胶体金免疫层析技术实验
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胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速:操作简单,一般只要5-10min 就 会出结果,而其它方法如ELISA需要1-2h, PCR 需要时间更长。
结果易于判定:阴、阳性呈色很明显,肉眼 很容易判断。
特异性好:因为该技术大多用单克隆抗体标 记,这决定了它具有很好的特异性。
胶体金试纸条诊断技术的原理 资料仅供参考,不当之处,请联系改正。
以硝酸纤维素膜为载体,利用了微孔膜的 毛细作用,滴加在膜条一端的液体慢慢向另 一端渗移,通过抗原抗体结合,并利用胶体 金呈现颜色(红色)反应,检测抗原/抗体。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
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胶体金试纸条示意图
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课后思考
1. 瘦肉精试纸条检测的原理? 2. 早孕试纸条检测的原理?
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实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
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简介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成,该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的 免疫学检测技术,最先用于人绒毛膜促性 腺激素(HCG)的测定和乙型肝炎病毒表 面抗原(HBsAg)等检测。
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胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病:传染性法氏囊病、禽流感、 新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病:血吸虫病、旋毛虫病、囊虫 病、恙虫病。
细菌性疾病:霍乱弧菌、类鼻疽。
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H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5AIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
样品垫
连接垫 (胶体金垫)
质检线
吸收垫
背衬 (底板)
检测线
硝酸纤维素膜
测
定
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测定时将试纸条下端浸入液体标 本中,下端吸水材料即吸取液体 向上端移动,流经C处时使干片 上的免疫金复合物复溶,并带动 其向膜条渗移。
测
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定
若标本中有待测特异抗原,即可 与免疫金复合物中的抗体结合, 此抗原抗体复合物流至测试区即 被固相抗体捕获,在膜上显出红 色反应线条(T)。
测
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定
过剩的免疫金复合物继续前行, 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合 (免疫金复合物中的单克隆抗体 为 小 鼠 IgG), 而 显 出 红 色 质 控 线条(R)。
测
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定
阴性标本则无反应线条,而仅显示质控线条。
胶体金的质量判定标准 ✓质量好的胶体金:溶液呈红色,胶体金颗
粒为球形,大小均一,无棱角。 ✓质量差的胶体金:溶液呈紫色,大小不一,
形状各异。
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胶体金标记的原理:胶体金在碱性条件下带 负电荷,与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶 体 金 标 记 技 术 ( Immunogold labeling technique)是以胶体金作为示踪标记物应用 于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
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简介
胶体金(Colloidal gold)是氯金酸(HAuCl4) 的水溶胶,利用HAuCl4在还原剂(柠檬酸钠) 的作用下,聚合成特定大小的金颗粒,形成带 负电的疏水胶溶液,由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态,故称胶体金。
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