影响酶促反应的因素

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激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告

激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告

激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
影响酶作用的因素:影响酶促反应的因素常有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度、抑制剂、激活剂等。

其变化规律有以下特点:
1、酶浓度对酶促反应的影响:在底物足够,其它条件固定的条件下,反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其它不利于酶发挥作用的因素时,酶促反应的速度与酶浓度成正比。

2、底物浓度对酶促反应的影响:在底物浓度较低时,反应速度随底物浓度增加而加快,反应速度与底物浓度近乎成正比,在底物浓度较高时,底物浓度增加,反应速度也随之加快,但不显著,当底物浓度很大且达到一定限度时,反应速度就达到一个最大值,此时即使再增加底物浓度,反应也几乎不再改变。

3、酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。

氯离子为唾液淀粉酶的激活剂,铜离子为其抑制剂,激活剂使酶的活性升高,抑制剂使酶活性降低。

注意事项:
激活剂和抑制剂对于酶活性的影响,常常分不清激活剂,因为加入蒸馏水、NaCl、Na2SO4这3支试管的颜色一致,都是黄色。

出现这种现象的原因是酶活性太高了,需要稀释唾液,唾液稀释至加入蒸馏水的试管呈浅红色即可。

这样一来,这3支试管的颜色分别是浅红、黄、浅红,就可以断定Cl-是激活剂。

偶尔也有分不清抑制剂的就是加入蒸馏水、CuSO4、
Na2SO4这三支试管的颜色一致,都是蓝色。

因为酶活性太低,需要提高酶活性,只要重新制备唾液淀粉酶就行(但是新酶的活性不可太高,否则又分不清激活剂)。

最后3支试管的颜色应该是浅红、蓝、浅红,可以断定Cu2+是抑制剂。

实验22 影响酶促反应因素——温度、

实验22 影响酶促反应因素——温度、
实验22 影响酶促反应因素—— 温度、pH和抑制剂
1.实验目的
(1)通过本实验了解pH、温度、抑制剂对 酶活力的影响。 (2)通过实验掌握控制变量法,并能使用控 制变量法设计实验。
2.实验原理
本实验通过对胰蛋白酶的测试,考察温 度、pH、抑制剂对酶活性的影响。 (1)温度的影响:酶是生物体内一类具 有催化活性的蛋白质,与一般催化剂一样 存在温度效应。开始时,酶促反应的速率 随温度的增加而增加,达到最大反应速率 时的温度为酶的最适温度,而超过最适温 度,会引起蛋白质变性,使酶促反应速率 降低直至停止。
(2)pH组 设置空白组:取一支试管,加入1.0mL1%酪 蛋白溶液和3.0mL5%三氯乙酸溶液,摇匀后加入 0.2mL酶液和0.8mL蒸馏水,在37oC下恒温10min。 对pH的测试:取3支试管,依次编号1、2、3, 向3支试管中分别加入0.2mL胰蛋白酶溶液,向1 号试管中加入0.8mLpH=7.4的硼酸缓冲液,向2号 试管中加入0.8mLpH=8.0的硼酸缓冲液,向3号试 管中加入0.8mLpH=9.0的硼酸缓冲液,上述试管 置于37oC水浴中恒温2min,然后加入各加入 1.0mL1%酪蛋白溶液,在37oC水浴中继续恒温 10min后加入三氯乙酸切断反应。将上述试管以 3000r/min离心5min,取上清液在280nm波长测定 吸光度。
(3)抑制剂组 设置空白组:取一支试管,加入1.0mL1%酪蛋 白溶液和3.0mL5%三氯乙酸溶液,摇匀后加入 0.2mL酶液和0.8mL蒸馏水,在37oC下恒温10min。 对抑制剂作用的测试:取两支试管,编号1、2, 在两支试管中分别加1.0mL1%酪蛋白溶液,然后 在1号试管中加入0.8mL蒸馏水,在2号试管中加 入0.1mL1mmol/mL苯甲脒溶液和0.7mL蒸馏水, 在37oC水浴中恒温2min,然后向两支试管中各加 入0.2mL的胰蛋白酶溶液,在37oC水浴中继续恒 温反应10min,最后加入三氯乙酸终止反应。将 上述试管以3000r/min离心5min,取上清液在 280nm波长测吸光度。

影响酶促反应的因素

影响酶促反应的因素

影响酶促反应的因素
酶促反应指的是由酶作为催化剂进行催化的化学反应。

影响酶促反应的因素有温度,酸碱度,酶浓度,底物浓度,抑制剂和激活剂等。

1.温度:酶促反应在一定温度范围内反应速度随温度的升高而加快;但当温度升高到一定限度时,酶促反应速度不仅不再加快反而随着温度的升高而下降。

在一定条件下,每一种酶在某一定温度时活力最大,这个温度称为这种酶的最适温度。

2.酸碱度:每一种酶只能在一定限度的pH范围内才表现活性,超过这个范围酶就会失去活性。

3.酶浓度:在底物足够,其它条件固定的条件下,反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其它不利于酶发挥作用的因素时,酶促反应的速度与酶浓度成正比。

4.底物浓度:在底物浓度较低时,反应速度随底物浓度增加而加快,反应速度与底物浓度近乎:成正比,在底物浓度较高时,底物浓度增加,反应速度也随之加快,但不显著;当底物浓度很大且达到一定限度时,反应速度就达到一个最大值,此时即使再增加底物浓度,反应也几乎不再改变。

5.抑制剂:能特异性的抑制酶活性,从而抑制酶促反应的物质称为抑制剂。

6.激活剂:能使酶从无活性到有活性或使酶活性提高的物质称为酶的激活剂。

酶促反应的初速率

酶促反应的初速率

酶促反应的初速率酶促反应是生物体内许多化学反应的关键步骤,酶作为催化剂,能够加速化学反应的进行,降低活化能,提高反应速率。

酶促反应的初速率是衡量酶催化效率的重要指标,本文将从酶的特性、反应速率的影响因素以及初速率的测定方法三个方面进行阐述。

1. 酶的特性酶是一种生物催化剂,通常由蛋白质组成。

酶能够与底物发生特异性结合,形成酶-底物复合物,通过改变底物的构象,降低反应的活化能,从而加速反应速率。

酶促反应的速率通常受到酶的浓度、底物浓度、温度和pH值等因素的影响。

2. 反应速率的影响因素(1)酶的浓度:酶浓度越高,酶与底物之间的碰撞频率就越高,反应速率也就越快。

但酶浓度过高时,酶与底物之间的碰撞频率已经达到饱和状态,进一步增加酶浓度对反应速率的提高作用不大。

(2)底物浓度:底物浓度越高,酶与底物之间的碰撞频率就越高,反应速率也就越快。

但底物浓度过高时,酶活性可能已经达到饱和状态,进一步增加底物浓度对反应速率的提高作用不大。

(3)温度:适宜的温度能够提高酶的催化活性。

通常情况下,随着温度的升高,酶促反应速率也会增加。

但当温度过高时,酶的构象可能发生改变,导致酶失活。

(4)pH值:不同酶对pH值的适应性不同。

酶的活性通常在特定的pH值范围内最高,这是因为酶的活性部位对于特定的离子环境具有较高的亲和力。

在酶的活性部位离子环境改变时,酶的结构可能发生改变,从而影响酶的催化效率。

3. 初速率的测定方法初速率是指在反应刚开始时的瞬时速率,可以通过测定反应物浓度随时间变化的斜率来确定。

常用的测定方法有初始速率法和比色法等。

初始速率法是在反应初期取样,通过测定反应物浓度的变化来计算初始速率。

比色法则是通过观察反应产物的颜色变化来推断反应速率。

总结起来,酶促反应的初速率是衡量酶催化效率的重要指标,受到酶浓度、底物浓度、温度和pH值等因素的影响。

合理调节这些因素可以提高酶催化反应速率,从而在生物过程中发挥重要的调控作用。

酶工程 第二章酶动力学 第二节影响酶促反应的因素

酶工程 第二章酶动力学 第二节影响酶促反应的因素
图2-9 pH对酶活性的影响
第二节 影响酶促反应的因素
酶的最适pH并不是一个常数,它往往因酶的纯度、底物种 类和浓度以及环境介质的成分不同而不同。因此,酶的最适pH 只在一定的条件下才有意义。大多数酶的最适pH在6~8之间, 动物酶多在6.5~8.0之间,植物和微生物酶多在4.5~6.5之间。 也有少数例外,如胃蛋白酶为1.5,肝脏中的精氨酸酶则为9.7。 几种常见酶的最适pH见表2-1。
pH对酶活性产生影响的原因存在以下几方面的可能:
1.氢离子与氢氧根离子的浓度会影响到酶蛋白构象的变化, 甚至能够导致酶变性而失活。
2.pH能够影响到酶分子中某些基团的解离,这些基团的离 子化状态与酶分子的活性中心构象有关。
第二节 影响酶促反应的因素
3.pH会影响到底物分子的解离状态,同时也会影响酶分子 的解离状态,从而对酶与底物的亲和力产生影响。
所示。
[s]
图2-6 底物浓度与酶反应速度的关系
第二节 影响酶促反应的因素
从上图可以看出,在低的底物浓度时,底物浓度增加,反 应速度随之急剧增加,反应速度与底物浓度成正比,此时米氏 方程可简化为
当底物浓度较高时,增加底物浓度,反应速度虽随之增 加,但增加的程度不与底物浓度成正比;当底物达到一定浓 度后,若再增加其浓度,则反应速度将趋于恒定(v= Vmax), 并不再受底物浓度的影响,此时的底物浓度巳达到饱和程度。 所有的酶都有这种饱和现象,但各自达到饱和时所需要的底 物浓度各不相同,甚至差异极大。
第二节 影响酶促反应的因素
竞争性抑制作用可以通过增加底物的浓度来加以解除。这
种 米抑氏制常作数用Km的增特大点(是如酶图催2-化10反)应。的最大反应速度Vmax不变,而
图2-10 竞争性抑制作用的特性

高一生物酶促反应的影响因素

高一生物酶促反应的影响因素

2014--2015学年生物(苏教版)必修一同步导学案4.1.3酶促反应的影响因素一、目标导航1.酶促反应的影响因素二、知识网络1.影响酶活性的因素:温度和pH。

①温度:在较低的温度范围内,酶促反应的效率随着温度的升高而加快。

反应速率最高时的温度称为酶促反应的最适温度。

适当升高温度能加速酶促反应,但过高的温度又加速了酶蛋白的变性。

②pH:在一定的pH下,酶表现出最大活性,此时的pH称为最适pH,高于或低于此pH,酶的活性均降低。

过酸、过碱会使蛋白质变性而失去活性。

不同的酶最适pH是不同的。

(6)影响酶促反应速率的因素:pH、温度、酶的浓度、底物浓度等。

三、导学过程知识点一影响酶催化作用的因素甲乙丙1.酶相关实验的设计思路(1)根据两类催化剂催化H 2O 2产生O 2的多少判断酶的高效性 2H 2O 2――→H 2O 2酶2H 2O +O 2↑(气泡多而大);2H 2O 2――→Fe 3+2H 2O +O 2↑(气泡少而小)。

(2)根据斐林试剂与还原糖发生氧化还原反应判断酶的专一性蔗糖――→淀粉酶蔗糖(非还原糖)+斐林试剂→蔗糖+斐林试剂(无砖红色)。

(3)根据碘试剂与淀粉的颜色变化判断淀粉的水解淀粉+蒸馏水→淀粉+碘液→蓝紫色复合物(淀粉未被水解); 淀粉+淀粉酶→麦芽糖+碘液→无蓝紫色复合物(淀粉已被水解)。

(4)根据温度变化来判断酶的活性和结构的变化温度:低温(0 ℃)→升温→最适温度(37 ℃)→再升温→高温(大于70 ℃)| | | | | 活性:活性低―→活性增高→活性最高―→活性降低→无活性 | | | | | 结构:未变性―→未变性―→未变性―→渐变性―→已变性 (5)根据酸碱度变化来判断酶的活性和结构的变化 酸碱度:过酸←酸性增强←最适酸碱度→碱性增强→过碱 | | | | | 活性:无活性←活性降低←活性最高→活性降低→无活性 | | | | | 结构:变性← 渐变性 ← 未变性 ―→ 渐变性―→变性 【例1】 甲、乙、丙三图依次表示酶浓度一定时,反应速率和反应物浓度、温度、pH的关系。

酶促反应影响因素

酶促反应影响因素

酶促反应影响因素酶促反应影响因素1. 温度:温度高于酶的最适活性温度,会加速酶分子的活性,而酶活性过高则可导致酶烧伤或破坏,从而降低反应的速率,所以保持合适的温度是影响酶促反应的重要因素之一。

2. 酶浓度:酶浓度是影响酶促反应速率的主要因素,它直接影响反应中酶与底物之间的接触次数,当酶浓度增加时,酶与底物越多,接触次数越多,反应速率自然越快,反之,当酶浓度过低时,反应速率就变慢。

3. pH值:pH值也会影响酶促反应,每种酶都有自己最适宜的pH值,若pH值过高或过低,酶活性可能会下降,甚至在一定的极端条件下可能造成酶的解离,因此需要控制反应的pH值。

4. 辅助因子:对于一些特定的酶,还需要加入某些激活剂或辅助因子,才能促进反应,引起酶活性。

例如,维生素是不可缺少的辅助因子,它们可能和一些酶结合形成介质型酶,影响酶促反应的反应速率。

5. 抑制剂:在生理反应过程中,也需要抑制酶的活性,而一些有机分子可以抑制酶的活性,从而降低反应的速率。

抑制剂的效果受其类型、浓度和pH值等影响,如果抑制剂的浓度过高,将会完全抑制酶活性,从而降低反应的速率。

6. 氧化剂和还原剂:氧化剂和还原剂都会影响酶促反应,氧化剂可以促进酶的反应速率,而还原剂则可以降低酶的反应速率。

例如,苯酚可以作为氧化剂加速酶促反应,而过氧化氢则可以作为还原剂,降低酶促反应的速率。

7. 金属离子:一些金属离子也可以影响酶的反应速率,其中锰、铜、铁等离子可能介导酶的正向活性,而硫酸钙、硫酸镁、硫酸铝等离子可能起抑制作用,降低酶的反应速率。

因此,温度、酶浓度、pH值、辅助因子、抑制剂、氧化剂和还原剂以及金属离子等都是影响酶促反应速率的重要因素。

基于此,实验室工作者可以在有效控制这些条件条件的基础上,改善反应的质量和效率,从而获得更佳的实验结果。

酶促反应知识点总结

酶促反应知识点总结

酶促反应知识点总结酶促反应是生物体内重要的一种生物化学反应,涉及到生命活动中的代谢、能量释放和物质转化等。

酶是生物体内的一种蛋白质,具有催化作用,可以加快化学反应的速率,降低反应所需能量。

酶促反应在生物体内起着非常重要的作用,它涉及到各种重要的代谢途径,如糖酵解、脂肪酸氧化、蛋白质合成等。

本文将对酶促反应的相关知识进行总结,包括酶的结构和功能、酶的分类、酶促反应的机制、影响酶促反应的因素等内容。

一、酶的结构和功能1.酶的结构酶是一种特殊的蛋白质,其分子结构一般由多肽链组成。

酶的活性部位是酶分子上特定的功能区域,也称酶活性中心。

酶活性中心通常由氨基酸残基组成,其中一些氨基酸残基可以与底物发生相互作用。

2.酶的功能酶主要的功能是催化生物体内的化学反应,使化学反应速率增快,降低反应所需能量。

酶在生物体内起着非常重要的作用,如参与代谢途径、维持细胞内稳态、调节生物体对外界环境的响应等。

二、酶的分类根据酶的作用方式和受限性质,可以将酶分为许多类别。

酶的一般分类如下:1.氧化还原酶氧化还原酶是一类能够催化氧化还原反应的酶,它可以促使底物发生氧化还原反应,使电子转移。

2.脱羧酶脱羧酶是一类能够催化底物脱羧反应的酶,它可以使底物发生脱羧反应,从而释放二氧化碳等气体。

3.水解酶水解酶是一类能够催化底物水解反应的酶,它可以使底物中的化学键发生水解反应。

4.合成酶合成酶是一类能够催化底物合成反应的酶,它可以使底物中的小分子合成为大分子。

转移酶是一类能够催化底物发生分子转移反应的酶,它可以将底物中的一个官能团转移到另一个分子上。

6.异构酶异构酶是一类能够催化底物异构反应的酶,它可以使底物在空间构象上发生改变。

以上只是酶的分类中的一部分,实际上酶的分类非常复杂,有数百种酶用于不同的生物转化反应。

三、酶促反应的机制酶的催化作用可以通过理化学和生物学两种方式进行解释,下面将分别介绍。

1.理化学机制酶对底物的催化作用是通过改变底物的反应自由能,使底物分子在与酶发生作用时更容易发生反应。

影响酶促反应的心得体会

影响酶促反应的心得体会

影响酶促反应的心得体会酶促反应是化学反应中的一种重要类型,它可以通过催化器,即酶,来促进反应的进行。

我在研究酶促反应的过程中,发现有几个因素会影响这种反应的效率。

首先,反应底物的浓度对酶促反应的速率起着关键作用。

当反应底物的浓度越高时,酶促反应的速率会随之增加,直到达到酶的反应饱和点。

反之,如果反应底物的浓度过低,酶的活性会降低,从而减缓反应速率。

因此,在进行酶促反应实验时,我们需要控制好反应底物的浓度,以保证反应的正常进行。

其次,温度也会影响酶的活性和酶促反应的速率。

一般来说,酶的活性随着温度的升高而增强,直到达到酶的最适温度。

超过最适温度后,酶的活性会受到破坏,从而降低酶促反应的速率。

因此,在进行酶促反应实验时,需要控制好反应溶液的温度,以保证酶的活性和反应速率的稳定。

此外,pH值也是影响酶促反应的重要因素之一。

不同酶的最适pH值各不相同,如果反应溶液pH值偏离酶的最适pH值,就会影响酶的活性和反应速率。

因此,在进行酶促反应实验时,我们需要控制好反应溶液的pH值,以保证酶的最佳活性和反应速率。

此外,酶促反应的其他因素,如反应时间、反应体系、配比等,也会影响反应的速率和效果。

在实际实验中,我们需要根据实验目的和方法来确定这些因素的参数,以保证实验结果的准确性和可重复性。

总的来说,酶促反应是一种十分重要的化学反应类型,它可以广泛应用于生物制药、医疗诊断、生物传感等领域。

通过掌握酶促反应的影响因素,我们可以更好地设计和优化反应体系,提高反应的效率和特异性,为生物科技的发展做出贡献。

底物对酶促反应的影响

底物对酶促反应的影响

底物对酶促反应的影响主要体现在以下几个方面:
1.底物浓度:在其他因素不变的情况下,底物浓度的变化与酶促反应速度之间呈
矩形双曲线关系。

在底物浓度较低时,反应速度随底物浓度的增加而加快;当底物浓度较高时,反应速度不再呈正比例加快;当底物浓度很大且达到一定限度时,反应速度达到一个最大值,此时即使再增加底物浓度,反应速度也几乎不再改变。

2.酶浓度:在其他因素不变的情况下,酶促反应的速度与酶浓度成正比。

3.温度:温度对酶促反应的影响表现为最适温度和耐热性。

在最适温度下,酶促
反应具有最高的反应速度。

超过最适温度后,酶促反应速度会降低。

4.pH值:每一种酶只能在一定限度的pH范围内才表现活性,超过这个范围酶就
会失去活性。

综上所述,底物浓度是影响酶促反应的重要因素之一,其他因素如酶浓度、温度和pH 值也会对酶促反应产生影响。

在实际应用中,需要综合考虑各种因素,选择合适的条件以实现最佳的酶促反应效果。

影响酶促反应的因素.

影响酶促反应的因素.
抑制剂I和底物S对游离酶E的结合有竞争作用,互相排 斥,已结合底物的ES复合体,不能再结合I。同样已结合抑
制剂的EI复合体,不能再结合S
抑制剂I在化学结构上与底物S个相似,能与底物S竞争 酶E分子活性中心的结合基团,因此,抑制作用大小取决于 抑制剂与底物的浓度比,加大底物浓度,可使抑制作用减 弱。
2.非竞争性抑制(non-competitive inhibition) 抑制剂I和底物S与酶E的结合完全互不相关,既不排斥, 也不促进结合,抑制剂I可以和酶E结合生成EI,也可以和ES 复合物结合生成ESI。底物S和酶E结合成ES后,仍可与I结合
的症状。解磷定等药物可与有机磷杀虫剂结合,使酶和有机磷杀
虫剂分离而复活。
(二)可逆性抑制(reversible inhibition)
抑制剂与酶以非共价键结合,在用透析等物理方法除去
抑制剂后,酶的活性能恢复,即抑制剂与酶的结合是可逆的。
这类抑制剂大致可分为以下二类。
1.竞争性抑制(competitive inhibition)
生化学家将酶活性最高处的pH称为最适pH。一般来说,血 清中大多数酶最适pH接近中性(pH6.5-7.5)。有些酶在最适 pH处活性变化尖锐明显,也有些平坦宽广。测定酶活性浓度时 一定要选择在最适pH处,不仅因为此处酶反应速度最大,测定 灵敏度最高,还因为此处酶活性变化的斜率最小,如反应体系 中出现pH变化时,对测定结果影响最小。
2. 专一性不可逆抑制
此属抑制剂专一地作用于酶的活性中心或其必需基团,进行 共价结合,从而抑制酶的活性。有机磷杀虫剂能专一作用于胆碱
酯酶活性中心的丝氨酸残基,使其磷酰化而不可逆抑制酶的活性。
当胆碱酯酶被有机磷杀虫剂抑制后,胆碱能神经末稍分泌的乙酰 胆碱不能及时分解,过多的乙酰胆碱会导致胆碱能神经过度兴奋

实验酶促反应的影响因素

实验酶促反应的影响因素

实验酶促反应的影响因素此实验可以根据酶的特性,设计影响酶促反应的各种因素,并进行实验检验。

(一)酶的激活剂和抑制剂一、实验目的1.了解酶促反应的激活与抑制。

2.学习鉴定激活剂和抑制剂影响酶反应的方法和原理。

二、实验原理酶的活性常受某些物质的影响,有些物质能使酶的活性增加,称为酶的激活剂;有些物质能使酶的活性降低,称为酶的抑制剂。

例如,氯化钠为唾液淀粉酶的激活剂,硫酸铜为其抑制剂。

通常少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性,而且常具有特异性。

但是,值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的,有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂,而在高浓度时则为该酶的抑制剂。

例如氯化钠达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活性。

三、器材1.试管及试管架 2.烧杯、椎形瓶和量筒(100mL)3.玻璃漏斗 4.吸管 5.滤纸 6.恒温水浴锅四、试剂1. 1% 淀粉溶液2.稀释100~200倍的新鲜唾液3. 1%氯化钠溶液4.0.1 %硫酸铜溶液5.碘化钾-碘溶液:将碘化钾20g 和碘10g 溶于100 mL水中,使用前稀释10倍。

五、操作方法取3支试管,向第一支试管中加入1%氯化钠溶液1 mL,向第二支试管中加入 0.1%硫酸铜溶液1 mL,向第3支试管中加入蒸馏水1mL作对照。

再向每支试管各加入 0.1%淀粉溶液3 mL和稀释的唾液1 mL。

摇匀各管,充分混合,一起放入37℃恒温水浴中保温10~15分钟后取出。

冷却后,各滴入2-3滴碘化钾-碘溶液。

混匀。

观察比较3支试管颜色的深浅,并解释之。

如果激活剂或抑制剂的作用不明显,主要可能原因是唾液淀粉酶的活性不够高,可以适当延长反映时间或者降低唾液稀释的倍数。

思考题1.激活剂可以分为哪几类?本实验中氯化钠属于其中的哪一类?2.抑制剂和变性剂有什么不同?试举例说明。

3.酶反应的抑制作用有哪些类型?根据什么划分的?它们都有什么特点?(二)温度对酶活性的影响一、实验目的通过检验不同温度下唾液淀粉酶的活性,了解温度对酶活性的影响。

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酶的竞争性和非竞争性抑制可通过双倒数作图加以区 不因竞争性抑制剂的存在而改变, 别。Vmax不因竞争性抑制剂的存在而改变,Km则不因非 不因竞争性抑制剂的存在而改变 则不因非 竞争性抑制剂的存在而改变。 竞争性抑制剂的存在而改变。
固定酶反应的其它条件,在不同pH处测定酶反应速度,可 得各种类型的酶活性与pH关系
生化学家将酶活性最高处的pH称为最适pH。一般来说,血 清中大多数酶最适pH接近中性(pH6.5-7.5)。有些酶在最适 pH处活性变化尖锐明显,也有些平坦宽广。测定酶活性浓度时 一定要选择在最适pH处,不仅因为此处酶反应速度最大,测定 灵敏度最高,还因为此处酶活性变化的斜率最小,如反应体系 中出现pH变化时,对测定结果影响最小。
2. 专一性不可逆抑制
此属抑制剂专一地作用于酶的活性中心或其必需基团,进行 共价结合,从而抑制酶的活性。有机磷杀虫剂能专一作用于胆碱 酯酶活性中心的丝氨酸残基,使其磷酰化而不可逆抑制酶的活性。 当胆碱酯酶被有机磷杀虫剂抑制后,胆碱能神经末稍分泌的乙酰 胆碱不能及时分解,过多的乙酰胆碱会导致胆碱能神经过度兴奋 的症状。解磷定等药物可与有机磷杀虫剂结合,使酶和有机磷杀 虫剂分离而复活。
五、pH对酶的作用 pH对酶的作用
当pH变化时,可影响到底物、酶、酶-底物复合物的解离状 态和构型,甚至还可能影响到各种辅因子,从而影响酶活性。 PH对酶还有一个重要的作用,就是影响酶的稳定性。 最适pH并非是酶的特征性常数,易受多种因素影响而改变, 如缓冲液的种类、底物浓度、温度等,在研究pH对酶稳定性影 响还应注意到酶浓度高低,在低浓度时,酶易解离为单体,常比 多聚体更易灭活。
(二)可逆性抑制(reversible inhibition) 可逆性抑制(reversible
抑制剂与酶以非共价键结合, 抑制剂与酶以非共价键结合,在用透析等物理方法除去 抑制剂后,酶的活性能恢复,即抑制剂与酶的结合是可逆的。 抑制剂后,酶的活性能恢复,即抑制剂与酶的结合是可逆的。 这类抑制剂大致可分为以下二类。 这类抑制剂大致可分为以下二类。 1.竞争性抑制(competitive inhibition) 抑制剂I和底物S对游离酶E的结合有竞争作用,互相排 斥,已结合底物的ES复合体,不能再结合I。同样已结合抑 制剂的EI复合体,不能再结合S。 抑制剂I在化学结构上与底物S个相似,能与底物S竞争 酶E分子活性中心的结合基团,因此,抑制作用大小取决于 抑制剂与底物的浓度比,加大底物浓度,可使抑制作用减 弱。
实验二十二 影响酶促反应的因素 ——温度、pH和抑制剂 温度、 温度 pH和抑制剂
一、温度对酶作用的两个方面
和一般化学反应一样,酶促反应在一定的温度范围内, 和一般化学反应一样,酶促反应在一定的温度范围内,其反 应速度随温度的升高而加快。通常温度每增加10 ℃,酶促反应 应速度随温度的升高而加快。通常温度每增加 速度增加1~ 倍 其机理在于温度升高使活化分子含量提高, 速度增加 ~ 2倍。 其机理在于温度升高使活化分子含量提高 , 从而加快分子间的反应速度。另一方面:酶是蛋白质, 从而加快分子间的反应速度 。 另一方面 : 酶是蛋白质 , 遇热易 变性,随着温度的升高,酶蛋白热变性随之加快, 变性 , 随着温度的升高 , 酶蛋白热变性随之加快 , 通过减少有 活性酶的含量而降低了酶促反应速度。 活性酶的含量而降低了酶促反应速度 。 温度对酶促反应速度的 影响是以上两方面综合作用的结果。 影响是以上两方面综合作用的结果。
2.非竞争性抑制(non-competitive inhibition) 抑制剂I和底物S与酶E的结合完全互不相关,既不排斥, 也不促进结合,抑制剂I可以和酶E结合生成EI,也可以和ES 复合物结合生成ESI。底物S和酶E结合成ES后,仍可与I结合 生成ESI,但一旦形成ESI复合物,再不能释放形成产物P。 I和S在结构上一般无相似之处,I常与酶分子上结合基团 以外的化学基团结合,这种结合并不影响底物和酶的结合, 增加底物浓度并不能减少I对酶的抑制程度。
六、抑制剂对反应速度的影响
凡能使酶的活性下降而不引起酶蛋白变性的物质称做酶 的抑制剂(inhibitor)。使酶变性失活(称为酶的钝化)的因素 如强酸、强碱等,不属于抑制剂。通常抑制作用分为可逆reversible inhibition)
不可逆性抑制作用的抑制剂,通常以共价键方式与酶的必 需基团进行不可逆结合而使酶丧失活性,按其作用特点,又有专 一性及非专一性之分。 1. 非专一性不可逆抑制 抑制剂与酶分子中一类或几类基团作用, 抑制剂与酶分子中一类或几类基团作用,不论是必需基团 与否,皆可共价结合,由于其中必需基团也被抑制剂结合, 与否,皆可共价结合,由于其中必需基团也被抑制剂结合,从 而导致酶的失活。某些重金属 而导致酶的失活。某些重金属(Pb++、Cu++、Hg++)及对氯汞苯 、 、 及对氯汞苯 甲酸等,能与酶分子的巯基进行不可逆适合, 甲酸等,能与酶分子的巯基进行不可逆适合,许多以巯基作为 必需基团的酶(通称巯基酶 ,会因此而遭受抑制,属于此种类型。 必需基团的酶 通称巯基酶),会因此而遭受抑制,属于此种类型。 通称巯基酶 用二巯基丙醇(british antilewisite,BAL)或二巯基丁二酸钠等含 用二巯基丙醇 或二巯基丁二酸钠等含 巯基的化合物可使酶复活。 巯基的化合物可使酶复活。
二、酶最适温度的定义
在一定条件下,每一种酶在某一特定的温度时,其活性最大, 该温度称为酶的最适温度。酶的最适温度不是酶的特征物理常数, 该温度称为酶的最适温度。酶的最适温度不是酶的特征物理常数, 也不是一个固定不变的常数。其数值受酶工作的时间、底物种类、 浓度、缓冲液种类等的影响。
四、酶的最适pH 酶的最适
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