肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义

肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义

上海医学检验杂志1992年第7卷第1期

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肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义

上海长征医院心内科(2o0003)

黄高忠综述陈思聪许绍辉*审校R,』/.——————一●,

肌酸激酶(CK)及其同工酶CK—MB是目前公

认的诊断急性心肌梗塞(AMI)最有价值的生化指

标,具有很高的敏感性和特异性n.近十余年来,

CK—MM亚型的研究逐渐受到重视,观察AMI后发

现该亚型的演变可早期诊断AMI,推测梗塞时间及

判断再灌注,对于AMI溶栓治疗病例的选择,疗效

和顶后的判断具有独特的价值,已成为近年来国外

酶学研究的热点之一.现简要介绍如下.

一

,命名及理化特性1968年Kumuduvalli发

现从人类肌肉中提取的CKMM可通过电泳区分为

三个不同的区带,但未引起重视.七十年代末,

Wevei.s[.,3通过杂交试验证实l『CK—MM是山两

个不完全相同的亚单位构成的二聚体,其不同的组

合形成一j’CK—MM的三种亚型.目前命名方法尚未统一.一般根据其电泳迁移率的差异,从阳极到阴

极命名为CK—MM,CK—MM,CK—MM3(有的以C,B,A分别代替1,2,3).其亚基组成分别为:CK—

MM3一M2M2;CK—MM2一MlM2;CK—MMl—M】M1.

现已证实,人心肌和骨骼肌中fl,~CK—MM均以CK—MM3的形式存在,又称为组织型或纯基因型CK—MM.AMI后CK—MM3随同其他生物大分子如肌球蛋白,谷草转氨酶等一起从坏死细胞内逸出,经

淋巴回流入血,在血中羧肽酶N(CP—N)的作用下,

其中一个M亚基肽链羧基末端上的赖氨酸被切除

转变成CK—MM.;随后另一个M亚基又经历同样变化,转变成CK—MM,(可见M.和MI亚基仅相差一

个赖氨酸).这三种亚型具有相同的抗原性,

分子量和酶活力,8].因在生理pH下赖氨酸带正

电,故其等电点不同.Hashimoto应用聚焦层析

法测定的等电点CK—MM3,CK—MM2CK—MM1分别为7.91,7.74~N7.51.CK—MM1的等电点最低,故

其向阳极的迁移率最大.

CP-N存在于E常血t…HJ-f1,分了量19万,不能透

过毛绷血管内皮,来见于肌肉组织或淋巴系统中

I”

,.&弧j_r,-蔓只订CK放入In1.才龙,f:,j:

且由于该反应单向进行,CK—MM不断地从血巾被清除,CK—MM亚型随AMI病程呈现规律性变化一

12]

.CP—N可被特异性抑制剂如苯甲酰精氨酸或

e一氨基已酸所抑制.其昕介导的反应依赖于温度, 时间和Ca”,在4.G这一转变几乎停止….EGTA

或EDTA作为Ca”的螯合剂常用于体外防止采血后亚型的转变.

二,检测方法

(一)等电聚焦(IEF)法:早期研究者采用本

法较多.灵敏度高,CK总活力(T—CK)大于1o～

5olU/L即可检出Ell,13,但需用一种昂贵的二性电解质,而且长时间的高压常导致酶的热失活.本法

常出现四,五条(分别命名为X和Y带)以上的区带.Guslits[14分离出21条区带,并按概率推论M

亚基具有六种不同的结构,但尚无直接证据. Morelli[3观察到这些区带均具有CK潘力,但性质不明;另一种观点则认为是二性电解质与CK—MM

相互作用形成的矫作物.

(二)聚焦层析(CF)法睛,l6:不使用电

流,故不致使酶蛋白变性失活,灵敏度也较高,但

试剂昂贵.

(三)免疫浸渍法:方法非常复杂,但可

同时分析多个样本,能准确定量,可作为开发其1也

方法时的参照.

(四)高效液相层析(HPLC)法:3omin内

即可得出结果,但需特殊仪器,试剂消耗量大.

以上四种检测方法因费时不适于急诊需要,或

因成本高不易推广,均难以成为临床普遍使用的方法.

(五)电泳法:本法在一股区带电泳基础

上增加电泳时间或提高电压,在电泳槽巾加入一种

具有类似等电聚焦作用昀特殊缓冲液(Polybuffer 96)或加入n_5啡啉丙磺酸形成一种不连续缓冲体系. 该法所需设备简单,操作方便,价廉,比较适合国内

一

般实验室开展n..∞.缺点是灵敏度和准确性嫌不

够高,检测时间稍长(2h左右).国外采用高压电泳,

可将分离时问缩5～12min,仪器贵m

实验诊断科

?44?

(六)单克隆抗体法:近一,二年外已研制

出CK—MM亚型特异的单克隆抗体∞.应用免

疫抑制或免疫沉淀0方法测定,不需分离CK—MM 亚型,结果准确,仪器设备要求不高,操作简便,随

时可急诊检测,目前正在临床试用,有希望普遍推广...

三,临床意义

(一)早期诊断AMI:AMI的溶栓疗法是近年

迅速发展起来的比较积极有效的治疗措施,一般要求在发病6h内开始给药,但由于早期诊断的困难, 容易延误本疗法的最佳时机.致使疗效明显降低.

另一方面,由于该疗法有一定出血危险,费用也相

对较”,避免盲口用于怀疑AMT的病人,故迫切

需要一种能早期快速诊断AMI的方法. Hashimoto3用CF法测定狗实验性AM[模

型的CK—MM亚型变化.冠脉阻塞前血中CK—MM3,CK—MM2,CK—MM1分别占CK—MM活力的11.4±4.8%,22.3±5.5%$H66.3±9.6%.冠脉

阻塞后1hCK—MM3(除非特指绝对活力,均为百

分率,下同)即已明显上升,4,1±1.3h达峰值