实验4 土壤细菌分离纯化

四.稀释混合平板法 ：
1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
4、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养 箱中培养3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 在37℃培养1-2days。 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存
•倒置培养 • 挑菌落
•纯化（平板划线法）
倒平板——划线——培养——挑菌落——纯种（纯培养）
二.稀释涂布平板法 ：
步骤： 1、倒平板： 牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查 氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培 养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。
2、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后 用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸 取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
3、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养35days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。
4、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。
三平板ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ线法：
1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。 2、划线方法
3、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养35days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。 4、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存
无菌水：带有玻璃珠装有90mL无菌水三角瓶、 装有4.5mL无菌水的试管。
其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、 台天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标 签纸、胶水、水浴锅。
四 操作步骤
• 一.制备土壤稀释液
•称取10g土样，加入90ml无菌水中，在三角瓶中振摇 20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中，以此类 推，制成不同稀释度。
微生物培养技术
1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 4、将已接种的斜面、半固体和液体培养
基放置培养箱中培养
5、将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃冰 箱中保存。
五 注意事项
制备土壤稀释液时，要注意使土样均匀分散在 稀释液中。
注意无菌操作。
六 思考题
试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步骤。 如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？
实验四 土壤细菌的分离与纯化
一 目的要求 通过从土壤中分离纯化细菌，初步掌握
微生物的分离纯化方法和无菌操作技术。 二 实验原理
常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法 稀释涂布平板法 稀释混合平板法 平板划线法
三 材料与器材
样品：新鲜土壤。
培养基：已灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、 高氏一号琼脂培养基、马铃薯 培养基、豆芽汁 培养基 。