微生物生化鉴定
微生物的生化鉴定
微
生 物
4.甲基红实验（M.R实验）
生
（3）结果观察记录
化
鉴
加入甲基红1~2滴，红色——M.R实验阳性，用 + 表示；不变色——M.R
定
实验阴性，用 - 表示。分别将试验（“+”表示阳性，“-”表示阴性）
技
术37℃恒温倒置培养24-48h。
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• 微生物生化鉴定常规实验
微
生 物
2.淀粉水解实验
生
（3）结果观察记录
化
鉴
将平板打开盖子，滴入少量Lugol’s碘液于平皿
定
中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺面整个平板，
技
术
判断结果。
有水解圈—淀粉水解实验阳性，用 + 表示；
无水解圈—淀粉水解实验阴性，用 - 表示。
食品微生物检验技术
目录页
微生物生化鉴定原理 微生物生化鉴定常规实验
— 1—
微生物生化鉴定原理
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• 微生物生化鉴定的原理
微
生
物 生
微生物代谢类型多样性具体表现在生化反应的多样性，
化
不同微生物分解生物大分子的能力，分解利用含碳化合物、
鉴
含氮化合物的途径和产生代谢产物也各不相同。
定
微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产
技 术
的小导管，包扎灭菌。
试管标记：培养基名称和接种细菌菌名。
（试管4支，分别标记大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，第四支空白对照）
接种培养：挑取少量菌种于试管中，37℃培养24h。
— 1—
• 微生物生化鉴定常规实验
微
生 物
1.糖发酵实验
生
微生物生理生化鉴定
提问：志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产 气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。应该产 生什么现象？
大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，
大多数能分解乳糖，不产生H2S。应该是什
么现象？
沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳
糖，大多数产生H2S，多数产气。
沙门氏菌的TSI试验
吲哚试验：用来检测细菌对色氨酸的利用能力。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色 氨酸产生吲哚和丙酮酸，吲哚本身无色，不能 直接观察到，当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂 时，可形成红色的玫瑰吲哚。
吲哚试验
大肠杆菌：+ 产气杆菌： –
阳性 阴性
甲基红试验：用来检测细菌发酵葡萄糖的产 酸能力。当细菌代谢糖大量产酸时，就会使 加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色 （pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红 反应阳性。
1、淀粉的水解试验
菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。 培养基：固体淀粉培养基。 溶液或试剂：卢戈氏碘液。 器材：无菌培养皿，接种环，试管架。
1、淀粉的水解试验
操作步骤：
（1）无菌操作制备淀粉固定培养基平板。
（2）将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别在同一平 板不同的部分划线接种，在平板的反面分别写 上菌名。
使吲哚溶于乙醚中。静置片刻，待乙醚层浮于液面后 形成明显的乙醚层，再沿管壁加入吲哚试剂8-10滴。 如有吲哚存在，则乙醚层呈现玫瑰红色，为阳性反应。
H2S试验
尿素酶（Urease）试验：
有些细菌能产生尿素酶， 将尿素分解、产生2个分子 的氨，使培养基变为碱性， 酚红呈粉红色。
1、未接种
微生物生理生化鉴定
1、淀粉的水解试验
微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必 须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸 收利用。
微生物生化鉴定管
微生物生化鉴定管微生物生化鉴定管是一种常用的实验室工具，用于对微生物进行生化鉴定。
通过使用生化鉴定管，可以了解微生物的代谢特性和生化反应，进而对微生物进行分类和鉴定。
以下是微生物生化鉴定管所包含的试验及其简要介绍：1.糖发酵试验：糖发酵试验是鉴定细菌能否利用不同糖类的重要方法之一。
不同细菌对糖的分解能力不同，因此可以通过观察糖发酵管中是否出现气泡来鉴别细菌。
2.柠檬酸盐利用试验：某些细菌能够利用柠檬酸盐作为碳源，通过观察是否能够利用柠檬酸盐生长来鉴别细菌。
3.丙二酸盐利用试验：丙二酸盐是植物体内一种有机化合物，某些细菌能够利用它作为碳源。
通过观察丙二酸盐利用试验管中是否出现颜色变化来鉴别细菌。
4.淀粉水解试验：淀粉水解试验是鉴定细菌能否分解淀粉的试验。
通过观察淀粉水解管中是否出现透明圈来鉴别细菌。
5.甲基红试验：甲基红试验是鉴定细菌能否利用某些有机酸作为碳源的试验。
通过观察甲基红试验管中颜色的变化来鉴别细菌。
6.乙酰甲基甲醇试验：乙酰甲基甲醇试验是鉴定细菌能否将乙酰甲基甲醇氧化成乙酸的试验。
通过观察乙酰甲基甲醇试验管中颜色的变化来鉴别细菌。
7.伏-普试验：伏-普试验是鉴定细菌能否将葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢的试验。
通过观察伏-普试验管中颜色的变化来鉴别细菌。
8.七叶苷水解试验：七叶苷水解试验是鉴定细菌能否分解七叶苷的试验。
通过观察七叶苷水解管中是否出现颜色变化来鉴别细菌。
9.吲哚试验：吲哚试验是鉴定细菌能否产生吲哚的试验。
某些细菌能够产生吲哚，而其他细菌则不能。
通过观察吲哚试验管中颜色的变化来鉴别细菌。
10.明胶液化试验：明胶液化试验是鉴定细菌能否分解明胶的试验。
通过观察明胶液化管中是否出现透明圈来鉴别细菌。
这些生化鉴定试验可以帮助我们了解微生物的代谢特性和生化反应，进而对微生物进行分类和鉴定。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的生化鉴定管进行实验，以确保结果的准确性和可靠性。
微生物常规生化鉴定技术
微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。
１）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
革兰氏染色:革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
微生物分类鉴定方法
微生物分类鉴定方法微生物分类鉴定是微生物学领域的重要研究内容之一，它涉及到对微生物的形态、生理生化特性、遗传特征等方面进行综合鉴定和分类。
准确地鉴定和分类微生物对于了解其生态学、分子进化等方面的特征以及应用于医学、农业等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的微生物分类鉴定方法。
1.形态学鉴定法：形态学鉴定法是最传统和常用的微生物分类鉴定方法。
通过观察微生物在显微镜下的形态特征，如细胞形态、细胞大小、结构特征、胞壁形态等来对微生物进行鉴定和分类。
例如，革兰氏染色可以用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌；芽孢形态特征可以用于区分芽孢杆菌属和其他杆菌属等。
2.生理生化鉴定法：生理生化鉴定法是通过微生物对不同生理生化试验的反应特征来鉴定和分类微生物。
常用的试验包括碳源利用试验、氧需求性试验、双氧水试验、酸碱度试验等。
例如，氧需求性试验可以区分厌氧菌和好氧菌；双氧水试验可以区分产气乳杆菌和其他乳杆菌属。
3.免疫学鉴定法：免疫学鉴定法是通过检测微生物产生的抗原或对抗原的反应来对微生物进行鉴定和分类。
包括血清学鉴定、补体结合试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫电泳等。
例如，通过检测微生物产生的特定抗原来诊断细菌感染。
4.分子生物学鉴定法：分子生物学鉴定法是近年来发展迅速的微生物分类鉴定方法。
通过检测微生物的核酸序列来鉴定和分类微生物。
常用的方法包括PCR、序列分析、比较基因组学等。
例如，16SrRNA基因序列分析可以用于鉴定和分类细菌。
此外，还有一些综合鉴定方法，如荧光原位杂交（FISH）、质谱分析、流式细胞术等。
这些方法在微生物分类鉴定中各具特色，能够提供更准确和细致的分类信息。
总之，微生物分类鉴定方法多种多样，各种方法常常结合使用，以提高鉴定的准确性。
随着基因测序技术的发展，分子生物学鉴定方法在微生物分类鉴定中的地位越来越重要并逐渐取代了传统的鉴定方法。
微生物鉴定原理
微生物鉴定原理
微生物鉴定是通过分析微生物的形态特征、生理生化特性、遗传特性和分子生物学特性等方面的信息来确定微生物的种属或亚种的过程。
其原理主要包括以下几个方面：
1. 形态特征鉴定：通过观察微生物在培养基上的形态特征来判断其属于哪一类微生物，比如形状、大小、颜色、聚集方式等。
比如，球菌、杆菌、弧菌等各具有特定的形态特征。
2. 生理生化特性鉴定：通过检测微生物在特定条件下的生理生化反应来鉴定其种属或亚种。
常用的生理生化特性鉴定方法有氧耗量测定、产气反应、口气反应、酸碱反应等。
3. 遗传特性鉴定：通过检测微生物的遗传物质（如DNA或RNA）序列来确定其种属或亚种。
常用的遗传特性鉴定方法
有16S rRNA基因测序、多重引物扩增反应（PCR）等。
4. 分子生物学特性鉴定：通过检测微生物的分子生物学特性来确定其种属或亚种。
常用的分子生物学特性鉴定方法有核酸杂交、基因克隆、Southern blot等。
以上是微生物鉴定的原理，通过综合使用以上各种方法，可以较为准确地确定微生物的种属或亚种，为进一步的研究和应用提供依据。
微生物生化鉴定3篇
微生物生化鉴定【微生物生化鉴定】微生物生化鉴定是一种鉴定微生物种类和特性的方法，它通过检测微生物代谢产物和酶的活性等生化特性来对微生物进行鉴定。
在微生物的研究、诊断和治疗等方面都有着广泛的应用。
下面我们将分别介绍鉴定细菌、真菌和病毒的微生物生化鉴定方法。
一、细菌的微生物生化鉴定1. 常规生化试验：包括氧化-发酵试验、铁锰试验、利用光对紫杆菌的鉴别、胶原酶酶切试验等。
2. 抗生素敏感试验：对于致病菌的抗生素敏感试验是非常重要的生化鉴定方法。
在临床上，通过检测微生物对各种抗生素的敏感性来确定选用哪种抗生素进行治疗。
3. 酸碱度试验：对于肠道菌等产生乳酸的菌株，可以通过酸碱度试验来鉴定其种类。
4. 糖代谢试验：细菌不同的糖代谢方式也是一种微生物生化鉴定方法。
二、真菌的微生物生化鉴定1. 吸附凝集实验：可用于白色念珠菌的鉴定。
2. 纸片扩散法：可用于真菌药物敏感性试验。
3. 不同培养基的试验：对于不同种类的真菌，它们对不同培养基有不同的适应性，可以通过这种方法来进行鉴定。
4. 营养需求试验：真菌的营养需求也不同，通过对真菌在培养基上的生长情况进行观察，可以对其种类进行初步鉴定。
三、病毒的微生物生化鉴定1. 免疫荧光试验：通过对病毒进行免疫染色等手段来进行鉴定。
2. 基于PCR技术的鉴定：包括标准PCR、荧光PCR和荧光定量PCR等方法。
3. 细胞培养法：将病毒在细胞培养基上培养，观察病毒在细胞上的生长和变化，以进行鉴定。
总之，微生物生化鉴定方法是一种基础的、重要的微生物鉴定方法，对于微生物的研究、诊断和治疗等方面都具有重要的意义。
不同类型的微生物鉴定方法不同，需要根据具体的情况进行选择和操作。
通过合理地运用微生物生化鉴定方法，可以更准确地鉴定不同类型的微生物，为其应用提供有力的支持。
微生物鉴定之生化实验大全
(一）碳水化合物代谢实验糖(醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖得能力与该菌就是否含有分解某种糖得酶密切相关,故分解糖得能力各不相同，细菌分解糖类后得终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气,使培养基颜色改变，从而判断细菌就是否分解某种糖或其她碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入0、5％-1％得糖类(单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类(水杨苷、菊糖等）、培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型.（3)实验方法：取某一种细菌得２4h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内,37℃培养2４h，观察结果并记录.（4)结果判定：如果接种进去得细菌可以发酵某种糖或醇,则可产酸,使培养基由紫色变成黄色,如果不发酵,则仍保持紫色。
如发酵得同时又产生气体,则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用:就是鉴定细菌最主要最基本得实验,特别就是对肠杆菌科细菌得鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（Ｏ/F）得测定（1）原理:细菌在分解葡萄糖得过程中，必需有氧得参加，称为氧化型(O),细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解得,称为发酵型(F）。
发酵型细菌无论在有氧无氧得环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖得细菌称为产碱型（-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义.（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5ｇ,磷酸氢二钾0、３g,葡萄糖10g,琼脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水10００mL。
将蛋白胨、盐、琼脂与水混合,加热溶解，校正PH至7、2，然后加葡萄糖与指示剂，加热溶解,分装试管，３-4ｍL/管；115℃,高压蒸汽灭菌20m ｉn,取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18—2４h得幼龄斜面培养物,穿刺接种,每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1ｍL液体石蜡，3７℃培养２4h或更长时间。
（4）结果判定:(５)应用:O／F试验主要适用于G—肠道杆菌得鉴别。
微生物鉴定的方法
微生物鉴定的方法
微生物鉴定是确定或识别微生物种类的过程。
以下列出了常用的微生物鉴定方法：
1. 形态学鉴定：通过观察微生物的形态特征，如大小、形状、颜色和结构，来鉴定微生物。
这可以通过显微镜观察微生物细胞和组织的特征来实现。
2. 培养基鉴定：将微生物分离培养在特定的培养基上，根据不同的培养特性（如生长速度、形态、生理特征等）来鉴定微生物。
培养基可以提供适宜的营养和环境条件，促进微生物的生长。
3. 生化测试：通过测试微生物代谢产物的变化来鉴定微生物。
常用的生化测试方法包括酶活性测试、代谢途径测试和糖发酵测试等。
4. 分子生物学方法：利用分子生物学技术鉴定微生物，包括引物PCR扩增、序列分析、DNA指纹图谱等。
这些技术可以检测微生物的DNA序列并与已知的序列进行比较，从而确定微生物的种类。
5. 免疫学方法：利用免疫学技术鉴定微生物，包括血凝法、免疫荧光染色、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。
这些方法可以检测微生物特异性抗原或抗体，从而确定微生物种类。
6. 质谱法：利用质谱技术鉴定微生物，如质谱分析、质谱成像等。
这些技术通
过分析微生物代谢产物或特定的质谱图谱，来确定微生物的种类。
综合使用上述的方法，可以更准确地鉴定微生物种类，特别是对于难以通过传统的形态学观察进行鉴定的微生物。
微生物的鉴定与鉴别方法
微生物的鉴定与鉴别方法微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们在自然界中广泛存在，对人类的生活和健康有着重要的影响。
鉴定和鉴别微生物是微生物学研究的基础，也是保障食品安全和公共卫生的重要手段。
本文将介绍一些常用的微生物鉴定和鉴别方法。
一、形态学鉴定法形态学鉴定法是通过观察微生物的形态特征来进行鉴定和鉴别的方法。
在细菌的鉴定中，常用的方法包括显微镜观察细菌形态、染色和培养基特性等。
例如，革兰氏染色可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，进一步缩小了鉴定范围。
二、生理生化鉴定法生理生化鉴定法是通过检测微生物的生理和生化特性来进行鉴定和鉴别的方法。
这些特性包括生长要求、代谢产物和酶活性等。
比如，葡萄糖发酵试验可以区分肠道埃希菌和沙门菌，鉴定其是否具有肠道致病性。
三、分子生物学鉴定法分子生物学鉴定法是通过检测微生物的基因组DNA或RNA序列来进行鉴定和鉴别的方法。
这些方法包括PCR、序列分析和基因芯片等。
PCR技术可以扩增微生物的特定基因片段，通过比对序列来确定微生物的种属和亚种。
这些方法具有高度的准确性和灵敏度，已经成为微生物鉴定的重要手段。
四、免疫学鉴定法免疫学鉴定法是通过检测微生物与宿主之间的免疫反应来进行鉴定和鉴别的方法。
这些方法包括免疫荧光、酶联免疫吸附试验和免疫印迹等。
免疫荧光技术可以通过标记抗体来检测微生物的特定抗原，从而确定微生物的种类和数量。
五、质谱鉴定法质谱鉴定法是通过检测微生物样品中的分子质量来进行鉴定和鉴别的方法。
质谱仪可以将样品分子离子化，并根据其质量-电荷比进行分析和鉴定。
质谱鉴定法具有高度的准确性和灵敏度，已经成为微生物鉴定的重要手段。
总结起来，微生物的鉴定和鉴别方法多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，常常需要结合多种方法进行综合分析，以提高鉴定的准确性和可靠性。
微生物的鉴定和鉴别工作对于食品安全、疾病预防和环境保护等方面都具有重要意义，值得我们继续深入研究和应用。
微生物鉴定之生化实验大全
微生物鉴定之生化实验大全Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】（一）碳水化合物代谢实验糖（醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入%-1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等).培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。
（3)实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。
（4)结果判定：如果接种进去的细菌可以发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。
如发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用：是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（O/F)的测定（1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参加，称为氧化型（O），细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解的，称为发酵型(F)。
发酵型细菌无论在有氧无氧的环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖的细菌称为产碱型(-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。
（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾，葡萄糖10g，琼脂3g，1%溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mL。
将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热溶解，校正PH至，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解，分装试管，3-4mL/管；115℃，高压蒸汽灭菌20min，取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18-24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1mL液体石蜡，37℃培养24h或更长时间。
微生物的鉴定方法
微生物的鉴定方法微生物是一类广泛存在于各种环境中的生物，包括细菌、真菌、病毒等。
通常情况下，鉴定微生物首先需要通过一系列的实验室技术和方法进行，以便确定其种类和特征。
下面将介绍一些常用的微生物鉴定方法。
一、形态学鉴定法：形态学是鉴定微生物的基础方法之一、通过观察微生物的形态特征，可以初步判断其种类。
细菌通常可以通过对菌落形状、色素、大小、边缘、透明度等进行观察和比较，以确定其菌属；真菌则可以通过判断菌落的形状、颜色、质地等特征，以及孢子形态和产孢器的形式来进行鉴定。
二、生理生化鉴定法：生理生化鉴定是通过测试微生物在培养基上的生理和生化特征来确定其种属。
这些特征包括生长条件（如温度、pH值）、营养需求（如对碳源、氮源的利用）、代谢产物（如气体产物和酸碱指数）等。
通过对微生物的这些表现进行定性、定量和定位观察，可以推断其种属。
三、分子生物学鉴定法：随着分子生物学技术的快速发展，分子鉴定已成为现代微生物学中重要的鉴定方法之一、其中，16SrRNA基因序列分析是最常用的鉴定细菌的分子生物学方法。
通过从微生物中提取总RNA，然后使用聚合酶链反应（PCR）扩增16SrRNA基因，在测序后与数据库进行比对，可以准确地鉴定细菌的种类。
对于真菌的鉴定，通常使用ITS区域（内转录间隔序列）进行分析。
四、免疫学鉴定法：免疫学鉴定法是通过检测微生物的免疫特异性反应来进行鉴定。
具体方法包括免疫荧光检测、酶联免疫吸附试验（ELISA）、凝集反应和免疫印迹等。
这些方法可以检测微生物中的抗原和抗体，并通过与特异性抗体的结合来确认微生物的种属。
五、基因测序鉴定法：随着测序技术的迅速发展，基因测序已经成为鉴定微生物的重要手段之一、通过对微生物基因组的整个或部分DNA序列进行测序分析，可以确定微生物的种属。
目前，全基因组测序、宏基因组测序、特定基因测序等方法已经成为微生物鉴定常用的手段。
综上所述，微生物的鉴定方法包括形态学鉴定法、生理生化鉴定法、分子生物学鉴定法、免疫学鉴定法和基因测序鉴定法等。
水生微生物常用的生理生化鉴定
水生微生物常用的生理生化鉴定1、需氧性的测定2、氧化酶的测定1%二甲基对苯撑二胺盐酸盐（或对氨基二甲基胺盐酸盐）水溶液，1%α-萘酚酒精（95%）溶液3、过氧化氢酶的测定牛肉膏蛋白胨斜面：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5g，可溶性淀粉5.0g，水1000mL，琼脂15g-20g，pH 7.0-7.25%过氧化氢4、利用碳源的测定5、利用酚的测定6、利用无机氮的测定7、有机氮源利用的试验8、生长谱法测定氮源的利用9、硝酸盐还原试验硝酸盐还原培养基：蛋白胨10g，NaCl 5g，KNO3(分析纯)1-2g，水1000mL,pH 7.4格利斯亚硝酸试剂Ⅰ：0.5g磺胺酸溶于150mL醋酸溶液（30%）中，保存于棕色瓶中。
Ⅱ:0.5g α-萘酚,加入50ml蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30%的醋酸溶液150mL，保存于棕色瓶中。
10、缺氧利用硝酸盐产气的测定11、发酵糖醇类的试验1）一般细菌常用休和利夫森二氏培养基，葡萄糖可以被1%糖醇替代蛋白胨2g，葡萄糖10g，k2HPO4 0.2g，NaCl 5g，溴百里酚蓝1%水溶液3mL（先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液），水1000mL,pH 7.0-7.2，115℃，20min。
2）芽孢杆菌培养基：（NH4）2HPO4 1.0g，KCl0.2g，MgSO4 0.2g，酵母膏0.2g,琼脂7g，糖或醇类10g，水1000mL, 0.04%溴甲酚紫15mL，pH 7.2，112℃，30min。
3）乳酸菌培养基：蛋白胨5g，吐温80 0.5g，糖或醇类10g，水1000mL, 加入1.6%溴甲酚紫约1.4mL以上，pH 6.8-7.2，112℃，30min。
12、水解淀粉的试验淀粉培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5g(用陈海水时不加)，可溶性淀粉5.0g，水1000mL，琼脂15g-20g，pH 7.2-7.4卢哥氏碘液13、水解纤维素试验无机盐基础培养基：NH4NO3 1.0g，k2HPO4 0.5g，CaCl2 0.1g，FeCl3 0.02g，KH2PO4 0.5g，酵母膏0.05g，NaCl 1.0g，水1000mL,pH 7.0-7.20.8%的纤维素粉14、甲基红试验葡萄糖蛋白胨培养基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，k2HPO4（或NaCl）5g，水1000mL, pH 7.0-7.2甲基红指示剂15、V.P. 试验葡萄糖蛋白胨培养基，40%KOH（或NaOH）,肌酸，α-萘酚溶液16、明胶水解试验明胶液化培养基：蛋白胨5g，明胶100-150g，水1000mL，pH 7.2-7.4 ，115℃，20min17、石蕊牛乳试验石蕊牛乳培养基：牛乳脱脂→调至中性→用1%-2%石蕊液调至淡紫色偏蓝→56KPa，30min18、产生吲哚试验蛋白胨水培养基：蛋白胨10g，NaCl5g，水1000mL，pH 7.6吲哚试剂（对位二甲基氨基苯甲醛3g，戊醇（或丁醇）75.0mL，浓盐酸25、0mL）乙醚19、产硫化氢试验1）蛋白胨10g，NaCl 5g，半胱氨酸0.5g，水1000mL, pH 7.0-7.45%醋酸铅2）牛肉膏7.5g，蛋白胨10 g，NaCl 5g，明胶5g，10%FeCl2(培养基灭菌后加入)5mL，水1000mL, pH 7.0，112℃，20min。
常见的微生物鉴定方法(一)
常见的微生物鉴定方法（一）引言概述：微生物鉴定方法是一种利用生物特性和化学反应来判断微生物种属和类别的技术手段。
它在医学、环境科学、食品安全等领域具有广泛的应用。
本文将介绍常见的微生物鉴定方法，以帮助读者更好地了解和运用这些方法。
正文：一、形态学鉴定方法1. 眼镜检查法：通过裸眼观察微生物的各种形态特征，如颜色、形状、大小等，判断其种属。
2. 显微镜观察法：利用显微镜观察微生物的细胞形态、排列方式、黏附物等特征，进行鉴定。
3. 染色鉴定法：运用染色技术对微生物进行染色，并观察染色后的颜色、形态等变化，以帮助鉴定。
二、生理生化鉴定方法1. 拮抗试验：通过接种不同微生物组合进行拮抗试验，观察是否发生拮抗反应，从而判定其是否属于同一种。
2. 酶活性检测：通过检测微生物体内特定酶的活性，如氧化酶、淀粉酶等，来进行鉴定。
3. 营养代谢检测：通过培养微生物在不同营养基质上的生长情况，了解其对不同营养物质的利用能力，进行鉴定。
三、分子生物学鉴定方法1. PCR技术：利用聚合酶链反应（PCR）扩增微生物DNA片段，通过比对标准数据库中的DNA序列进行鉴定。
2. DNA测序：直接对微生物的基因组DNA进行测序，然后与已有的DNA序列进行比对，来鉴定微生物。
四、免疫学鉴定方法1. 血清学鉴定法：利用微生物分泌的特定抗原与抗体结合反应来鉴定微生物，如凝集反应、免疫层析等。
2. 免疫荧光染色法：利用荧光标记的抗体与微生物特定抗原结合，在显微镜下观察荧光信号，进行鉴定。
五、生物化学鉴定方法1. 脂多糖检测：通过检测微生物产生的脂多糖，来判断其属于革兰氏阴性菌还是阳性菌。
2. 呼气气味检测：通过检测微生物代谢产物中挥发性化合物的气味，来鉴定微生物种类。
总结：微生物鉴定方法是一个多样化的领域，通过不同的技术手段可以对微生物进行准确的鉴定。
形态学鉴定方法、生理生化鉴定方法、分子生物学鉴定方法、免疫学鉴定方法和生物化学鉴定方法都是常见的方法。
微生物鉴定中常用的生理生化试验
一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（枯草杆菌，大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
微生物鉴定实验
微生物鉴定实验微生物鉴定实验是用于确定微生物种类的一系列实验。
以下是一些可能的微生物鉴定实验：1.形态学鉴定：通过观察微生物的形态特征，如形状、大小、颜色等来进行初步鉴定。
这包括对微生物的形态特征、细胞壁结构、产生的孢子类型等方面的研究。
2.生理生化鉴定：通过微生物的生理生化特征来确定其种类。
这包括微生物对碳源、氮源和其他营养物质的利用能力、产生酶和代谢产物的类型和量等方面的研究。
3.免疫学鉴定：通过检测微生物的免疫学特征来鉴定其种类。
这包括对微生物产生的抗原、抗体等方面的研究。
4.分子生物学鉴定：通过检测微生物的DNA或RNA序列来鉴定其种类。
这包括PCR扩增、测序、DNA指纹图谱等方面的研究。
5.病原性鉴定：对于致病微生物，可以通过感染动物或细胞、检测微生物产生的毒素或细菌培养物中的病原学特征等方面的研究来鉴定其病原性。
以上实验都需要在严格的无菌条件下进行，以避免微生物污染和误判。
同时，不同的微生物鉴定方法有其适用范围和局限性，需要综合使用以提高鉴定的准确性。
微生物鉴定实验详细过程报告微生物鉴定实验是一个复杂而系统的过程，通常包括以下步骤：1.样品采集和处理：在开始实验之前，需要收集待鉴定的微生物样品，例如从环境、体液或食品中采集。
样品应当妥善保存以防止污染或变质，并在实验之前进行必要的处理，例如洗涤、浓缩或稀释。
2.细菌培养：将样品接种到含有适当营养物质的培养基上，以促进细菌的生长和繁殖。
培养基可以是液体、半固体或固体的，通常需要根据微生物的生理生化特征来选择。
培养条件包括温度、湿度、气体含量等，也需要根据微生物的特性进行调整。
3.形态学鉴定：通过显微镜观察微生物的形态特征，例如细胞形状、大小、颜色、运动方式等，以初步鉴定微生物的种类。
这需要在无菌条件下进行，使用高倍率的显微镜观察样品，通常需要进行染色处理以增加对比度。
4.生理生化鉴定：通过检测微生物对不同营养物质的利用能力、产生酶和代谢产物的类型和量等特征，以进一步确定微生物的种类。
生化鉴定方法
• 方法：将待检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中 ，35℃孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚（95％乙 醇溶液）0.6ml，轻轻振摇试管，然后加0.2ml 400g/L KOH，轻轻振摇试管30s至1min，然后静 置观察结果。
生化鉴定注意事项
• • • • • • 待检菌应是纯种培养物 待检菌应是新鲜培养物 遵守观察反应的时间 必要的对照试验 注意提高阳性检出率等 试验中至少挑取2-3各待检的疑似菌落分 别进行试验。
微生物学检验细菌鉴定的生化试验
• • • • • 糖（醇）代谢试验 氨基酸和蛋白质的代谢试验 碳源和氮源利用试验 酶类试验 抑菌试验
吲哚（靛基质）试验原理及照片
靛基质+
2.苯丙氨酸脱氨酶试验
• 原理：某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙 氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，加入氯化铁试剂 后产生绿色反应。 • 培养基：苯丙氨酸琼脂培养基。 • 方法：将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养基 斜面上，于35℃培养l8～24h，滴加10％三氯化铁 试剂3～4滴，自斜面上方流下。 • 结果：出现绿色为阳性。应立即观察结果，延长 反应时问会引起褪色。 • 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌 属、普罗威登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性， 肠杆菌种中其他细菌均为阴性。
尿素酶试验图
阳性
Ⅲ.碳源和氮源利用试验
• 枸橼酸盐利用试验
1. 枸橼酸盐利用试验
• 原理：某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一 碳源，而在此培养基上生长，并分解枸橼 酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。 • 方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上 ，置35℃孵育1~4d，逐日观察结果。 • 结果：若用溴麝香草酚兰指示剂，斜面出 现菌落或菌苔，培养基变蓝色为阳性；无 菌落生长，培养基绿色为阴性。 • 应用：可用此试验作细菌种属间鉴定。
微生物生化鉴定管
微生物生化鉴定管
微生物生化鉴定管是一种用于鉴定微生物的实验工具。
它是由一系列不同的培养基和试剂组成，旨在帮助科学家们快速准确地鉴定微生物的种类和特性。
在微生物学领域，鉴定微生物的种类和特性是非常重要的。
它不仅可以帮助我们了解微生物的生态特征和生物多样性，还可以为医学、农业和环境保护等领域的研究提供基础数据。
微生物生化鉴定管的使用方法相对简单。
首先，科学家们从样本中提取微生物，并将其悬浮于适当的培养基中。
然后，他们将培养基转移到鉴定管中，并加入特定的试剂。
这些试剂可以与微生物的代谢产物反应，产生特定的颜色或化学变化。
通过观察这些变化，科学家们可以推断出微生物的种类和特性。
微生物生化鉴定管的种类繁多，每种鉴定管都有其特定的用途和鉴定目标。
例如，氧化/发酵鉴定管可以用于区分厌氧微生物和好氧微生物；碳水化合物鉴定管可以用于鉴定微生物对不同碳水化合物的利用能力；酸碱指示鉴定管可以用于检测微生物产酸或产碱的能力等等。
微生物生化鉴定管的使用不仅需要科学家们具备丰富的微生物学知识和实验技巧，还需要他们细心、耐心和准确地观察实验结果。
只有这样，才能保证鉴定结果的准确性和可靠性。
微生物生化鉴定管是一种非常重要的实验工具，它能够帮助科学家们快速准确地鉴定微生物的种类和特性。
通过使用这种工具，我们可以更好地了解微生物的生态特征和生物多样性，为各个领域的研究提供基础数据。
同时，它也需要科学家们具备丰富的微生物学知识和实验技巧，以保证鉴定结果的准确性和可靠性。
我们相信，在科学家们的努力下，微生物生化鉴定管将会在微生物学研究中发挥越来越重要的作用。
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常用生化试验一．糖、醇发酵试验1.糖、醇发酵试验原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇的酶，所以分解糖、醇的能力个不相同。
有的能分解某些糖、醇类，有的则不能分解。
有的分解某些糖、醇类发酵产酸产气，有的仅产酸，而不产气。
根据这些特点，可鉴别细菌。
培养基：糖发酵试验应用的培养基种类很多，大致可分为液体，半固体，固体（高层、斜面）等几类。
可根据试验的要求和细菌的特性来选择。
2.乙酰甲基甲醇试验（V-P 试验）原理：某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧，变为乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下，被空气中的氧氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色的化合物。
故在培养基中加入少量含胍基的化合物，如肌酸、肌酐可增加胍基含量。
试验中加入的a -萘酚为催化剂，可加速此反应，使反应颜色增加，提高反应的敏感性。
大肠埃希菌不能将丙酮酸脱羧，故V-P 试验呈阴性。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基3.甲基红试验（MR 试验）原理：许多细菌如大肠埃希菌等，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再次被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，这样使培养基的PH 降至4.5 以下。
这时加入甲基红指示剂呈红色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醛、气体和水等），则培养基的酸度仍在PH6.2 以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基MUG 葡萄糖醛酸苷酶试验原理：细菌的葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下，作用于4-甲基伞形酮-3 -D葡萄糖醛酸甘（4-Methylumbelliferyl- 3 -D-glucuronide简称MUG ）的3葡萄糖醛酸甘键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm 紫外灯下产生蓝白色荧光。
培养基：MUG 培养基4.3-半乳糖苷酶试验原理：肠杆菌科细菌发酵乳糖，依靠半乳糖苷渗透酶和3-半乳糖苷酶两种不同的酶作用，能水解邻硝酸酚-3-D 半乳糖苷（O-nitrophenyl- 3-D-galactopyranoside,ONPG ），而释放出黄色的邻硝酸酚。
发酵乳糖的细菌具有上述两种酶，可迅速分解乳糖。
迟缓发酵乳糖的细菌只有3■半乳糖苷酶，而缺少半乳糖苷渗透酶或是其活性很弱，不能将乳糖很快运送到菌细胞内，通常需要延长培养时间数天，乳糖才被分解。
本实验主要鉴别肠道细菌，乳糖发酵及乳糖迟缓发酵菌为阳性反应，非乳糖发酵酶为阴性。
本试验可作为迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定方法。
5•葡萄糖氧化-发酵（0/F）试验原理：细菌对糖的代谢分为氧化型和发酵型两种。
在有氧环境下氧化完全，生成二氧化碳和水。
在无氧环境下，进行不完全的分解（发酵），生成酸类、醇类和气体。
氧化型的细菌在无氧环境中，不能分解糖。
发酵型的细菌无论在有氧或是无氧的环境中均可分解糖。
葡萄糖氧化-发酵试验有助于假单胞菌、硝酸盐阴性杆菌、粪产碱杆菌的鉴别。
培养基：氧化发酵试验培养基6•石蕊牛乳试验原理：牛乳中含有大量的乳糖和酪蛋白，营养丰富，一般细菌均能在其生长，但各种细菌对这些物质的分解能力不同，可观察的反应也不同，在培养基中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂，可观察到不同的反应结果。
产气荚膜梭菌对牛乳具有强烈的发酵反应，产酸、产气、凝固、胨化几乎同时发生。
所产生的气体，可将培养基表层的凡士林冲至管口，牛乳可全被胨化变清，这种暴风雨”样的发酵现象称为汹涌发酵”为该菌所特有。
乳链球菌可使牛乳培养基产酸、凝固，并可使石蕊还原。
培养基：石蕊牛乳培养基二.氨基酸和蛋白质代谢试验1.靛基质试验原理：某些细菌，如大肠埃希菌、变形杆菌等，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，形成靛基质（吲哚）。
靛基质无色，与试剂对二甲氨基苯甲醛作用后，形成红色化合物-玫瑰靛基质。
本试验常用于肠杆菌科种属鉴别，大肠埃希菌98%为阳性反应，肺炎克雷伯菌、沙门菌为阴性反应。
培养基: 胰蛋白胨水培养基2.硫化氢产生试验原理：检查肠杆菌科娥硫化氢试验，是利用细菌对于培养基中硫代硫酸钠或硫酸钠、亚硫酸钠的还原作用，生成硫化氢。
硫化氢是无色气体，遇硫酸亚铁或枸橼酸铁铵，产生不溶性黑色沉淀物硫化亚铁。
按此原理设计的硫化氢试验，适用于肠杆菌科细菌的鉴定。
沙门菌，弗劳地枸橼酸杆菌，缓慢爱德华菌，莱克勒菌属和变形杆菌属为阳性反应，其他细菌均为阴性反应。
在沙门菌属中，亦有硫化氢阴性的菌型，如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等，伤寒沙门菌中亦有部分菌株为硫化氢阴性。
培养基：二糖铁琼脂或克氏双糖铁琼脂培养基。
3•尿素酶试验原理：某些细菌，如变形杆菌具有尿素酶，能分解培养基中的尿素而产生大量的氨，使培养基成碱性，培养基中的酚红指示剂呈红色。
本试验常用语鉴别变形杆菌属。
变形杆菌属能分解尿素呈阳性反应，其他肠道细菌的尿素酶试验多数为阴性反应。
培养基：尿素培养基4•明胶液化试验原理：明胶是一种胶原蛋白，不具有一般蛋白质加热凝固的特性，其水溶液在24摄氏度以下为凝胶状态。
明胶可被细菌的胶原酶分解为氨基酸，分解后的明胶，凝固力降低，低于20摄氏度不再凝固，呈液化状态。
本试验为细菌鉴定的常规实验法。
铜绿假单胞菌，荧光假单胞菌，腐败假单胞菌等为阳性反应，肠杆菌科细菌很少液化明胶。
培养基：明胶培养基。
5•氨基酸脱羧酶试验原理：细菌分解氨基酸使其脱羧，生成胺和二氧化碳，此为脱羧反应，需要细菌所产生的脱羧酶完成反应。
各种细菌产生的脱羧酶不同，对各种氨基酸底物所产生的胺亦不相同，但均可使培养基变碱，由培养基中的指示剂显示出来。
培养基: 氨基酸脱羧酶培养基6•精氨酸双水解酶试验原理：细菌分解精氨酸产碱不限于精氨酸脱羧酶。
精氨酸可通过精氨酸脱酰胺酶及瓜氨酸酶，经两次水解，先生成瓜氨酸和氨，后形成鸟氨酸、氨及二氧化碳。
鸟氨酸又在鸟氨酸脱羧酶的作用下生成腐胺及二氧化碳。
氨和腐氨均为碱性，由培养基中的指示剂显示出来。
培养基：含精氨酸的氨基酸脱羧酶培养基或用Thomley精氨酸培养基，后者常用于假单胞菌属鉴定。
7•苯丙氨酸脱氨酶试验原理：变形杆菌属可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂后产生绿色反应。
本试验主要用于肠杆菌科细菌鉴定，变形杆菌属均为强阳性反应，而肠杆菌科其他细菌则为阴性反应。
培养基: 苯丙氨酸琼脂培养基。
三•碳源和氨源利用试验1•枸橼酸盐利用试验原理：枸橼酸盐培养基是一综合性培养基，其中枸橼酸钠为碳的唯一来源，磷酸二氢铵为氮的唯一来源。
有的细菌如产气肠杆菌等，可以利用枸橼酸盐作为碳源，能在此培养基上生长，并且分解枸橼酸盐而最后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。
这样培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为蓝色，为枸橼酸盐利用实验的阳性反应。
若细菌不能利用枸橼酸盐作为碳源，则在此培养基上不能生长，培养基不变色，为枸橼酸盐利用实验的阴性反应。
本试验主要用于肠杆菌科细菌鉴定，大肠埃希菌、志贺菌属、爱德华均属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属，克雷伯均属，枸橼酸杆菌和魔秀变形杆菌通常为阳性反应。
此外，铜绿假单胞菌、洋葱假单胞菌和嗜水气单胞菌亦为阳性。
培养基: 西蒙枸橼酸盐培养基2•丙二酸盐利用实验原理：当细菌利用丙二酸盐作为唯一碳源时，丙二酸钠可被分解成碳酸钠，使培养基变碱。
沙门菌亚属n川及肺炎克雷伯菌为阳性反应，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属有不用生物型反应，其他各菌属为阴性反应。
培养基：丙二酸钠培养基。
3•其他有机酸盐利用试验原理：酒石酸受细菌酶的作用，可分解为乙酸，草酸等比较简单的有机酸。
枸橼酸经细菌酶的作用进入三羧酸循环被分解为琥珀酸、乳酸、乙酸等。
这些有机酸的生成，使培养基的PH值下降，这可由培养基中的指示剂变化显示出来。
同时未分解的酒石酸和枸橼酸可与加入的醋酸铅试剂形成铅盐沉淀，故可判断反应程度。
细菌的酒石酸分解酶对各种酒石酸光学异构体的分解具有特异性，故可用于细菌的鉴别，此外，粘液酸经分解后也可形成简单的有机酸，亦可由PH降低时指示剂颜色变化进行判断。
本试验用于肠杆菌科细菌鉴别。
沙门菌属大部分菌属的右旋酒石酸盐利用试验为阳性，志贺菌属为阴性，沙门菌属对左旋酒石酸盐有不同反应，其他菌属均为阴性，不分解粘液酸的只有志贺菌属。
培养基：有机酸盐培养基四•酶类试验1•氧化酶试验原理：某些细菌如奈瑟球菌和铜绿假单胞菌，具有氧化酶，能将盐酸二甲基对苯二胺四甲基对二胺试剂氧化成红色的醌类化合物。
2•细胞色素氧化酶试验原理：某些细菌如铜绿假单胞菌，具有细胞色素氧化酶，在有分子氧存在的情况下，将试剂盐酸二甲基对苯二胺氧化，并与a萘酚生成吲哚芬蓝，而出现蓝色。
次试验常与氧化酶同时进行。
3•触酶试验（过氧化氢酶试验）原理：细胞代谢产生的过氧化氢对细菌细胞有毒，而细胞内的过氧化氢酶能催化过氧化氢，使其分解为分子态氧和水，使其解毒。
在含有过氧化氢酶的细菌培养物上滴加过氧化氢溶液后，立即产生大量气泡，为阴性反应。
绝大多数细菌的琼脂培养物均产生过氧化氢酶，但链球菌属为阳性，故用于鉴别葡萄球菌、微球菌邙日性）与链球菌。
乳酸菌及梭菌为阴性。
4•硝酸盐还原试验原理：某些细菌如肠道杆菌，能还原培养基中的硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与试剂中的醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，在与试剂中的a-萘酚结合成N - a-萘酚偶氮苯磺酸（红色）。
本实验在细菌鉴定中广泛使用，肠杆菌科均为阳性反应。
培养基：硝酸盐培养基5•硝酸盐还原产气试验原理：有些细菌可将硝酸盐还原成亚硝酸盐，并将亚硝酸盐分解成氮气，观察有无产气现象，即为亚硝酸盐还原产期试验。
本试验常用于鉴别铜绿假单胞菌和其他假单胞菌，前者为阳性反应。
培养基：硝酸盐胨水培养基6•血浆凝固酶试验原理：测定葡萄球菌的致病性，通常以能否产生血浆凝固酶为准，产生者为致病菌株，不产欢迎下载5生者为非致病菌株。
但也有少量致病菌株不产生血浆凝固酶。
葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种，一种是结合在细菌的细胞壁上，直接作用与血浆中的纤维蛋白，使细菌凝成块状，破片法实验的阳性结果是由此酶形成。
另一种是由菌体类产生释放到菌体外，称为游离血浆凝固酶，它能使血浆中的凝固酶原变为凝血酶类产物，试管法的阳性结果是由游离的血浆凝固酶形成。
7•耐热性脱氧核糖核酸酶试验原理：某些革兰阳性均为葡萄球菌、链球菌、梭菌等能产生细胞外的脱氧核糖核酸酶（DNase），是培养基中的脱氧核糖核酸长链水解，成为由几个单核苷酸组成的寡核苷酸，但仅有金黄色葡萄球菌所长生的DNase能耐受煮沸而不被破坏。
除凝固酶试验外，这种耐热的脱氧核酸酶可作为金黄色葡萄球菌重要的鉴定试验。
试验采用甲苯胺蓝DNA琼脂，其中甲苯胺蓝0是一种异染性染料，党羽DNA结合时呈蓝色；担当DNA被水解成寡核苷酸或单核苷酸时，甲苯胺蓝0与其结合所产生的吸光光谱是粉红色，借以判断DNase的存在。