r oＧI b a n e zE,S a n zＧG a r c i aA,V i s a k o r p iT,e t a l．D i f f e rＧe n t g D N A c o n t e n t i n t h e s u b p o p u l a t i o n s of p r o s t a t e c a n c e r e xＧt r a c e l l u l a r v e s i c l e s:A p o p t o t i c b o d i e s,m i c r o v e s i c l e s,a n d e xＧo s o m e s[J]．P r o s t a t e,２０１４,７４(１４):１３７９Ｇ１３９０．[５７]㊀L u n d h o l m M,S c h r o d e rM,N a g a e v aO,e t a l．P r o s t a t e t u m o rＧd e r i v e d e x o s o m e s d o w nＧr e g u l a t eN K G２De x p r e s s i o no nn a t uＧr a l k i l l e r c e l l s a n dC D８(＋)Tc e l l s:M e c h a n i s mo f i mm u n e eＧv a s i o n[J]．P L o SO n e,２０１４,９(９):e１０８９２５．[５８]㊀A b u s a m r aA J,Z h o n g Z,Z h e n g X,e ta l．T u m o re x o s o m e se x p r e s s i n g F a s l i g a n d m e d i a t eC D８(＋)TＧc e l l a p o p t o s i s[J]．B l o o dC e l l sM o lD i s,２００５,３５(２):１６９Ｇ１７３．(收稿日期:２０１８Ｇ０１Ｇ０３)(本文编辑:徐汉玲)０７ 现代泌尿生殖肿瘤杂志２０１８年４月第１０卷第２期㊀JC o n t e m p U r o lR e p r o dO n c o l,A p r i l２０１８,V o l１０,N o ２。
实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测NG、UU和CT及MG结果分析
实用妇科内分泌杂志Journal Of Practical Gynecologic Endocrinology1102017 年8月C 第4卷/第24期Aug.C 2017 V ol.4 No.24实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测NG、UU和CT及MG结果分析李美珠，杨洁飞，李启欣（佛山市第一人民医院，广东佛山 528000）【摘要】目的 RNA恒温扩增实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测淋病奈瑟菌（NG）、解脲脲原体（UU）、沙眼衣原体（CT）及生殖支原体（MG）结果。
方法选择我院2016年6月至2017年7月拟诊为泌尿生殖道感染患者的宫颈或者尿道分泌物标本426例，选择培养法对UU、MG及NG病原体进行检测，选择胶体金免疫层析法来对CT抗原进行检测，同时选择RT-PCR来对NG、UU、 MG和CT的核酸进行检测。
结果在病原体检出阳性率方面，RT-PCR检测显著高于金标法或者培养法检测，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论在对NG、UU、 MG和CT感染进行检查诊断，采用RT-PCR检测NG、UU、MG和CT具有非常重要的作用，能对常规方法进行有效补充，值得临床推广和应用。
【关键词】荧光定量PCR；淋病奈瑟菌；解脲脲原体；沙眼衣原体；生殖支原体【中图分类号】R695 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-8803.2017.24.110.02非淋菌性尿道炎和淋病是临床中发生率较高的性传播疾病，会引起女性盆腔炎、宫体炎、不孕、宫颈炎、输卵管炎和男性前列腺炎、附睾炎、尿道炎等，除此之外还可能引起女性早产、流产和宫颈癌等，会严重危害患者的生命健康和安全[1]。
泌尿生殖道感染的病原体主要为淋病奈瑟菌（NG）、解脲脲原体（UU）、沙眼衣原体（CT），生殖支原体（MG），而病原体常常表现为共同感染状态。
在临床表现方面，非淋菌性尿道炎和慢性淋病比较类似，临床中常常不能有效明确诊断。
在实际的临床诊断中，传统实验室检测方法存在一定的不足之处，在现代医学技术快速发展和进步的过程中，RT-PCR在临床中的应用也越来越广泛，该方法具有自动化、定量、快速、特异、敏感等特点[2]。
王哲教授丨分子病理技术的分类以及临床上的应用
王哲教授丨分子病理技术的分类以及临床上的应用1. 引言分子病理学是一门综合性学科，结合了分子生物学、病理学和临床医学的知识，通过对组织和细胞水平的分子变化进行检测和分析，为疾病的诊断、治疗和预后评估提供了重要依据。
王哲教授是该领域的专家，在分子病理技术的分类以及临床应用方面做出了突出贡献。
2. 分子病理技术的分类根据不同的检测对象和方法，分子病理技术可以分为以下几类：2.1 基因检测技术基因检测是通过对DNA或RNA进行检测，来发现基因突变、拷贝数变异等遗传变异。
常见的基因检测技术包括PCR、Sanger测序、Next-Generation Sequencing（NGS）等。
这些技术在肿瘤分子诊断中具有重要作用，可以帮助确定肿瘤类型、预测预后以及指导个体化治疗。
2.2 蛋白质检测技术蛋白质检测是通过对蛋白质的表达量、修饰和亚细胞定位等进行检测，来揭示疾病的发生机制和进展过程。
常见的蛋白质检测技术包括免疫组化、Western Blot、质谱等。
这些技术在肿瘤诊断中可以判断肿瘤的分子亚型，评估治疗效果以及预测预后。
2.3 表观遗传学检测技术表观遗传学是指通过对DNA甲基化、组蛋白修饰等进行检测，来揭示基因的调控机制和表达模式。
常见的表观遗传学检测技术包括甲基化特异性PCR、甲基化芯片、染色质免疫共沉淀等。
这些技术在肿瘤早期诊断和预后评估中具有重要作用。
3. 分子病理技术在临床上的应用分子病理技术在临床上应用广泛，涉及到多个领域，下面将介绍其在肿瘤、感染病和遗传病等方面的应用情况。
3.1 肿瘤诊断和治疗肿瘤是分子病理学的重要应用领域之一。
基因检测技术可以帮助确定肿瘤的分子亚型，例如乳腺癌中的HER2阳性和雌激素受体阳性，可以指导靶向治疗的选择。
蛋白质检测技术可以评估肿瘤标志物的表达水平，例如前列腺特异性抗原（PSA）在前列腺癌中的检测。
表观遗传学检测技术可以揭示肿瘤相关基因的甲基化状态，例如MLH1基因甲基化与结直肠癌易感性相关。
实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的临床效果
实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的临床效果发布时间：2021-10-11T05:24:15.816Z 来源：《医师在线》2021年12期作者：罗朝霞[导读] 探讨分析实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的临床效果。
罗朝霞（赣州市人民医院；江西赣州341000）摘要：目的：探讨分析实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的临床效果。
方法：此次研究，选择我院之中，收诊接受生殖道支原体感染检测的200例患者，2019年2月-2021年2月，均采取实时荧光核酸恒温扩增技术检测，并对检测结果进行分析。
结果：男性检测阳性率，高于女性（P＜0.05）；年龄≤20岁患者阳性率最高，随着年龄增加患者感染率降低（P＜0.05）。
结论：实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的价值较高，受到患者性别、年龄影响，临床价值明显。
关键词：泌尿生殖道；实时荧光核酸恒温扩增技术；生殖支原体生殖支原体是人类和动物体内必须存在的一种极其微小的寄生微生物。
它可以复制和繁殖自己。
生殖道支原体感染可引起多种泌尿系统疾病，包括前列腺炎、宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、尿道炎以及男女不育症。
由于生殖道支原体离体培养环境要求高，适合在37℃左右的厌氧培养皿中生活[1]。
如果培养皿中的环境不满足生殖支原体的繁殖生长，则其组合缺乏特异性和敏感性。
实时荧光核酸恒温扩增(SAT)检测是一种将实时荧光检测与核酸恒温扩增相结合的检测方法。
该方法具有灵敏度高、特异性强的优点。
广泛应用于泌尿生殖道、呼吸道病原体和肠道病毒的检测[2]。
本次研究，主要针对实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的临床效果进行调查和研究。
详细内容见下文：1、资料与方法1.1一般资料此次研究，选择我院之中，收诊接受生殖道支原体感染检测的200例患者，2019年2月-2021年2月；男性100例，女性100例，年龄范围在18岁~60岁之间，平均年龄为（37.25±3.82）岁；患者在参与研究之前，需进行基础资料登记，以及数据统计，P＞ 0.05。
前列腺炎及其研究新进展
前列腺炎及其研究新进展郑乃钻雷州计划生育服务站前列腺炎，尤其慢性前列腺炎（Chronic Prostatitis, CP）是成年男性的常见疾病。
由于以往对其病因和病理学缺乏深入了解，存在许多混淆。
随着近20年来的研究进展，人们逐渐认识到前列腺炎不是一种单纯的疾病，而是具有各自特异表现的综合征。
美国国立健康研究所（NIH）制定了有关前列腺炎的新的定义和分类,包括4类：急性细菌性前列腺炎（Ⅰ型, ABP）、慢性细菌性前列腺炎（Ⅱ型, CBP）、慢性前列腺炎/慢性盆腔痛综合征(Ⅲ型, CP/CPPS)和无症状前列腺炎(Ⅳ型）［1］。
美国健康统计中心的一项流行病学调查显示，泌尿生殖系统疾病中慢性前列腺炎约占25%，50%的男性在一生中的某段时期曾有前列腺炎病史［2］。
其中研究表明，前列腺炎病人中只有33%有前列腺的炎症，而且炎症主要存在于前列腺间质，不足5%的病人有腺体或腺体周围炎症，且前列腺分泌物中炎细胞数目与组织中的炎症程度无关。
1.细菌性前列腺炎细菌感染是Ⅰ、Ⅱ型前列腺炎的病因，90%～95% 为革兰氏阴性菌，其中80%为大肠杆菌，10%～15%为变形杆菌、克雷白杆菌、沙门氏菌属等。
5%～10%为革兰氏阳性菌，主要为肠球菌，其次如链球菌、表面葡萄球菌、类白喉菌等。
有关细菌性前列腺炎的致病性还未明确，细菌性前列腺炎绝大多数为单细菌感染，很少出现2种或2种以上细菌混合感染。
2.CP/CPPS的病因及检测方法①CP/CPPS与衣原体和支原体CP/CPPS是慢性前列腺炎中最常见的一种，约占60%，慢性前列腺疼痛是最常见的主诉，尤其是会阴痛、下腹痛、睾丸痛、射精痛，其他的泌尿生殖系统不适包括性功能障碍和排尿疼痛［3］。
CP/CPSS有2个亚型：ⅢA是在前列腺分泌物、按摩后尿液或精液中有炎症存在，此类型不仅包括以前所说的“非细菌性前列腺炎”，而且还包括在按摩后尿液或精液中存在炎症的病人，大大扩大了范围［4］：ⅢB型是有症状但在前列腺分泌物、按摩后尿液或精液中无炎症存在。
荧光定量PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体结果分析
荧光定量PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体结果分析张欠欠;仵恒立;胡军婷;成俊珍;任勇;杨晗;马莹【摘要】目的了解延安市皮肤性病科门诊患者泌尿生殖道淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)及解脲脲原体(UU)的感染现状及其特点,为临床提供依据.方法采用实时荧光聚合酶链式反应技术(FQ-PCR)对784例患者的泌尿生殖道分泌物的NG、CT和UU核酸进行检测.结果 784例患者中,NG、CT和UU的阳性检出率分别为15.43％、34.69％和30.87％,女性UU感染率明显高于男性(P＜0.01),男性CT感染率明显高于女性(P＜0.05),NG感染率男性虽高于女性,但无性别差异(P＞0.05).混合感染检出率为19.64％,其中CT+ UU双重感染的阳性检出率最高,为10.20％.不同年龄感染情况显示,感染率以21～40岁年龄段最高.结论泌尿生殖道感染患者NG、CT和UU阳性检出率不尽相同,阳性患者大多年龄在青壮年时期,应作为性传播疾病防治工作中的重点对象.混合感染较为常见,临床应进行3种病原体的检测.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2016(032)003【总页数】3页(P312-314)【关键词】淋球菌;沙眼衣原体;解脲脲原体;实时荧光聚合酶链式反应【作者】张欠欠;仵恒立;胡军婷;成俊珍;任勇;杨晗;马莹【作者单位】延安大学医学院,延安 716000;延安大学医学院,延安 716000;延安大学医学院,延安 716000;延安大学附属医院,延安 716000;延安大学附属医院,延安716000;延安大学医学院,延安 716000;延安大学医学院,延安 716000【正文语种】中文【中图分类】R374Supported by the Scientific Research Project of Henan Education Department (No. 14JK1836), the Yan’an University Youth Special Fund to Support the Project (UTI) Pathogens Detection (No. YDQ2013-03), and the 2015 Shaa nxi Province College Students’ Innovation and Entrepreneurship Training Program (No. 1415)淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(Chlamydozoa trachomatis,CT)和解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)是目前引起性传播疾病最常见的3种病原体，可引起尿道炎、附睾炎、子宫内膜炎、盆腔炎及输卵管炎等，严重的可导致不孕不育[1]。
实时定量PCR技术检测前列腺癌微小转移的研究
虽 然 血清 Ｐ Ａ 检 测 的灵 敏度 大 于 ９ ， 是其 特异 性 只有 ２ ｌ ， 外 ， １ ～２ 前 列腺 癌 患者 血 Ｓ Ｏ 但 ５ ＿ 另 ２ ］ 约 ５ ５
清 Ｐ Ａ 在正 常范 围 内 ． 有 的其 它 检测 手段 所 检 出 的患者 多 处于 疾病 的 中晚期 ， Ｓ ］现 但对 微 转移 患者 却 无
转 移 ＿． 多研究 者 通过巢 式 Ｒ Ｐ Ｒ 技 术检 测 外周 血 中 Ｐ Ａ、 Ｓ ４许 ］ Ｔ— Ｃ Ｓ Ｐ ＭＡ 和人 腺 体 激 肽释 放 酶 ２（ Ｋ２ 的 ｈ ）
ｍＲＮＡ 水平 检 测前列 腺 癌细胞 ． 由于存在 的假 阳性 和不 能进 行 准确定 量 的缺点 ， 能应 用 于临床 检 测． 但 不 本 研究 应 用 近年来 发 展起 来 的实 时定 量 Ｐ Ｒ 技术 比较 了前 列腺 增生 和 前列 腺 癌患 者 （ 限和转 移 癌 ） Ｃ 局 的
收 稿 日期 ： ０ ７ １ － ０ ２ ０ —０２
基 金 项 目 ：国家 自然 科 学 基 金 （０ ７ １ １ ３ ６ ０ １ ） 天津 市科 委攻 关 培 育 基 金 （ ６ Ｓ Ｆ ２ ０ ，７ ｚｊ０ ３ ０ ３ ６ ２０ ，０ ０ ２ ８ ； ０ＹＦ ＹＳ ０ ０ ０ ０ｊ ｄｃ ８ ０） ｃ 作者简 介 ： 杨 睿 （９ １ ）男 ， 津 人 ， 士 研 究 生 ． １８一 ， 天 博
新辅助治疗后RT-PCR对前列腺癌盆腔淋巴结微转移的诊断价值
·论著·新辅助治疗后RT-PCR对前列腺癌盆腔淋巴结微转移的诊断价值夏维木1，刘定益2，周文龙3，王名伟4，王健2，王颖5，王树军5，叶永峰1，王满琴1，许胜1，夏宇1［摘要］目的明确新辅助治疗后以逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测前列腺癌盆腔淋巴结微转移的意义。
方法本组41例临床局限性前列腺癌病例，术前行淋巴管造影显示盆腔淋巴结，对可疑淋巴结在X线定位下穿刺抽吸淋巴液，用RT-PCR法检测淋巴液中前列腺特异性抗原（prostate-spe-cific antigen，PSA）mRNA和前列腺特异性膜抗原（prostate-specific membrane antigen，PSMA）mRNA的表达；术后对淋巴结组织切片进行免疫组化检查，将PSA mRNA或PSMA mRNA阳性作为存在微转移。
结果对术前盆腔淋巴结穿刺抽吸淋巴液测PSA mRNA和PSMA mRNA，证实有21例淋巴结存在微转移，术后对清扫淋巴结予免疫组化检查有5例存在淋巴结转移，组织学检查阳性组与RT-PCR检测证实微转移组PSA mRNA和PSMA mRNA的表达存在明显差异。
结论新辅助治疗后，采用RT-PCR法检测淋巴液中PSA mRNA和PSMA mRNA的表达有利于探测到淋巴结微转移。
［关键词］逆转录酶链反应；前列腺肿瘤；前列腺癌根治术；微转移；新辅助治疗［中图分类号］R737．25［文献标志码］A［文章编号］1672-271X（2012）05-0399-03The diagnostic value of real-time reverse-transcriptase polymerase chain reaction in de-tecting micrometastases of pelvic lymph nodes after neoadjuvant hormonal therapyXIA Wei-mu1，LIU Ding-yi2，ZHOU Wen-long3，WANG Ming-wei4，WANG Jian2，WANG Ying5，WANG Shu-jun5，YE Yong-feng1，WANG Man-qin1，XU Sheng1，Xia Yu1．1．Department of Urology，184Hospital of PLA，Ying-tan，Jiangxi335000，China；2．Department of Urology，Punan Hospital，Shanghai200125，China；3．Department of Urology，Ruijin Hospital，Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai200025，China；4．Depart-ment of Urology，Luwan Branch of Ruijin Hospital，Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 200020，China；5．Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai200025，China ［Abstract］Objective To clarify the significance of real-time reverse-transcriptase polymerase chain reaction（RT-PCR）in detecting micrometastases of pelvic lymph nodes after neoadjuvant hormonal therapy．Methods The study included41patients with clinically localized prostate cancer who received neoadjuvant hormonal therapy（NHT）．If positive lymph nodes are seen or suspected，a thin-walled22gauge needle is di-rected transabdomenally under fluoroscopic control into the area and an aspirate is obtained after bipedal lym-phangiography．The expression of prostate-specific antigen（PSA）and prostate-specific membrane antigen（PA-MA）in aspirate were assessed by a fully quantitative real-time reverse-transcriptase polymerase chain reaction．We regarded specimens in which either PSA or PSMAmRNA were positive as showing the“presence of micro-metastasis”．Lymph node specimens were also stained immunohistochemically with an antibody PSA after RP．Results Lymph node metastases from5cases were detected bt pathological examination，and real-time RT-PCR further identified lymph node micrometastases from21cases with no pathological evidence of nodal involve-ment．The expression level of PSA mRNA and PSMA mRNA were statistically significant in patients with histo-logical confirmed lymph node metastases and micrometastases detected by real-time RT-PCR despite the lack of histological evidence．Conclusion Applying quantitative real-time RT-PCR tar g eting PSA and PSMA genes can基金项目：南京军区医学科技创新经费资助项目（07MO58）作者简介：夏维木（1963-），男，江西乐平人，硕士，主任医师，从事临床泌尿外科工作作者单位：1．335000江西鹰潭，解放军184医院泌尿外科；2．200125上海，上海市浦东新区浦南医院泌尿外科；3．200025上海，上海交通大学医学院附属瑞金医院泌尿外科；4．200020上海，上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院泌尿外科；5．200025上海，上海交通大学医学院detect micrometastatic tumour foci in pelvic lymph nodes by fine needle aspiration biopsy of lymph nodes．［Key words］quantitative real-time PCR；prostate cancer；radical prostatectomy；micrometastasis；neoadjuvant hormonal therapy2007年8月至2011年3月，我们对41例局限性前列腺癌实施前列腺癌根治术（radical prostatec-tomy，RP）的病例术前行淋巴管造影［1-2］，用逆转录酶-聚合酶链反应（reverse-transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR）方法检测可疑淋巴结淋巴液中前列腺特异性抗原（prostate-specific antigen，PSA）mRNA和前列腺特异性膜抗原（prostate-spe-cific membrane antigen，PSMA）mRNA的表达，以了解RP前前列腺癌盆腔淋巴结微转移的情况，现报告如下。
PCR技术检测性病病原体在男性泌尿生殖系感染中的意义
PCR技术检测性病病原体在男性泌尿生殖系感染中的意义发表时间：2018-08-20T14:23:00.220Z 来源：《航空军医》2018年10期作者：向文秀[导读] 目的本文分析的是PCR技术检测男性泌尿生殖系感染性病病原体的方式和效果。
（怀化市妇幼保健院湖南怀化418000）摘要：目的本文分析的是PCR技术检测男性泌尿生殖系感染性病病原体的方式和效果。
方法本文选择了在2015年6月到2017年6月到我院接受检查的200例男性泌尿生殖系感染患者，应用PCR技术对其进行了淋病双球菌、沙眼衣原体、解脲支原体三种性病病原体检测，并统计了患者的检测阳性结果。
结果在此次检查中淋病双球菌感染患者有24例（12%），沙眼衣原体感染患者有30例（15%），淋病双球菌感染患者有16例（8%），淋病双球菌混合沙眼衣原体感染患者有10例（5%），淋病双球菌混合解脲支原体感染患者有4例（2%），沙眼衣原体混合解脲支原体感染患者有6例（3%），未发现三种性病病原体共同感染患者。
结论PCR技术检测男性泌尿生殖系感染性病病原体具有显著效果，适合被广泛应用。
关键词：PCR技术；性病病原体；男性泌尿生殖系感染我国现阶段临床医学中关于男性泌尿生殖系感染性病病原体的研究和分析理论及技术还不够完善，传统的检测方式大部分应用培养方式和涂片方式，这些检测方式都存在不够精确和灵敏的局限性。
为了男性泌尿生殖系感染性病病原体检测工作的精确程度，医护人员开始在病原体检测中应用PCR技术，现有的临床医学实验也证实了PCR技术在男性泌尿生殖系感染性病病原体检测中的应用具有显著效果。
为此，本文选择了在2015年6月到2017年6月到我院接受检查的200例男性泌尿生殖系感染患者，分析了PCR技术检测男性泌尿生殖系感染性病病原体的方式和效果。
1.资料及方法1.1一般资料本文选择了在2015年6月到2017年6月到我院接受检查的200例男性泌尿生殖系感染患者，患者年龄在26-56岁之间，患者的平均年龄为32.125.12岁，患者患病周期在0.24-3.89年之间之间，患者的平均患病周期为0.891.56年。
初培养结合PCR检测精液解脲脲原体感染的临床应用
初培养结合PCR检测精液解脲脲原体感染的临床应用王建华;王卫国;钱亚东;张红安【摘要】目的探讨初培养产物结合PCR方法检测精液解脲脲原体感染应用价值.方法选取120例不育症患者的精液,分别用PCR、培养加药敏试剂盒、初培养产物结合PCR的方法检测解脲脲原体,并与分离培养结果相比较.结果 120例精液分离培养出62例解脲脲原体,使用PCR法检测出30例阳性、用培养加药敏试剂盒检测出65例阳性、用初培养产物结合PCR技术检测出62例阳性,以上三种方法与分离培养结果的总符合率分别为73.3％、97.5％和100％.结论初培养产物结合PCR是一种检测精液解脲脲原体的可行性方法.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2012(030)004【总页数】3页(P361-363)【关键词】解脲脲原体;PCR;培养;精液【作者】王建华;王卫国;钱亚东;张红安【作者单位】阜阳市人民医院,安徽阜阳236006;阜阳市人民医院,安徽阜阳236006;阜阳市人民医院,安徽阜阳236006;阜阳市人民医院,安徽阜阳236006【正文语种】中文【中图分类】R446.5;R375+.3解脲脲原体是是人类泌尿生殖道最常见的寄生菌之一，可以引起多种疾病，若上行感染引起男性前列腺炎或附睾炎，可导致不育症的发生[1，2]。
目前检测生殖道解脲脲原体的方法基本上采用PCR或培养加药敏试剂盒，由于精液相对于其他生殖道标本，较为特殊，目前这两种被广泛采用的方法对于检测精液中解脲脲原体是否合适，相关报道极为少见。
为此，我们通过PCR、培养加药敏试剂盒以及初培养产物结合PCR方法检测精液中解脲脲原体，并与分离培养结果(当前实验室检测解脲脲原体的“金标准”)相比较，分析何种方法更适合检测精液中的解脲脲原体。
1.1 研究对象选取2011年5月至2011年7月就诊于阜阳市人民医院生殖科的120例男性不育患者精液，年龄18～47岁，所选对象无梅毒、淋病、尖锐湿疣、生殖器疱疹，无细菌性尿路感染，无衣原体和人型支原体感染，无艾滋病毒感染。
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括 ：金 黄 色 葡 萄 球 菌 、酿 脓 链 球 菌 、表 皮 葡 萄 球 菌 、溶 血 葡 萄 球 菌 、大 肠 埃 希 菌 、奇 异 变 形 菌 、屎 肠 球 菌 、粪 肠 球 菌 、肺 炎 克 雷 伯 菌 、铜 绿 假 单 胞 菌 。 白 色 假 丝 酵 母菌、ＨＢＶ－ＤＮＡ 由微生物室提供。 １．１．３ 引 物 设 计 用 ＰＣＲ 引 物 设 计 软 件 ｐｒｉｍｅｒ ５．０设 计 两 条 引 物。 上 游 为 ５′ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧ－ ＧＣＴＣＡＧ３′；下 游 为 ５′ＣＣＧＴＣＡＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＧＴＴＴ３′， 扩 增 产 物 长 度 为 ９２０ｂｐ。 １．１．４ 试剂与仪器 ＤＮＡ 提 取 试 剂、ＰＣＲ 反 应 试 剂盒购自宝生物（大 连）生 物 工 程 公 司，引 物 由 上 海 英骏生 物 技 术 有 限 公 司 提 供，９６００ 型 ＰＣＲ 反 应 仪 是美国 Ｐｅｒｋｉｎ ｅｌｍｅｒ公 司 产 品，Ｇｅｌ ｄｏｃ １０００ 型 凝 胶图 象 处 理 系 统 由 美 国 Ｂｉｏ－Ｒａｄ 公 司 提 供，ＢａｃＴ／ ＡＬＥＲＴ３Ｄ 自动血培养仪为法国生物梅里埃公司提 供。 １．２ 试 验 方 法 １．２．１ 模板 ＤＮＡ 的提取 已知试验菌株、９７例慢 性前列腺炎患者的 前 列 腺 液 和 １５ 例 正 常 人 的 前 列
中华医院感染学杂志２０１２年第２２卷第７期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ Ｖｏｌ．２２Ｎｏ．７ ２０１２
· １５３５ ·
·论 著·
ＰＣＲ 技术在前列腺液细菌检测中的应用
邱建达
（浙江省象山县中医院检验科，浙江 象山县 ３１５７００）
摘要：目的 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测慢性前列腺炎患者前列腺液中病原菌的阳性率。方法 收 集 ９７ 例慢性前列腺炎患者的前列腺液，分别用１６ＳｒＲＮＡ 基因 ＰＣＲ 方 法 和 细 菌 培 养 法 进 行 检 测，比 较 两 种 方 法 检 测 病原菌的敏感性。结果 ９７例慢性前列腺炎患者前列腺液中，ＰＣＲ 方法检测出５８例，阳性率为５９．７９％，培养法 检出１０例，阳性率为１０．３１％，ＰＣＲ 方法检出率明显高于培养法（Ｐ＜０．０１）。结论 １６ＳｒＲＮＡ 基因 ＰＣＲ 检测方 法 具 有 快 速 ，特 异 性 和 敏 感 性 高 等 特 点 。 关键词：聚合酶链反应技术；慢性前列腺炎；１６ＳｒＲＮＡ 基因 中 图 分 类 号 ：Ｒ４４６ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１００５－４５２９（２０１２）０７－１５３５－０３
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ａｐｐｌｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｉｔｉｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ９７ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｉｔｉｓ．Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ＰＣＲ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ９７ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ，５８ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｆ ５９．７９％ ，ａｎｄ ｏｎｌｙ １０ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂｙ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｆ １０．３１％ ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｂｙ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ （Ｐ＜０．０１）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ１６ＳｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ＰＣＲ ｉｓ ａ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；Ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｒｏｓｔａｔｉｔｉｓ；１６ＳｒＲＮＡ ｇｅｎｅ
慢性前列腺炎 是 泌 尿 外 科 男 性 常 见 病，因 为 该 病不易治愈和易 复 发，使 临 床 治 疗 十 分 棘 手。 应 用 传 统 的 培 法 方 法 培 养 前 列 腺 液 ，细 菌 阳 性 率 较 低 ，但 一些患者前列腺液 中 的 白 细 胞 较 高，提 示 可 能 存 在 细菌感染而未 检 出 的 现 象。 本 研 究 采 用 ＰＣＲ 方 法 来检测慢性前列腺炎患者的前列腺液中的细菌 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因，提高了阳性检出率，现报道如下。
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ห้องสมุดไป่ตู้ａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ
ＱＩＵ Ｊｉａｎ－ｄａ （Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｘｉａｎｇｓｈａｎ ｃｏｕｎｔｙ，Ｘｉａｎｇｓｈａｎ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ３１５７００，Ｃｈｉｎａ）
１ 资 料 与 方 法
１．１ 资 料 １．１．１ 一般资料 受 试 对 象 为 本 院 泌 尿 外 科 慢 性 前 列 腺 炎 的 患 者 ９７ 例 ，参 照 美 国 国 立 卫 生 研 究 院 慢 性前列腺炎诊断标准进行诊断［１］；同时取１５例 正 常 人的前列腺液作对照。 １．１．２ 试验菌株 试 验 菌 株 来 源 于 我 院 检 验 科 微 生 物 室 保 存 的 常 见 引 起 前 列 腺 炎 的 １０ 株 病 原 菌 ，包