实验六 阿司匹林原料药中水杨酸的液相色谱分析测定
高效液相色谱法同时测定复方阿司匹林片中各种有效成分及游离水杨酸
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｔｏ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ａｓｐｉｒｉｎ （Ａ）， ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎｅ （Ｐ） ａｎｄ ｃａｆｆｅｉｎｅ （Ｃ） ｉｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ａｓｐｉｒｉｎ ｔａｂｌｅｔｓ ｂｙ ＨＰＬＣ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｏｎ ａ ＨＰＬＣ ｃｏｌｕｍｎ （Ｃ１８， ＶＰ－ＯＤＳ １５０Ｌｘ４．６） ｗｉｔｈ ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ－ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ （Ｖ／Ｖ ＝ ４６：５２：１．５：０．５） ａｓ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ （υ＝０．８ｍＬ／ｍｉｎ） ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ２７９ｎｍ． Ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ Ｙ＝１４１５．５Ｘ ＋ １１２７８ （ｒ＝０．９９９８） ｆｏｒ Ａ （０．２７￣８０．２７μｇ．ｍＬ－１）， Ｙ＝１７３０．８Ｘ ＋ ６２４．７ （ｒ＝０．９９９６） ｆｏｒ Ｐ （０．１９￣５７．３４μｇ．ｍＬ－１）， ａｎｄ Ｙ＝６５６．２Ｘ ＋ ６６３５．２ （ｒ＝０．９９９６） ｆｏｒ Ｃ （０．０４￣１２．３９μｇ．ｍＬ－１）． Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ９９．８４％ ｆｏｒ Ａ， １００．２９％ ｆｏｒ Ｐ ａｎｄ １００．５７％ ｆｏｒ Ｃ． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｌｌｏｗｓ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ＡＰＣ ｔａｂｌｅｔｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ａｓｐｉｒｉｎ ｔａｂｌｅｔ， Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， Ａｓｐｉｒｉｎ， Ｃａｆｆｅｉｎｅ， Ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎｅ， Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ
阿司匹林药物的高效液相色谱法测定
实验四阿司匹林药物的高效液相色谱法测定[目的要求]1、了解高效液相色谱法分离有机化合物的基本原理及操作条件；2、掌握高效液相色谱仪的基本结构及作用；3、了解HPLC法测定阿司匹林药片中水杨酸的方法。
[基本原理]高效液相色谱法是20世纪70年代急剧发展起来的一项高效、快速的分离分析技术。
液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。
在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论基础，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。
这种柱色谱技术称做高效液相色谱法。
它可用来作液固吸附，液液分配，离子交换和空间排阻色谱（即凝胶渗透色谱）分析，应用非常广泛。
据估计，世界上几百万种化合物中除20%宜用气相色谱(GC) 分离分析外，其余80%的化合物，包括大(高)分子化合物、离子型化合物、热不稳定化合物以及有生物活性的化合物都可以用不同模式的HPLC ( 正相HPLC、反相HPLC、离子交换色谱和离子色谱、体积排除色谱、亲合色谱等等) 进行分离分析。
而且高效液相色谱法还具有以下几个突出的特点：（1）分离效能高由于新型高效微粒固体相填料的使用，液相色谱填充柱的柱效可达5000~30000块/m理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱的1000块/m 理论塔板数的柱效；（2）选择性高由于液相色谱具有高柱效，并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性，因此高效液相色谱不仅可以分析不同类型的有机化合物及其同分异构体，还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体；（3）检测灵敏度高高效液相色谱法使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度，紫外检测器灵敏度可达10-9g，荧光检测器灵敏度可达10-12g；（4）分析速度快由于高压泵的使用，相对于经典液相（柱）色谱法其分析时间大大缩短。
高效液相色谱仪器系统的主要部件:储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置（色谱工作站）：(1) 输液系统输液系统要为HPLC仪器提供流量恒定、准确、无脉冲的流动相，流量的精度和长期的重复性要好，同时还要提供精度好、准确度高、重现性好的多元溶剂梯度。
GC-MS测定阿司匹林中的水杨酸
生物制药与研究2018·01170Chenmical Intermediate当代化工研究GC-MS 测定阿司匹林中的水杨酸＊詹佶睿 朱致君 高仕君 郭天童（武汉大学化学与分子科学学院 湖北 430000）摘要：本实验旨在运用气相色谱-离子阱质谱的SIM定量方法，调整色谱柱参数，通过BSTFA这种具有较高活性的衍生试剂，对阿司匹林片中的成分水杨酸进行衍生作用，弥补水杨酸直接用GC-MS测定的存在的灵敏度低、峰展宽较大等不足，从而提高测定的灵敏度，并绘制出工作曲线，探究在特定条件下的灵敏度和重现性问题，结果表明：水杨酸在44-88μg/mL范围内线性关系良好，方法具有操作简便、无需净化步骤、准确度高、重现性好等特点，可用于阿司匹林药片中的水杨酸的测定。
关键词：水杨酸；气相色谱-质谱联用；衍生；BSTFA中图分类号：R 文献标识码：ADetermination of Salicylic Acid in Aspirin by GC-MSZhan Jirui, Zhu Zhijun, Gao Shijun, Guo Tiantong(Chemistry and Molecular Science College of Wuhan University, Hubei, 430000)Abstract ：The purpose of this experiment is to use SIM quantitative method of gas chromatography-ion trap mass spectrometry to adjust theparameters of the column, to derive the salicylic acid from aspirin tablets through derivative reagent with higher activity such as BSTF A to make up for salicylic acid GC-MS directly with the existence of the low sensitivity, peak broadening and other deficiencies,thereby increasing the sensitivity of the determination and draw the working curve to explore the sensitivity under certain conditions, and reproducibility, the results show that:salicylic acid The linearity in the range of 44-88 ug / mL, the method has the advantages of simple operation no purification steps, high accuracy, good reproducibilityetc., can be used for the determination of salicylic acid in aspirin tablets.Key words ：salicylic acid ；gas chromatography-mass spectrometry ；derivatization ；BSTF A阿司匹林（乙酰水杨酸）是水杨酸类非甾体抗炎药，是常用的解热、消炎镇痛药。
高效液相色谱法测定复方阿司匹林中有效成分
高效液相色谱法测定复方阿司匹林中有效成分
用超纯水稀至lOOOmL摇匀。
4、液相色谱分离条件：G&色谱柱；流动相：甲醇：1%冰穂酸溶液(50: 50); 流速：1.0
ml/min；检测波长：276 nm；柱温：30°C o
5、标准曲线制作：将浓度分别为25、5()、125、250j.ig/mL阿司匹林标准溶液，进样
2()pL,二次进样，以浓度C(Mg/mL)对应二次测定峰面积平均值A制作工作曲线，并进行回归分析，得回归方程。
6、样品测定：将样品溶液用0.45pm的微孔滤膜过滤，进样20P L,分别进样二次，用回归
方程计算阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量。
五、数据记录及处理
1•数据记录
C(ppm)Ai A2A平均
000
25177165.4171.2
50325.9328.6327.25
125796.9803.1800
250160&11609.91609
c样品672.1665.7668.9
2.标准曲线的绘制:
根据上表数据，以浓度(C)为横坐标，峰面积(A平均)为纵坐标作图，得到标准曲线如下图：
阿司匹林标准曲线
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合!。
阿司匹林中乙酰水杨酸含量的测定
阿司匹林中乙酰水杨酸含量的测定阿司匹林是一种常见的非处方药，广泛用于缓解小至中度疼痛以及减轻发热等症状。
其主要成分是乙酰水杨酸，可通过化学方法来测定其含量。
一、实验原理乙酰水杨酸为无色或白色结晶性粉末，是一种有机酸。
它可以在碱性条件下水解成水杨酸和乙酸，而水杨酸可以与铁离子反应形成红色络合物。
利用此原理，可以使用一种称为铁氰化钾法的方法来测定乙酰水杨酸的含量。
铁氰化钾法的基本原理是：将阿司匹林样品与过量碱液反应，水解成为水杨酸和乙酸。
然后，加入过量的铁氰化钾溶液，水杨酸与铁离子反应产生红色络合物。
通过比较样品红色络合物的吸光度与已知浓度的乙酰水杨酸标准曲线的吸光度来测定乙酰水杨酸的含量。
二、实验步骤1. 制备乙酰水杨酸标准曲线：(1) 准备含不同浓度乙酰水杨酸的标准溶液，用去离子水调制成每毫升1mg/mL的乙酰水杨酸溶液。
(2) 取不同浓度的标准溶液如0.01、0.025、0.05、0.1、0.2 mL分别加入5.0 mL安乃近溶液中，然后加入5.0 mL氢氧化钠溶液，用去离子水稀释至50.0 mL。
(3) 以铁氰化钾为基础，制备铁氰化钾溶液（50 mg/L），5.0 mL盛于10 mL容量瓶中，用去离子水稀释至10.00 mL。
(4) 用铁氰化钾试剂将样品转化为反应所需的酸性条件，取1.0 mL 25%硝酸加入样品中，用去离子水定容至50 mL，即为铁氰化钾试剂。
(5) 按照铁氰化钾试剂说明书上的取样方法和使用方法制备分别为0.01~0.2 mg/mL的标准浓度溶液，置于离心管中混匀。
(6) 用分光光度计分别测量吸光度，并用已知浓度的乙酰水杨酸标准曲线的吸光度进行比较。
2. 阿司匹林样品的测定(1) 取0.25 g阿司匹林样品，加到50 mL锥形瓶中，加入5.0 mL氢氧化钠溶液，并加盖，摇动混匀。
(2) 放置1小时，过滤，将滤液定容至50 mL。
（若中途出现白色析出物，加入一滴2 mol/L盐酸溶液重新明亮）(3) 用铁氰化钾试剂将样品转化为反应所需的酸性条件，取1.0 mL 25%硝酸加入样品中，用去离子水定容至50 mL，即为铁氰化钾试剂。
[药物分析] 实验6 高效液相色谱法用于阿司匹林肠溶片中游离水杨酸检查和阿司匹林含量测定
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【思考题】1.供试品溶液制备中，为什么要选用1%冰醋酸甲醇溶液作为溶剂？为什么供试品溶液需要临用新制？为什么供试品溶液需要过滤，取续滤液使用？除滤膜过滤外，还有什么方法可以达到同样的目的？①防止阿司匹林水解。
②由于供试品溶液室温下不稳定, 因此需要临用新制。
③过滤是为了除去其中的不溶性辅料等杂质。
续滤液指过滤时去掉前几滴后的滤液，可以保证待测药物的浓度与均一度。
前面的部分溶液需要对滤膜润洗，因而影响了药物的浓度，最终影响峰面积或峰高。
④………………2.为什么流动相需要过滤和超声波脱气？过滤是为了除去流动相中的杂质，保护系统和柱子。
主要是过滤掉不溶性微粒和气体，（尤其是有机相和水相混合的时候，会产生大量的气泡），防止堵住仪器和色谱柱。
脱气是为了除去溶解在流动相中的气泡。
防止气泡影响色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线的稳定性。
此外，溶解在流动相中的氧可以与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）发生反应。
溶解气体也会引起溶剂pH值的变化，从而导致分离或分析结果的误差。
3.系统适用性试验的目的是什么？系统适应性试验参数和合格标准是建立基础是：仪器，电子元件，分析操作和待测样品是个不可分割的整体。
系统适应性实验确保系统在样品分析的时候能很好地运行。
在分析方法中应当要包括适当的系统适应性合格标准。
按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。
色谱分析做系统适用性试验主要是为了确定分析使用的色谱系统是有效的、适用的。
系统适用性通常用四个参数来确定系统的适用性：分离度，柱效，重复性和拖尾因子。
其中分离度和柱效是两个最重要，也更具有实用意义的参数。
分离度是判断两物质在一个方法中分离的程度，虽然与柱效相关，但在衡量系统适用性时，强调的应该是分离度，只有当色谱图中仅有一个色谱峰或测定微量成分时，规定柱效才有其特殊重要性。
关于阿司匹林中乙酰水杨酸含量测定实验的讨论
（1）0.1000 mol·L HC1溶液的配制和标定
（2）NaOH标准溶液与HC1标准溶液体积比的测定
（3）药片中乙酰水杨酸含量的测定
准确称取0.6g左右(
0．8g／片)药片研成的粉末于100ml的烧杯中，用移液管准确加入25.0 ml 1.00mol/LI1NaOH标准溶液，加蒸馏水30 m1，轻摇几下，水浴加热15 min，迅速用流水冷却，并定量转移至100ml容量瓶中，稀释至刻度、摇匀。
用移液管准确移取10ml溶液于250ml锥形瓶中，加水20—30ml，滴加2滴酚酞，用浓度约为0.1000 mol/L HC1标准溶液滴至红色消失即为终点．
存在的问题
问题一：
淀粉为胶状沉淀，比较难过滤。与此同时，过滤过程中会造成较大损失。因此课上我们采取的是不过滤的做法。
问题二：
不过滤在用移液管移取溶液时会因混如淀粉而是溶液体积偏小。
A．P．
C．及水杨酸的最大吸收波长有重叠．从而难以准确测定水杨酸含量。图中曲线2,λ
229处为
A．，λ
250处为P．，λ
275处为
C．，λ
295-330处为水扬酸．从图中看，在25O～330nm波长范围内无特征峰，因而不能进行水杨酸的定量测定。本实验利用水杨酸与Fe能形成紫堇色配合物的原理，在可见光区(520nm)测定水杨酸含量，
在用移液管移取溶液时，由于100ml容量瓶体积较小，因此很难避免将瓶底的淀粉吸取上来。另外，由于仅移取10.00ml溶液，淀粉所占体积分数是比较大的，因此会造成较大误差。
改进方案：
第一种：冷却后在溶液中加入α-粉酶至淀粉全部溶解。以下同原操作。
优点：
淀粉全部被α-淀粉酶溶解，最终产物以麦芽糖和葡萄糖为主，不但解除了淀粉胶状沉淀对实验的干扰，而且新的生成物对实验结果也没有什么影响。
阿司匹林中乙酰水杨酸和水杨酸含量的测定(正式)
六、思考讨论
1．在找寻双波长时，我们首先根据水杨酸和阿司匹林标准品的光谱图形寻找。光谱图中277.5nm处阿司匹林处于最大吸收。图中320nm处的水杨酸的吸光度值与277.5nm处的吸光度值相等。利用紫外分光光度计的光度测量时，发现有误差。在318.5nm处的水杨酸吸收值与277.5nm处的相同。我们首先用318.5nm、277.5nm作为双波长的两个波长值。测出的样品的含量大于100%，引起了我们队实验的正确操作性的怀疑。于是我们重新走了水杨酸的光谱，找出2个波长为277.5nm和320nm。在这个条件下，我们再次测量了标准品、样品的吸光度，并算出样品的含量仍然大于100%。经老师讲解，工厂做工有一定误差。标示量为40mg/片，但含量也许更多。
三、仪器和试剂
1.仪器 UV-2550紫外-可见分光光度计、容量瓶10ml、50ml。
2.水杨酸标准品1.008mg/ml、阿司匹林标准品1.008mg/ml、阿司匹林样品40mg/片、乙醇。
四、实验步骤
1.样品溶液、标准溶液的配置：
标准溶液的配置：取6个10ml容量瓶，标号1~6。使用微量进样器精密吸取阿司匹林标准品0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml注入各个容量瓶，95%乙醇定容。配置成约40μl/ml、60μl/ml、80μl/ml、100μl/ml、120μl/ml的标准溶液，备用。并将水杨酸标准品溶液稀释为20μl/ml，备用。
0.4188
C
40.24
60.36
80.48
100.6
120.72
x
2．标准曲线（△A-C关系图）
第一次测量
第二次测量
3．利用第一次测量得出的曲线，根据样品的吸光度值，在标准曲线上找到相应的浓度94.37μl/ml。
0910 阿司匹林液相色谱法分析
乙酰水杨酸（阿司匹林）有效成分的测定阿司匹林含量的测定酸碱滴定法（中国药典，2015版，阿司匹林）电化学分析法紫外可见分光光度法近红外光谱分析法高效液相色谱分析法（中国药典，2015版，阿司匹林制剂）COOH OCCH3O第一部分实验目的第二部分实验原理第三部分试剂和仪器第四部分实验步骤第五部分数据处理第六部分思考题要内容1. 熟悉液相色谱仪的仪器构造和一般操作方法；2. 掌握阿司匹林的分离和定性、定量分析的原理及实验条件的建立。
液相色谱法分离分析物质的基本原理是基于各组分在流动相和固定相两相间分配系数的不同。
COOH 3O反相高效液相色潽法：反相键合相色谱，键合固定相极性小于流动相的极性，适合分离非极性、极性和离子型化合物。
非极性烷基键合相：十八烷基硅烷键合相流动相：甲醇：超纯水：冰乙酸= 60：40：4◆定性分析待测样标准样当色谱条件相同且完全分离时，乙酰水杨酸的保留时间相同或相近。
◆定量分析：外标法单点校正式中：c x –待测组分的浓度；A x –待测组分的峰面积或峰高；c r –标准组分的浓度；A r –标准组分的峰面积或峰高；三、试剂和仪器1.试剂甲醇（色谱纯），冰乙酸流动相：甲醇：超纯水：冰乙酸= 60：40：4色谱柱清洗液：甲醇：超纯水= 85：15（V/V)2. 仪器高效液相色谱仪（色谱柱：Hypersil BDS C-18 5 µm 4.6 mm ×200 mm ；流量：1.00 mL⋅min-1；紫外可见可变波长检测器：检测波长，280 nm），分析天平，超声波清洗仪，10 µL 微量进样器四、实验步骤1.测定乙酰水杨酸标准试样精确称取乙酰水杨酸标准试样0.02g，置于5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
经试样过滤器过滤后，量取5µL注入液相色谱仪，平行进样5针。
2.测定乙酰水杨酸试样将阿司匹林研细后，准确称取0.03g左右，同上配制溶液并测定，按外标法以峰面积计算出待测试样中乙酰水杨酸的含量。
CE测阿司匹林中水杨酸
实验六 毛细管电泳法测定阿司匹林中的水杨酸一、实验目的1．掌握毛细管电泳法的基本原理、结构与使用方法。
2．掌握紫外吸收光谱检测方法。
3．测定阿司匹林与水杨酸。
二、实验原理毛细管电泳又称高效毛细管电泳( High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE) 是一种仪器分析方法。
通过施加10-40kV 的高电压于充有缓冲液的极细毛细管，对液体中离子或荷电粒子进行高效、快速的分离。
现在，HPCE 已广泛应用于氨基酸、蛋白质、多肽、低聚核苷酸、DNA 等生物分子分离分析，药物分析，临床分析，无机离子分析，有机分子分析，糖和低聚糖分析及高聚物和粒子的分离分析。
人类基因组工程中DNA 的分离是用毛细管电泳仪进行的。
1．仪器结构毛细管电泳较高效液相色谱有较多的优点。
其中之一是仪器结构 简单（见图1）。
它包括一个高电压源，一根毛细管，紫外检测器及计算机处理数据装置。
另有两个供毛细管两端插入而又可和电源相连的缓冲液池。
hi gh-vol tagepower s uppl y BufferVi alBuffer Vi al Detector Recordi ng devi cecapi l l aryEl ectrode El ectrode2．分离原理毛细管中的带电粒子在电场的作用下，一方面发生定向移动的电泳迁移，另一方面，由于电泳过程伴随电渗现象，粒子的运动速度还明显受到溶液电渗流速度的影响。
粒子的实际流速 V 是泳流速度 Vep 和渗流速度 Veo 的矢量和。
即:V = Vep + Veo (1)电渗是一种液体相对于带电的管壁移动的现象。
溶液的这一运动是由硅/水表面的Zeta势引起的。
CE通常采用的石英毛细管柱表面一般情况下(pH>3)带负电。
当它和溶液接触时，双电层中产生了过剩的阳离子。
高电压下这些水合阳离子向阴极迁移形成一个扁平的塞子流，如图2。
毛细管管壁的带电状态可以进行修饰，管壁吸附阴离子表面活性剂增加电渗流，管壁吸附阳离子表面活性剂减少电渗流甚至改变电渗流的方向。
HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸含量PowerPoi
HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸 含量PowerPoi
水杨酸的线性试验
•配制不同浓度的水杨酸溶液作为标准溶液。各 取20μl依次注入液相色谱仪，以浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标，进行回归处理，得水杨酸回 归方程。
•组１：4、6、10 、 16 、 20μg/ml
•组２：1.5 、 3 、 6 、 9 、 15 、 24 、 30μg/ml
４.在做样品的稳定性实验时，发现阿司匹林的稳定性 都不好，特别是组1阿司匹林的水解率很大，且随 时间变化呈一定的线性关系，原因可能有以下几方 面：一是溶液配置过程太长，导致水解发生；二是 所配溶剂酸性控制不好，导致了阿司匹林的水解。 由实验可知用冰醋酸：甲醇(1：10) (pH值约为2． 4） 做溶剂相比1%冰醋酸-甲醇(50：50)可一定程 度抑制阿司匹林水解． 解决方法:一.在实验过程中确定阿司匹林的有效稳定 时间，在这段时间内进行水杨酸含量的测定。 二.改用其他溶剂,像乙腈一甲酸(99:1)溶液作为本方 法测定溶剂.
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峰面积
801746.8 802056.1 807673.3 804326.7 805846.9 809299.3
峰面积/浓度
80174.68 80205.61 80767.33 80432.67 80584.69 80929.93
平均（峰面 积/浓度） 80515.8
RSD（%） 0.38
组2
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HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸 含量PowerPoi
•最低检出限试验(组1)
•精密吸取水杨酸对照品溶液，用流动相逐级进 行稀释。当记录的色谱图中信噪比为10：1时。 确定水杨酸的定量限，信噪比为3：1时确定检测 限。噪音信号为2.1ng/ml，检测限为6.3ng/ml。
阿司匹林片剂中乙酰水杨酸含量的测定
学院/专业/班级: 姓名：实验4・6设计性实验实验序号：教师评定：______________合作者:【所选实验题目】阿司匹林片剂中乙酰水杨酸含量的测定【实验要求】①山学生自行选做上述的一个实验题口（但保持每个实验题U的选作人数基本相等），然后山学生根据本课程的理论及实验知识，查阅相关文献，独立设计实验方案，山教师审阅通过后进行实验，并完成实验报告；②在实验设计时应遵循以下原则：（1）首先确定分析方法及滴定方式；（2）根据所测样品的大概含量（教师提供），自己确定如何称取试样；（3）要考虑到实验中干扰因素及排除方法；（4）试剂及指示剂尽量选择实验室提供的试剂；（5）在保证实验准确度要求的前提下, 要尽量节约使用试剂及试样；③在考虑上述儿点后，与实验前完成预习报告，包括（1）分析方法及简单原理；（2）所需试剂；（3）具体实验步骤；（4）实验注意事项；（5）参考资料；（6）数据记录及处理的表格及相关计算公式；④教师审阅通过后，学生自行完成实验及实验报告，并对自己设计•的实验方案进行评价及问题讨论，如果实验中的实际做法与预习报告有差异，以加以说明或重新写过。
【分析方法及简单原理】乙醸水杨酸邙可司匹林）是最常用的解热镇疼药之一，是有机弱酸（pKd二3.0）,摩尔质量为180. 16 g/mol,微溶于水，易溶于乙醇；干燥中稳定，遇潮水解。
阿司匹林片剂在强碱性溶液中溶解并分解［乙酰水杨酸中的酯结构在碱性溶液中很容易水解为水杨酸（邻疑基苯屮酸）和乙酸盐］,水杨酸（邻疑基苯屮酸）易升华，随水蒸气一同挥发。
水杨酸的酸性较苯屮酸强，与Na2C03或N&HCO3中和去竣基上的氢，与NaOH中和去疑基上的氢。
山于药片中一般都添加一定量的赋形剂如硬脂酸镁、淀粉等不溶物（不溶于乙醇），不宜直接滴定。
因此其含量的测定经常采用返滴定法（误差：无事先中和去游离酸，乙酰水杨酸片剂中山于含有少量稳定剂酒石酸和枸椽酸，制剂工艺过程中乂可能水解产生水杨酸和酷酸，）。
阿司匹林中乙酰水杨酸和水杨酸含量的测定(正式)
09级临床药学唐辰逍0929014、彭文星0929012、邸宣0929009
一、实验目的
1．掌握用紫外可见分光光度法测定药物中乙酰水杨酸的方法。
2．学会使用UV-2550紫外-可见分光光度计。
二、实验原理
阿司匹林是解热镇痛药，主要成分为乙酰水杨酸，摩尔质量180.16g/mol。阿司匹林少量水解成水杨酸，因而在阿司匹林样品中混有少量水杨酸。
本实验采用双波长法和校正曲线法。水杨酸干扰阿司匹林的吸光度测定，在选定的两波长下测定吸光度差值。配制一系列浓度不同的标准阿司匹林溶液，在测定条件相同的情况下，分别测定其在两个波长下的吸光度，以标准浓度为横坐标，以相应吸光度差值为纵坐标，绘制△A-C关系图，在相同条件下测出试样在两波长处的吸光度，可从校正曲线上查出试样液的浓度。
0.4188
C
40.24
60.36
80.48
100.6
120.72
x
2．标准曲线（△A-C关系图）
第一次测量
第二次测量
3．利用第一次测量得出的曲线，根据样品的吸光度值，在标准曲线上找到相应的浓度94.37μl/ml。
因样品稀释10倍，故原样品溶液浓度为943.7μl/ml=0.9437mg/ml。
故样品中阿司匹林的质量为0.9437*50=47.185mg。
样品溶液的配置：取1片阿司匹林研细，加入无水乙醇1~2ml分次研磨，使溶解。利用滤膜过滤后转入50ml容量瓶中，充分振摇，乙醇定容（浓度：800μl/ml）。取1ml定容后的样品溶液，转入10ml容量瓶，乙醇定容。配置成约为80μl/ml的样品溶液。
2.波长选择
使用紫外-可见分光光度计，先用95%乙醇进行基线校正。用阿司匹林标准品3和稀释过的水杨酸标准品进行光谱测量。将扫描波长范围定在200-400nm，分别找出两者的最大吸收峰。阿司匹林标准品在277.5nm、235.0nm处有最大吸收峰。因在277.5nm处，阿司匹林、水杨酸均有吸收，故采用双波长法。以277.5nm为λ1，从水杨酸的光谱中找到与277.5nm处A值相等的点所对应的波长值λ2=320nm。
阿司匹林的分析实验报告
一、实验目的1. 掌握阿司匹林的分析方法，包括鉴别和含量测定。
2. 熟悉阿司匹林原料药及肠溶片的质量分析原理与操作。
3. 了解阿司匹林的特殊杂质检查方法。
二、实验原理阿司匹林（乙酰水杨酸）是一种常用的非甾体抗炎药，具有解热、镇痛、抗炎和抗血小板聚集作用。
本实验采用紫外分光光度法、高效液相色谱法等方法对阿司匹林进行含量测定，并对其原料药和肠溶片进行质量分析。
三、实验材料1. 阿司匹林原料药2. 阿司匹林肠溶片3. 甲醇、乙醇、盐酸、硫酸等试剂4. 紫外可见分光光度计5. 高效液相色谱仪6. 其他实验器材四、实验方法1. 紫外分光光度法测定阿司匹林含量- 原理：阿司匹林在酸性条件下与三氯化铁反应生成红色络合物，于510nm波长处测定吸光度，根据标准曲线计算阿司匹林含量。
- 步骤：1. 配制阿司匹林标准溶液；2. 配制样品溶液；3. 在510nm波长处测定样品溶液的吸光度；4. 根据标准曲线计算阿司匹林含量。
2. 高效液相色谱法测定阿司匹林含量- 原理：利用高效液相色谱仪对阿司匹林进行分离和定量分析。
- 步骤：1. 配制阿司匹林标准溶液；2. 配制样品溶液；3. 样品溶液和标准溶液分别进行高效液相色谱分析；4. 根据峰面积计算阿司匹林含量。
3. 阿司匹林原料药与肠溶片的质量分析- 鉴别：采用紫外光谱法、红外光谱法等方法对阿司匹林原料药和肠溶片进行鉴别。
- 含量测定：采用紫外分光光度法、高效液相色谱法等方法对阿司匹林原料药和肠溶片进行含量测定。
- 特殊杂质检查：根据《中国药典》规定，对阿司匹林原料药和肠溶片进行特殊杂质检查，如游离水杨酸、重金属等。
五、实验结果与分析1. 紫外分光光度法测定阿司匹林含量标准曲线线性范围为0.2-2.0mg/mL，相关系数为0.999。
样品溶液的吸光度与阿司匹林含量呈良好线性关系。
2. 高效液相色谱法测定阿司匹林含量样品溶液和标准溶液在相同色谱条件下，阿司匹林峰面积与浓度呈良好线性关系。
阿司匹林药片中乙酰水杨酸含量的测定
阿司匹林药片中乙酰水杨酸含量的测定一．实验目的1．学习阿司匹林药片中乙酰水杨酸含量的测定； 2．学习利用滴定法分析药品。
二．实验原理阿司匹林的主要成分是乙酰水杨酸。
乙酰水杨酸食有机弱酸(Ka?1?10?3），结构式，Mr?180.16g?mol?1，微溶于水，易溶于乙醇。
在强碱性溶液中溶解并水解为水杨酸和乙酸盐，反应式如下：由于药片中一般都添加一定量的赋形剂如硬脂酸镁、淀粉等不溶物，不宜直接滴定，可采用返滴定法进行测定。
将药片研磨成粉末状后加入过量的NaOH标准溶液，加热一段时间使乙酰基水解完全，再用HCl标准溶液回滴过量的NaOH，滴定至溶液由红色边为接近无色即为终点。
在这一滴定反应中，1mol乙酰水杨酸消耗2molNaOH。
三．仪器试剂酸式滴定管，移液管，容量瓶等1mol?LNaOH溶液，0.1mol?LHCl溶液，酚酞指示剂，甲基红指示剂，硼砂Na2B4O7H2ONa2B4O7?10H2O基准试剂，阿司匹林药片等?1?1四．实验步骤1．0.1mol?LHCl溶液的标定用差减法准确称取0.4-0.6g硼砂，置于250mL锥形瓶中，加水50mL溶解，滴加2滴甲基红指示剂，1?1用0.1mol?L?1HCl溶液滴定至溶液由黄色变为浅红色即为终点。
计算0.1mol?L?1HCl溶液的浓度，平行滴定5-7份，各次相对偏差在?0.2%之内。
2．药片中乙酰水杨酸含量的测定将阿司匹林药片研成粉末后，准确称量约0.5g左右药粉，于干燥小烧杯中，用移液管准确加入20.00mL1mol?L?1NaOH标准溶液，加入30mL水，盖上表面皿，轻摇几下，水浴加热15min，迅速用流水冷却，将烧杯中的溶液定量转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
准确移取上述溶液10.00mL于250mL锥形瓶中，加水20-30mL，加入2-3滴酚酞指示剂，用根据所消耗的HCl溶液的体积计算药片中乙酰水杨酸的质量分数0.1mol?L?1HCl标准溶液滴定至终点。
阿司匹林片剂中乙酰水杨酸含量的测定(终极版)
实验4-6 设计性实验题目：阿司匹林片剂中乙酰水杨酸含量的测定学院/专业/班级：姓名：1.小组成员：实验台号：教师评定：____________ 【分析方法及简单原理】样品为市售片剂，每片药片质量约为75 mg，含阿司匹林50 mg左右，其余为硬脂酸镁、淀粉等赋形剂；②乙酰水杨酸为一元有机弱酸（pKa=3.0），摩尔质量为180.16g/mol，易溶于乙醇，微溶于水。
纯品的分析可以用乙醇为溶剂，NaOH标准溶液直接测定。
片剂中由于不溶赋形剂的存在，通常采用返滴定方式，即将药片研磨成粉状后加入过量的NaOH标准溶液，加热一段时间使乙酰基水解完全，再以酚酞为指示剂，用HCl标准溶液回滴过量的NaOH，至酚酞的红色刚刚消失为终点。
水解反应如下：COOH+3OH-=COO-O-+CH3COO-+2H2OOCOCH3注意：1. 酚氧负离子碱性较强，返滴定至终点时以酚羟基形式存在！2. 水解过程中过量的NaOH溶液会吸收空气中的CO2生成部分Na2CO3，而回滴至酚酞红色刚刚消失时这部分Na2CO3以NaHCO3形式存在，由此所产生的误差应如何消除？需要在同样条件下进行空白校正。
【实验仪器和试剂】仪器：电子分析天平（0.1 mg）、台秤（0.1 g）、常用滴定分析仪器一套、恒温水浴锅、陶瓷研钵②试剂：500 g/L NaOH溶液、6 mol/L HCl溶液、邻苯二甲酸氢钾基准物、无水碳酸钠基准物；2 g/L酚酞指示剂（乙醇溶液）、1 g/L 甲基橙指示剂【具体实验步骤】1.0.1mol/L NaOH溶液的配置与标定（1）用10mL量筒量取500g/L NaOH溶液8.0mL，倾入500mL的试剂瓶中，用水洗涤量筒数次，洗涤液并入试剂瓶中，稀释至200mL，摇匀后备用。
（2）准确移取 0.5moL/L NaOH溶液50.00mL,倾入250mL的容量瓶中，定容至250mL。
（3）用减重法称取0.4~0.6g的KHC8H4O4置于三个编号好的锥形瓶中，分别加入20~30mL 蒸馏水，小心摇动，使其溶解，然后加入2滴酚酞指示剂，用所配制的0.1mol/L NaOH溶液滴定至溶液呈微红色且30s内不褪色为终点，记下所消耗NaOH的体积，计算所配置NaOH溶液的浓度。
阿司匹林中游离水杨酸含量测定
紫外分光光度法测定阿司匹林中游离水杨酸含量1 开机，仪器自检2 配溶液（1）水杨酸储备液的配制：精密称取对照品水杨酸0.2500g，加10 mL乙醇，使溶解，用0.01 mol/L HCl稀释至250 mL容量瓶中，稀释到刻度，摇匀。
(此溶液浓度为0.1%)（2）标准溶液的配制：移取储备溶液1.00mL，用0.01mol/L的盐酸定容至100mL棕色容量瓶中。
（3）样品溶液的配制：取本品15片，精确称量，记录质量，研细。
将研细的样品置于称量瓶中，再称取1/3质量的药品，记录。
（取本品5片，准确称量，研细，记录。
加无水乙醇10 mL分次研磨）加无水乙醇10 mL分次溶解，转入100 mL容量瓶中，充分振动摇匀，加0.01 mol/L HCl稀释至刻度，摇匀，立即滤过（干过滤，前面15 mL滤液弃去，取续滤液），滤液备用。
2.2 波长选择在两个比色皿中都加入蒸馏水，在220nm处在T模式下对比色皿进行配套验证，第一个为100%，第二个要求在99.5%~100.5%。
再转换到A模式下，进行校正，并记录数据。
精密移取上述标准溶液3mL或5mL置50 mL棕色容量瓶中，加0.01 mol/L HCl稀释至刻度，摇匀，以0.01 mol/L HCl液为空白，在232和297nm处测定吸光度，如吸光度在0.4左右，继续下一步；如若不在，讨论。
2.3 标准曲线的绘制精密移取标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL（或0.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00 mL）置50 mL棕色容量瓶中。
加0.01 mol/L HCl至刻度，摇匀，以0.01 mol/L HCl 液为空白，在最大吸收波长处测吸光度。
2.4 样品测定移取2或1 mL滤液于50 mL棕色容量瓶中，以0.01 mol/L HCl稀释至刻度，摇匀。
以0.01 mol/L HCl液为空白，在最大吸收波长处测吸光度。
阿司匹林中乙酰水杨酸的含量测定(分析化学课件)
阿司匹林中乙酰水杨酸的含量测定
三、数据处理
1）C H O %= 9 8 4
c V NaOH NaON
M C9H8O4 1000
100%
ms
=
c V NaOH NaOH
180.2 1000
100%
ห้องสมุดไป่ตู้ms
T V 100% 2）用滴定度T计算，则：C9H8O4%= NaOH NaOH
ms
6
阿司匹林中乙酰水杨酸的含量测定
阿司匹林、酚酞为指示剂、氢氧化钠滴定液
2
阿司匹林中乙酰水杨酸的含量测定
二、测定步骤 乙酰水杨酸(阿司匹林)是常用的解热镇痛药，属芳酸酯类结构，
分子结构中含有羧基，在溶液中可解离出H+(Ka=3.24×10－4)，故可 用酚酞为指示剂，用碱标准溶液直接滴定，其滴定反应为：
3
阿司匹林中乙酰水杨酸的含量测定
【注意事项】 为了防止乙酰水杨酸分子中的酯结构水解而使测定结果偏高，滴
定应在中性乙醇溶液中进行，并注意滴定时应保持温度在10℃以下， 并在振摇下快速滴定。
二、测定步骤
COOH + NaOH
OCOCH3
COONa
+ H2O OCOCH3
4
阿司匹林中乙酰水杨酸的含量测定
操作步骤如下：精密称取样品约0.4g，加20ml中性乙醇 (对酚酞指示剂显中性)，溶解后，加酚酞指示液3滴，在不超 过10℃的温度下，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定，滴定至 溶 液 显 粉 红 色 。 每 1ml 氢 氧 化 钠 滴 定 液 (0.1000mol/L) 相 当 于 18.02mg乙酰水杨酸(C9H8O4)。乙酰水杨酸的百分含量可按下式 计算：
HPLC法测定阿司匹林中游离水杨酸含量-PowerPoi
104.4 0.093438 0.15
104.3 0.093349 0.25
103.5 0.092633 0.25
测得量 (mg)
平均回 回收率 收率
(%) (%)
0.154245 107.33
0.155000 105.56
0.257745 0.256579
106.98 105.47 105.40
组1
峰面积
2500000 2000000
组2 S= 7.8801E+07C - 1.5760E+04 R2 = 9.9975E-01
1500000
1000000
500000
0 0 0.005 0.01 0.015
图1 水杨酸的线性回归图
0.02
0.025 0.03 0.035 浓度(ug/ml)
50mL量瓶 滤膜过滤 阿司匹林0.15g
供试品溶液(3mg/ml)
20μL 记录色谱图
溶液 供试品 对照品
1
205196. 2
231913.
峰面积
2
209214. 3
231125.
平均值
207205. 3
231519.
水杨酸浓度 （ug/m l)
2.685
3.000
水杨酸含 量
0.09%
讨论
１.流动相的选择 本实验两个流动相相比较, 1%冰醋酸-甲醇
组别/峰面积
阿司匹林样品1 阿司匹林样品2
水杨酸平均峰 面积
3476.53003
165.10301
样品浓度 （mg/ml）
1.009
0.984
水杨酸含量
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实验六阿司匹林原料药中水杨酸的液相色谱分析测定
一、实验目的
1. 掌握高效液相色谱定性、定量的原理及方法。
2. 了解高效液相色谱仪的结构和操作。
3. 了解高效液相色谱一般实验条件。
二、实验原理
1.高效液相色谱分离的基本原理
分析试样中各组分在流动相推动下，通过装有固定相的色谱柱到达检测器。
由于不同化合物分子结构和物理化学性质不同，与固定相及流动相的作用力不同，在两相中具有不同的分配系数，各组分在两相中进行反复分配而被分离。
在同一色谱条件下，标准物质与待测样品中同一化合物保留时间一致是色谱法定性的基本依据。
定量分析首先要选择合适的色谱柱和洗脱液系统及对被分析物反应较为灵敏的检测器。
被测组分要与其他成分有足够的分离度。
一般要求被定量的物质与相邻组分的分辨率要大于1.5，分辨率R s用下式计算：
2（t R2-t R1）
R s= ——————
ω1+ω2
式中：t R2-t R1为两个组分的保留时间之差；ω1、ω2为两个谱带基线宽度。
当R s≥1时，峰面积重叠小于2%，定量结果比较准确。
2.外标校正曲线法定量
校正曲线是通过测定一系列已知浓度的标准样品，经曲线拟合而得到的含量-响应值（峰面积或峰高）的曲线。
测定待分析样品的响应值后，用校正曲线进行含量计算的方法为外标法。
3.水杨酸含量分析
阿司匹林（乙酰水杨酸）为常用的解热镇痛药，并被用于防治心脑血管病。
由于其很容易降解为水杨酸，药物中水杨酸含量测定被用于阿司匹林的质量监测。
用液相色谱法可以很好地分离阿司匹林和水杨酸，水杨酸的含量可用外标法进行定量测定。
三、仪器与试剂
1.高效液相色谱仪（包括高压输液泵、进样阀及紫外检测器）
固定相：C18键合多孔硅胶小球，5μm。
柱尺寸：150mm×4.6mm I.D.。
20μL定量环。
2.试剂
双蒸水；甲醇（色谱纯）；冰醋酸（分析纯）；水杨酸（标准品）；乙酰水杨酸（阿司匹林）（原料药品）。
四、实验步骤
1.标准溶液及样品溶液的配制
（1）水杨酸标准溶液的配制
称取水杨酸标准品8.1mg，溶解后，转移至1000mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为水杨酸储备液。
分别吸取此储备液1.00mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL、6.00 mL于10 mL 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。
（2）阿司匹林样品溶液配制
称取阿司匹林原料药10mg，用流动相溶解后，转移至100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为阿司匹林样品储备液。
吸取此储备液1.00 mL于10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.色谱分析
（1）色谱条件
检测波长：300nm。
流动相：甲醇-水-冰醋酸（体积比60:40:4）
流速：1 mL∕min。
温度：室温。
（2）操作程序
当基线温度后通过进样阀进行水杨酸标准溶液色谱分析，用数据处理系统绘制标准曲线。
标准曲线的相关系数应为0.998以上。
进行阿司匹林样品溶液色谱分析，用外标法计算样品中水杨酸含量。
五、实验数据及结果
利用色谱工作站软件，按外标校正曲线法计算阿司匹林中水杨酸的质量分数。
1.用数据处理系统绘制标准曲线
在“method”文件中选择外标法（ESTD）。
在菜单中选择“data analysis”，用“load signal”调出最低浓度的水杨酸标准样品数据文件。
从“calibration”中选择“new calibration table”，并在显示的窗口中输入“1”作为校正级数（level），在“calibration table”中填入样品浓度值。
一个校正水平为一个浓度校正点。
用“load signal”依次调出其他浓度的水杨酸标准样品数据文件，同时用“add level”输入其他校正点的校正级数（level）和样品浓度值数据。
所得到的校正曲线及相关系数自动显示与右侧窗口。
2.计算阿司匹林样品中水杨酸的含量
用“load signal”打开阿司匹林样品数据文件，数据处理系统自动根据校正曲线计算出阿司匹林样品溶液中水杨酸的含量（注意：在建立标准曲线时若输入浓度单位为μg∕mL，所得到的浓度单位仍为μg∕mL，在下面的计算中要转换为mg∕mL）。
根据下式计算阿司匹林原料药中水杨酸的含量：
水杨酸的含量（%）=（c×10×100∕m）×100
式中：c为阿司匹林样品溶液中水杨酸浓度（mg∕mL）；m为阿司匹林原料药称量质量（mg）。
六、注意事项
（1）实验步骤按照Agilent 1100液相色谱仪器具体操作方法写
成，不同的色谱仪在操作指令上会有所不同。
（2）实验条件（主要是流动相配比）可以根据实际情况进行调整。
（3）实验结束后，以甲醇-水（体积比60:40）为流动相冲色谱柱约30min。
七、思考题
1、使用C18色谱柱时，如果采用甲醇-水（体积比50：:50）作为流动
相，求该流动相的强度因子。
如果改用乙腈-水作为流动相，若保持相同的强度因子，其体积比应为多少？
2、在其他HPLC色谱条件不变，仅改变下列一种条件，色谱峰的保留时
间与峰形将发生怎样的变化？
（a）流动相流速增加；
（b）柱温升高；
（c）色谱柱增长；
（d）固定相粒径变大；
（e）在线性范围内增大进样量
3、什么是化学键合固定相？有何优点？。